细胞化学染色检验方法和要求
临床专业骨髓细胞学检验要求达到的素质目标 范文
临床专业骨髓细胞学检验要求达到的素质目标一、引言骨髓细胞学检验作为临床诊断和治疗领域的重要手段，对医疗机构和临床实践者提出了较高的素质要求。
本文将从多个方面分析临床专业骨髓细胞学检验要求达到的素质目标。
二、医学知识1. 确保具备扎实的医学基础知识，包括解剖学、生理学、病理学等相关专业知识。
2. 熟悉骨髓细胞学检验的基本原理和技术方法，包括骨髓细胞的形态学特征、染色技术、免疫学检测等。
3. 掌握常见疾病的临床表现和相关的骨髓细胞学检验结果，能够准确判断疾病类型和严重程度。
三、实验操作技能1. 熟练掌握骨髓采集、制片和染色技术，能够获得高质量的骨髓涂片和染色切片。
2. 具备独立判断和筛选骨髓细胞学检验结果的能力，能够准确识别异常细胞，并及时向临床医生提出建议。
3. 熟练掌握各种仪器设备的操作和维护方法，确保设备正常工作和维持高水平的实验质量。
四、思维能力1. 具备良好的分析和解决问题能力，能够准确理解和解释骨髓细胞学检验的结果，为临床诊断提供有力支持。
2. 能够深入思考和探讨骨髓细胞学检验相关的学术问题，不断提升自己的专业水平和学术造诣。
3. 具备良好的沟通能力和团队合作精神，能够与临床医生、实验室技术人员和其他相关人员有效沟通和协作。
五、职业道德1. 遵守医学伦理和职业道德准则，保护患者隐私和权益，谨慎处理骨髓细胞学检验相关的信息和数据。
2. 严格执行实验室标准操作规程，确保实验过程的安全和准确性，杜绝实验操作中的不端行为。
3. 不断学习和提升自己的专业水平，积极参加相关的学术交流和培训活动，为患者提供更好的医疗服务。
六、结论骨髓细胞学检验作为临床医学领域中至关重要的检验手段，其要求的素质目标不仅仅是为了保障实验数据的准确性和临床诊断的正确性，更重要的是为了保障患者的生命健康和医疗权益。
临床专业骨髓细胞学检验要求达到的素质目标不仅是医疗从业者的责任所在，更是医疗机构和整个医疗体系的责任所在，务必引起广泛重视。
细胞化学染色
细胞化学染色细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科学。
它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下,运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构及生理活性物质原位地显示。
因而对于探索细胞内的化学成分、生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要意义。
血液细胞化学染色的范围一般可分为：蛋白质类（氨基酸、酶)、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类,采用的方法通常为化学结合和物理溶解及酶-底物反应。
临床评价:1.细胞化学染色的开展,已有数十年的历史。
其在结合细胞形态学的基础上对各类白血病的确诊，对许多血液疾病鉴别诊断中的帮助，对各种良、恶性血液系统疾病疗效和预后估计提供一定的信息。
2.血液系统各种恶性疾病，特别是急性白血病，因其多为早期分化较差的病理细胞增殖,客观上存在着形态变异、畸形发育，即使是有经验的检验人员仅凭细胞形态也难以避免错误诊断的发生。
如将细胞形态和细胞化学染色相结合，能提高急性白血病的诊断和较正确地对其分型及亚型分型，即为急性白血病FAB 分型。
3.近年来，由于细胞免疫学、细胞遗传学、分子生物学和细胞超微结构等迅速发展，进一步推动了细胞化学染色这一领域的进展，并出现了细胞免疫组织化学染色、细胞超微化学染色等更新、更准确的检验方法与手段，对探讨各类血液疾病发病原理和观察治疗反应及预后起了极其重要的作用。
如将细胞免疫化学、细胞遗传学、分子生物学这三者与细胞化学染色及细胞形态学相结合，对各种白血病进行分型，即成为白血病的MICM分型诊断。
4.细胞化学染色通常应用在各种血液系统疾病特别是对各种急性白血病的诊断与鉴别诊断中。
但白血病细胞因其呈高度的异质性和多态性，有时即使是同一类型的白血病也可在细胞形态、细胞化学染色结果、细胞免疫表型及分子生物学等方面存在较大的差异。
所以对各类型白血病作一套较完整的细胞化学是补充了单凭形态对细胞辨认的不足。
因此我们在实际工作中若要对各类型白血病作出比较准确的诊断与鉴别诊断，应尽可能采用多项细胞化学染色或双（多）重染色。
高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项
高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项朱秋霖，马天兵兰州二中，兰州 730000 摘要：目的：探究高中生物试验中常见染色剂的使用方法及常见问题与注意事项方法：通过一些简单的实验验证与参考文献得出结论。
结果：验证与总结出生物试验中常见染色剂的染色原理及所遇到的染色问题的原因。
