第四章 细胞化学染色

六、铁 染 色
（ferric stain）
正常人骨髓中的贮存铁存在的方式： 骨髓小粒中的含Fe血黄素 —骨髓单核-巨噬细胞内 （细胞外铁） 铁蛋白 —幼红细胞内（细胞内铁）
原理
酸性环境
铁 ＋ 亚铁氰化钾 普鲁士蓝 反应
亚铁氰化铁
(蓝色沉淀在含Fe部位)
【结果判断】
细胞外铁
低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒,细 胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬 细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团 块状。
Ⅰ型(1-2) Ⅱ型(3-5) Ⅲ型(6-10) Ⅳ型(11以上)
铁粒幼红细胞
胞质中出现蓝色铁颗粒 的幼红细胞。
环铁粒幼红细胞
幼红细胞胞质内蓝色铁 颗粒在6颗以上，并围绕 核周1/2以上者。
铁粒红细胞
成熟红细胞出现蓝色铁颗
粒。
【参考值】
1.细胞外铁
+～++，约2/3人为++，约1/3人为+。
2.细胞内铁
再用油镜判断阳性程度，根据铁量
多少分五级:
（ -）
（ +）
（++） （+++） （++++）

细胞内铁 幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色。 油镜下计数100个中幼红细胞和晚幼红细胞，
记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率。
根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色 深浅和颗粒分布情况,将铁粒幼红细胞分为 四型:
（4）巨核细胞白血病
阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。
3.其他细胞
戈谢细胞呈强阳性
（葡萄糖脑苷脂在单核-吞噬细胞积聚）
尼曼-匹克细胞呈阴性或弱阳性
（鞘磷脂在单核-吞噬细胞积聚）
四、α-醋酸萘酚酯酶染色
（α-naphthol acetate esterase ，α-NAE）
酯酶
酸性α-醋酸萘酚酯酶
0分 1分 2分 3分 4分
阳性率
积分值
全部阳性反应细胞之和
各种阳性程度细胞的分值之和
3.参考值 积分值 阳性率 40~80分 10%~40%
( 各实验室参考值不同)
ห้องสมุดไป่ตู้
【临床意义】
病理性变化： （1）细菌性感染与病毒性感染
（尤其是化脓性感染）
明显增加
无明显变化
(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病 明显增加 明显下降且常为零分，
巨幼细胞性贫血
幼红细胞阴性
骨髓增生异常综合征 幼红细胞阳性 再生障碍性贫血 幼红细胞阴性
2.鉴别急性白血病类型
（1）急性淋巴细胞白血病
阳性率20%～80%，呈红色粗颗粒状或块状。
（2）急性粒细胞白血病
少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。
（3）急性单核细胞白血病
可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时
胞质边缘处颗粒较粗大。
阳性率19%～44% Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型（无环形铁粒幼红细胞 和铁粒红细胞）
【临床意义】
1.诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗 细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂 治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多。
2.诊断铁粒幼细胞性贫血
铁粒幼红细胞、环形铁粒幼红细胞均 增多，细胞外铁也常明显增多。
(与血红素合成有关的酶和辅酶缺乏或活 性降低 铁利用障碍、血红素合成障碍、红细胞 无效生成）
2.红细胞系统
阴性 3.单核细胞系统 细颗粒状，有时分布于细胞边缘的阳性 颗粒较粗大。
4.淋巴细胞系统
大多数淋巴细胞呈阴性； 少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。 5.巨核细胞系统 呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。
【临床意义】
1.红细胞疾病:恶性疾病呈阳性，良性疾病，呈阴性。
红血病或红白血病 幼红细胞阳性
急粒
-或 弱+ 不被 抑制
急性早幼粒
++
急粒单
阳性
急淋
-或+
NaF
不被抑制
部分被抑制 部分未被抑制
五、 α-丁酸萘酚酯酶染色
2. 原理 细胞内的α-丁酸萘酚酯酶(α-NBE)在碱性条件下， 将基质中的α-丁酸萘酚水解，产生α-萘酚，再与重氮 盐偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于酶活性所在处 。
α-丁酸萘酚酯 （基质液中） 水解 α-丁酸萘酚酯酶 （细胞内） 重氮盐 （坚牢蓝B）
弱阳性
阳性 强阳性
无颗粒 颗粒小，分布稀疏 颗粒稍粗，分布较密集 颗粒粗大，密布于整个胞浆
【正常血细胞染色反应】
1.粒细胞系统 POX主要存在于粒系细胞中。 分化差的原粒细胞阴性; 分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各 阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成
熟逐渐增强。
2.单核细胞系统 3.淋巴细胞系统 红细胞系统 巨核细胞系统 浆细胞
3.骨髓增生异常综合征（MDS）
伴环形铁粒幼红细胞增多的难治性贫 血（ RARS 亚型），其环形铁粒幼红细胞大 于0.15。
正常骨髓细胞各染色结果对比表
染色方法 红系 POX 阴性 NAP 阴性 PAS 阴性 NAS-DCE 阴性 ɑ-NBE 可阳性 粒系 阳性 阳性 阳性 阳性 阴性 单核系 弱阳性 阴性 阳性 阴性 阳性 淋巴系 巨核系 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性/阳性 阳性 阴性 阴性 可阳性 可阳性
×100%
【正常血细胞染色反应】
1.单核细胞系统
原始单核细胞
分化差
分化好 阳性
阴性
阳性 被氟化钠抑制
幼稚及成熟单核细胞
2.粒细胞系统
原粒细胞阴性或弱阳性
以下阶段为弱阳性
3.淋巴细胞系统
多数阴性，少数弱阳性
不 被 氟 化 钠 抑 制
【临床意义】
主要用于鉴别急性白血病类型
急单
α-NAE +++或 ++++ 被抑制
阴性或弱阳性
阴性
组织细胞
【临床意义】
临床上是辅助判断急性白血病首选的、
最重要的细胞化学染色
急性髓细胞白血病
鉴别
急性淋巴细胞白血病
1. 急性髓细胞白血病
（1）急性粒细胞白血病
阳性反应：M3>M2b>M2a>M1 （分化差的原粒细胞呈阴性反应） （2）急性单核细胞白血病 弱阳性反应 （分化差的原单核细胞呈阴性反应）
【 原 理 】
α-萘酚
胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀
参考值 粒细胞系统：各阶段均阴性 单核细胞系统：原单阴性，余均阳性，但 被氟化钠抑制 淋巴细胞系统：B淋巴细胞均阴性，余可 阳性 其他细胞：可阳性，不被氟化钠抑制
5. 临床意义： 1）鉴别急性白血病类型： AMOL时，原始单核细胞可呈阳性反 应，幼单核细胞和成熟单核细胞呈强阳性反应，但能被氟化钠 抑制(抑制率在50%以上)；AML时，原始粒细胞一般呈阴性反应 ，少数呈阳性反应，但不被氟化钠抑制或仅部分轻度抑制；ALL 时，原始淋巴细胞和幼淋巴细胞呈阴性反应，T-ALL原始淋巴细 胞可呈阳性反应，但不被氟化钠抑制。 2）鉴别急性单核细胞白血病和组织细胞白血病：异常组织细胞 可呈阳性反应，但此酶不能被氟化钠抑制；急单时，白血病细 胞的阳性反应可被氟化钠抑制。
复染
显示各种细胞，其颜色与有色沉 淀的颜色有明显的对比度
三、临床应用
1.鉴别各类血细胞
2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断
3.观察疾病疗效和判断预后
第二节 常用细胞化学染色方法

