实验三_细菌的分离培养与移植
实验三细菌的分离培养及移植
➢ 美蓝指示剂可显示干燥器中的厌氧程度，美蓝在有氧时呈 氧化型（蓝色），无氧时呈还原型（无色）。
➢ （2）李伏夫法
➢ 此法系用连二亚硫酸钠和碳酸钠反应，以 吸收空气中的氧气，其反应式如下：
➢ 方法：
➢ ①取一个干燥器，用水量出其体积。
➢ ②按体积计算并称量出焦性没食子酸和10％氢氧化钠的用 量。
➢ ③将氢氧化钠溶液倒入干燥皿的底部，将焦性没食子酸用 纸包好，用青霉素小瓶将焦性没食子酸支撑于氢氧化钠溶 液上方，两种药品勿接触。
➢ ④放上隔板，将接种好的培养皿放在隔板上。
➢ ⑤放入一支美蓝指示剂管。
谢谢欣赏
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nana22ss22oo44na22coco33na22soso44na22sosoco22该法与焦性没食子酸法操作基本相同只该法与焦性没食子酸法操作基本相同只是用连二亚硫酸钠和碳酸钠反应来吸收罐是用连二亚硫酸钠和碳酸钠反应来吸收罐中的oo22按1000cm1000cm33空间用连二亚硫酸钠空间用连二亚硫酸钠及碳酸钠各及碳酸钠各3g3g称取药品在纸上混匀后称取药品在纸上混匀后加水少许使混合物潮湿立即放入干燥器加水少许使混合物潮湿立即放入干燥器底部上放隔板及培养皿密封培养
，接种后将平皿用石蜡密封，倒扣置37℃恒温箱 中培养2～3d后，即可观察到需氧菌和厌氧菌先 后生长的现象。
➢ 2、化学方法
利用还原作用强的化学物质，将环境或培养 基内的氧气吸收，或用还原氧化型物质，降 低氧化-还原电势。
➢ （1）焦性没食子酸法
原理：
细菌的分离培养实习报告
细菌的分离培养实习报告一、实验目的通过本次实习，掌握细菌的分离培养和接种技术，了解细菌的形态特征及生长习性，并能够正确使用细菌培养基和培养设备。
二、实验原理细菌的分离培养和接种技术是一种将混合菌液中的不同种类的细菌分离出来并进行单独培养的方法。
该方法主要是通过对细菌的生长特性进行观察和分析，从而将不同种类的细菌分离开来。
三、实验材料与设备1. 实验材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎球菌等。
- 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基等。
- 接种工具：接种环、接种针等。
- 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、生物安全柜、显微镜、培养箱等。
2. 实验步骤1) 菌种的准备：将各种菌种分别接种在斜面培养基上，37℃培养24小时。
2) 培养基的制备：按照配方制备牛肉膏蛋白胨琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基等，高压蒸汽灭菌法灭菌。
3) 接种方法：a) 平板划线法：将菌种接种环在琼脂平板表面划线，使细菌分散生长，形成单个菌落。
b) 稀释涂布平板法：将菌种接种环在液体培养基中稀释后，涂布在琼脂平板表面。
4) 培养：将接种后的琼脂平板倒置放入培养箱中，37℃培养24小时。
3. 实验结果与分析1) 菌落的观察：观察不同菌种在琼脂平板上的生长情况，记录菌落的形状、大小、颜色等特征。
2) 菌种的鉴定：根据菌落的特征和生长习性，对不同菌种进行鉴定。
四、实习心得通过本次实习，我对细菌的分离培养和接种技术有了更深入的了解。
在实验过程中，我学会了如何准备菌种、制备培养基、进行接种操作以及观察菌落等技能。
同时，我也明白了细菌分离培养的重要性，它不仅可以帮助我们研究细菌的生物学特性，还可以为临床诊断和防治疾病提供依据。
在实验过程中，我注意到了无菌操作的重要性，严格遵循无菌操作规程，避免交叉污染。
同时，我也学会了如何使用显微镜观察细菌的形态特征，从而对菌种进行初步鉴定。
总之，本次实习让我对细菌的分离培养和接种技术有了更全面的了解，也为我今后的科研和工作打下了坚实的基础。
细菌的接种分离与培养实验报告实验结论
细菌的接种分离与培养实验报告实验结论下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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实验3：细菌的分离与纯化
实验 3 微生物的纯种分离培养微生物广泛地分布在自然界的土样、水体、空气、动植物体表及人体、动物体的排泄物中。
它们以单个的菌体、无性孢子和芽孢的形式存在。
由于单一的自然界环境并不能完全满足微生物对水、空气、营养物质、温度、pH的综合要求，它们往往以散居”的状态出现，而不能形成人们肉眼可直接观察到菌落。
不同的自然环境中，微生物的种类和数量差异很大。
