、氨基酸纸层析分离鉴定_
(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)
(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)实验报告：纸层析法分离氨基酸实验目的通过纸层析法分离并鉴定氨基酸的类型及其浓度。
实验原理纸层析法是一种简单的分离技术，它的分离原理就是根据溶液成分在固定相上的不同运移速度而分离出各种化合物的方法。
氨基酸属于碱性氨基酸、酸性氨基酸和非极性氨基酸三类，它们在纸层析上的运移速度不同，可以通过将样品施加到起始线处，用溶剂上升将样品分离成单独的氨基酸，从而鉴定氨基酸的类型和浓度。
实验步骤1.准备好样品；2.准备纸层析板和移层溶剂；3.在纸层析板上留下起始线处，将样品点于起始线上；4.将纸层析板浸泡在移层溶剂中，注意不要使样品触及移层溶剂；5.待溶剂上升至足够高处后将纸层析板取出晾干；6.可选择用氨基酸定性试剂对氨基酸进行鉴定。
实验结果经过实验，分离出了6种氨基酸，它们是： 1. 苯丙氨酸 2. 丝氨酸3. 脯氨酸4. 缬氨酸5. 赖氨酸6. 天冬氨酸结论纸层析法是一种常用的分离技术，适用于分离和鉴定氨基酸等化合物。
通过本次实验，我们了解了氨基酸在纸层析上的运移规律，并成功地分离出了样品中的6种氨基酸。
实验分析在实验中，我们使用纸层析法分离鉴定了氨基酸。
纸层析法是一种简便易行的分离方法，常用于生物学和化学研究中。
它的原理是利用固定相吸附和液态相洗脱分离成分，从而实现混合物分离和提纯的过程。
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，其种类丰富，具有重要的生物学和化学意义。
氨基酸的分离和鉴定对于深入研究生命科学和化学领域的相关问题具有十分重要的意义。
在实验中，我们采用纸层析法将溶液中的氨基酸分离开来。
由于氨基酸的不同极性和分子大小不同，它们在纸层析中的运移速度存在较大差异，可以通过纸层析进行分离。
在实验中，我们通过将氨基酸样品点于纸层析板上的起始线处，并将其浸泡于移层溶剂中，利用溶剂的上升，将氨基酸分离开来。
实验不足与改进在实验过程中，我们虽然成功地分离出了样品中的氨基酸，但存在一定的不足。
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究生物化学和生物学具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。
本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定，以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。
实验步骤：1. 实验前准备：准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。
2. 制备纸层析纸：将纸层析纸剪成适当大小的长方形，用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线，再在该线上距离左边1cm处画一个小点。
3. 装置纸层析槽：将纸层析纸的底端浸入色谱槽中，确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。
4. 样品加载：用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上，尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。
5. 开始分离：将色谱槽盖好，待溶液上升至纸层析纸的顶端时，取出纸层析纸，迅速标记各个斑点的位置。
6. 斑点分析：将纸层析纸放入紫外灯下观察，记录各个斑点的颜色和位置。
结果与讨论：通过纸层析法，我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
在紫外灯下观察，我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。
根据斑点的颜色和位置，我们可以初步判断其中的化合物。
在本次实验中，我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。
根据实验结果，我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。
根据颜色和位置的初步判断，我们可以推测第一个斑点为苏氨酸，第二个斑点为甘氨酸，第三个斑点为丙氨酸。
然而，仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。
为了进一步确认各个斑点的化合物，我们可以利用已知标准物质进行对照。
通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点，我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。
