8. Attune NxT流式细胞仪标准操作规程

合集下载

流式细胞仪校准安全操作及保养规程

流式细胞仪校准安全操作及保养规程1. 背景流式细胞仪是一种现代化的实验仪器，广泛应用于生命科学、医学研究、诊断和治疗等领域。

流式细胞仪可以对单个细胞进行快速测量和分析，具有高灵敏度、高通量和高精度的优点。

在使用流式细胞仪时，正确的校准和安全操作，以及定期的保养是非常重要的。

2. 流式细胞仪的校准方法流式细胞仪的校准是保证实验结果准确的前提。

在进行校准之前，需要先准备好以下工具：•流式细胞仪校准珠•DI水•漂白液•消毒剂•塑料管•紫外线消毒灯2.1 流速校准1.将流式细胞仪开机，并将流式细胞仪校准珠装载到样品池中。

2.打开软件界面，进入流速校准模式。

3.将DI水装入塑料管，并连接到样品流路上。

4.开始采集数据，记录每个管道中的时间和事件数。

5.根据样品流速，计算出要达到特定事件数所需的时间，这就是实际流速。

6.通过调整样品流量控制器，将实际流速调整至设定值。

2.2 光学参数校准在进行光学参数校准之前，需要将流式细胞仪校准珠置于样品池中。

2.2.1 激发光的校准1.进入激发光校准模式，打开紫外线消毒灯。

2.将DI水装入塑料管中，并连接到样品流路上。

3.开始采集数据，记录激发光强度和事件数。

4.根据实际激发光强度，调整光源强度，使其达到设定值。

2.2.2 探测光的校准1.进入探测光校准模式，放置漂白液样品。

2.打开灯箱，选择合适的滤片和灵敏度，开始采集数据。

3.根据采集到的数据，调整探测器增益，使其达到合适的灵敏度。

2.3 粒子大小校准1.将流式细胞仪校准珠装载到样品池中。

2.进入粒子大小校准模式，开始采集数据。

3.根据采集到的数据，调整光学系统，将校准珠作为参考，确定粒子的大小。

3. 流式细胞仪的安全操作在操作流式细胞仪时，需要做好以下几点：1.先关掉紫外线消毒灯，并断开电源，然后进行操作。

2.对样品进行处理前，先进行消毒。

3.在进行样品注入时，应该进行过滤，并先进行细胞计数，控制加入的细胞数量。

4.遵守严格的操作规程，在操作流式细胞仪时，不要将手伸入仪器。

流式细胞仪操作规程

流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。

为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。

以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。

2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。

3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。

4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。

二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。

2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。

3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。

三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。

2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。

3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。

4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。

5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。

四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。

2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。

3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。

4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。

五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。

2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。

3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。

总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。

流式细胞术操作规程

流式细胞术操作规程
《流式细胞术操作规程》
流式细胞术是一种用于研究细胞表型和功能的重要技术。

在进行流式细胞术时，操作规程的严谨性和标准化是非常重要的。

以下是流式细胞术操作规程的一般步骤：
1. 样品准备：首先，需要准备好待测的细胞样品。

这包括细胞的培养和收集，以及必要的处理和染色。

2. 仪器准备：在进行流式细胞术之前，需要确保流式细胞术仪器的正常运行。

这包括检查流式细胞仪和细胞分选仪的通电和冷却系统，以及其它相关设备的准备。

3. 校准仪器：在进行流式细胞术之前，需要对流式细胞仪进行校准，以确保其准确测量样品中细胞的特定参数。

4. 样品测量：将准备好的细胞样品加入流式细胞仪，并进行测量。

测量完毕后，需要对数据进行分析和记录。

5. 数据分析：对测量得到的数据进行分析，包括确定细胞的表型和功能，以及对其它相关参数进行分析和比较。

6. 结果解释：根据数据分析的结果，进行结果的解释和报道，并对相关实验现象进行讨论和总结。

在进行流式细胞术时，需要严格遵守操作规程，以确保实验结果的准确性和可靠性。

此外，对于一些特殊的实验操作，可能
还需要根据具体情况进行相应的调整和改进。

流式细胞术的操作规程是一个很重要的研究工具，它可以帮助研究人员进行高效、准确的实验，从而为科学研究和医学诊断提供更为可靠的数据和方法。

流式细胞仪操作流程(单标)