肥沃的土壤，富养化的水体，是许多微生物麇集、孳生的场所，在这里存活着能分解淀粉、蛋白质、脂肪、纤维素、木质素、果胶、农药、含磷有机物（卵磷脂、肌醇、核酸等）、石油以及溶解铜矿的细菌、放线菌、真菌等多种类的微生物，如何根据微生物的生理要求，按照人类的需求，将它们从自然界中分离出来，获得纯种，发挥微生物的特长为人类的生产和生活服务，是微生物研究中最基础的实验技术。
一、实验目的：1．学会将混杂的各种微生物分离成纯种，统计分析样品中微生物的种类和数量的方法。
2．学会从菌落及培养特征区分细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。
3．学会好氧微生物平板及斜面培养的方法。
二、实验原理：在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的释放，按其生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种，由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，利用不同的培养基制成平板进行分离，然后从菌落形态上的差异，可以把细菌、放线菌和霉菌三大类群区分并可计算出其数量，分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。
三、实验材料和用具：1．材料（1）土壤样品（ 2 ）培养基：①牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨培养基（% ）牛肉膏0.3-0.5g 蛋白胨1.0g NaCl 0.5g 琼脂2.0g 蒸馏水100mL pH 7.2-7.4 ，0.1Mpa 压力，灭菌20-30分钟。
配制液体培养基时不加琼脂；半固体培养基加0.3-0.5%琼脂。
肠道菌的分离培养与鉴定PPT课件
3．结果 产酸产气时，可使培养基的指示 剂变色，并可在发酵管内顶端出现气泡； 只产酸时仅见发酵管内培养基颜色改变， 不见气泡；不分解者无反应。如大肠杆菌 分解乳糖产酸产气；用“㈩”表示，金黄 色葡萄球菌虽能分解乳糖，但产酸不产气， 用“+”表示；马流产沙门氏杆菌不能分解 乳糖，用“一”表示。
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实验三 肠道菌的分离培养与鉴定
目的要求： 1．熟悉选择和鉴别培养基的原理； 2．了解大肠杆菌的主要培养特性； 3．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌的常规鉴定方
法；
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基本原理
肠道菌大多为革兰氏阴性小杆菌，
采用一般染色和分离培养难以鉴别，故须
采用鉴别和生化试验培养方能鉴定。不同
种类的肠道菌，产生的酶类及活性不同。
培养方法，其原则在于使被检材料充分分 散，以便经过培养后得到单个菌落，并可 对菌落的形态、颜色、溶血与否等进行观 察。
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术式
右手似持毛笔的姿势持接种棒的塑料柄处， 将接种环伸人酒精灯火焰中烧至通红，再 缓慢将接种棒其余金属部分均加以烧灼， 准备蘸取材料；左手取琼脂平板，琼脂面 与水平面成45°角，接种环同培养基平面 也成45°角。靠近酒精灯火焰操作。
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2．方法
将需要鉴别的肠道菌（大肠杆菌和沙门氏 菌）或含肠道菌的病料，在康凯琼脂培养 基上划线分离，37℃培养24h观察。使之得 到单个菌落。
3．结果 大肠杆菌在此培养基上形成红色 菌落，沙门氏菌形成无色或浅黄色菌落。
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（二）SS琼脂培养基分离培养
1．原理 此培养以中性红作批示剂，其中 还有胆盐硫代硫酸钠，构椽酸钠，煌绿等 等抑制G+的生长，对大肠杆菌了有一定的 抑制作用，只有少数生长。培养基中含有 乳糖，在大肠杆菌能分解乳糖，产酸，指 示剂显红色（5.0-7.4 红—黄），故大肠杆 菌呈红色菌落，而沙门氏菌不能分解乳糖， 没能使培养基变酸呈黄色菌落。
细菌的分离培养实习报告
一、实习目的本次实习旨在通过细菌的分离培养实验，掌握细菌分离培养的基本原理和操作方法，了解细菌的生长特性，培养出单一菌株，为后续的鉴定和研究提供基础。
二、实验原理细菌的分离培养是将混合菌液中的不同种类的细菌分离出来并进行单独培养的方法。
通过观察和分析细菌的生长特性，将不同种类的细菌分离出来，培养出单一菌株，为后续的鉴定和研究提供基础。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基。