结论：通过纸层析法，我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
根据初步判断，我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。
氨基酸的分离鉴定纸层析法
氨基酸的分离鉴定纸层析法引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于生物体的正常生理功能至关重要。
因此，准确地分离鉴定氨基酸成分对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
纸层析法是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。
本文将介绍氨基酸的分离鉴定纸层析法并探讨其应用。
一、纸层析法的原理纸层析法是利用气相平衡原理进行物质分离的一种方法，其原理是根据物质在纸上各组分的相对亲疏性，通过运动距离的差异来分离物质。
在氨基酸的分离鉴定中，纸层析法通过将待测氨基酸溶液滴于纸上，然后将纸立起来，将纸的下端浸入相应的溶剂中，使得溶剂上升，通过毛细作用将氨基酸上提，最终实现氨基酸的分离和鉴定。
二、纸层析法的步骤1. 准备工作：制备纸层析板和显色剂。
2. 样品处理：将待测氨基酸溶解于适量的溶剂中，使其浓度适宜，然后滴于纸层析板上。
3. 运行纸层析：将纸层析板立起，纸的下端浸入相应的溶剂中，待溶剂上升到一定高度后，取出纸层析板。
4. 显色：将纸层析板放置于显色剂中，通过氨基酸与显色剂的反应，使得氨基酸在纸上显色。
5. 结果鉴定：根据显色的位置、颜色和强度等特征，对氨基酸进行鉴定和定量分析。
三、纸层析法的应用1. 氨基酸组成分析：纸层析法可用于分析蛋白质中氨基酸的组成，从而揭示蛋白质的结构和功能。
2. 质量控制：纸层析法可用于对食品、药品等中氨基酸含量的快速检测，保证产品质量和安全性。
3. 生物体内氨基酸代谢研究：纸层析法可用于研究生物体内氨基酸的代谢途径和代谢产物。
四、纸层析法的优缺点纸层析法作为一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法，具有以下优点：1. 简单易行：操作简单，不需要复杂的仪器设备，成本低廉。
2. 分离效果好：对于氨基酸的分离效果较好，可以得到较为准确的结果。
3. 易于观察：通过显色剂的反应，可以直观地观察到氨基酸在纸上的分离和鉴定结果。
然而，纸层析法也存在一些缺点：1. 分离效果有限：对于某些结构相似的氨基酸，纸层析法的分离效果不佳，难以实现准确鉴定。
氨基酸的分离鉴定 纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定则是研究蛋白质的前提和基础。
本次实验使用纸层析法对氨基酸进行了分离鉴定。
首先，我们需要了解一下纸层析法的原理。
纸层析法是一种基于分子大小和亲水性的分离技术，常用于生化分析中。
其原理是通过纸张上固定的固定相（通常是硅胶或纤维素）与待分离物质之间的相互作用来实现分离。
待分离物质在移动相（溶液）的推动下，根据其与固定相的亲水性和大小的差异，以不同的速度在纸上移动，从而实现分离。
在实验中，我们使用了两种氨基酸溶液进行分离鉴定。
首先，我们需要准备好实验所需的材料和试剂，包括纸层析纸、氨基酸溶液、显色剂等。
然后，将纸层析纸剪成适当大小的条状，用铅笔在纸上标记出起点线和终点线。
接下来，我们将纸层析纸的一端浸入移动相（溶液）中，使其吸满溶液后取出，待溶液在纸上上升到起点线时立即停止。
然后，将氨基酸溶液滴在起点线上，待其渗透进纸层析纸后将纸张平放在容器中，盖上盖子，保持相对湿润的环境。
随着时间的推移，溶液将在纸上上升，并逐渐分离成不同的组分。
不同的氨基酸在纸上的迁移速度受到其亲水性和分子大小的影响。
亲水性较强的氨基酸会更容易被纸上的固定相吸附，从而迁移速度较慢，而亲水性较弱的氨基酸则会迁移得更快。
当溶液上升到终点线时，我们将纸张取出，用显色剂处理。
显色剂可以与氨基酸发生反应，产生可见的色带。
通过比较色带的位置和颜色，我们可以确定不同氨基酸的迁移速度和存在量。
实验结果显示，我们成功地将两种氨基酸分离开来，并且确定了它们的相对迁移速度。
这为进一步的氨基酸分析和蛋白质研究提供了基础数据。
同时，我们还发现，在纸层析过程中，一些氨基酸可能会发生相互作用，导致它们的迁移速度发生变化。
这提示我们在进行氨基酸分析时需要考虑到可能的相互作用因素。
总结起来，纸层析法是一种简单、经济且有效的氨基酸分离鉴定方法。
通过该方法，我们可以快速地分离出不同的氨基酸，并确定它们的相对迁移速度。
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告一、实验目的通过纸层析法将混合氨基酸分离并鉴定其种类及含量。
二、实验原理纸层析法的原理是根据化合物的物理化学性质在纸质或硅胶薄层中移动的速度不同，从而实现对混合物中各种物质的准确分离。
对于氨基酸而言，其分子结构均包含有羧基和氨基，因此都是具有弱酸和弱碱性的。
通过没食子酸和氯化钠的混合缓冲液，可使氨基酸在纸层析板上逐渐向上移动，从而实现了混合氨基酸的分离。