流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。

（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。

3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。

以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。

4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。

三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。

2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。

3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。

4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。

Invitrogen Attune NxT 流式细胞仪应用手册说明书

Invitrogen Attune NxT流式细胞仪应用手册成就稀有细胞超灵敏高通量分析梦想实现全血样本无需裂解无需洗涤夙愿21人全血样本免洗免裂解白细胞分析(三种方法)...............................................................................................2人全血6色T 细胞无需补偿且免洗免裂解检测................................................................................................6人全血10色免疫表型分析.....................................................................................................................10人全血13色免疫表型分析.....................................................................................................................13人全血吞噬细胞检测...........................................................................................................................17小鼠脾细胞10色免疫表型分析...............................................................................................................22小鼠调节性T 细胞检测........................................................................................................................25藻类存活率分析...........................................................................................................................28使用Attune NxT 流式细胞仪进行荧光蛋白检测...........................................................................................30hPSC 来源的心肌细胞分化过程中转录因子表达的流式细胞分析......................................................................37利用Attune NxT 流式细胞仪检测全血中的血小板............................................................................................42利用Attune NxT 流式细胞仪设计T 细胞基础配色方案......................................................................51利用Attune NxT 流式细胞仪快速准确地进行植物细胞核DNA 含量分析................................................................59使用 ModFit LT 软件分析 Attune NxT FCS 数据文件的操作指南 . (66)利用Invitrogen Attune NxT 流式细胞仪对单细胞生物中的中性脂进行检测 (74)利用Attune NxT 流式细胞仪进行精确浓度测定的推荐方法 (78)Attune NxT 自动进样器实现流式高通量自动化检测：在所有板孔和微孔板之间保持结果的一致性 (80)使用FlowJo 软件分析Invitrogen Attune NxT FCS 数据文件的操作指南 (88)使用FCS Express 6软件分析Attune NxT FCS 数据文件 (96)目录2人全血免洗免裂解白细胞分析(三种方法)无需洗涤/裂解检测人全血中的白细胞简介从人的全血中分离并检测白细胞的传统方法十分耗时，且通常需要大量处理和富集方可进行分析。