3. 接种工具：接种环、接种针、无菌棉签、无菌吸管。
4. 其他：酒精灯、酒精棉球、试管、试管架、显微镜等。
四、实验步骤1. 准备培养基：按照培养基配方，称取各成分，加入适量蒸馏水溶解，分装于试管中，高压灭菌。
2. 菌液的制备：将待分离的细菌接种于肉汤培养基中，37℃恒温培养24小时。
3. 平板划线接种法：取无菌平板，用接种环取菌液，在平板上划线，依次进行分区划线，每划完一个区域后，烧灼接种环进行灭菌。
4. 观察菌落：将划线平板倒置，置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。
5. 挑取纯种：根据菌落的特征，如颜色、形状、大小等，挑取单个菌落进行纯培养。
6. 菌落纯度鉴定：将纯培养的菌落涂片，染色，显微镜下观察，确认菌落纯度。
五、实验结果1. 金黄色葡萄球菌：菌落呈金黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑。
2. 大肠杆菌：菌落呈白色，圆形，边缘整齐，表面光滑。
3. 肺炎克雷伯菌：菌落呈灰白色，圆形，边缘不整齐，表面粗糙。
六、实验讨论1. 细菌的分离培养是微生物学实验中的基础操作，对于后续的鉴定和研究具有重要意义。
2. 在实验过程中，要注意无菌操作，防止杂菌污染。
3. 平板划线接种法是分离培养细菌的常用方法，通过分区划线，可以将菌液逐渐稀释，达到分离纯种的目的。
4. 在挑取纯种时，要仔细观察菌落特征，确保菌落纯度。
5. 本实验中，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌均成功分离培养，为后续的鉴定和研究提供了基础。
细菌的分离培养与移植实验报告
实验五细菌的分离培养与移植[实验目的]1、掌握细菌分离培养及移植的基本要领和方法。
[实验原理]在细菌学诊断中，分离培养是不可缺少的一环。
分离培养的目的主要是在含多种细菌的病料或培养物中挑选出某种细菌。
在分离培养时应注意：选择适合于所分离细菌生长的培养基、培养温度、气体条件等。
同时应严格按无菌操作程序进行实验，并做好标记。
[实验材料]菌种：大肠杆菌斜面、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌等。
器械：剪刀、记号笔(以上小组共用)。
培养基：普通肉汤和普通琼脂斜面、普通琼脂平板、酒精灯、接种环。
[实验内容]1、细菌的分离平板划线接种法通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。
若需从平板上获取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。
可用做分离纯种细菌。
操作方法（三区划线法）：a、右手拿接种环，烧灼冷却后，勾取菌种。
b、左手抓握琼脂平板（让皿盖留于桌上），在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入，右手将已沾菌的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/5-1/6，此为第一区。
划线时接种环与琼脂呈30-40度角轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。
c、接种环上多余的细菌可烧灼（每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定），待冷后，在划线末端重复2-3根线后，再划下一区域（约占1/4面积），此为第二区。
d、第二区划完后可不烧灼接种环，用同样方法划第三区，划满整个平皿。
e、划线完毕，将平板扣入皿盖并作好标记，置37℃温箱孵育18-24小时观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征（如大小、形状、透明度、色素等）。
平板分区划线法培养后菌落分布情况平板划线培养的方法甚多，可按各人的习惯选择应用，其目的都是达到使被检材料适当的稀释，以求获得独立单在的菌落，防止发育成菌苔，以致不易鉴别其菌落性状。
细菌的分离、培养及细菌对抗生素的敏感性试验
3、常用的接种方法
① 划线接种 ② 液体接种: ③ 穿刺接种 ④ 涂布接种 ⑤ 三点接种 ⑥ 浇混接种 ⑦ 注射接种
从固体培养基上挑取细菌，接种到 液体培养基中；或者从液体培养物中将 菌液接至液体培养基中，称为液体接种。
3、常用的接种方法
① 划线接种 ② 液体接种 ③ 穿刺接种： ④ 涂布接种 ⑤ 三点接种 ⑥ 浇混接种 ⑦ 注射接种
四、实验内容
1. 平板划线的练习
每人取普通平板1个: ① 练习如何打开平板； ② 练习接种棒的火焰灭菌； ③ 练习挑取单个菌落； ④ 练习分区平板划线。 再取普通平板1个, 4区划线后, 37℃培养, 作为考查内容.
