烟草植物组织培养实验报告2223
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4.4烟草叶片愈伤组织的诱导和不定芽的分化
于超净台中彻底冲洗外植体；70%酒精消毒3min；无 菌水冲洗3遍，每遍3mini；将烟草叶片残留的水分用灭 过菌的滤纸吸干；白瓷板上用消毒的解剖刀分割为11.5cm2的小块； 接入相应的MS培养基上，每瓶接种4-5 块。接入（1）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀；
CuSO4.5H2O4 0.025 100 2.5
CoCL2.6来自百度文库2O 0.025 100 2.5
4 铁 Na2-EDTA 盐 FeSO4.4H2O
37.3 100 3730 27.8 100 2780
甘氨酸
5 有 盐酸吡哆醇 机 物 盐酸硫铵素
烟酸
2.0 100 100 0.5 100 25 0.1 100 5 0.5 100 25
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜 过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就 不能再使用。
1． 制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准 要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2． 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制：
4.3植物材料表面灭菌——消毒剂灭菌
从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污 染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严
格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接 种。 1.接种步骤： 第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗 →→ 自来水冲洗 第二步：对材料的表面浸润灭菌 ： 70%酒精浸10-30秒→→无菌水 第三步：灭菌剂处理→→ 0.1-1%升汞5-8 min（或其他灭菌剂） 第四步：无菌水进行冲洗 注意事项： １.灭菌剂一般要临时配制，现配现用．升汞可以短期储存． ２.对去除较容易的灭菌剂灭菌后无菌水冲洗３-４次，升汞一般５-８ 次，每次不少于３min ３.灭菌时要轻轻的搅拌，消除气泡，使消毒更彻底． ４.灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。 ５.灭菌液要充分浸没材料 2.无菌操作可按以下步骤进行： （1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外 线灯进行杀菌； （2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯； （3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； （4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工 作台面； （5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； （6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽 等； 材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切 割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要 剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉 污染。 （7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连 续接种，每5天要大强度灭菌一次。
4.2 培养基配制和灭菌
4.2.1培养培养基配制程序
本次实验使用 （1）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L； （2）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L； （3）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
烟草叶片的组织培养
一、实验目的
本实验通过配制3种不同的培养基来实现烟草种子苗叶片 诱导、分化及植株再生从而深刻理解植物细胞的全能性、学习 和掌握植物组织培养技术，
二、实验原理
植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物 技术。由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界 的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。本文着重 介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济 核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉 的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
继代芽增殖培养：很多花卉植物经过2-6 周的培养即可分 化出大量的不定芽。根据情况可以将这些增殖了大量新芽的外 植体重新分割进行几代培养，以扩大繁殖规模直至满足繁殖需 要为止。
三、实验材料
植物材料：烟草植株
药品： 激素（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、 1N NaOH、 1N HCl 蒸馏水 、 70%酒精、 0.01%升汞 仪器：1 玻璃杯 、1玻璃棒、1pH试纸(5.5-9.0) 1瓶无菌水、1 个无菌烧杯、1包无菌滤纸、 1个无菌白瓷板 、 培养瓶若干 移液器、 微波炉、 灭菌器、 超净工作台、 酒精灯、 解剖 刀、 镊子
注意事项：上述培养基均在MS固体培养基溶化后降低到50 左右后，加入相应激素所得， MS固体培养基的配置过程在此 不作过多赘述
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度 25±2℃，光照强2000lx。
(一).母液吸取量的计算
配制培养基的升数 公式1：母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————
灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格， 无论哪种型号，操作的步骤都很相近。
进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热 源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀 →0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打 开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。
15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组 织，愈伤组织诱导率为100%；
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出 许多浅黄绿色芽点；
60d后，不仅从愈伤组织上分化出越来越多幼芽，芽 诱导频率(芽数/块愈伤组织)为25～35，而且还可观察 到，该愈伤组织较早分化产生的幼芽叶片呈现不同程度 白化（或缺绿）。但此时若将此缺绿幼芽切下，转接至 不加2,4-D的幼芽增殖培养基（2）上，
按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐 （FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物 可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小 口瓶中保存，贴上标签。 3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水 中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水 定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。 4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量 外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保 存，贴上标签。
将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至 80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0， 过酸过碱则用1N NaoH和1N HCL调整。 二．分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装
到25-30个三角瓶中，每个三角瓶约30ml左右（一般占试管、三角瓶容 量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰瓶壁。 三. 包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进 行灭菌。
四、实验方法与步骤
4.1 MS培养基母液的配制
母液
成 分
编种 号类
大 KNO3
量 NH4NO3 1元
素 MgSO4·7H2O
KH2PO4
2
CaCl2·2H2O
MnSO4·4H2O
ZnSO4·7H2O 3微
量 H3BO3
元 KI
规定 量
1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 6.2 0.83
用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、 烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
4.2.2 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（高压蒸汽灭
菌锅的使用方法）
