香蕉的组织培养与快速繁殖
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香蕉的组织培养与快速繁殖
摘要
香蕉,芭蕉科芭蕉属植物,又指其果实。热带地区广泛栽培食用。香蕉味香、富于营养,终年可收获,在温带地区也很受重视。香蕉也是一种绿色开花植物,它如其他绿色开花植物一样,也会开花结籽儿。野生香蕉中有一粒粒很硬的种子,吃起来极为不便。因此,有人把野生香蕉树和四倍体的芭蕉杂交产生了三倍体的香蕉。也就是现在的香蕉。这样的香蕉中就
没有种子了。香蕉的种子退化了,人们常通过香蕉地下的根蘖幼芽来繁殖它的后代,现在随植物细胞工程的发展,植物组织培养及快速繁殖更加高效进行香蕉繁殖,同时为其优良品种
的保存扩大提供有利条件。
关键词:香蕉;植物组织培养;快速繁殖;转化
1•香蕉植物组织培养
长期以来,香蕉生产上主要采用吸芽繁殖,用这种常规方法繁殖,不但故量有限,而且挖取吸芽还会伤及母株的地下真茎及挖断母株的根群,从而影响当年产量。同时,挖取的种苗切口大,成活率低。为了提供发展香蕉生产所需的大量种苗,应用植物组织培养技术,繁殖大量香蕉苗是非常必要的。此外,通过组织培养还可加快优良品种的繁殖速度,以满足生产上品种更新的需要。
1.1香蕉组培苗的培育技术
1.1.1品种的选择
选用适宜当地栽培、高产、优质、抗逆性强的品种,选取剑状吸芽若干个进行脱毒。
1.1.2原种吸芽苗的选择
选作吸芽的母株果梳应是果梳整齐、果大均匀、产量高、无病害症状、健壮的母株。用作外植体的剑叶吸芽必须按株系进行编号并建立株系档案,必要时拍照全株相片。
1.1.3香蕉吸芽外植体的消毒与接种
从田间取回来的吸芽用自来水冲洗干净后,用不锈钢刀将吸芽切去根和顶端,剥去外层包片并切成高2厘米X直径1.5厘米左右的圆锥体。在超净工作台上,用75%酒精消毒2分钟,倒掉酒精,再用0.1%升汞,另加2〜3滴吐温80,消毒20〜30分钟。消毒剂一定要浸过料,消毒过程中要经常摇动以便材料充分灭菌。用无菌水清洗4次,使药液彻底洗净。用解剖刀剥去外层叶鞘,留用5毫米左右的基座,并将此圆锥型外植体十字形切为4块,编号后,置入诱导培养基中培养,培养温度为27 C〜31C。开始培养时,可只用自然弱光,待长小芽后光照采用800〜1000LXS。
1.1.4.继代苗的培养
将已开始增殖的芽顶部叶片切除,切除的叶片可作为病毒检测的材料。将基部切成含有2〜4个芽的小块,转接到继代培养基中培养。培养温度27 C〜31C, 光照为800〜1000LXS,经检测不带生产上检定病毒的株系方可作为繁殖材料继代增殖。20〜30天继代一次,继代培养次数不超过12代。」
1.1.5生根苗的培育
将假茎生长至2厘米左右的无根继代苗转入生根培养基中培养,培养温度为27 T〜31 T,光照2500〜3000LXS,每天光照的时间为10小时左右。
1.1.6组培苗的炼苗培养
将培养室内培养的约3厘米高以上的组培苗转换至外界自然光温条件下培 养,待叶片转浓绿色后(时间大约 7〜10天)开始移栽。移栽时最好先打开塑
料袋一个晚上,第二天用清水冲洗掉根部的培养基,并根据苗的大小进行分级。 1.1.7检疫性有害生物的检测和变异株的剔出 1.1.7.1病毒的种类
主要检测束顶病(BBTV )和花叶心腐病(CMV )。 1.1.7.2检测方法
采用血清学DAS-ELISA 法检测。 1.1.7.3变异株的剔出
按香蕉组培检定苗质量标准中规定的 6种变异株予以剔出。变异株的6种类型:
①假茎和叶片、叶脉变红;②假茎变青、叶片尖形,叶柄细长;③假茎矮粗,叶 距较密集、叶片短圆(矮变);④叶片卷曲对称;⑤叶片出现黄、白色条纹或缺 绿斑块;⑥植株生长特快,和一般的植株不一样,叶片特大,杆特粗(高变)。 1.2不同植物生长调节剂对香蕉组织培养的影响
以MS+3%蔗糖+0.6%琼脂作基 本培养基,每个处理3次重复,每个 重复10株(块),接种后置于室内日
光 灯下培养,光照强度为1 500~2
OOOIx,每天光照12 h,培养温度为 (28 ± 2)°C 。诱导培养于第二代接种 后30天、分化培养于接种后20天、 生根培养于接种后 30天进行调
查 观察,计算各处理的芽诱导率、
增殖 率(倍)和生根率。 诱导培养试验设NAA 添加浓度 为 0、0.02、0.04、0.06、0.08 mg/L
和6-BA 添加浓度为2.5、5.0、7.5、
10.0、12.5 mg/L 共 25 个处理。各 供
试品种取嫩球茎,在自来水冲浴下 除去外层叶片,置于0.1% HgCI2溶 液中
浸泡15 min,无菌水冲洗5次, 然后在
超净工作台上沿球茎生长点 纵切成2~4块,每块大小约3 cm3, 分别接种到诱导培养基中进行培养, 每代培养30天。 分化培养试验设NAA 添加浓度
为 0.0、0.1、0.2、0.3、0.4 mg/L 和6-BA 添加浓度为2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0 mg/L 共25个处理,将经2 代培养并诱导成功的芽体分别转接
到分化培养基进行分化培养,每代培养25天。生根培养试验设NAA 添加浓度为
0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/L 和 6-BA 添加浓度为 0、0.02、0.04、0.06、0.08 mg/L 共25个处理,将分化的丛芽切成单株,分别转接到生根培养基中进行培养。
6- BA NAA 诱导率{怖、 普通衿苗 粉琵 贡苗
2. 5 n 43 19 47
2. 5 0 02 47 27
2. 5 0. 04 42 36 壮 2,5 0.06 3M 30 40
2. 5 0 DM 31 22 30
5.0 0 W 37 SO
5,0 D. 02 y? 4b
丸 5.0 0 04 42 S7
50 0. Ofi 81 40 E5
5.0 0. 08 77 37 70 7,5 0
66
7. 5 0 02 84 70
92 7,5 0 04 so 74 S7
7. 5 0佃 6ft 72 61
7. 5 0 08 50 69 59 10.0 0 JO 77 42 10.0 0.02 45 79 44
J0.0 0 04 45 M2 34 10.0 0. Ofi 37 80 32 10,0
.如 76
J2. 5 0
61 29 11. 5 0 02 31 70 39
J2. 5 O. 04 29 73 33
n. 5
O. 06 20 60 23 12. 5 O OS 17 51 ig 表1 2 BA 与NAA 对各香蕾品种外植怵诱导威芽的影响
注:衷屮数据为谨导培养第】代樓种后刃天的调奁结果.