接种环的火焰灭菌
平板分区划线示意图
把接种环上的材料涂在培养基的一侧，一般作3-5 次划线。
5、影响细菌生长的因素
① 营养 ② 水分、pH、渗透压 ③ 温度： ④ 气体环境 ⑤ 培养时间 • 只有处于最适生长温度时，生 长速度才最快，代时最短。 • 病原微生物通常为37℃。
5、影响细菌生长的因素
① 营养 ② 水分、pH、渗透压 ③ 温度 ④ 气体环境： ⑤ 培养时间 有的细菌还需要一定浓度的CO2 • 需氧菌 • 兼性需氧菌 • 厌氧菌 化学去氧 生物去氧 隔绝阻氧 替代驱氧
1、四个概念
① 分离培养： ② 接种 ③ 菌落 ④ 菌苔
就是把病料中的病原微生物分离培 养出来，并获得分离物的单一生长材料, 以进行诊断及有关研究工作。
1、四个概念
① 分离培养 ② 接种: ③ 菌落 ④ 菌苔
将微生物接到适合于它生长繁殖的 人工培养基上或活的生物体内的过程叫 做接种。
1、四个概念
2 1 3 4
2. 琼脂斜面的接种
每人取琼脂斜面1支: ① 练习打开斜面； ② 练习斜面到斜面的接种。
细菌的分离、培养和鉴定
② 加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质 （如血液/血清、酵母浸膏或生长因子等）；用以培养对 营养要求高的微生物（2216E）
③ 选择培养基：利用细菌对某种或某些化学物质的敏感性 不同；在培养基中加入这类物质，利于所需分离的细菌生 长，而抑制不需要的细菌生长，从而达到分离某种微生物 的目的。（中国科学院海洋研究所专利：一种定量检测鳗弧 菌的选择性培养基及其制备）【利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性 】
④ 鉴别培养基：是一类含有某种特定化合物或试剂的培养
基。某种细菌在这种培养基上培养后，产生某种代谢产物，
能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应；
从而达到区分不同的微生物.。（TCBS）
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ❖ 病料在接种培养基后，经过一段时间，应检查其 生长状况。首先用肉眼检查有无细菌生长；若有， 则需进一步检查菌落是否纯一。形态特征包括： 大小、形状、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、 波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白 色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度 （不透明、半透明、透明等）和粘度等
水可直接涂布平板
• 平板置于28℃ 恒温培养箱培养24h，观察细菌生
长状况
（注意：操作台在使用前后都需要用酒精棉球擦拭
台面，保持操作台的整洁）
.
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二、细菌的培养
培养基：培养基是指由人工方法配合而成的，用于微生物 培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的混合营养制品。
培养基的种类
① 基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物 质；可作为一些特殊培养基的基础成分（普通营养琼脂）
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生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
实验三细菌的分离培养
箱培养24小时（平板倒置），第二天抽时间看培养结
果
实验四 药敏试验
一 目的要求 学会药敏试验的操作方法及观察抑菌的范围 二 实验材料 大肠杆菌 庆大霉素 氯霉素 呋
1、菌种：金黄色葡萄球菌 2、药敏纸片：青霉素 喃妥因 红霉素
链霉素
复方新诺明
3、95%酒精缸、小镊子、普通琼脂平板
何种菌种最敏感？
3、为什么要把培养皿倒置培养？