三、实验步骤1. 准备滤纸、混合氨基酸标准溶液、混合缓冲液、酸性洗涤液、碱性洗涤液及定量分装棒。
2. 在滤纸的底端画一个以棕色标识的线，表示样品的注入位置。
3. 用定量分装棒把混合溶液从注入位置滴入滤纸中，约需滴入 5 μl。
4. 将悬浊液放在平台上，加入具有吸附性但不溶于缓冲液的薄层纸片，等待它变成透明状态。
5. 将滤纸放入盒中，使其完全覆盖盒底，并加入混合缓冲液。
6. 等待溶液上升至顶端时立即取出滤纸，并在溶液升至预定高度后标注液位高度。
7. 筛选并选择相应的染色剂将其喷在纸层析板上，以便于观察分离效果。
四、实验分析通过对实验纸层析图的分析，可以确定混合溶液中所含有的氨基酸种类及各种氨基酸的比例。
在该纸层析图上，靠近底部的区域标示着杂质的位置，应当忽略不计。
通过纸层析图，我们得到了以下氨基酸的分离和鉴定结果：1. Alanine（6μg）2. Leucine（4μg）3. Isoleucine（3μg）4. Phenylalanine（1μg）5. Tyrosine（1μg）六、实验结论通过实验结果表明，纸层析法能够成功地将混合溶液中的氨基酸分离，并且通过染色剂的辅助，可以更加清晰地看到氨基酸的分散情况。
此外，通过对实验结果的分析，我们可以得出混合溶液中所含有的各种氨基酸的种类及含量，为进一步的实验提供了帮助和指导。
1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
氨基酸纸层析法
氨基酸纸层析法氨基酸纸层析法（paper chromatography of amino acids）是一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法。
本文将详细介绍氨基酸纸层析法的原理、步骤、实验条件和数据处理方法等内容，以帮助读者更好地了解并应用这一实验技术。
一、氨基酸纸层析法的原理氨基酸纸层析法是利用氨基酸在纸上的分布系数和溶剂的渗透速度差异进行分离的方法。
其原理是在一根滤纸条上画上水平的线，将待测的氨基酸溶液直接点于纸条上，待溶液中的氨基酸离子在滤纸上沿渗透液前进，不同氨基酸在滤纸上的迁移速度不同，从而实现氨基酸的分离和测定。
二、氨基酸纸层析法的步骤1. 实验前准备（1）准备氨基酸样品，将其溶解在适当的溶剂中，并使用pH 计调节至适当的酸碱度。
（2）准备滤纸条，按照实验需要确定滤纸的宽度和长度。
（3）准备层析槽，将槽中的溶剂预先与上盖采光纸取代，避免有光照射到。
2. 进行层析实验（1）在滤纸条上绘制水平基线，并将标记的点分开，便于后续氨基酸的测定。
（2）将氨基酸溶液直接点于滤纸条上，点的位置要尽量靠近基线，以避免扩散的影响。
（3）将纸条的一端浸入含有适当溶剂的层析槽中，保持溶剂的面平稳。
（4）待溶液中的氨基酸在滤纸上渗透，不同氨基酸迁移的距离不同，最终在纸条上形成清晰的色斑。
（5）将纸条取出，用热风干燥，然后在紫外灯下进行观察和记录。
3. 数据处理将滤纸上的色斑分别用铅笔勾画出来，并测量它们与基线之间的距离。
然后，根据距离之间的比例关系来计算氨基酸在纸上的迁移速度，并与标准曲线进行比较，从而得出待测氨基酸的浓度。
三、氨基酸纸层析法的实验条件1. 溶剂体系常用的溶剂体系有正丙醇/ 乙酸/水 = 4:1:5、正丙醇/氨水/水 = 70:2:25等，需要根据实验需要确定溶剂的组成和比例。
2. 滤纸条的准备常用的滤纸有菱形滤纸和圆形滤纸，需要根据所需分离的氨基酸种类和数量决定滤纸的大小。
3. 实验条件实验应在干燥、通风的环境中进行，避免光照和温度过高。
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
【三、器材与试剂】
【三、器材与试剂】 器材： 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号) 试剂： 1、扩展剂 （正丁醇：水：冰醋酸= 4：3：1） 2、显色剂 0.1％茚三酮正丁醇溶液。 3、氨基酸溶液 0.5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液 及它们的混合液
显色： 用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
计算Rf值
【五、实验结果与分析】
【六、注意事项】
【七、思考题】
1、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？ 2、Rf值的含义、影响因素？
下次实验 ： 实验二 蛋白质和氨基酸的颜色反应
值 日 生 值 日
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小实验
当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。 滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。 看看接下来会发生什么事情…
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可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。
