临床血液学检验 06 细胞化学染色

一 、过氧化物酶染色 peroxidase (POX)
血细胞所含的POX主要为髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO） 1985年血液学国际标准化委员会（ICSH）推荐三种方法：二氨
基联苯胺法（DAB）、过氧化物酶氨基－甲基卡巴唑染色法及 二盐酸联苯胺法。 以前常用复方联苯胺法（Washburn法）
ALL：阴性（阳性率＜3% ） M3 、M2b ：强阳性 M2a、M1、M6、M4、M5 : 多数阳性
POX染色阳性为急性髓细胞白血病！
二、苏丹黑染色法 Sudan black B （SB）
原理：细胞浆内的中性脂肪、类固醇、磷 脂+苏丹黑→脂类物质被染成黑色
结果分级：基本同POX染色 临床意义：基本同POX染色。但苏丹黑比
血细胞内的α-丁酸萘酚酯酶在碱性条件下, 将基质液中的α-丁酸萘酚水解,释出α-萘 酚,α-萘酚与基质液中的坚牢紫酱GBC偶联, 形成不溶性红色沉淀,定位于胞质内
在细胞浆中出现阳性的颗粒，根据阳性物质有 无、多少分为（-）至（++++）
结果应报阳性率（观察100个白血病细胞，阳性 细胞所占的比例）及阳性分布情况
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POX染色的结果分级
（-） 无阳性颗粒。 （±） 颗粒细小、分布稀疏 （+） பைடு நூலகம்粒较粗、常呈局灶性分布、约占胞浆1/4 （++） 颗粒粗大、分布较密、约占胞浆1/4～1/2 （+++） 颗粒粗大、团块状分布、约占胞浆1/2～3/4 （++++）布满整个细胞、可覆盖核上
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二氨基联苯胺法（DAB）的原理
血细胞内的POX，在H2O2存在的情况下，氧 化二氨基联苯胺，形成金黄色不溶性沉淀， 定位于POX酶所在的活性部位
二氨基联苯胺法（DAB）
复方联苯胺法的原理 （Washburn法）
H2O2
四甲基联苯胺
POX
H2O
联苯胺蓝→棕黑色↓
复方联苯胺法
POX染色的结果判断
POX染色结果分级：
各种细胞POX染色的结果
粒细胞系统：早期原粒为阴性，随着细胞的 成熟阳性率和阳性程度逐渐增强
单核细胞：早期单核细胞呈阴性，其余各期 均呈阳性（弱阳性至＋）
白血病时Auer小体可呈阳性 吞噬细胞有时阳性，其余细胞系均呈阴性
POX染色的临床意义
是辅助判断急性白血病细胞类型的首选、最 重要的细胞化学染色
POX更为敏感，但特异性差一些
SB染色－M3
SB染色－M5
SB染色－急单
三、酯酶染色的种类
不同血细胞中所含酯酶的成分不同
根据酯酶特异性高低分为：
特异性酯酶（specific esterase, SE） 非特异性酯酶（nonspecific esterase,NSE）
特异性酯酶就是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色 非特异性酯酶的种类有多种，根据pH值不同分为
NAS-DCE染色：M3-
2．醋酸AS-D萘酚酯酶染色
naphythyol AS-D acetate esterase stains， NASDAE
NAS-DAE
重氮盐
醋酸ASD萘酚
ASD萘酚
有色沉淀
单核细胞系统的阳性可被氟化钠抑制，
通常同时做氟化钠抑制试验
氟化钠抑制率的计算：
氟化钠试验抑制率= 抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分 抑制前阳性率或阳性积分
酸性：酸性α- 醋酸萘酚酯酶 中性：α- 醋酸萘酚酯酶、醋酸AS-D萘酚酯酶等 碱性：α-丁酸萘酚酯酶
1．氯乙酸AS-DCE）D萘酚酯酶染色
（naphythol AS-D chloroacetate esterase stain ，NAS
NAS-DCE
重氮盐
氯乙酸ASD萘酚
ASD萘酚
有色沉淀
NAS-DCE几乎仅出现在粒细胞、特异性高。因此又称为“粒细 胞酯酶”、“特异性酯酶”
细胞化学染色的种类
过氧化物酶染色 苏丹黑染色 酯酶染色 过碘酸-雪夫反应 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 酸性磷酸酶染色 铁染色
急性白血病分型
急性白血病分型
急性淋巴细胞白血病（ALL）
急性髓细胞白血病（AML,NALL）
M0 急性髓细胞白血病微小分化型 M1 急性粒细胞白血病未分化型 M2 急性粒细胞白血病部分分化型 M3 急性早幼粒细胞白血病 M4 急性粒单核细胞白血病 M5 急性单核细胞白血病 M6 急性红白细胞白血病 M7 急性巨核细胞白血病
氟化钠抑制试验的抑制率大于0.50为抑制
NAS-DAE染色的正常血细胞染色反应
粒系： 常阳性，此反应不被氟化钠抑制 单系： 阳性（常较强），此反应能被氟化钠抑制 淋系： 阴性或弱阳性，此反应不被氟化钠抑制 红系： 早期可呈阳性，随着成熟而减弱 巨系：巨核细胞和血小板为阳性反应
NAS-DAE染色的临床意义
NAS-DCE的正常血细胞的染色反应
粒系：原粒细胞为阴性反应或阳性反应,自早幼粒细 胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应，EOS阴性或弱阳 性,BAS阳性
单系：个别可呈弱阳性反应 其他：淋巴、浆、幼红细胞和血小板均呈阴性反应
NAS-DCE的临床意义
主要用于辅助鉴别急性白血病细胞类型 急性粒细胞白血病：呈阳性或少数阴性 急性早幼粒细胞白血病：呈强阳性 急性单核细胞白血病：呈阴性，少数弱阳性 急粒-单核细胞白血病：粒系阳性，单系阴性 急性淋巴细胞白血病：呈阴性
用以辅助鉴别急性白血病的细胞类型 急性粒细胞白血病：阳性，不被NaF抑制 急性早幼粒细胞白血病:强阳性，不被NaF抑制 急性单核细胞白血病：阳性(常较强)，被NaF抑制 急性粒单核细胞白血病：阳性，被NaF部分抑制 急性淋巴细胞白血病：弱阳性或阳性，不被NaF抑制
3．α-丁酸萘酚酯酶染色—原理 α-naphthol butyrateesterase，α-NBE)
第二篇 造血细胞及其检验
第二章 造血基础理论 目的要求 第三章 造血细胞检验方法 第四章 造血细胞检验的临床应用
第三章 造血细胞检验方法
第一节 造血细胞形态学 第二节 细胞化学染色 第三节 骨髓活体组织检验（自学）
第四节 血细胞超微结构检验（自学） 第五节 造血祖细胞培养检验（自学） 第六节 血细胞遗传学检验（自学） 第七节 分子血液学检验（自学）