流式细胞仪中文手册

仪器操作手册

本手册根据标准配置的CyFlow® Space编写而成，具体内容根据实际配置可能有所偏差，手册内容应以实际配置为准。

CyFlow Space 仪器操作手册

内容

CyFlow Space介绍 (4)

典型分析步骤 (5)

基本操作 (6)

启动CyFlow Space (6)

多激光测量 (7)

开始检测 (8)

关闭CyFlow (9)

液量绝对计数（定量）----概述 (10)

如何执行液量绝对计数 (12)

光路几何示意图 (13)

光路图标准设置----参数 (14)

仪器设置 (15)

参数设置对话框：脉冲信号高度、面积和宽度 (16)

触发 (17)

光电倍增管（PMT）电压，增益和对数放大 (18)

样本进样速度 (19)

阈值：L-L（低值）和U-L（高值） (20)

附录 (21)

安装要求 (21)

仪器安装--概要 (22)

仪器安装--顺序 (23)

流动室精细校准 (24)

流动室 (25)

维护和服务 (26)

运输和储存 (26)

污染物处理 (26)

安全使用激光器的说明 (27)

CyFlow Space技术规格表 (28)

Partec推荐使用体外诊断试剂IVD

Partec CyFlow Space型流式细胞仪符合欧洲98/97/EC标准，已经取得欧洲CE认证。

○C2007 Partec GmbH

Otto-Hahn-Str.32

D-48161

Germany

CyFlow® Space介绍

Partec CyFlow® Space是什么？

CyFlow®Space有哪些用途？

本手册涉及内容？

其他要用到的说明书？

操作CyFlow®Space前应该具备哪些知识？Partec CyFlow®Space是一台配臵全面的桌面式/便携式流式细胞仪（FCM）。它的特色即设计理念是可以配备3个激光光源，和1至9个光学通道（参数），通过简单地更换光学滤片或镜片可以满足任何实验的需求。

CyFlow®Space在台式电脑或笔记本电脑下运行，数据采集、仪器控制和数据分析均由FloMax®软件控制并执行。

CyFlow® Space免费配套软件，提供常规的自动化操作，并能灵活应用在任何流式细胞术的各种研究过程中。

这些用途包括：

●免疫分型的常规和科研应用

●血细胞分析、HIV监测

●白细胞计数、比例分析

●微生物分析

●发酵控制

●浓度分析＋绝对计数定量分析

●细胞大小和荧光分布分析

CyFlow®Space仪器操作说明书包括CyFlow ®Space仪器的基本操作和维护。但不包含与软件相关的细节，不同仪器的配套软件的使用方法也不同。

FlowMax®–数据获取和仪器控制，涉及仪器控制和多参数数据获取。

FlowMax®–数据分析，涉及在线和离线数据分析的各个方面。

用途注解、指导和维修手册–用于学习起步，包括如何达到最佳结果的提示。

阅读本手册将使您掌握了流式细胞仪的基本知识。但最好有熟练的流式细胞仪操作人员在旁随时辅助您。另外，从流式细胞仪的基本书籍中也可获得帮助。（例如：Howard M. Shapiro, Practical Flow Cytometry. Wiley 2002）

Partec 分析过程的典型步骤

1. 细胞在悬浮液中通过不同的荧光标记染色而被分离。

2. 激光器发出来的光照到细胞表面，细胞被照射后散射出荧光和散射光。

3. 荧光信号显示在直方图和散点图中，并在每个图中进行分析。1. 制备和染色

对于流式细胞仪分析，细胞必须在悬浮液中彼此离散。一般，如果他们自身不能产生足够的光信号，则需要一种或更多荧光染色剂对其标记，荧光分子被目标细胞物质吸收，如CD4-,CD45-抗体与白细胞表面抗原结合。荧光染料结合率与细胞表面抗原的多少成正比。充分准备适合的试剂是准确分析的必要条件。通过检查荧光显微镜的染色情况可以解决准备过程中出现的问题。

2. 流式细胞仪分析

细胞逐一经过流动室时，单独接受激光的照射。由于激发效应，荧光分子发出有独特波长的荧光（发射波长谱）。通过滤光片，该荧光束分解成不同波长范围范围。针对细胞个体分析其波长范围的强度。

除荧光外，还同时测量每个细胞的物理光强度。散射光在光源前向角（FSC）和侧向角测量（SSC）。散射光强度代表细胞的大小和形态。散射光用于荧光分析前确认细胞，但细胞也可于散射光特性分析前由荧光确认。

3. 实时数据处理和结果

每一参数的光强度，以及伴随的目标颗粒数可在1～216或65536个通道中被收集，当细胞经过流动室时，其信息将被软件实时收集。单参数直方图将显示光通道内的细胞数。双参数点图将显示两种细胞特性间的关联程度。

4. 细胞绝对计数

由于CyFlow® Space可以分析到细胞悬液中的所有细胞，并能同时精确监控样本流体积，它能完成分析过程中的体积计数，即测定任意细胞亚群浓度，并定义细胞亚群，其浓度可在后期从文件夹载入数据后再进行分析（即进行离线分析）。

基本操作——启动CyFlow® Space

注意：

关于鞘液，您可以使用Patec 生产的原装鞘液，也可以使用自己制备的鞘液。

制备鞘液，将蒸馏水注入玻璃瓶或三角瓶，同时用小孔径（＜0.2μm）滤网过滤，然后用真空泵（如水泵）抽去水中气体。将瓶中液体摇匀约15分钟。

记住：您分析的颗粒越小，越要求严格清洁鞘液。

注意：要至少每周或每次使用前更换一次鞘液。

怎样在Windows®下工作，请参考手册《微软Windows介绍》或相关书籍。1. 检查鞘液和废液瓶

确认鞘液瓶已充满不超过1600ml清洁鞘液。该鞘液已过滤，并且与鞘液瓶相连的管路内无气泡存在。最后将鞘液瓶密封。

确认废液瓶已经排空。

2. 开机

CyFlow® Space可在100～240V交流电下操作。打开仪器左侧的主电源开关，并随后打开488nm 激光器开关，488nm激光器开关在主电源开关旁边。

其它激光器开关均由软件控制（细节请参考下一页）。

3. 调整488nm激光器的输出功率（仅限于200mw激光器）。

200mw激光器的功率调节范围在50～200mw之间，如需调整功率，请双击如左侧显示的图标（488－200）

改变功率请输入：

P=功率数值，然后按确认键

查询当前功率值请输入：

？P，然后按确认键

4. 打开附属装臵

打开打印机。

5. 打开计算机

最后打开计算机电源开关。大约几十秒钟后，出现Windows®桌面。

6. 启动仪器操作软件

移动鼠标按钮至FloMax®, 或其他仪器控制图标。鼠标左键双击图标。几秒钟后，显示―Flomax®Welcome Window (FloMax®欢迎窗口)‖。此时，CyFlow® Space开始进行初始化，并自动读取上次使用的仪器设臵。

点确定，显示空直方图。

7. 清洗

将运行速度调到4。运行1.6ml partec原厂绿色清洗液（Cleaning Slolution），再运行 1.6ml 蒸馏水，最后依次点击4次―清洗（Clean）‖按钮。

现在CyFlow® Space已完成标本运行的准备。