流式细胞术操作规程

流式细胞术操作规程流式细胞术是一种常用的细胞分析技术，它可以用来检测和分析细胞表面标记物、细胞数量、细胞分布等信息。

以下是一份流式细胞术操作规程，详细介绍了该技术的操作步骤和注意事项。

一、实验前准备1. 准备所需的实验材料，包括流式细胞仪、标记抗体、孵育培养基、样本组织、显微镜片等。

2. 检查流式细胞仪的功能是否正常，确认仪器能够正常运行。

3. 清洁实验台面，确保操作环境干净整洁。

4. 准备所需的试剂和溶液，如PBS缓冲液、抗体染色溶液等。

二、样本处理1. 准备样本组织，将其转移到离心管中，并添加适量的孵育培养基使其完全浸泡。

2. 使用离心机将样本离心，去除上清液。

3. 重悬样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。

4. 重复洗涤过程，直到样本完全洗净。

三、标记抗体染色1. 取出经过洗涤的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的标记抗体溶液。

2. 在黑暗条件下孵育样本，使其与标记抗体充分结合。

3. 静置反应15-30分钟，确保充分染色。

4. 在光线和温度适宜的条件下冰冻样本，避免抗体的结合。

5. 根据实验需求，可以选择单标记或多标记抗体。

四、样本准备1. 取出经过标记抗体染色的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。

2. 将样本离心并去除上清液。

3. 重悬样本，并根据实验需要加入适量的PBS缓冲液进行稀释。

4. 检查样本的细胞数目和活性是否符合实验要求，如有必要，可以使用显微镜进行观察和计数。

五、流式分析1. 打开流式细胞仪，并确认仪器的设置和参数是否符合实验要求。

2. 调整仪器的流速和灵敏度，使其适应样本的特性。

3. 将样本转移至流式细胞仪的样本管中。

4. 开始流式细胞分析，记录并保存实验数据。

5. 根据实验需要，可以进行不同的数据分析和处理，包括细胞分布、细胞数量、表面标记物的表达等。

六、实验后处理1. 关闭仪器，清洁工作台和操作区域。

2. 处理和储存实验数据，可以使用相应的图像科学软件进行数据处理和结果分析。

流式细胞仪使用规范

流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。

流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。

为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。

1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。

b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。

c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。

2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。

可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。

b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。

c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。

3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。

b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。

c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。

d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。

4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。

b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。

如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。

c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。

5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。

b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。

流式细胞仪使用规程

流式细胞仪使用程序1.目的规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作。

2.适用范围适用于本实验室使用流式细胞仪。

3.职责操作人员应熟练掌握并自觉遵守本标准操作程序。

如需获得更多信息，请参阅该仪器用户手册。

4.支持性文件流式细胞仪使用说明书。

5.操作规程5.1仪器开/关机程序5.1.1开机程序5.1.1.1 检查仪器鞘液桶和废液桶。

5.1.1.2 打开流式细胞仪。

5.1.1.3 气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

5.1.1.4 打开电脑。

5.1.1.5 等待机器预热5—10分钟后可开始实验。

5.1.2关机程序5.1.2.1 用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。

5.1.2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。

5.1.2.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步。

5.1.2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

5.1.2.5 选择Standby模式10分钟。

5.1.2.6 关闭电脑，再关掉仪器。

5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序）5.2.1CaliBRITE Beads 的准备5.2.1.1 在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITE Beads，并标上unlabeled；若配有双激光做四色，则须在unlabeled管中再加一滴APC-beads；5.2.1.2 在另一装有3ml鞘液的FALCON管加入unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、和APC-beads（若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed（PerCP不很稳定，最好在上机前加入）；5.2.1.3 避光放置，准备上机。

5.2.2软件环境的设置5.2.2.1 从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；5.2.2.2 在Sign In视窗中填入下列信息：操作者、机构、实验室主任（操作者是必须填入的，计算机将保存这些信息），点击Accept；5.2.2.3 进入Set Up视窗，在Assay Selection中，选择你需要的Assay：Lyse/Wash、Lyse/No Wash或HLA-B27 Calib；在CaliBRITE Beads Lot Ids中，根据每一种beads所对应的编码输入Lot ID；在Automatic Saving Options中，你可以选择自动保存或不保存Summary Report，你可以通过单击Location来更改文件名以及保存的位置；最后在Set Up视窗的右下角点击Run。

流式细胞仪操作规程

流式仪操作规程
1. 首次操作时务必在负责人的指导下进行。

2. 操作前需检查所有瓶中的液体，鞘液桶补满超纯水（2L），废液桶倒空，清洗液和消毒液不是空的。

3. 清洗液和消毒液配置方法：清洗液为1% BD FACS Cleaning solution(原液为10%，即稀释十倍使用)，消毒液为BD detergent solution concentrate。

4. 开机前，确保样品支架上放置的EP管内至少装500uL ddH2O。

5. 仪器启动期间，软件界面上仪器当前状态会显示黄色的灯，该过程中仪器会用鞘液冲洗液流管路，持续大约13分钟，直到显示绿灯表示仪器和软件连接完成。

6. 根据实验设计选择软件选项，进行上样。

7. 上样完毕后，用SIP程序清洗进样针，根据提示先上2ml 1% FACS Clean，再上2ml ddH2O。

8. 保证清洗液和消毒液的量，在进样针上放2ml ddH2O，轻触（不能超过3秒）仪器上电源键，仪器自动运行13min cleaning the fluidics程序后自动关机。

9. 清理桌面，写好仪器使用记录。

10.将房间卫生整顿好，垃圾带出实验室，负责人检查后方可离开。

流式细胞仪操作流程

流式细胞仪操作流程流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，它能够对单个细胞进行快速、准确的细胞分析和分类。