关键词：高中生物学实验染色剂显色原理注意事项The common dye staining principle and precautions in the highschool biology curriculumZhu Qiulin，Ma TianbingLanzhou NO.2 middle secondary school class8 grade2，lanzhou 730000Abstract:Objective: To explore the use of high school biology test stains and FAQs Notemethod: through some simple experiments verify references concluded.Results:Validation andsummed up a common biological test stain dyeing principle and coloring problem encountered byreason.Keywords:high school biology experiment stain color rendering principle Precautions1.常见染色剂常见的高中生物染色显色反应，其实质是化学反应或者物理反应，按照其反应本质，可分为下列几类[5]：1.1 氧化还原反应类染色剂通过氧化还原反应生成某些具有特殊颜色的物质，利用其与生物组织中某些具有还原性的物质或代谢产物进行化学反应，宏观上产生颜色变化，通过颜色变化,鉴别某些生物组织中的目标物质。
TUNEL染色
TUNEL染⾊相关疾病：产品名称：罗⽒(Roche)公司Tunel试剂盒英⽂名称：Tunel产品货号：11684817910产品规格：50T试剂级别：试剂级产品产地：USA产品商标：RocheIn situ cell death detection kit-POD法⼀、原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是⽤来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作⽤下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3‘-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者⼜与HRP底物⼆氨基联苯胺（DAB）反应产⽣很强的颜⾊反应（呈深棕⾊），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因⽽在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞⼏乎没有DNA断裂，因⽽没有3?-OH形成，很少能够被染⾊。
本试剂盒适⽤于组织样本（⽯蜡包埋、冰冻和超薄切⽚）和细胞样本（细胞涂⽚）在单细胞⽔平上的凋亡原位检测。
还可应⽤于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双⾊法确定细胞死亡类型和分化阶段。
⼆、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、⼩型染⾊缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻⽚或封⼝膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含TdT 10×、荧光素标记的dUTP 1×、标记荧光素抗体的HRP；⾃备试剂：PBS、双蒸⽔、⼆甲苯、梯度⼄醇（100、95、90、80、70%）、DAB⼯作液（临⽤前配制，5 µl 20×DAB+1µL 30%H2O2+94 µl PBS）、Proteinase K⼯作液（10-20µg/ml in 10 mM Tris/HCl，pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium citrate，临⽤前配制）、苏⽊素或甲基绿、DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl2，1 mg/ml BSA）等。
细胞化学染色
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6、临床意义 （1）正常分布 粒系:早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈 不同程度阳性。 单核系:早期原单阴性，其它阶段皆呈弱阳性。 淋巴、红系、浆细胞、巨核均呈阴性。
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（2）急性白血病的鉴别诊断 幼稚细胞POX阳性率≥3% ：急非淋（AML) 幼稚细胞POX阳性率＜3% ：急淋（ALL)