1、培养基：普通琼脂平板 每人 2块；普通琼脂斜面、普通 肉汤 每人各1支
2、菌种：大肠杆菌平板、金黄色葡萄球菌肉汤、大肠杆菌
肉汤、两种菌的混合肉汤 3、酒精灯、接种棒、镊子、记号笔
实验内容
三、实验内容：
1、 平板划线法（肉汤→平板）每人两块
2、 肉汤培养（大肠杆菌平板→肉汤），每人一支
3、 斜面移植（金黄色葡萄球菌肉汤→斜面），每人一支
Hale Waihona Puke 1、每人取两块平板，接种某种细菌，致密划线 2、用小镊子取药敏纸片贴于培养基上（取药纸片 前镊子要洗干净） 3、置37℃培养24小时观察结果
结果观察
根据抑菌圈的大小判断细菌对药物的敏 感程度：高敏、中敏、低敏和不敏感
五 作业
1 、 什么叫细菌对抗菌药物的敏感度，了解
它有何实际意义？
2 、 就你所做的药敏试验中，何种抗菌药对
实验三 细菌的分离培养
一、目的要求
1、 掌握细菌分离培养的基本要领和常用方法 2、 使被检材料适当稀释，以求获得独立单在菌落
• 分离培养的目的是要在含细菌的病料或培
养物中挑选出某种细菌 • 检验待测样品是否有污染 • 选择适合培养基、培养温度、气体条件等
细菌的纯种分离培养和接种技术实验报告
细菌的纯种分离培养和接种技术实验报告一、实验目的本实验旨在掌握细菌的纯种分离培养和接种技术，了解细菌的形态特征及生长习性，并能够正确使用细菌培养基和培养设备。
二、实验原理1. 细菌纯种分离：将混合菌涂于琼脂平板上，经过培养后，可以观察到不同形态和颜色的菌落。
选取单个菌落进行多次传代，最终得到纯种菌株。
2. 细菌培养基：含有必需营养物质的液体或固体培养基，可以提供适宜的环境促进细菌生长繁殖。
3. 细菌接种：将细菌转移到新的培养基中，以便于观察其生长情况。
三、实验步骤1. 准备工作：清洁工作台、消毒琼脂平板和试管等设备。
2. 分离纯种：取一支无菌铅笔，在琼脂平板上划出几条直线。
用无菌铅丝在混合液体中沾取少量后，在平板上均匀涂抹，避免相互重叠。
将琼脂平板倒置在恒温箱中，以适宜的温度和时间进行培养。
3. 传代：观察到菌落后，用无菌铅笔在菌落周围划出一圈。
用无菌铅丝沾取少量菌落，划过圈内，再均匀涂抹于新的琼脂平板上。
重复以上步骤多次，直至得到纯种细菌。
4. 培养：将培养基加热消毒后倒入试管中，待其冷却后，在试管口处焊接一根无菌铁针。
用无菌铁针沾取少量细菌接种于培养基中，放入恒温箱中进行培养。
5. 观察：观察培养基上的细菌生长情况、形态特征和颜色等。
四、实验注意事项1. 实验前要进行必要的清洁和消毒工作。
2. 操作时要保持无菌状态，避免污染。
3. 培养箱应设置适宜的温度和湿度，并定期消毒。
4. 实验结束后要及时清理和消毒设备和工作台。
五、实验结果经过分离和传代，成功得到纯种细菌。
在培养基上观察到细菌的形态特征、颜色和生长情况，并能够正确进行接种操作。
六、实验总结本实验通过对细菌纯种分离培养和接种技术的学习和掌握，使我们更加深入地了解了细菌的形态特征和生长习性，同时也提高了我们的操作技能。
在今后的学习和研究中，这些知识和技能将会发挥重要作用。
实验三：细菌分离接种技术和培养
实验三 细菌分离、接种技术和培养法
目的要求：
1、掌握细菌分离培养的基本要领和方法。
2、掌握平板划线、斜面培养基等接种方法。
3、熟悉细菌分离培养的环境和条件。
实验内容：
1、 细菌划线分离培养：连续划线分离培养法 分区划线分离培养法
2、 纯培养获得与移植：试管间的斜面移植； 可疑菌落纯培养移植
Staphylococcus epidermidis on blood agar With on hemolysis
细菌纯培养
细菌斜面 纯培养法
细菌纯培养
液体培养基
半固体培养基穿刺培养
实验报告：
1、细菌分离培养和纯培养的实验过程。 2、本次细菌分离培养的结果。
细菌划线分离培养
Streptococcus pyogenes on blood agar, illustration b-hemolysis.
Streptococcus pneumoniae on blood agar, illustration a-hemolysis.
Staphylococcus aureus on blood agar, illustration b-hemolysis.