这就是纸色谱法。 对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。 纸色谱法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。
实验一 纸层析法分离鉴定氨基酸
【一、实验目的】
【二、实验原理】
层析技术 是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷等
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固定相 在层析中起分离作用而不随层析过程移动的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。
氨基酸的分离鉴定——纸层析
氨基酸的分离鉴定——纸层析氨基酸是构成蛋白质的基本单元，其在生物体内的作用极为重要。
因此对氨基酸的分离和鉴定具有重要的研究意义。
纸层析是一种常用于分离和鉴定氨基酸的方法。
其原理是利用氨基酸在纸层析板上的运动速度不同，根据氨基酸之间的相互作用，分离出各种氨基酸。
实验步骤：1. 纸层析板的制备将一张高分子量纸，如Whatman No.1滤纸，剪成所需要的大小，并用铅笔在纸上画出氨基酸移行的标线。
2. 氨基酸样品的制备将所需的氨基酸样品溶解在适量的水中，浓度应为0.2-2%。
3. 样品的上样将氨基酸溶液利用微量注射器沿着标线往上移行。
在上样后，将纸层析板放在带有盖子的玻璃罩中，罩中放置一些饱和度为70%的异丙醇-水溶液，保持相对湿度为70%，使其充分展开。
5. 鉴定氨基酸将经过分离的氨基酸溶液阴性反应的氨基酸用二乙酰胺-丙酮混合溶液鉴定。
将0.2ml 二乙酰胺-丙酮混合溶液加入几滴氨基酸样品中，加热60℃-80℃，5分钟。
加入0.1ml氯仿，振荡混合，分离出上清液，上清液加入干燥瓶中，用喷雾器喷洒Ninhydrin试剂，加热于热水中1分钟，在冷水中快速降温附着氨基酸的部位呈现紫色。
注：二乙酰胺-丙酮混合溶液的组成为45%二乙酰胺，45％丙酮和10%水。
6. 结果的解释根据氨基酸在纸层析板上的运动速度和比色反应的颜色，确定样品中的氨基酸种类及含量。
优点：纸层析方法简便易行，无需昂贵的仪器设备，适用于小样品分析，能分离不同种类的氨基酸，并且结果清晰，操作简单。
限制：纸层析分离结果受到氢键作用和酸碱度等因素的影响，需要控制好上样的数量和浓度。
此外，纸层析无法分离胶原氨基酸和类似结构的氨基酸，且鉴定结果在颜色和色谱图谱方面有些模糊。
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定
纸层析法—氨基酸的分离与鉴定纸层析法——氨基酸的分离与鉴定⼀、实验⽬的1、了解纸层析法的使⽤原理。
2、掌握⽤纸层析法分离蛋⽩质的操作步骤。
⼆、实验原理1、纸层析法是以滤纸作为惰性⽀持物的分配层析⽅法，滤纸上的纤维具有羟基，是亲⽔基团，滤纸吸附⽔作为固定相，其上流经的有机溶剂即展层剂作为流动相。
当展层剂流经固定相时，固定相上的样品由于亲⽔、疏⽔能⼒不同，在两相之间不断分配，疏⽔能⼒强的多溶于流动相，随流动相移动距离较远，亲⽔能⼒强的移动距离则较近。
2、所有的氨基酸的α碳上均连接⼀个氢原⼦和两个亲⽔基团羧基（—COOH）与氨基（—NH2），唯⼀的不同则在于R基团。
因此R基团在氨基酸的亲⽔疏⽔能⼒对⽐中起到了决定性的作⽤。
本实验采⽤丙氨酸，苯丙氨酸，天冬氨酸，其R基团分别是—CH3，—CH2—C6H5，—CH2—COOH，其亲⽔疏⽔能⼒迥异，能在滤纸上明显分开。
3、Rf值表⽰原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离与原点中⼼⾄流动相前沿的距离⽐。
在⼀定条件下，Rf值为定值，其影响的因素有物质本⾝的性质，溶剂的性质，PH值，温度，滤纸的性质等等，本实验不予探究。
在测量原点中⼼⾄显⾊斑点中⼼的距离时，由于斑点的形状不规范（近似圆形），所以，⼀般取斑点的重⼼，测量出重⼼与起点的距离即可。
4、显⾊原理：茚三酮在弱碱性溶液中与α—氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氧，脱羧反应，最后茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮发⽣作⽤⽣成紫⾊物质。
三、试剂（⼀）提前配制试剂8*10-3mol/L丙氨酸溶液：精确称取0.356g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L苯丙氨酸溶液：精确称取0.661g晶体，溶解后定容到500ml。
8*10-3mol/L天冬氨酸溶液：精确称取0.532g晶体，溶解后定容到500ml。
（将上述三种溶液装于⼩瓶中实验时，每两组共⽤⼀组试剂）正丁醇88%甲酸蒸馏⽔茚三酮晶体注：实验时，以上试剂均为每两组同学共⽤⼀组试剂。
纸层析法分离鉴定氨基酸
纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法是一种常用的分离和纯化化学物质的实验方法，被广泛应用于有机合成、生物化学和食品科学等领域。
本文将介绍纸层析法在氨基酸分析中的应用。
一、实验原理氨基酸的分离和鉴定是生物化学实验中常用的手段。
氨基酸分子中含有羧基和氨基，可以通过纸层析法实现其分离。
纸层析法是一种基于物质分子间不同的吸附性能而进行分离的方法。
在纸层析实验中，将试样涂在纸层析片（通常为滤纸）的一侧，并将其放入溶剂（通常为水、丙酮、甲醇等）中，溶剂会沿纸层析片向上移动，分离出不同物质组分。
氨基酸分子的羧基和氨基分别具有不同的亲水性和疏水性，因此在纸层析分离中会表现出不同的吸附行为。
例如，疏水性较强的疏水基团会被生物样品或溶剂吸附，从而较慢地从纸层析片上移动，这些氨基酸通常出现在较高位置；而亲水性较强的羧基团则会被水吸附，因此移动速度较快，这些氨基酸通常出现在较低位置。
二、实验步骤1、制备样品：取大约1mg的氨基酸标准品或被测样品，加入1mL的去离子水中，并轻轻搅拌，制成1mmol/L的溶液。
2、制备纸层析片：取一张长约50cm的滤纸，将其叠成4层，然后将中间部分剪成30cm的长条，每条的宽度为1cm左右，用铅笔在底部标记出位置，离开1cm到1.5cm的距离。
3、涂样：在每个标记位置上滴加不同氨基酸溶液，每次加约5µL。
所有样品均按照氨基酸的相对极性从小到大进行涂样，从左到右编号，以便于鉴定。
4、溶剂选择：选择一种适宜的溶剂，通常为水、丙酮、甲醇等。
将滤纸上端放入溶剂中，约1cm左右的位置即可。
5、开始实验：用三角架和夹子将滤纸张贴在玻璃板上，使其呈现较小的倾斜面。
在滤纸的底部悬挂一张白纸，以便于观察样品在纸层析上的位置变化。
待溶剂无法再升高时，实验结束。
6、结果读取：按照行（从上到下）顺序，观察样品的移动距离。
三、实验结果及分析纸层析法可以分离并识别出存在于试样中的氨基酸分子，在实验中，通过观察样品从纸层析片底部开始向上移动的情况，可以确认每个氨基酸的相对位置和含量。
实验十二氨基酸的分离鉴定-纸层析法
原 到 析 心 距 点 层 中 的 离 = 原 到 剂 沿 距 点 溶 前 的 离
实验步骤: 三.实验步骤 实验步骤
1. 扩展剂的制备
20ml正 醇 丁 15ml → →分液漏斗 充分振→ 5ml冰 酸 醋
取 上层（油层） 扩展剂 5ml→层析缸→密闭，备用 → 静置分层→ 下层（水层） 弃掉 →
2. 纸层析操作 纸层析操作:
取层析滤纸,并画一条底线 用铅笔 取层析滤纸 并画一条底线(用铅笔 并画一条底线 用铅笔) 直线每隔１ 作标 用点样器点样 直线每隔１cm作标 记 缝线成筒状 扩展至上升 9~11cm 取出滤纸, 取出滤纸 并用铅笔描前沿 线 吹干 喷茚三酮 吹干显色 计算Rf值 计算 值
实验十三 氨基酸的分离鉴定 --------纸层析法 纸层析法
一.实验目的 实验目的: 实验目的 通过氨基酸的分离,学习纸层析法的 基本原理及操作方法
二.实验原理 实验原理: 实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分 配层析法.不同的氨基酸在滤纸上的移动 速度不同,最终层析的位置也不同,从而可 根据这个位置来确定各类氨基酸的比移 值Rf. Rf
四.数据记录及处理
1. 原点到溶剂前 沿的距离a= 2.原点到层析点中 心的距离b=
五. 分析讨论
氨基酸的分离鉴定—纸层析法
2)、氨基酸溶液0．5％的赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0．5％)各配置5mL。
3)、显色剂50～100mL 0．1％水合茚三酮正丁醇溶液。
【实验步骤】
（1）检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。
（2）平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上，再把盛有约5mL展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中，用塑料薄膜密封起来，平衡20min。
【注意事项】
⑴.点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面(即展层时样品可能达到的部分)。
⑵.点样斑点不能太大，防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，且点样后吹风温度不宜过高，以免样品变性(斑点发黄)。
⑶.展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。
⑷.展层剂要临用前配制，以免发生酯化，影响层析结果。
⑸.如果样品中溶质种类较多，且某些溶质在某一溶剂系统中的Rf值十分接近时，单向层析分离效果不佳，则可采用双向层析，即将样品点在一方形滤纸的角上，先用一种溶剂系统展层。滤纸取出干燥后，再将滤纸转90度角，用另一溶剂系统展层。所得图谱分别与这两种溶剂系统中作的标准物质层析图谱对比，即可对混合物样品中各成分进行鉴定。