至9.2，4℃保存！
（3）作用(基质液): 磷酸萘酚钠
5mg
N-N二甲基酰胺 1ml
Tris-Hcl液
4ml
坚固蓝RR盐
5mg
（4）复染液：1%中性红
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3.操作步骤 1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片（标本片及 对照片）加固定剂作用30秒（染缸），水洗待干； 2、滴加作用液，室温染色15min，水洗待干； 3、1%中性红复染1min
过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 糖原染色 非特异性酯酶染色 特异性酯酶染色 骨髓铁染色
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（一)过氧化物酶(POX)染色
1、原理：
pox
H2O2
O
联苯胺
联苯胺蓝 +
亚硝基铁氰化钠
蓝黑色颗粒
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2.试剂 (1)联苯胺酒精溶液： 取0.3g联苯胺加亚硝基铁氰化钠饱合液（36%）1ml, 再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。 (2) 稀过氧化氢（新鲜配制）：取50ml蒸馏水加 30%H2O21滴。 （3）瑞吉氏复染液
细胞化学染色检验
申家辉
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一、概述 二、细胞化学染色的基本方法 三、临床应用
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一、概 述
1、概念： 细胞化学染色是细胞学和化学相结合而成的一门
脂肪鉴定 脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法) 实验报告
细胞生物学实验报告脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法)1.实验目的：用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色,观察细胞颜色，掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法.2.实验用品：（1）仪器及器材:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管（2）实验药品：蒸馏水、甲醛钙溶液、70％乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液（3）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类，这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物.脂类是机体内的一类有机大分子物质，它包括范围很广，大体上可以分为类脂和油脂两大类。
类脂包括磷脂（phospholipids），糖脂（glycolipid）和胆固醇及其酯（cholesterol and cholesterol ester）三类。
而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类.这几种脂类化学结构有很大差异,生理功能各不相同.其共同物理性质是不溶于水而溶于有机溶剂，在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。
（2）在固定细胞时,通常使用脂溶性固定液。
然而,鉴定的材料是脂肪时，脂溶性的固定液会溶解脂肪，致使把切片放到显微镜下观察时，观察不到被染色的脂肪，只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。
最好的固定材料是甲醛类的固定液.如医学上保存尸体采用的是福尔马林，即40%的甲醛水溶液,本次实验采用的则是甲醛钙溶液。
（3）光学显微镜的切片多是石蜡切片.在熔接石蜡时，需要用到脂溶性溶剂,而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪,因此本次实验不可采用石蜡切片。
但是锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂，可以采用石蜡切片.（4）制作切片有多种方法，如冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、本次实验采用的是操作简单的铺片法。
（5）脂类染色的原理是,染料溶于脂类显色。