3、 液体培养基增菌和培养（示教）
4、 半固体培养基穿刺培养（示教）
说明：
病原菌的人工培养一般采用35～37℃，培养时间多数为18～24 h，但有 时需根据菌种及培养目的作最佳选择，如细菌的药物敏感试验则应选用对数 期的培养物。将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散 作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开，称为分离培养。一般 经过18～24 h培养后，单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团，称为 菌落（colony）。挑取一个菌落，移种到另一培养基中，生长出来的细菌均 为纯种，称为纯培养（pure culture）。从混杂的微生物群体中获得只含有 某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。微生物在固体培养 基生长形成的单个菌落一般是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取 单菌落而获得一种纯培养。
实验三、细菌分离培养及移植
实验结果
平板分离培养 分离到两种菌落
• 大肠杆菌菌落：扁平、宽大、无色素 • 金葡菌菌落：小而凸
细菌分离培养及移植
在细菌学诊断中，分离培养是不可缺 少的一环。
分离培养的主要目的是在含多种细菌 的病料或培养物中挑选出某种细菌。
在分离培养时应注意：选择适合于所 分离细菌生长的培养基、培养温度、 气体条件等。同时应严格按无菌操作 程序进行实验，并做好标记。
分离：从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的方法。
目的要求
1.掌握细菌分离培养的基本要领和方法； 2.掌握纯培养的移植、肉汤增菌培养的方法 实验材料
1.将混合菌液（大肠杆菌和葡萄球菌混合菌液） 于平板培养基中划线分离（1板/人）。 2.将大肠杆菌（肉汤）移植到斜面培养基（1支 /人） 3.将葡萄球菌（斜面）移植到肉汤培养基（1支 /人） 上述培养基均放在37℃温箱中培养24h观察结 果。
3. 用力适用当力，适当不，不要要划划破破琼脂琼表面脂表面 4. 注意无菌操作
4. 注意无菌操作
2. 斜面培养基接种法
3. 液体培养基接种法
菌膜
对照
菌沉淀
均匀浑浊
沉淀—成链生长 浑浊—均匀分散生长 菌膜—表面生长（需氧菌）
4. 半固体培养基接种法
方法：穿刺接种
结果：沿穿刺线生长——动力扩散生长——动力+
菌落
菌苔
纯培养的获得：挑取划线分离培养好的平板上的单个菌 落，移植于营养琼脂斜面培养，所得到的的培养物，即 为纯培养物。纯培养物可再做其他细菌学检查。
肉汤增菌培养：为了提高由病料中分离培养细菌的机会， 多用营养肉汤做增菌培养，病料中即使细菌很少，这样 做也能检查出。另外，用肉汤培养细菌，以观察其在液 体培养基上的生长现象，也是鉴别细菌的依据之一。
细胞微生物学实验
实验一：细菌革兰染色一：目的和要求二：实验原理：①通透性学说¡G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入，不易脱色¡G-菌细胞壁较为疏松，肽聚糖层很薄，脂质含量多，易被乙醇溶解，易脱色②等电点学说¡G+菌等电点2-3，G-菌4-5，染料结晶紫带正电荷，相同条件下，阳性菌更易与染料结合的较牢，不易被脱色③化学学说¡G+菌含核糖核酸镁盐，易与染料结合成大分子物质，染料不易从胞内析出三：材料和试剂①菌种：大肠杆菌24h培养物表皮葡萄球菌24h培养物蜡样芽孢杆菌培养物②革兰染料：结晶紫卢革氏碘液95%乙醇稀释石碳酸复红③其他：接种环，玻片，生理盐水等四：步骤和方法①涂片制备：②初染：滴加结晶紫（以刚好覆盖菌膜为宜），染色1min后，用细流水洗去，甩干。
③媒染：滴加碘液，染色1min后，用细流水洗去，甩干。
④脱色：加95％酒精（脱色剂）盖满标本，轻轻摇动玻片，约0.5min后水洗、甩干。
⑤复染：滴加稀释复红染0.5min，水洗，用吸水纸印干。
