噬菌体综合防治细则

噬菌体的综合防治细则
一、环境：
1、马路：每天清扫一次，每月洒漂白粉一次。

2、楼顶：每月清扫一次；每月洒漂白粉一次。

3、楼面：每天打扫卫生，无料液，无积水。

用来苏水喷洒楼面消毒；接种前30分钟，用0.5％新洁尔灭溶液喷洒设备及周围；每周对种子楼、夹层、楼面、总过滤器区取样进行碟检检测噬菌体。

4、走廊、各操作室、休息室：每天打扫卫生，每周喷洒来苏水一次。

5、地面：发酵周边地面每天清扫一次。

每半月对大罐中、下部地面、罐底洒甲醛一次；每月用热碱水对发酵楼地面彻底清洗消毒一次。

6、夹层：每周清扫一次，洒甲醛消毒。

7、阴沟：每周清扫一次，无淤积；每月在阴沟周围洒漂白粉消毒一次。

8、取样：每次取样时用器皿将取样外流出的发酵液接好，集中后用万分之三的甲醛闷消30分钟后倒入下水道，并用水冲净桶及下水道周边。

每周用蘸有新洁尔灭的纱布擦净取样嘴的污垢。

9、活菌液：每班做样后，加万分之一的甲醛煮沸，倒净，再冲洗干净。

10、器皿消毒：每周定期用漂白粉水清洗消毒。

11、菌渣：及时处理。

12、卫生：保持楼面干净无残留发酵液，无积水；保持设备、门窗上无灰尘；车间周围的沟无淤积。

二、空气系统：
1、列管冷凝器、旋风分离器：每月一次检漏；三级冷却每级温差不超过45℃；每小时排油水一次。

2、总过滤器、膜过滤器、金属过滤器：严格按过滤器操作规程使用操作，空气温度控制在40－50℃，使用20天左右开始检查（尘埃粒子计数器），检查合格后才能使用，必须安排专人处理消毒。

（总过滤器处理：加碱或洗涤剂煮丝网、油污清洗，吹干后再填装）
3、滤纸过滤器：每批消毒，使用3－5批更换介质，染菌罐每批更换介质再进罐。

4、空气管道：每日对管道巡检，排灰一次；每月进行一次检漏。

5、一、八车间过滤器：每月定期清洗更换过滤袋。

6、分过滤器：正常每月消毒一次，与总过滤器同步进行；消毒前，应对过滤器进行认真检查，装好后应用肥皂水试压试漏，消毒时，先将蒸汽管道的冷凝水排尽后，将蒸汽缓慢地通入过滤器，当压力达到0.1MPa时再保压1小时。