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与被测物的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用单向纸层析法分离氨基酸。
实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法
实验报告
实验报告是学生实验研究结果的记录和总结，同时也是评价 学生实验课成绩的重要依据。
实验报告的格式： 一、实验目的 二、实验原理 三、仪器和试剂 四、实验方法与步骤 五、实验结果与分析 六、讨论、心得
注意 讨论部分不是对结果的重述，而是实验结果、实验方
法和实验异常结果的分析和讨论，以及对实验设计的认识、体 会及建议。
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基础生物化学实验课评分标准
实验课中迟到或早退者其实验过程成绩须扣分。 无故不做实验的学生其实验项目成绩评为零分。 实验课缺勤超过1/3的学生其实验总成绩评为不及 格。 在规定的时间内不能按时交实验报告的学生其实 验报告成绩须扣分。 实验成绩占基础生物化学考试成绩的20℅。
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实验一 氨基酸的分离鉴定（纸层析法）
【实验目的】
通过实验，掌握纸层析法的一般原理和操作技术。 掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的一般过程。
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【实验原理】
层析技术 是一种物理的分离方法，利用混合物中各 组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度 分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此 相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而 达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷
12名称操作方式固定相流动相分离依据分配层析纸层析薄层层析液体液体溶解度离子交换层析离子交换柱层析固体液体带电性静电引力吸附层析吸附薄层层析气体吸附层析固体液体气体吸附力亲合层析酶与底物抗原与抗体固体液体配体专一性凝胶层析凝胶过滤固体液体分子大小实验原理实验原理层析的分类层析的分类13分配层析分配层析是利用不同物质在两种不相溶的溶剂中的分配系数不同而达到分离的一种技术
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【仪器和试剂】
实验仪器
1.电热鼓风干燥箱 2.培养皿、青霉素小瓶、毛细管、小型喷雾器 3.层析滤纸、滤纸芯
1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
三、操作 1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。 2、取层析滤纸（长18—20厘米，宽14厘米）一张。在垂直 于纸的纹路一端距边缘2—3厘米处用铅笔划一条直线，在此 直线上每间隔2厘米作一记号，作为点样位置，并用铅笔在点 样点下端写出所点氨基酸的名称。 3、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这5个位置上，干 后再点一次，共点三次。每点在纸上扩散的直径，最大不超 过3mm。 4、扩展 用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不 能接触。将盛有约20 mL扩展剂的培养皿迅速 置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿 中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点 样线1 cm)。待溶剂上升15―20 cm时即取出 滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用 吹风机热风吹干。
5、显色 用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置 烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点 6、用铅笔轻轻描出各显色斑点的形状，用直尺量出各斑点中 心与原点的距离以及溶剂前沿与原点的距离，求出各氨基酸 的Rf值，将各显色斑点的Rf 值与标准氨基酸的Rf 值比较，可 得知该斑点的准确成分。 四、结果与讨论： 1．计算出各种氨基酸的Rf值， 并根据Rf值鉴定出混合氨基酸 中的各组分，在层析图谱上标 出各氨基酸名称。 2．对氨基酸移动快慢的原因 给予简要分析。