⑥镜检：玻片干燥后，用油镜观察五：结果和讨论六：思考题①涂片制备时固定的目的是什么？②G+菌与G-菌细胞壁的区别？③哪些环节会影响革兰染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？实验二：培养基的配置、灭菌一：目的和要求1. 掌握配制培养基的一般方法和步骤2. 了解常用的培养基及其作用3. 掌握消毒，灭菌，防腐，无菌的概念4. 掌握高压灭菌的原理以及使用方法5. 熟悉其他消毒、灭菌的方法以及原理二：实验原理三：材料和试剂：量筒、小试管、中试管、试管帽、移液管、500mL锥形瓶、玻璃棒、试管架、电炉、搪瓷杯、滴管、NaOH溶液、HCl溶液、琼脂、电子称四：步骤和方法1、称量:蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。
称完后，马上盖好盖子，瓶盖不要盖错。
2、溶化:①称好后，加蒸馏水稍微加热，使其溶化。
细菌分离培养实验报告
细菌分离培养实验报告细菌分离培养实验报告一、引言细菌是一类微小的单细胞生物，广泛存在于自然界中，包括土壤、水体、人体等各种环境中。
细菌的分离培养是研究细菌的基础工作，通过分离培养可以得到单一种类的细菌，方便进行后续的鉴定、培养和功能研究。
二、实验目的本实验旨在通过分离培养的方法，从土壤样品中分离出不同种类的细菌，并观察其形态特征、生长情况和代谢能力。
三、实验材料与方法1. 实验材料- 土壤样品- 琼脂培养基- 离心管- 灭菌棉签- 培养皿- 显微镜2. 实验方法（1）准备土壤样品从自然环境中采集适量的土壤样品，并将其放入离心管中。
（2）制备琼脂培养基按照琼脂培养基的配方，将琼脂粉溶解在适量的水中，并加热煮沸，待冷却后倒入培养皿中。
（3）分离培养细菌将土壤样品加入到离心管中，并加入适量的生理盐水，用灭菌棉签搅拌均匀。
然后，取少量土壤样品溶液，用灭菌棉签在琼脂培养基表面均匀涂抹。
将培养皿倒置放置在恒温培养箱中，培养温度为30℃。
（4）观察细菌生长情况在培养箱中培养一段时间后，观察培养皿上是否有菌落形成。
如果有菌落形成，将其分离至新的琼脂培养基上进行纯化培养。
（5）观察细菌形态特征将纯化培养的细菌涂抹在玻片上，用显微镜进行观察。
观察细菌的形态特征，如形状、大小、颜色等。
（6）代谢能力测试通过对细菌进行生理和生化试验，了解其代谢能力。
如对氧气需求的试验、产气能力的试验等。
四、实验结果与讨论经过一段时间的培养后，我们成功地从土壤样品中分离出了多个菌落。
观察这些菌落的形态特征，我们发现它们形状各异，有的呈圆形，有的呈长条状，还有的呈不规则形状。
颜色方面，有的呈白色，有的呈黄色，还有的呈深褐色。
通过进一步的生理和生化试验，我们发现这些细菌具有不同的代谢能力。
例如，通过对氧气需求的试验，我们发现有些细菌是厌氧菌，只能在无氧条件下生长，而有些细菌是好氧菌，需要氧气才能生长。
此外，我们还进行了产气能力的试验，发现有些细菌能够产生气泡，而有些细菌则不能。
细菌的分离培养与纯培养实验报告
实验报告：细菌的分离培养与纯培养一、背景细菌是一类微生物，是生命中最简单的有细胞结构的生物。
它们广泛存在于自然界的各个环境中，包括水体、土壤、空气和人体等。
为了了解细菌的性质、研究其生物学特性以及开发应用价值，分离培养并得到纯培养的细菌菌株是必不可少的步骤。
本次实验旨在通过分离培养的方法，从样本中分离出单一种类的细菌，然后进行纯培养，最终得到该细菌的纯培养物。
二、实验方法和步骤1. 实验材料准备•细菌样本：采集自自然环境或已知细菌株。
•培养基：根据细菌的特性选择适当的培养基，如营养琼脂平板。
•培养基成分：包括葡萄糖、氯化钠、琼脂等。
•培养基容器：如琼脂平板、试管等。
•实验器材：消毒锅、试管架、涂布棒等。
•实验仪器：恒温培养箱、显微镜等。
2. 分离培养实验步骤步骤1：样品的采集和制备从自然环境中采集待研究的细菌样品，例如土壤、水样等。
将样品收集在无菌容器中，并在实验室内进行处理。
步骤2：样品的稀释取一定量的培养基，根据需要的适宜稀释倍数（一般为10-1~10-5），将样品和培养基按比例混合，制成一系列不同稀释度的样品溶液。
使用无菌滴管，分别取适量的样品溶液接种到对应的琼脂平板上。
步骤3：平板涂布使用消毒好的涂布棒，将样品溶液均匀涂抹在琼脂平板上，然后用标签标记每个平板。
涂布完毕后，将平板倒置放在无菌培养箱中，孵育一段时间。
步骤4：单菌落的分离观察培养箱中的平板，找出生长菌落较少、分散且各不相连的菌落。