染球菌一批或连续两批染杂菌必须消毒处理。

三、设备：
1、打料罐、配料罐、打料管道：每批冲洗干净，每周消毒处理一次；配料按工艺操作。

2、放料管道：每批冲洗干净；每天放罐后洗罐水压入提炼，用蒸汽冲消5分钟；每月用煮罐碱水冲洗消毒一次并压入提炼。

3、酸化罐、滤洗液罐：每批冲洗干净；每周喷新洁尔灭一次；每月用碱水(1.5－2％，煮开，浸泡2－3小时)清洗一次。

4、中、小罐：进罐前试压检漏，检查近罐第一阀。

小罐每批移完后清洗干净，加水煮罐；中罐每批空消；中、小罐每月煮碱水(1.5－2％，煮开，浸泡2－3小时)一次。

5、糖罐：每月用碱水(1.5－2％，煮开，浸泡2－3小时) 清洗一次。

6、油罐：每月煮碱水(1.5－2％，煮开，浸泡2－3小时) 清洗一次。

7、大罐：进罐前试压检漏，检查近罐第一阀。

正常时可根据实际情况进行空消；染菌罐批必须进行空消。

放罐后要冲洗干净，并下罐清除死角残渣。

每月煮碱(2％，120度，2－3小时)一次，煮完碱水后蛇管试压试漏。

8、料罐：每日补料后冲洗干净；每半月煮碱一次。

9、移种补料管道系统：每周试压检漏处理一次；每月浸碱后碱水通过分配站压入管道消毒一次。

移种前必须检查管道上各小排汽及阀垫，补料系统的隔膜阀垫子要定期检查更换。

10、系统消毒：糖系统每周消毒一次；油系统每周消毒一次；丙醇系统每周消毒一次。

四、罐前准备：
1、近罐第一阀：每批必查阀芯、阀杆、阀垫。

2、蛇管、罐体、轴封：每批试压检漏。

3、大、中、小罐：每批清除死角残渣。

4、糖、计量罐的隔膜阀每半月拆检一次。

每周抽查一次。

5、油分配站的隔膜阀每半月拆检一次。

每周抽查一次。

6、空气进罐隔膜阀片：中、小罐、糖、油、丙醇罐每季拆检一次；大罐每半年拆检一次。

对连续染菌罐应同分过滤器一起拆检、消毒。

7、移种分配站隔膜阀每周抽查一次，每月更换一批，每周试漏一次。

五、消毒：预热、实消、保压按消毒工艺执行。

六、移种及处理：
1、移种、补料管、罐：每批按工艺规定操作。

2、移种管道：移种、补料完后用蒸汽冲消5分钟以上；消移种管道时每15分钟巡检一次；保证小排汽畅通。

3、小排汽及周围：每次用后冲洗干净，保证无菌液、积水。

七、异常处理：
1、中、小罐染菌：煮至120℃，保压10分钟，放下水道，洗净，煮清水至120℃后浸泡12小时，进罐前查漏。

2、大罐染菌：加万分之五的甲醛煮放，洗净后，加甲醛进行闷消30分钟，洗净，进罐前查漏。

3、中、小罐化稀：煮至120℃，保压10分钟，放下水道，洗净，煮碱水(1.5％)2小时，煮开清水浸泡1－2小时。

4、大罐化稀：加万分之五的甲醛煮至120℃，保压10分钟，放下水道，洗净后煮碱水(2％)120度保温1－2小时，清水洗。

八、菌种及相关无菌管理：
1、做好菌种的技术档案工作，建立好台帐。

2、对菌种的系谱和特性进行认真的整理、分类，在生产过程中，不同菌号的菌种交叉使用。

3、对菌种有计划的进行筛选，在筛选的过程中，注重种子的抗噬菌体性能的筛选。

4、对筛选出来的斜面和每一批新斜面要到菌种中心做噬菌体检测实验。

5、化稀罐，及时留样，送菌种中心做噬菌体检测。

6、操作室、无菌室日常消毒处理：
（1）环境处理：每天工作开始前,将所属卫生区域打扫一遍,地面用扫帚扫干净后,用拖把拖净,所有桌面、台面用清水擦拭干净；
（2）每天进无菌室前开启紫外灯30分钟对无菌室及缓冲间进行灭菌处理,当天用具(包括空白培养基)可同时放入缓冲间进行表面灭菌.
（3）进入无菌室后,应先用0.1%的新洁尔灭溶液洗手,擦拭操作台,然后用75%的酒精再对手及操作台擦拭一遍,并对所有放置超净工作台的物品也用75%的酒精进行揩擦.
（4）每日对无菌室空气洁净度进行监测,在工作台(工作时)和无菌室空气管道风口处放置无菌双碟,37℃培养48小时后,菌落计数.
（5）工作完毕，用0.1％的新洁尔灭溶液对操作台、墙面、地面、凳子进行擦拭，并用0.25％的新洁尔灭向无菌室及缓冲间空中喷洒。

并紫外灭菌30分钟。

（6）所有废弃的活菌培养物均应放入蒸煮锅内煮沸3～5分钟，染其它杂菌、噬菌体培养物另加适量甲醛煮沸十分钟，方能丢入垃圾中。

（7）对恒温培养间的脏物（如修理后、摇瓶破损等）应及时进行处理,尤其是摇床、培养架上的污渍，应用0.1％的新洁尔灭溶液进行揩擦。

7、作室、无菌室每周消毒处理：
（1）用0.1%的新洁尔溶液擦洗操作室、培养间所有用具、门窗、柜子、培养箱、冰箱、水池、地面、台面、墙壁、培养间、摇床等，再用清水擦一遍，之后用来苏水喷洒地面。

（2）每周用0.1％的新洁尔灭溶液对无菌室的天花板、墙壁、地面、操作台，缓冲间的天花板、墙壁、地面进行一次彻底的消毒处理，一周或间隔一周用苯酚薰蒸一次。

（3）每周对无菌室、操作室环境检查一次无菌情况：无菌室清洁后，取细菌培养基平皿，均匀放置无菌室内各工作位置上以及各缓冲间，开盖暴露30分钟．在35～37℃培养48小时后，计算菌落数，无菌室沉降菌均值应≤3个／皿，操作室≤10个／皿。

并经常对操作室、恒温培养间、走廊进行噬菌体检测，发现异常应及时进行特殊处理。

（4）每周检查一次超净工作台无菌程度：打开紫外灯照射30分钟后，打开超净台送风系统运行30分钟，37℃培养48小时后计算菌落数，其沉降菌均值应≤1个／皿。

（5）沉降菌检测不合格的无菌室不得使用，须立即清扫；必要时可使用甲醛按每立方米2～4ml/m3进行熏蒸12小时，打开清洁工作台送排风系统，排除干净后，再次检测直至合格。

（6）不同无菌室有各自专用的清洁用具，不得混用。

（7）使用过的清洁工具清洁完毕后，要浸渍消毒（如：0.1～0.5%新洁尔灭溶液），放入规定地点。

9、月处理：
（1）每半月或每月对无菌室、恒温培养间无菌空气管道送风口纱布进行一次更换；纱布倒上5%新洁尔灭甘油液；
（2）每月对所有玻璃器皿用1.5～2.0%碱水煮消一次，
（3）每月对种子用空气过滤器进行消毒处理一次。

九、其它
1、霉菌、生化：每月一次对所有器具消毒，摇瓶煮碱。

与煮罐同步进行。

2、板框：每批冲洗干净菌渣及残液；每两周刷槽板一次；每月刷板一次；染菌严重的罐，滤布进行消毒处理；酸化罐洗罐碱水打入板框；地面清洗卫生要求同发酵楼面。

3、有针对性地对部分原材料如豆粉、玉米浆等取样进行噬菌体检测。

4、对检测发现有噬菌体的地方重点撒漂白粉薰甲醛。

5、提炼接收发酵液时，酸化时正常罐加万分之三的甲醛，染菌较严重的发酵液，应加入万分之五的甲醛。

每月煮碱一次。

5、以上的处理情况均应建立专门台帐，要有专人负责安排、检查、记录。