常用血细胞化学染色原理及应用

常用血细胞化学染色原理及应用Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT常用血细胞化学染色原理及应用（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义（POX）[原理]粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为蓝色联苯胺。

后者进一步变成黑色化合物，沉积于胞质内。

正常血细胞的染色反应：1.粒细胞系---原粒大多数呈阴性反应，有点渴出现少量蓝黑色颗粒。

自早幼粒致成熟中性郡城阳性反应，细胞月成熟，阳性越强。

中性分叶核强阳性，嗜酸性粒细胞阳性反应最强，其阳性颗粒比中性粗大，有折光性。

定位于胞质内。

嗜碱性粒细胞呈阴性反应。

2.单核细胞系-原始单核呈阴性反应，幼稚单核及单核呈弱阳性,阳性颗粒少而细小，均匀分布，有时也可呈阴性反应。

3.红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系---均呈阴性。

有的巨噬细胞可呈阳性。

（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义（PAS）[原理]过碘酸-雪夫又称糖原染色。

胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。

该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。

正常血细胞的染色反应：1.粒细胞系-----原粒细胞多呈阴性,至早幼粒至中性分叶核粒细胞呈阳性反应，并随细胞熟，阳性反应的强度逐渐增强。

嗜酸粒细胞本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色，嗜碱粒细胞为阳性反应，阳性物质为大小不一的紫红色颗粒。

2.单核细胞系---原单位阴性，幼单为（+）阳性反应，单核细胞为（+）~（++）阳性反应。

3.淋巴细胞系---大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可为（+）阳性反应。

4.红细胞系----红细胞系的各个阶段皆呈阴性反应。

5.巨核细胞系--巨核细胞和血小板呈弥散性和粗大颗粒状强阳性反应。

6.其他----浆细胞呈阴性反应,少数呈较弱阳性。

巨噬细胞可呈阳性反应。

均定位于胞质内。

1[临床意义]1）急性白血病类型的鉴别红白血病的幼红细胞PAS染色多呈阳性反应，阳性率高，反应强；成熟红细胞有时亦可为阳性；急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞PAS染色多为红色颗粒或块状阳性反应；急性粒细胞白血病的原粒细胞呈阴性或胞质呈弥漫淡色阳性反应；急性早幼粒细胞白血病异常早幼粒细胞的PAS染色为阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞PAS染色阳性反应呈弥漫分布的红色细颗粒，巨核细胞白血病原巨核细胞PAS染色呈阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。

2）各类贫血的鉴别MDS、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血（曾称地中海贫血）的幼红细胞PAS染色多为阴性反应，有时可出现阳性反应；巨幼红细胞贫血、溶血性贫血、再障的幼红细胞PAS染色为阴性。

3）其他细胞类型的鉴别戈谢细胞呈强阳性反应；尼曼－匹克细胞PAS染色为弱阳性，空泡中心阴性。

非霍奇金淋巴细胞PAS染色呈阳性反应；R-S细胞则为弱阳性或阴性反应。

骨髓内转移的腺癌细胞PAS染色呈强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。

（3）中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原理和临床意义（偶氮耦联法）（NAP）[原理]中性粒细胞内碱性磷酸酶在时，能水解磷酸萘酚钠，释放出磷酸与萘酚，再以重氮盐与萘酚耦联成不溶性有色沉淀于胞质内酶所存在的部位。

阳性—（+）1分：胞质见浅红色，无颗粒或有少量细小颗粒但小于胞质1/4面积。

（++）2分：胞质见红色，有较粗红色颗粒但小于胞质1/2面积。

（+++）3分：胞质见粗大红色颗粒，可达胞质面积3/4以上。

（++++）4分：胞质见粗大深红色颗粒，达胞质全部面积甚至可掩盖于胞核上。

正常血细胞的染色反应：1.碱性磷酸酶主要存在于成熟中性粒细胞，除巨噬细胞可呈阳性反应外，其他细胞均呈阴性反应。

2.成熟中性粒细胞碱性磷酸酶积分的计算100（包括分叶核和杆状核粒细胞），参考值为7-51。

[临床意义]生理变化：①新生儿高，老年低；②应激状态可增高；③月经前期高，行经后降低；④妊娠后逐月增高NAP积分增高：1.细菌感染,凡革兰阳性球菌感染、活力显着升高；病毒感染无明显变化。

鉴别细菌性感染和病毒感染。

2.慢粒NAP积分明显减低，常为“0”，缓解时上升。

类白血病,由化浓性球菌引起的类白反应,NAP活力明显升高。

鉴别慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效。

3.急性粒细胞白血病NAP减低，急性淋巴细胞性白血病可见NAP中度增加,鉴别急粒和急淋。

4.急单减低。

5.再生障碍性贫血,NAP活力持续增加,经治疗缓解时可有下降趋势。

对再障的诊断疗效观察和估计病情均有一定意义。

阵发性睡眠性血红蛋白尿NAP减低，可鉴别PNH和再障。

6.真性红细胞增多症,NAP活力持续增加,而继发性红细胞增多症NAP无明显变化，鉴别真红和继发红细胞增多症。

7.骨髓增生异常综合征NPA减低。

8.红白血病NAP减低，镰形细胞型贫血，家族地磷酸酶血症减低；慢淋、骨髓纤维化、原发性血小板增多和红血病增高。

9.其它应用肾上腺皮质激素、雌激素、和ACTH后NAP增高。

（4）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色的原理和临床意义NAS-DCE[原理]细胞内的氯乙酸AS－D萘酚酯酶（NAS-DCE）水解基质液中的氯乙酸AS－D萘酚，产生AS－D萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。