使用无菌的细胞刮取棒在菌落边缘轻轻划线，然后用刮取棒将菌落刮移到另一块琼脂平板上。
此时，细菌已被成功分离。
3. 纯培养实验步骤步骤1：选取单菌落进行培养从分离得到的细菌菌落中挑选出一个单菌落，利用无菌的细胞刮取棒将其转移到新的琼脂平板中。
步骤2：液体培养将得到的单菌落转移到含有适宜培养基的液体培养基中，如含有营养成分和抗生素的葡萄糖盐水。
利用无菌的试管，接种适量的菌落，并在恒温培养箱中以适当条件培养。
实验三 细菌的分离培养与移植
一 目的要求 1.掌握细菌分离培养的方法； 2.掌握细菌移植的方法。 二 实验内容 1.将混合菌液于平板培养基中划线分离（1板/人）。 2.将大肠杆菌（肉汤）移植到斜面培养基（1支/人） 3.将葡萄球菌（斜面）移植到肉汤培养基（1支/人） 上述培养基均放在37℃温箱中培养24h观察结果。 4.厌氧培养法（焦性没食子酸法）示教。 三 实验报告 试述需氧菌及厌氧菌分离培养方法及注意事项。
2. 斜面培养基接种法（示教）
3. 液体培养基接种法（示教）
4. 半固体培养基接种法
方法：穿刺接种
结果：沿穿刺线生长——动力扩散生长——动力+
细菌在培养基上生长现象
1. 固体 2. 半固体
菌落 菌苔 动力+ 动力-
3. 液体
沉淀—成链生长 浑浊—均匀分散生长 菌膜—表面生长（需氧菌）
菌落 菌苔
接种工具
接种针和接种环：由三部分组成，即 环（针）、金属柄和绝缘柄。接种前后都 要过火灭菌。接种针用于穿刺接种细菌， 接种环用于固体、液体培养基的细菌接种。
1. 混合菌液平板划线分离接种法
2
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3
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分区划线接种法
2
3区和②区之间要灭菌 2. ④区不要接上①区 3. 用力适当，不要划破琼脂表面 4. 注意无菌操作
菌落与菌苔
菌膜 菌沉淀
对照 均匀浑浊
无动力 现象
有动力 现象
实验结果
1. 平板分离培养 分离到两种菌落
• 大肠杆菌菌落：扁平、宽大、无色素 • 金葡菌菌落：小而凸
思考题
1、细菌分离培养的目的是什么？何谓纯培养？ 2、培养皿培养时为什么要倒置？ 3、分别描述大肠杆菌、混合菌种在液体培养基、
固体培养基中的生长表现。
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分区划线接种法
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注意事项
1. ①区和②区之间要灭菌 2. ④区不要接上①区 3. 用力适当，不要划破琼脂表面 4. 注意无菌操作
2. 斜面培养基接种法（示教）
3. 液体培养基接种法（示教）
4. 半固体培养基接种法
方法：穿刺接种 结果：沿穿刺线生长——动力扩散生长——动力+
细菌在培养基上生长现象
1、细菌分离培养的目的是什么？何谓纯培养？ 2、培养皿培养时为什么要倒置？ 3、分别描述大肠杆菌、混合菌种在液体培养基、
固体培养基中的生长表现。
4.厌氧培养法（焦性没食子酸法）示教。 三 实验报告 试述需氧菌及厌氧菌分离培养方法及注意事项。
接种工具
接种针和接种环：由三部分组成，即 环（针）、金属柄和绝缘柄。接种前后都 要过火灭菌。接种针用于穿刺接种细菌， 接种环用于固体、液体培养基的细菌接种。
1. 混合菌液平板划线分离接种法
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实验三 细菌的分离培养与移植
一 目的要求 1.掌握细菌分离培养的方法；
2.掌握细菌移植的方法。
二 实验内容 1.将混合菌液于平板培养基中划线分离（1板/人）。 2.将大肠杆菌（肉汤）移植到斜面培养基（1支/人） 3.将葡萄球菌（斜面）移植到肉汤培养基（1支/人）
上述培养基均放在37℃温箱中培养24h观察结果。
1. 固体 2. 半固体 3. 液体
菌落 菌苔 动力+ 动力沉淀—成链生长 浑浊—均匀分散生长 菌膜—表面生长（需氧菌）
菌落
菌苔
菌落与浊
无动力 现象
有动力 现象
实验结果
1. 平板分离培养 分离到两种菌落 • 大肠杆菌菌落：扁平、宽大、无色素 • 金葡菌菌落：小而凸
思考题