选择溶剂时应注意，溶剂必须既溶解的染料，又不溶解掉脂类。
4.实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔,用镊子提起小肠,使盖玻片紧贴于肠系膜.用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上,固定15分钟，（2）吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲洗，用滴管不断吸取液体以去除固定液.（3）用70％的乙醇水溶液代替蒸馏水重复上一步骤，进行冲洗。
细胞(组织)化学和免疫化学染色技术
细胞（组织）化学和免疫化学染色技术细胞化学（cytochemistry）或组织化学（histochemistry），是细胞学（cytology）或组织学与生物化学（biochemistry）相结合的一门科学。
细胞化学染色（cytochemical staining）是在血细胞的原位上研究其化学成分的性质，包括蛋白、脂类、糖类、无机盐和酶等，在保持细胞形态的基础上进行化学的定位、定性及半定量的观察，是血液病形态学诊断中的一个重要手段。
细胞免疫化学（immunocytochemistry）又称免疫细胞化学或免疫组织化学（immunohistochemistry）染色，是鉴定某些细胞或组织的病态细胞（如微小巨核细胞）和白血病的重要的辅助性检验技术。
一、涂片细胞化学和免疫化学染色技术（一）细胞化学染色1.铁染色正常骨髓中存在一定量的贮存铁，以含铁血黄素的形式贮存，多分布在巨噬细胞内，称为贮存铁。
骨髓中幼红和晚幼红细胞含有铁颗粒，为细胞内铁，含内铁的细胞称为“铁粒幼细胞”，少数成熟红细胞也含有小的铁颗粒，称为“铁粒红细胞”。
以上铁质均可用普鲁士蓝反应加以显示。
（1）原理：骨髓内含铁血黄素的铁离子和幼红细胞内的铁颗粒，在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用，生成蓝色的亚铁氰化铁沉淀（普鲁士蓝反应），定位于含铁粒的部位。
（2）试剂：铁染色液（临用时配制）：200g/L亚铁氰化钾溶液5份加浓盐酸1份混合；复染液：1g/L沙黄溶液。
（3）操作：取新鲜含骨髓小粒的骨髓涂片，于铁染色架上，滴满铁染色液；室温下染色30分钟，流水冲洗，复染液复染30秒；流水冲洗，晾干后镜检。
（4）结果判定1）细胞外铁：细胞外铁呈蓝色的颗粒状、小珠状或团块状，细胞外铁主要存在巨噬细胞胞质内，有时也见于巨噬细胞外。
“-”为涂片骨髓小粒全无蓝色反应；“+”为骨髓小粒呈浅蓝色反应或偶见少许蓝染的铁小珠；“++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的片状或弥散性阳性物；“+++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的密集小块或成片状；“++++”为骨髓小粒铁粒极多，密集成片。
过氧化物酶染色法
项目名称：碱性磷酸酶染色法检验标本：外周血涂片收费标准： 50元检验方法：细胞化学染色原理：在PH9.5时，底物被白细胞的酶水解，释出磷酸根和芳香萘胺，后者与偶氮盐偶合，形成有色沉淀。
试剂：1.固定液（保存于4℃）冰箱2. 0.05缓冲液（PH9.4~9.6）保存于4℃冰箱3.底物4.二甲基甲酰胺5.固紫B操作步骤：1.血片或髓片放置4C固定液中30秒，流水冲洗，空气晾干2.工作液：（1）用二甲基甲酰胺溶解底物后，倒入缓冲液中（2）再加入固紫B混匀3.把固定后的玻璃片放入工作液中，置37C水温箱45分钟4.流水冲洗5.苏木精复染6.流水洗，晾干7.直接油镜观片结果：酶活动处呈亮红颗粒正常参考值：积分10～100分/100个中性分叶核细胞意义：NAP活性增高见于细菌性感染、类白反应、再障、某些肿瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病急性变等。
NAP活性减低见于慢性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、绿色瘤、红白血病、PNH、病毒感染等。
注意事项：1.外周血涂片标本需新鲜，收到标本后需立即用专用固定液固定。
2.试剂需防在4℃冰箱内，临用前拿出，试剂打开后需立即应用，最长不得超过30min。
项目名称：过氧化物酶染色法检验标本：骨髓涂片收费标准：50元检验方法：细胞化学染色检验原理：过氧化物酶在细胞内的颗粒从H2O2中释放出氧，氧化联苯胺，引起在过氧化酶活性处，沉积棕黑色的化合物。
试剂：1.0.3%联苯胺酒精溶液2.H2O2溶液（3%H2O2+蒸馏水5ml）操作步骤：1.骨髓涂片加0.3%联苯胺酒精溶液10-15滴2.一分钟后，加H2O2溶液10-15滴3.五分钟后，流水冲洗4.再用瑞氏染液复染5.水洗，晒干结果：酶活力处呈棕黑色。
意义：急性白血病中可借过氧化物酶染色区蓓别急淋与急非淋。
急淋POX呈阴性反应，FAB分型规定阳性率＜3%。