过氧化物酶染色
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 α-醋酸萘酚酯酶染色 铁染色

一、过氧化物酶染色 （peroxidase，POX）
【结果判断】
阳性 阴性 胞浆内出现红色阳性物， 呈弥漫均匀红色、颗粒状或小块状。 胞浆内无色,核淡绿。
用阳性率报告结果，并说明阳性物的形态。
【正常血细胞染色反应】
1.粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性； 分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞
各阶段均呈阳性反
应，阳性程度随细
胞的成熟逐渐增强。
阳性物呈细颗粒、 均匀红色。
（T淋巴细胞、单核-巨噬细胞）
α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE） 非特异性
（单核细胞、粒细胞、淋巴细胞）
α-丁酸萘酚酯酶
（单核细胞、巨噬细胞）
醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-D NAE)
（单核细胞、粒细胞、淋巴细胞）
特异性
氯乙酸AS-D萘酚酯酶(AS-D NCE)
（粒细胞）
α-醋酸萘酚 （基质液中） 水解 α-醋酸萘酚酯酶 （细胞内） 重氮盐 （坚牢蓝B）
紫黑色偶氮染料 （胞浆中）
【结果判断】
胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+～++++）
【正常血细胞染色反应】
1. 中性成熟粒细胞（杆状和分叶）阳性反应 其他细胞呈阴性反应
2.NAP积分值 油镜下计数100个成熟中性粒细胞（杆 状和分叶）,分别记录其分级情况：
(-) (+) (++) (+++) (++++)
【 原 理 】
α-萘酚
胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀
【结果判断】
胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀 为阳性。
氟化钠抑制试验
在基质液中加入适量NaF,其余染色方法同上。 两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细 胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性 积分。
氟化钠抑制率=
抑制前阳性率或阳性积分 抑制后阳性率或阳性积分 抑制前阳性率或阳性积分
第三章
血细胞化学染色
第一节
概述
以细胞形态学为基础，根据化学反应的原 理，应用涂片染色的方法，对血细胞内的各 种化学成分及其变化作定性、定位、半定量 的分析。
一、研究对象
外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的 化学物质：
酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等
二、基本步骤
固定
显示
保持细胞结构和化学成分
被染的化学物质最终形成稳定的 有色沉淀
缓解时又上升到正常
（3）再生障碍性贫血
阵发性睡眠性血红蛋白尿
增加
下降
三、过碘酸-雪夫反应
( 糖原染色 )
（periodic acid-Schiff reaction，PAS）
【原理】
过碘酸 乙二醇基 (多糖类物质含有) 氧化
双醛基
雪夫试剂中 的无色品红 紫红色化合物 (附于含多糖类 的胞浆内)
POX:粒细胞，单核细胞 NAP:杆状核、分叶核 NAS-DCE：粒细胞，单核细胞 ɑ-NBE ：单核细胞 PAS:除红细胞系统外，均可
常用的细胞化学种类和意义
本章目的要求
1 ．掌握常用细胞化学染色方法的结果判断
和临床意义。
2．熟悉常用细胞化学染色方法的原理。
髓过氧化物酶（
marrow peroxidase,MPO )
血细胞主要的POX,是人类中性粒细胞含量
最多的蛋白质，主要功能是破坏生物氧化过
程中有剧毒的过氧化物。
【原理】
二氨基联苯胺 （无色）
过氧化氢
POX
（基质中） 粒、单核 细胞胞浆
新生态氧 [O]↑ 棕黄色沉淀
（浆内酶部位）
【结果判断】
阴性
2. 急性淋巴细胞白血病 阴性反应
或阳性率< 3%(残留的原粒细胞)
二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色
（neutrophilic alkaline phosphatase，NAP）
【原理】Kaplow偶氮偶联法
中性粒细胞 胞浆中NAP 水解 α-萘酚
磷酸萘酚钠
（基质中）
＋
磷酸钠
重氮盐
（坚牢蓝盐RR）