具体操作步骤： 1. 高压锅放水至平把架； 2. 把包扎好的培养基装入高压锅; 3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀. 4. 然后接通电源. 5. 压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。 6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭 菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针 下降至0.11MPa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟。 7. 灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待 高压锅内的空气完全排除后，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍 待冷后再把培养基取出。 8. 经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用 前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25℃下保存4天，如 果培养基需要贮存较长时间，可在4℃低温下保存。
(三) 配制培养基（1000ml） 1. 琼脂: 称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全 溶解为止. 2. 蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼 脂的300ml蒸馏水中。 3. 各种母液的吸取（培养基1L） （1） 用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母 液（B）各100ml （2） 分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐 （D）母液各10ml （3） 用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml （4） 移取激素
6
肌酸
100 100 5000
1000 10 500 10 500 10
注意： 1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量 后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量 蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至 刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍 数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2．微量元素母液的配制
浓缩 倍数
称取量 （mg）
母液 体积 （ml）
配制1 升培 养基 吸取 量定 容
10 19000 10 16500 1000
100 10 3700
10 1700
10 4400 1000 100
100 2230
100 860
100 620 100 83
1000 10
素 Na2MoO4·7H2O 0.25 100 25
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态 发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过 脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一 块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动 期、分裂期和形成期。
培养基配方设计是组培法育苗中的关键步骤。根据理论与 实际经验，对不同种类的花卉及不同的取材部位，需设计出相 适应的配方，并从中筛选出最佳者。
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配 成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸 （NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米 素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。 激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸 需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母 液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃） 保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为 0.5mg时，则取1ml母液即可。
母液浓缩倍数
培养基要求的含量 公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂）
母液每CC的含量
（二） 各种母液按顺序编号排列 A. 大量元素；B.CaCl2.2H2O； C.微量元素 ；D.铁盐； E.有机 物； F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA 用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、 激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后, 加蒸馏水定容至100ml。
于超净台中彻底冲洗外植体；70%酒精消毒3min；无 菌水冲洗3遍，每遍3mini；将烟草叶片残留的水分用灭 过菌的滤纸吸干；白瓷板上用消毒的解剖刀分割为11.5cm2的小块； 接入相应的MS培养基上，每瓶接种4-5 块。接入（1）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀；
CuSO4.5H2O4 0.025 100 2.5
CoCL2.6来自百度文库2O 0.025 100 2.5
4 铁 Na2-EDTA 盐 FeSO4.4H2O
37.3 100 3730 27.8 100 2780
甘氨酸
5 有 盐酸吡哆醇 机 物 盐酸硫铵素
烟酸
2.0 100 100 0.5 100 25 0.1 100 5 0.5 100 25
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜 过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就 不能再使用。
1． 制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准 要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2． 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制：
4.3植物材料表面灭菌——消毒剂灭菌
从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污 染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严
格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接 种。 1.接种步骤： 第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗 →→ 自来水冲洗 第二步：对材料的表面浸润灭菌 ： 70%酒精浸10-30秒→→无菌水 第三步：灭菌剂处理→→ 0.1-1%升汞5-8 min（或其他灭菌剂） 第四步：无菌水进行冲洗 注意事项： １.灭菌剂一般要临时配制，现配现用．升汞可以短期储存． ２.对去除较容易的灭菌剂灭菌后无菌水冲洗３-４次，升汞一般５-８ 次，每次不少于３min ３.灭菌时要轻轻的搅拌，消除气泡，使消毒更彻底． ４.灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。 ５.灭菌液要充分浸没材料 2.无菌操作可按以下步骤进行： （1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外 线灯进行杀菌； （2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯； （3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； （4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工 作台面； （5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； （6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽 等； 材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切 割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要 剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉 污染。 （7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连 续接种，每5天要大强度灭菌一次。
4.2 培养基配制和灭菌
4.2.1培养培养基配制程序
本次实验使用 （1）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L； （2）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L； （3）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
烟草叶片的组织培养
一、实验目的
本实验通过配制3种不同的培养基来实现烟草种子苗叶片 诱导、分化及植株再生从而深刻理解植物细胞的全能性、学习 和掌握植物组织培养技术，
二、实验原理
植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物 技术。由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界 的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。本文着重 介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济 核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉 的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