急非淋呈阳性反应，阳性率≥3%。
注意事项：1.骨髓涂片标本需新鲜，收到标本后需立即染色。
细胞化学染色
•【染色方法】
• 1.取新鲜骨髓涂片置浓福尔马林中蒸3分钟。（2 滴） • 2.放入作用液37℃温箱30分钟。 • 作用液配制：取固兰40mg，1%α -萘酚（以50%丙 酮做溶剂）0.8ml，0.05mol/L磷酸盐缓冲液 （PH7.4）40ml混合，过滤后使用。 • 3.用自来水冲洗，晾干。 • 4.用1%沙黄复染45秒。 • 5.水洗，晾干后镜检。
【正常血细胞的染色结果】
• 细胞中如有蓝黑色即为阳性细胞。根据阳性 颗粒的有无及多少，将染色结果分为（-）、 （+）、（++）、（+++）、（++++）。
阳性反应细胞 阳性强度 阳性特征 阴性反应细胞 部分原粒细胞 嗜碱性粒细胞 大部分单系细胞 淋巴细胞 浆细胞 红系细胞
部分原粒细胞 +~++ 颗粒细小，分布稀疏 早幼粒细胞 ++~++++ 颗粒状或弥散状 中性成熟粒细胞 ++~+++ 同上 嗜酸性粒细胞 ++~++++ 粗颗粒状，密集 少数单系细胞 +~++ 细小，弥散，较少
• 【标本要求】
• 一般用新鲜的骨髓涂片做POX染色； 如果外周血中白血病细胞多而骨髓涂 片不够的情况下，可选择新鲜的血涂 片来做。为了保证酶的活性，片子一 般应在固定后一周内完成染色。
•【染色方法】
• 一、试剂：甲液：联苯胺（0.3g）；95%乙醇 （99ml）；亚硝基氰化钠饱和溶液（1ml） 乙液：3%过氧化氢（0.3ml）；蒸馏水（2ml） 注：乙液必须现配现用（5mlH2O+1滴H2O2） 二、染色：1.滴加甲液在干的涂片上。 2.待30秒后滴加乙液。（比例为2:1） 3.过3-4分钟后用自来水冲洗3-4分钟。 4.复染15分钟。
细胞化学染色检验
2.细胞内铁 观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞，计算 出铁粒幼红细胞的百分比（即细胞内铁阳 性率）。铁粒幼红细胞是指胞质中出现蓝 色铁颗粒的幼红细胞，根据蓝色铁颗粒多 少、粗细分为：I型、II型、III型、IV型及环 形铁粒幼红细胞。环形铁粒幼红细胞是指 幼红细胞胞质内蓝色颗粒在5星以上，围绕 核周三分之一以上者，成熟红细胞中出现 铁颗粒称为铁粒红细胞。
临床用途：
①辅助判断白血病细胞的类型的。不同的细胞系列， 其所含的化学物质成分、含量及分布各不相同，随着细胞的分化阶段 及病理生理状态变化，这些物质的含量也会发生相应改变。因此根据 细胞化学染色结果的不同，可推断细胞的所属系列。因此临床上细胞 化学染色成为辅助诊断白血病必要的、有力的手段。 ②其他血液系统疾病的诊断和鉴别诊断。在病理情况下，血细胞的化 学物质的成分及含量会发生改变，据此可以辅助疾病的鉴别诊断。如 中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。
二：中性粒细胞碱性磷酸染色（NAP）
Kaplow偶氮偶联法： 成熟中性粒细胞碱性磷 酸酶在PH9.6左右的碱性环境中，能水解基质液 中的磷酸萘酚钠底物，释放萘酚，后者与重氮盐 偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质酶 活性所在之处。
【参考范围】： 1.细胞外铁（+）~（++），约2/3人为 （++），约1/3为（+）。 2.细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率在 12%~44%。以I、II型为主，无环形铁粒幼 红细胞 及铁粒红细胞。
【临床意义】：铁染色是临床应用最广泛 的细胞化学染色之一，主要用于缺铁性贫 血和环形铁粒幼红细胞增多性贫血的诊断 和鉴别诊断。 1.缺铁性贫血 外铁（-）；内铁＜10%； 治疗有效后，内外铁↑。 2.铁粒幼细胞贫血 外铁↑；内铁阳性率↑，环形铁粒幼红细胞 增多。
细胞化学染色(lishai)
正常血细胞的染色反应
淋巴细胞系统 大多数阴性，少数阳性。 巨核细胞系统 巨核细胞和血小板阳性，阳性反应 的程度随细胞的发育成熟而增强。
临床意义
◆红细胞系统疾病
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中 幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些 红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。
◆白细胞系统疾病
ALL：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或 块状） 急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状 急单：可呈阳性，阳性细颗粒状
过氧化物酶染色
Peroxidase stain, POX
染色原理（四甲基联苯胺法）
H2O2