本文将详细介绍使用流式细胞仪的操作流程。

一、实验准备在进行流式细胞仪实验之前，需要做好以下准备工作：1. 准备样品：收集和准备待分析的细胞样品，确保样品质量符合要求。

处理样品时要注意细胞的保存和处理条件，以避免样品的污染或破坏。

2. 准备反应体系：根据实验的需要，按照标准操作规程制备所需的反应液和缓冲溶液。

3. 检查和校准仪器：在使用流式细胞仪前，需要对仪器进行检查和校准，确保仪器状态良好，获得准确的实验结果。

二、仪器开机和设置1. 打开流式细胞仪电源，并等待仪器启动完成。

2. 进行仪器的初始化设置，包括选择所需的参数和实验模式等。

3. 设置流式细胞仪的激发和检测通道，根据实验需要选择适当的滤光片和荧光探针。

调整激光功率和检测灵敏度，确保后续实验过程中的信号质量。

三、样品加载和检测1. 将样品转移到适当的离心管中，并进行样品标记。

根据实验需要可以使用荧光标记物、抗体等对细胞进行特异标记。

2. 打开流式细胞仪的样品载架，将样品离心管安置在载架上，并将载架插入流式细胞仪的样品槽中。

3. 启动数据采集软件，设置样品参数和实验条件。

选择合适的采集速度和事件数目，确保获得足够的数据。

4. 开始数据采集，点击软件上的“实时运行”按钮，流式细胞仪将开始读取样品中的细胞信息，并将其转化为电子信号。

5. 采集完成后，保存数据并关闭数据采集软件。

四、数据分析1. 导出数据文件：根据实验需要，将采集到的数据文件导出到数据分析软件中进行进一步处理。

2. 进行数据筛选和清洗，去除噪音污染和非特异信号。

3. 根据实验的目的和问题，选择合适的数据分析方法，对细胞数据进行统计学和生物学分析。

4. 生成结果图表：根据数据分析结果，生成合适的图表或图像，用于展示实验结果和研究发现。

5. 结论和讨论：根据数据分析结果，撰写实验结论和讨论，解释实验结果并提出相应的科学推论。

流式细胞仪的使用流程

流式细胞仪的使用流程1. 简介流式细胞仪 (Flow Cytometer) 是一种先进的生物学实验设备，用于检测和分析细胞的形貌、大小、形态、功能和数量等特征。

它可通过流式技术将单个细胞排列成单个的流束，然后通过激光器进行激发和检测，实现对细胞的高通量分析。

本文将介绍使用流式细胞仪的具体使用流程，帮助用户能够正确、高效地操作该设备。

2. 准备工作在正式操作流式细胞仪之前，需要做一些准备工作：2.1 样本准备•从培养皿中取出待分析的细胞，并进行适当的处理，如洗涤、离心等。

•将细胞悬浮液转移至离心管中，并进行适当的离心操作，以获得较为纯净的细胞样本。

2.2 仪器准备•打开流式细胞仪的电源开关，并等待设备启动完成。

•根据实验需要，调整仪器的相关参数，如流速、激发光源、检测通道等。

•准备合适的背景溶液，用于样本的稀释和冲洗。

3. 操作步骤了解了准备工作后，下面将介绍流式细胞仪的具体操作步骤：3.1 样本准备与装载•使用移液器将经过处理的细胞悬浮液取出一定量至样本管中。

•观察样本管中的细胞悬浮液是否均匀分散，如果存在沉淀则轻轻摇晃样本管使之均匀。

3.2 仪器设置•在流式细胞仪的操作界面上设置相应的参数，如流速、激发光源、检测通道等。

•检查仪器的液路系统是否正常工作，如检查液体的流速、流量传感器是否正常等。

3.3 校准仪器•使用已知样本进行仪器的校准。

通常使用亮度微珠进行仪器的调整和刻度。

•在仪器设置界面选择亮度微珠的通道，并进一步设定检测参数以达到最佳校准效果。

3.4 样本测试•将样本管装载至流式细胞仪中的样本架上，确保样本与仪器的光学系统的光路对准。

•启动流式细胞仪，开始测试。

•根据实验需要，选择合适的激发光源和检测通道，进行样本的快速测试。