继代芽增殖培养：很多花卉植物经过2-6 周的培养即可分 化出大量的不定芽。根据情况可以将这些增殖了大量新芽的外 植体重新分割进行几代培养，以扩大繁殖规模直至满足繁殖需 要为止。
三、实验材料
植物材料：烟草植株
药品： 激素（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、 1N NaOH、 1N HCl 蒸馏水 、 70%酒精、 0.01%升汞 仪器：1 玻璃杯 、1玻璃棒、1pH试纸(5.5-9.0) 1瓶无菌水、1 个无菌烧杯、1包无菌滤纸、 1个无菌白瓷板 、 培养瓶若干 移液器、 微波炉、 灭菌器、 超净工作台、 酒精灯、 解剖 刀、 镊子
注意事项：上述培养基均在MS固体培养基溶化后降低到50 左右后，加入相应激素所得， MS固体培养基的配置过程在此 不作过多赘述
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度 25±2℃，光照强2000lx。
(一).母液吸取量的计算
配制培养基的升数 公式1：母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————
灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格， 无论哪种型号，操作的步骤都很相近。
进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热 源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀 →0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打 开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。
15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组 织，愈伤组织诱导率为100%；
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出 许多浅黄绿色芽点；
60d后，不仅从愈伤组织上分化出越来越多幼芽，芽 诱导频率(芽数/块愈伤组织)为25～35，而且还可观察 到，该愈伤组织较早分化产生的幼芽叶片呈现不同程度 白化（或缺绿）。但此时若将此缺绿幼芽切下，转接至 不加2,4-D的幼芽增殖培养基（2）上，
按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐 （FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物 可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小 口瓶中保存，贴上标签。 3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水 中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水 定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。 4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量 外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保 存，贴上标签。
将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至 80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0， 过酸过碱则用1N NaoH和1N HCL调整。 二．分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装
到25-30个三角瓶中，每个三角瓶约30ml左右（一般占试管、三角瓶容 量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰瓶壁。 三. 包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进 行灭菌。
四、实验方法与步骤
4.1 MS培养基母液的配制
母液
成 分
编种 号类
大 KNO3
量 NH4NO3 1元
素 MgSO4·7H2O
KH2PO4
2
CaCl2·2H2O
MnSO4·4H2O
ZnSO4·7H2O 3微
量 H3BO3
元 KI
规定 量
1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 6.2 0.83
用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、 烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
4.2.2 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（高压蒸汽灭
菌锅的使用方法）
具体操作步骤： 1. 高压锅放水至平把架； 2. 把包扎好的培养基装入高压锅; 3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀. 4. 然后接通电源. 5. 压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。 6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭 菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针 下降至0.11MPa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟。 7. 灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待 高压锅内的空气完全排除后，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍 待冷后再把培养基取出。 8. 经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用 前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25℃下保存4天，如 果培养基需要贮存较长时间，可在4℃低温下保存。
(三) 配制培养基（1000ml） 1. 琼脂: 称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全 溶解为止. 2. 蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼 脂的300ml蒸馏水中。 3. 各种母液的吸取（培养基1L） （1） 用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母 液（B）各100ml （2） 分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐 （D）母液各10ml （3） 用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml （4） 移取激素
6
肌酸
100 100 5000
1000 10 500 10 500 10
注意： 1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量 后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量 蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至 刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍 数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2．微量元素母液的配制
浓缩 倍数
称取量 （mg）
母液 体积 （ml）
配制1 升培 养基 吸取 量定 容
10 19000 10 16500 1000
100 10 3700
10 1700
10 4400 1000 100
100 2230
100 860
100 620 100 83
1000 10
素 Na2MoO4·7H2O 0.25 100 25
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态 发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过 脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一 块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动 期、分裂期和形成期。
培养基配方设计是组培法育苗中的关键步骤。根据理论与 实际经验，对不同种类的花卉及不同的取材部位，需设计出相 适应的配方，并从中筛选出最佳者。
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配 成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸 （NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米 素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。 激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸 需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母 液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃） 保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为 0.5mg时，则取1ml母液即可。
母液浓缩倍数
培养基要求的含量 公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂）
母液每CC的含量
（二） 各种母液按顺序编号排列 A. 大量元素；B.CaCl2.2H2O； C.微量元素 ；D.铁盐； E.有机 物； F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA 用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、 激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后, 加蒸馏水定容至100ml。