溶酶体颗粒中的ＰＯＸ
H2O＋O2
四甲基联苯胺
O2
联苯胺蓝
O2
联苯胺蓝＋亚硝基铁氰化钠
蓝色物质
（沉淀）
正常血细胞的染色反应
粒细胞系统 原粒（可为阴性） 分叶（阳性程 度逐渐增强） 嗜酸阳性最强 嗜碱阴性 单核细胞系统 阴性或弱阳性（颗粒少而 细） 其他血细胞 阴性
细胞化学染色的基本步骤 固定
显示
保持细胞结构及化学成分不变，并使血 膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏
形成稳定的有色沉淀，显示出被检 测的化学物质
复染
既能显示细胞结构又能清楚地看出细 胞化学染色结果
细胞化学染色的种类
过氧化物酶染色（POX)、苏丹黑染色
（SBB) 过碘酸-雪夫反应（PAS）又称糖原染色 酯酶染色 酸性磷酸酶染色（ACP) 铁染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
PAS临床意义
MA 幼红细胞呈阴性反 应
AML-M6 幼红细胞呈阳性反 应
ALL
AML-M6
AML-M6 PAS(+)
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定义：
细胞化学染色是细胞学和化学相结合的一 门科学。它是以细胞形态学为基础，根据 化学反应的原理、应用涂片染色的方法观 察细胞的化学成分及其变化的重要方法。
各种类型血细胞的化学成分（酶，脂，糖， 蛋白，核酸）,分布及其量不完全相同,在病 理情况下,血细胞的成分可发生改变.
二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
原理:成熟中性粒细胞内的AKP在PH 9.4~9.6缓 冲
液中能水解基质液中的α-磷酸柰酚，产生α-奈 酚，其与重氮盐偶联，形成不溶性灰黑色偶氮染 料沉淀，定位于酶活性处。
AKP主要存在于中性成熟粒细胞内,其他细胞基 本阴性.
阳性程度：
- —— 胞浆中无紫黑色颗粒 + —— 胞浆中有一层棕黑色不透明或局限地 方 有紫黑色颗粒(约1/4) ++—— 胞浆中颗粒占胞浆1/2或遍布整个胞 浆，但较疏松 +++—— 胞浆中颗粒占3/4，颗粒染色浓 ++++——仅见核影，其余均是黑色
原理： 正常人骨髓中的储存铁主要存在于骨髓
小粒和幼红细胞中。骨髓小粒中的含铁血黄素 称细胞外铁，其中的三价铁与分子中的蛋白质 结合不牢，经稀盐酸处理后而游离，并能在酸 性亚铁氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞 内铁也可用此法显示。根据反应的强弱了解骨 髓中铁的含量。
细胞内铁：中、晚幼红细胞胞浆中有蓝绿色颗 粒,为铁蛋白. 铁粒幼细胞：胞质内有蓝绿色颗粒的幼红细胞. 环铁粒幼红细胞：胞质内有蓝绿色颗粒在6个以 上，并围绕于核周排列成环形者，超过1/2区
4.再障与PNH的鉴别 再障—— NAP增高 PNH —— NAP减低
慢粒与中性粒细胞性类白血病反应的鉴别
三、过氧化物酶染色（POX）
原理： 细胞内的过氧化物酶能将底物的过氧
化氢分解，产生新生氧。后者将试剂中的 联苯胺氧化为联苯胺蓝，再与亚硝基铁氰 化钠结合，进而生成棕黑色化合物沉淀于 酶的所在部位。
AKP积分总分为325
参考范围：30~130分
参考值：
阳性率 ﹤40% 积分值 30～130分
生理变化：
AKP活性和年龄有关，新生儿、婴幼儿高 于成年人，老年人略低,应激状态下增加。
病理变化：
（1）增高
细菌感染、AA、类白血病、急淋、骨髓纤 维化,真红,慢淋,血小板增多症,恶性肿瘤等
（2）减低
主要的鉴别点:酸碱性
各种原始细胞的鉴别
鉴别点 原淋 原粒
胞体 圆
圆
核形 圆
圆
核位置 中或偏 中或偏
核仁 小
小
染色质 颗粒 细颗粒
胞质 少
较少
颜色 蓝
蓝
颗粒 无
无
其他
原单 圆,不规则 圆,不规则 中或偏 大 网状 较多 灰蓝 无 空泡
原红 圆,突起 圆 中 较大 粗颗粒 较多 深蓝 无
原巨 圆,不规则 圆,不规则 中或偏
急慢粒、PNH、MDS、恶组,病毒感染等
临床意义:
1.慢粒(无继发感染时)——积分明显下降 中性粒细胞类白血病——积分可大于200
2.细菌感染——NAP积分增加 病毒性感染——无明显变化（感染症状相似）
3.急性白血病类型的鉴别： 急粒—— NAP明显减低 急淋—— NAP增高 急单—— NAP正常或减低
强阳性 显色明显 深染
大
密集
（+++~++++） （蓝~黑） （大珠~成堆） （片状分布）
———————————————
—
++++
+++
++
+
--
环形铁粒幼细胞
环形铁粒幼细胞
参考值
1、细胞外铁：（＋）～（＋＋）
2、细胞内铁：观察100个幼红细胞,计 算出铁粒幼红细胞百分比,阳性率为12 ％～44％,无环形铁粒幼红细胞和铁粒红 细胞。
铁的生成和利用
食物中的铁经吸收后在单核吞噬系统内储存, 铁通 过幼红细胞表面的铁受体,转至幼红细胞内,与原卟 啉结合形成血红素.