实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法
一、目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法 在一定的条件下，一个物质在某溶剂系统中的分配系数， 在一定的温度下是一个常数。纸层析是以滤纸作为惰性支持 物的分配层析，滤纸纤维上的-OH基具有亲水性，因此能吸附 一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶 剂自上而下流动，称为下行层析；自下而上流动，称为上行 层析。流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使物质 在两相之间不断分配而得到分离。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
实验原理
• 茚三酮的显色原理 氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条件下共加热时， 氨基酸被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮水合物被 还原，其还原物可与氨基酸加热分解产生的氨 结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化 合物，称为罗曼紫（Ruhemann's purple）。
实验试剂与仪器
• 试剂 纯净的赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸 8×10E-3mol/L溶液；四种氨基酸混合溶液（每 种浓度与对应纯净溶液一致）；2.5%茚三酮丙 酮溶液；酸性展层剂（正丁醇：88%甲酸：水 =60：17：8）。 • 仪器 钟罩×1、培养皿×1、小烧杯10ml×1、层析 柱×1、小漏斗×1、新华一号滤纸 （14cm×17cm）×1、电吹风、烘箱、毛细管、 订书机，及其他常用仪器。
实验结果及分析
——图像实例
实验结果及分析
——各氨基酸比移值Rf
氨基酸
Rf
赖氨酸
0.2294
天冬氨酸
0.3814
丙氨酸
0.5771
亮（白）氨酸
0.8609
在同一实验条件下，比移值Rf主要取决于分配系数，不同的物质分配 系数不同，也就有不同的Rf 。此外，溶剂的溶质的性质、滤纸的性质、展 层的温度和p H值均会影响比移值Rf。 实验中，Rf值与个人操作及具体实验条件息息相关，存在一定波动， 但总体趋势相同。
• 纸层析 纸层析法属于分配层析，层析滤纸为载体， 流动相是指层析液，在毛细拉力作用下， 层析液能不断由下向上流动。固定相是指 被吸附在滤纸纤维之间的水分。由于纤维 素上的羟基具亲水性使这部分水束缚在纤 维素周围，不易扩散而成为固定相。
实验原理
• 在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用 下，上升流经滤液滴点时，滴点上的氨基 酸就相继融入层析液，随着层析液上升， 并发生在分配，即有一部分色素从层析液 分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分 配系数的不同，那些分配系数大的氨基酸 分子，随层析液向上移动得快，形成的斑 点集中在滤纸的上部；而分配系数小的氨 基酸分子，随层析向上移动得慢，形成的 斑点集中在滤纸的下面。
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1.本实验中滤纸的作用是什么？
滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂作为流动相。
2.实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？
固定相是水，流动相是正丁醇
3.R f值的含义、影响因素？
Rf=物质斑点（浓度中心）移动的距离/溶剂前缘移动的距离=a/b，即溶质在滤纸上的移动速度。
物质的结构、性质、容积系统、层析滤纸的质量和层析温度等。
4.R f值为多少范围内可以确定为同一物质？
在两Rf值之差绝对值小于0.05可以确定为同一物质。
5.层析滤纸和普通滤纸有什么区别？
层析滤纸，组成该滤纸的纤维素是亲水物质，能形成水相和展层溶剂的两相系统，被分离物质在两相中的分配保持平衡关系。
层析滤纸材质较普通滤纸材质比较均匀、机械强度好、有一定的纯度、纤维松紧适宜。
6.为什么要平衡？平衡剂和扩展剂是同一物质吗？
平衡剂起到使纸层析上吸附的溶剂达到饱和的作用，平衡后得到的斑点比较圆整。
平衡剂和扩展剂不是同一物质。
7.用手直接接触滤纸会引起什么不良后果，为什么？
会使手上的杂质蛋白质污染滤纸，造成实验的误差。
8.缝制的纸筒如果两边缘相靠会造成什么后果？
会出现毛细现象，使边缘的层析液上升加快，出现的不是一条直线。
9.为避免实验结果出现“拖尾”现象，实验操作中应注意哪些环节？在点的时候，多点几次，每次的量要控制，点下一次的时候，前面一次的点样要吹干。
10.标记滤纸不能使用油性笔，为什么？
因为油性的会溶解与有机溶剂，会溶于正丁醇。