•在测试过程中，可根据实验需要采集样本的荧光和散射信号，以及其他额外的参数。

3.5 数据分析•测量完成后，通过流式细胞仪软件导出所测细胞的数据文件。

•使用相应的数据分析软件对所测细胞的数据进行分析和解读。

流式细胞仪使用方法说明书

流式细胞仪使用方法说明书1. 概述流式细胞仪是一种用于细胞分析和排序的先进仪器。

本方法说明书旨在向用户介绍如何正确操作流式细胞仪以及最佳的使用方法。

请用户在使用前仔细阅读本说明书并遵循相关的安全操作规程。

2. 仪器组成流式细胞仪主要由以下几个组成部分构成：- 流体传送系统：用于将样本引入仪器并排除废弃物。

- 激光系统：产生激光束以激发样本中的荧光染料。

- 光学系统：收集样本产生的荧光信号并进行检测。

- 数据分析系统：用于解析和分析收集到的数据。

3. 使用准备在进行流式细胞仪实验之前，请确保以下几个步骤已经完成：- 仪器校准：根据仪器的使用手册进行仪器校准，确保仪器工作在最佳状态。

- 样本准备：按照实验需求，对待测样本进行合适的处理，例如细胞培养、染色等。

- 试剂准备：准备好所需的荧光染料、缓冲液等试剂。

4. 仪器操作以下是流式细胞仪的一般操作步骤：- 打开仪器电源，并等待仪器启动完成。

- 将样本装入合适的样本管，并在样本管中加入适量的荧光染料或其他试剂。

- 将样本管放入仪器中的样本槽，并调整流速和其他参数。

- 启动激光系统，并调整激光强度和波长以适应实验需求。

- 开始数据采集，根据仪器界面指示收集所需数据。

- 数据分析：根据实验需要，使用相应的数据分析软件对采集到的数据进行解析和处理。

5. 安全注意事项在使用流式细胞仪时，务必注意以下安全事项：- 佩戴个人防护装备，包括实验手套和护目镜。

- 遵循实验室的生物安全规程，确保样本处理符合相关的安全要求。

- 避免直接暴露于激光束下，以免损伤眼睛和皮肤。

- 在清洁仪器时使用合适的溶剂，并按照仪器清洁的标准程序进行操作。

6. 故障排除在实际操作中，有时可能会遇到仪器故障或其他问题。

以下是一些常见问题及其排除方法：- 仪器无法启动: 检查电源连接是否正常，重启仪器。

- 数据质量差: 检查样本制备和染色的质量，调整参数和仪器校准。

- 清洗困难: 检查是否有阻塞，按照清洁程序进行清洗。

流式细胞仪安全操作及保养规程

流式细胞仪安全操作及保养规程1. 前言流式细胞仪是一种高端的生命分析仪器，广泛应用于医学、化学、生物学等领域，已经成为现代实验室不可或缺的仪器之一。

然而，流式细胞仪的操作较为复杂，使用过程中需要注意许多安全问题，否则会对自身和实验室环境造成潜在的危害。

为了确保流式细胞仪的正常、安全使用，特制定以下操作及保养规程。

2. 流式细胞仪操作规程2.1 准备工作在使用流式细胞仪前，应注意以下准备工作：2.1.1 带上个人防护装备在使用流式细胞仪时，需要带上一定的个人防护装备，如实验手套、口罩、眼镜等，以防范样本物质对自身的伤害。

2.1.2 样品制备精确地制备样品是获得准确、可重复的流式细胞仪数据的关键。

在制备样品时，需要注意以下事项：•样品应洁净，纯度高；•样品应稀释至适合的浓度；•样品需要避免暴露在光线下。

2.1.3 流式细胞仪清洁使用流式细胞仪前，应将设备清洗并按照操作手册正确设置。

注意声音警报器和信号灯的功效。

2.2 实验操作2.2.1 启动流式细胞仪启动流式细胞仪的前提条件是样品审核通过、清洁完毕并符合清洁过程中设定的安全警戒线。

按照以下操作步骤进行启动：1.将流式细胞仪插头插入电源插座；2.打开流式细胞仪前面板上的电源开关；3.检查设备是否能够正常通电；4.检查设备上的液晶屏是否正常显示。