细胞外铁:单核吞噬系统内的铁,反映骨髓的储存铁 细胞内铁:幼红细胞和红细胞内的铁,骨髓可以利用 的铁.
几种病理情况,
1.体内铁摄入不足或消耗过多:骨髓细胞内 外铁均减少或消失(IDA) 2.铁利用障碍:幼红细胞线粒体合成血红素 功能障碍,为铁失利用,内外铁均增加(铁粒 幼细胞性贫血) 3.铁储存于单核吞噬细胞内不能被释放入幼 红细胞内,为铁失利用,外铁增加,内铁减少 (慢性炎症贫血)
研究的对象：细胞和组织中的化学物质
研究的方法：根据细胞和组织中化学物质 的有无以及强弱判断血细胞类型以及是否 发生异常.
细胞化学染色的临床应用
1、 辅助诊断急性白血病的细胞类型（不同系别， 不同阶段的细胞所含化学物质不同）；
2、 辅助血液系统疾病的诊断和鉴别诊断（IDA、 CML与类白）。
一、铁染色
结果统计:
1.阳性率计算: 100个中性杆状,分叶核粒细 胞中阳性细胞总数.
2.AKP积分的计算
积分：-——0分 +——1分
++——2分 +++——3分 ++++——4分
举例：细胞数 积分
5
5*0——0
5
5*1——5
10
10*2——20
20
20*3——60
60 60*4——240
——————————
域. 细胞外铁：正常骨髓以含铁血黄素形式储存的 铁，主要存在骨髓小粒的巨噬细胞的胞质内或 外。正常情况下 +~++
细胞外铁反应强度的判断标准：
显微镜检查
肉眼观察 ————————————————
着色程度 形态大小
分布情况
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阳性 显色不明显 淡染
小
稀疏
（+~++）
（绿~蓝） （颗粒~小珠）（星状排列）
疾病鉴别意义：
缺铁贫：外铁明显下降，甚至消失； 内铁下降,铁粒幼细胞减少。经铁剂治 疗后，铁增加.
铁粒幼细胞贫血：内、外铁增加，且 出现环铁粒幼红细胞增多,有时可见铁 粒红细胞.
感染、肝硬化、慢性肾炎、尿毒症、 恶性肿瘤：外铁增加,内铁减少。
骨髓增生异常综合症:环形铁粒幼细 胞大于有核红细胞的15%,细胞外铁 也常增加.
细胞化学染色检验方法和要求
瑞氏染色的原理
瑞氏染料中含有碱性亚甲蓝和酸性伊红 两种成分,它们与细胞内的各种物质具有 不同的亲和力,使其显现出不同的色调,以 利辨认.
1.细胞核是由核糖核酸与强碱性的组蛋白, 精蛋白形成核蛋白,与酸性染料伊红有亲和 力,染成红色.
2.幼稚细胞的胞质和核仁含有酸性物质,与 碱性染料亚甲蓝有亲和力,染成蓝色.