骨髓细胞化学染色讲义资料

[临床意义]
铁染色主要用于缺铁性贫血与 铁粒幼细胞性贫血的诊断，也是 指导铁剂治疗的一个灵敏而可靠 的指标。特别是铁粒幼细胞贫血 形成特有的环形铁粒幼细胞，也 易与其他类型贫血区别。
中性粒细胞碱性磷酸酶
(NAP)染色(钙-钴法）
[原理] 当细胞内的NAP活性存在时，在pH
为9.2～9.5的碱性条件下，它可将作用 液中的基质β-甘油磷酸钠水解，释出磷 酸，进而与作用液中的钙离子结合，成 为磷酸钙沉淀，再经过硝酸钴和硫化胺 的作用，生成不溶性硫化钴，呈黑色沉 淀定位于胞浆。
4.苏木素复染液:1瓶× 5
[方法]
1.新鲜涂片滴加固定液(4 °C)30秒,水洗待干。 2.将I液置入II液混合成为基质液。将涂片置
入后，37°C放置30分钟，流水冲洗数分钟， 取出待干。 3.苏木素复染1-2分钟，水洗，待干，镜检。 4.结果显示： 阳性——细胞内出现暗红色沉淀物，定位于胞 质。 阴性——细胞内无红色沉淀物。
[临床意义]
用于鉴别急性粒细胞白血病、急性 单核细胞白血病、急性淋巴细胞白 血病。POX主要存在于粒系细胞中， 细胞越成熟，其反应越强。原始单 核细胞呈阴性，幼稚单核细胞和成 熟单核细胞呈弱阳性反应。淋巴系、 巨核系、红细胞系各阶段细胞均呈 阴性反应。
酸性磷酸酶(ACP)染色
[原理]
在酸性条件下(pH值4.9)，磷酸 酶将作用液中的基质(甘油磷酸钠) 水解，产生磷酸，进而与铅作用生 成磷酸铅沉淀于细胞酶活性存在处， 然后与硫化铵作用，生成黑色硫化 铅沉淀。
心倒入340ml冷蒸馏水中，混匀） 20g/l伊红溶液。 甲醛溶液。
[结果观察]
幼红细胞核染成鲜红色，胞浆呈淡 黄色，铁粒呈蓝绿色。
（1）细胞外铁：用低倍镜观察骨髓 小粒,细胞外铁主要存在于巨噬细胞 胞浆内,而被染成蓝色，再用油镜判 断阳性程度。分为（-）、（+）、 （++）、（+++）、（++++）。
2. 显示:通过化学反应显示被测物质，有 偶氮偶联法，联苯胺法，金属沉淀法等。
3. 复染：作为背景染色，使反应的细胞 结构能更清楚显示出来。
铁染色
[原理] 机体多余的铁以铁蛋白及含铁 血黄素的形式储存。这些铁与低 铁氰化钾在酸性溶液中发生反应 而呈蓝色。
[试剂]
40g/l亚铁氰化钾溶液。 4%盐酸（38%浓盐酸40ml，小
NAP染色测定(偶氮偶联法）
[检测原理]
血细胞内的碱性磷酸酶（NAP）在碱性环境下， 水解α-磷酸萘酚钠，产生α -萘酚。后者与重氮 试剂偶联形成有色沉淀物，沉淀物的显色深浅
与NAP活性成正比。
[试剂盒组成]
1. NAP固定液：1瓶×5
2. NAPI液(α-磷酸萘酚钠)：1瓶× 5
3. NAPII(坚牢蓝B+tris-HCl)液:1瓶× 5
骨髓细胞化学染色
细胞化学染色是以细胞形态学为基 础，利用化学反应原理，对细胞中 的酶类、脂类、糖类及蛋白质等化 学物质进行定性、定位或半定量分 析的方法。
用于血液系统疾病的诊断、鉴别诊 断及疗效判断；用于白血病细胞类 型的判断。
基本步骤
1. 固定:目的是保持细胞固有结构和化学 成份不变，分蒸汽固定和液体固定。
[临床意义]
1.网状细胞、吞噬细胞、组织细胞、粒 细胞和单核细胞此酶阳性反应。
2.毛细胞白血病时，毛细胞呈阳性反应， 且不为L-酒石酸所抑制。
3.戈谢细胞ACP染色阳性，而尼曼-匹克 细胞呈阴性。
特异性酯酶(SE)染色 [原理]
氯醋酸AS-D萘酚酯酶为粒细胞所 特有，故称特异性酯酶，可将基质中 的氯醋酸AS-D萘酚水解而产生萘酚 AS-D，后者与重氮盐偶联生成不溶性 有色沉淀定位于胞浆中。
[临床意义]
1.正常血细胞反应：SE在分化 好的原始粒细胞可呈弱阳性反应， 早幼粒细胞呈强阳性反应，SE活 性不随粒细胞的成熟而增强。单 核细胞呈阴性或弱阳性反应，其 他细胞均呈阴性反应。
2.急性白血病类型的鉴别：急性 粒细胞白血病时，原始粒细胞和 早幼粒细胞的SE活性显著增强； 急性单核细胞白血病、急性淋巴 细胞白血病、急性巨核细胞白血 病时，其原始、幼稚细胞均呈阴
过氧化物酶(POX)染色[原理]
粒细胞和部分单核细胞胞浆中 存在过氧化酶，它可将底物 (H2O2)分解产生出新生态氧， 进而使无色的联苯胺氧化为蓝 色的联苯胺蓝，后者与亚硝基 铁氰化钠结合，形成稳定的蓝 色物质。
阳性的中性粒细胞
阳性的原始粒细胞和阴性的淋 巴细胞
阳性的粒细胞和阴性的巨核细 胞
3. NAP活性对下列疾病有鉴别诊断价值：
1）.慢性粒细胞白血病与类白血病反应的鉴别 2 ）.慢性粒细胞白血病与其他骨髓增生性疾病 的鉴别
3） PNH与再生障碍性贫血的鉴别
4） 恶性组织细胞病与反应性组织细胞增 生症的鉴别
5） 真性红细胞增多症与继发性红细胞增 多症的鉴别
6） 区别细菌性感染和病毒性感染
(-)
(+)
(++)
(+++)
(++++)
(+++)、（+）、（++++）
[积分计算]
在油镜下计数100个成熟中性粒细胞， 包括杆状核和分叶核粒细胞，结果分级 为（-）、（+）、（++）、（+++）、 （++++），分别为0-4分，所有细胞 分值之和即为积分值，阳性细胞之和为 阳性率。正常范围：10-100分，阳性率 10-50%
细胞外铁阳性（++）
（2）细胞内铁：油镜下计数100 个有核红细胞，记录阳性细胞 （胞浆中有蓝色颗粒即铁粒幼细 胞）的百分率。同时注意有无环 形铁粒幼细胞（6颗以上，并绕核 1/2以上者）。
环形铁粒幼红细胞
[参考值]
1.细胞内铁：计算100个中幼红细胞、 晚幼红细胞，计数阳性率，正常值2045%；铁颗粒1-5粒，一般不超过10 粒。 2.细胞外铁：观察骨髓小粒中巨噬细 胞胞浆内蓝色颗粒。正常为（+）或 （++）。
[注意事项]
1.标本宜新鲜，若不能及时测定可先用 固定液处理后，可保存数天。
2.基质液配制后要及时应用，以免失效 或降低阳性强度。
3.基质液为一次性使用，配制后不能反 复应用。
[临床意义]
1.各种急、慢性粒细胞性白血病，其NAP积分 可降低甚至为零。
2.各种炎症（细菌性），手术后，灼伤等NAP 积分均可升高。