2.2.2 样品操作样品操作是流式细胞仪的核心，需要遵循以下步骤：1.打开样品架门；2.将样品检测管放在样品架上，注意是否正确安装；3.关上样品架门，并设置喷雾器；4.按下样品检测管的开关，将样品进入流式细胞仪；5.启动流式细胞仪，进行检测。

2.2.3 关闭流式细胞仪实验室操作完毕后，需要及时关闭流式细胞仪，避免发生紧急事故。

按照以下步骤进行：1.关闭流式细胞仪喷雾器；2.将样品架门打开，取出检测管；3.关闭前面板的电源开关；4.拔出插头，关闭电源。

2.3 安全注意事项在实验操作中，需要注意以下安全事项：•在操作流式细胞仪前，应认真阅读使用说明书和操作手册。

流式细胞仪操作步骤

流式细胞仪操作步骤一、样品准备1. 确认样品是否符合实验要求，如细胞浓度、荧光标记等。

2. 根据实验需求，选择合适的试管和细胞样品。

3. 确认样品中是否有杂质或污染物，必要时进行离心和洗涤。

4. 尽可能缩短样品处理时间，避免细胞活性受到影响。

二、样品上机1. 打开流式细胞仪，确认仪器正常工作。

2. 将样品加入到流式细胞仪的样品管中。

3. 根据实验需求，设置合适的流速和压力。

4. 开始采集数据，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。

三、参数设置1. 根据实验需求，选择合适的荧光标记和检测参数。

2. 根据细胞类型和特性，设置合适的门控和阈值。

3. 确认仪器校准和定标工作已完成。

4. 根据需要，设置多色分析，以便于进行细胞分群和定量分析。

四、数据采集1. 在采集数据时，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。

2. 根据实验需求，确定采集的数据量，确保数据具有代表性。

3. 记录采集数据的时间和条件，以便于后续数据分析。

4. 在采集数据时，注意观察细胞活性、浓度和分布情况，及时调整实验条件。

五、数据分析1. 使用专业软件对采集的数据进行处理和分析。

2. 根据实验需求，对数据进行去噪、归一化和定量分析。

3. 进行细胞分群、细胞周期和细胞凋亡等分析。

4. 对数据进行统计学分析和可视化展示。

六、结果输出1. 根据分析结果，输出相应的图表和数据表格。

2. 对结果进行解释和注释，以便于读者理解和应用。

3. 如果需要，可将结果整理成报告形式，提供给相关人员参考和使用。

七、质量控制八、实验室清理。

流式细胞仪的日常操作规范

流式细胞仪的日常操作规范
(总1页)
本页仅作为文档封面，使用时可以删除
This document is for reference only-rar21year.March
流式细胞仪的日常操作规范
一、仪器开/关机程序
1、开机程序
检查仪器鞘液桶和废液桶。

打开流式细胞仪。

气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

打开电脑。

等待机器预热5—10分钟后可开始实验。

2、关机程序
用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。

将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。

将样品换成蒸馏水重复1-2步。

放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

选择Standby模式10分钟。

关闭电脑，再关掉仪器。

二、维护保养
1、每日保养
用蒸馏水作样品，将样品支架支撑置于旁路，以外管吸入2ml
将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml.
选择Standby模式10分钟。

关闭电脑，再关掉仪器。

2、每月保养
将10%漂白剂装入鞘液桶。

旁路鞘液过滤器,以防损害。

将盛有3ml10%漂白剂的试管置于样品支架上,以HI RUN 20-30分钟。

将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤。

流式细胞仪标准操作规程

流式细胞仪标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号：××-JYK-MY-×××版本：生效日期：共页第页1.目的建立规范标准的××型流式细胞仪操作程序确保流式细胞检测结果准确可靠2.仪器名称及型号××（品牌）××（型号）流式细胞仪。

3.应用范围适用于免疫组经授权的检验技术人员。

4.仪器简介和测试原理流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号，工作在测量区进行。

所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。

液流中央的单个细胞通过测量区时，受到激光照射会向立体角为2x的整个空间散射光线，散射光的波长和入射光的波长相同。

散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关，因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。

未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。

经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变，其散射光信号当然不同于活细胞。

散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关，还跟散射角及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。

因此流式细胞仪综合了激光技术、计算机技术、半导体技术、流体力学、细胞化学等各门学科。

5.开展项目包括：常规免疫功能检测、细胞周期检测、细胞凋亡检测、免疫细胞分型、造血干细胞检6.仪器环境要求无尘、通风良好的环境，无直接日照。

温度：18～25℃，温度的改变应该<2℃/h。

室内湿度：30%～80%。

7.操作规程7.1·设备每日开机程序：开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源。

开启其他周边配备电源，如打印机，开启计算机。

确认鞘液筒有八分满，废液桶近似空的，桶盖是旋紧的；所有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠。

流式细胞仪操作规程

流式细胞仪操作规程一、开机程序1、检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。

2、打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。

打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用超纯水，特殊情况需要用PBS），合上压力阀。

确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。

3、将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热 5－10 分钟。

排出过滤器内的气泡。

4、如果需要打印，打开打印机电源。

5、打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。

6、执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。

7、分析样品时，先用 FACAFlow 或 PBS 进行 HIGH RUN 约 2 分钟，以去除可能的管路残片。

二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1、从苹果标志中选择 CELLQuest，建一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。

2、选取屏幕左列绘图工具中的 Dot plot，绘出一个或多个 Dot Plots（点图）。

从 Dot Plot 对话框中选取 Acquisition 作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和 y 轴参数。

3、选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram（直方图）。

4、将此视窗命名后储存于 FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder\EXP 文件夹中（也可以自己取名，但每个实验人员只能建立一个文件夹），下次进行相同实验时可直接调用。

三．用 CELLQuest 进行仪器的设定和调整1、从苹果画面中选取 CELLQuest，进入 CELLQuest 后在 File 指令栏中打开合适的获取模式文件。

2、从屏幕上方 Acquire 指令栏中，选取 Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。

流式细胞术标准操作规程,1200字

流式细胞术标准操作规程流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞学研究技术，广泛应用于细胞表型分析、细胞分选、免疫学研究等领域。

为了确保流式细胞术的准确性和可靠性，需要遵循一系列的标准操作规程。

1. 实验前准备- 确保流式细胞仪、计算机和相关设备正常工作，包括保证激光器、光学系统等的正常运行。

- 确保光谱校准及标定的准确性，包括日常监测仪器的性能、定期校准补偿参数等。

- 准备所需试剂和标记抗体，确保其质量良好并符合实验要求。

2. 样本处理- 根据实验目的选择合适的细胞来源和取样方式，并保持细胞的完整性及活性。

- 根据细胞类型和实验需要选择适当的预处理方法，如细胞固定、细胞膜穿透等。

- 对于固定样本，要避免过度固定和过度穿透，以免影响细胞染色和光学性能。

3. 样品标记- 预先优化标记抗体的浓度和反应时间，确保准确的抗原检测和最大的靶向效率。

- 避免标记抗体和细胞表面抗原的非特异性结合，应加入相应的负对照组和等位控制。

- 合理选择荧光染料和标记方法，避免光谱重叠和串扰，以确保标记物的准确检测。

4. 流式细胞仪调试及仪器设置- 根据样本类型和实验需求，选择适当的仪器设置，包括选择合适的激光器、滤光片和检测参数等。

- 对于多色染色，进行补偿设置以消除光谱重叠和仪器漂移带来的影响。

- 定期校准和检验仪器的参数，确保仪器性能和数据稳定性。

5. 流式细胞术操作- 严格控制实验要求的温度、湿度和光照等环境条件，避免对细胞和染料的影响。

- 合理设置流速和事件采集数目，以确保准确且充分的样本分析。

- 避免空管事件和双重事件的发生，及时清理堵塞和冲洗流式细胞仪采集管路。

- 对于稀有事件和低频事件，需要增加采集数目和合理的补偿设置，以提高检测敏感性。

- 及时保存数据和相应的控制实验数据，以备后续数据分析和结果验证。

6. 数据分析和结果解释- 使用专业的流式细胞术分析软件进行数据处理和结果分析。

- 对于多色染色，应进行合理的补偿和背景校正，确保数据的准确性和可靠性。