3正常细胞反应:1.粒细胞系---中性粒细胞(除原粒细胞外)均可呈阳性或强阳性,且酶活性并不随细胞成熟而增强，定位于胞浆内。

嗜酸粒细胞为阴性和弱阳性，嗜碱为阳性。

2.单核为阴性，个别阳性。

淋巴细胞系、浆细胞系、幼红细胞系、血小板均呈阴性。

[临床意义]临床上主要用于急性白血病类型的鉴别急性粒细胞白血病时，白血病性原粒细胞可出现阳性反应；急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病：白血病性细胞为阴性反应；（5）α-醋酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义（α-NAE）[原理]血细胞中的α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）水解基质液中的α-醋酸萘酚，释放出α-萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。

正常细胞阳性反应:1.粒细胞系----各期粒细胞均为阴性，少数粒细胞可呈阳性反应,不被NaF抑制。

2.单核细胞系—原单为阴性或弱阳性，单核和幼稚单核为阳性,被NaF抑制。

3.巨核细胞系--巨核细胞和血小板为阳性。

4.其他红细胞系-----幼红和淋巴一般为阴性，少数可可呈弱阳性，不被NaF抑制，浆细胞阴性。

[临床意义]主要用于急性白血病类型的鉴别。

单核细胞阳性受氟化钠抑制，其他不受抑制。

（6）碱性α-丁酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义α-NBE[原理]细胞内的α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）在pH碱性条件下水解基质液中的α-丁酸萘酚，释放出α-萘酚，后者与基质液中的重氮盐耦联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。

本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。

α-NBE主要存在于单核细胞中，其阳性产物能被氟化钠抑制，而其他细胞系列的阳性产物不能被氟化钠抑制。

4正常细胞阳性反应:1.粒细胞系----各期粒细胞均阴性。

2.单核细胞系—分化差的原单阴性，分化好的原单阳性，幼稚及成熟单核细胞呈阳性，被NaF抑制。

3.淋巴细胞----T、非T非B淋巴细胞可呈阳性，B淋巴细胞阴性。

4.其他细胞——幼红细胞、巨核细胞系、浆细胞均呈阴性或弱阳性。

组织细胞可以呈阳性，但不被NaF抑制。

[临床意义]与α-NAE临床意义相同，敏感性不如α-NAE，而特异性较差，是急性白血病常用的化学染色。

（7）酸性磷酸酶染色的原理和临床意义[原理]细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下，将基质中的磷酸萘酚AS－BI水解，释出萘酚AS－BI，再与重氮盐耦联，形成不溶性有色沉淀，定位于胞浆中。

[临床意义]1）白血病类型鉴别多毛细胞白血病的多毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性反应，并耐L－酒石酸抑制作用；慢性淋巴细胞白血病和淋巴瘤的淋巴细胞ACP染色也可阳性，但可被L－酒石酸抑制，有助于与多毛细胞鉴别。

2）鉴别T淋巴细胞和B淋巴细胞T淋巴细胞ACP染色呈阳性反应；B淋巴细胞ACP染色呈阴性反应。

3）戈谢细胞和尼曼－匹克细胞的鉴别戈谢细胞ACP染色呈强阳性反应；尼曼－匹克细胞呈阴性或弱阳性反应。

（8）酯酶双染色的原理和临床意义[原理]血细胞内的醋酸AS-D萘酚酯酶与重氮盐偶联，形成不溶性蓝色沉淀，定位于胞质内。

氟化钠抑制试验是以相同方法制备2份基质液，其中一份加入适量NaF，另一份不加NaF作对照。

将已固定的2张相同标本的涂片混入这2种不同基质液中，分别作醋酸AS-D萘酚酯酶染色。

属于非特异性酯酶染色。

用油镜观察计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率和阳性积分，按下述公式计算出抑制率。

抑制率（%）=（抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分）/抑制前阳性率或阳性积分×1005[临床意义]鉴别急性白血病类型，除单核细胞被NaF抑制，都不受抑制。

都阳性。

（9）骨髓铁染色的原理和临床意义[原理]骨髓中的含铁血黄素（细胞外铁）和幼红细胞胞内的铁与酸性亚铁氰化钾发生普鲁士蓝反应，形成蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于细胞内外铁存在的部位。

细胞外铁：观察骨髓小粒重点铁，呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状。

分为（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++）细胞内铁：观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞计算出铁粒幼细胞的百分比。

根据蓝色铁粒的多少分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及环铁粒幼红细胞（指幼红细胞胞质内蓝色颗粒在6颗以上，围绕核周二分之一以上者）。

1.正常人骨髓细胞外铁为+-++。

2.大多数为++铁粒幼细胞阳性率为19%-44%。

铁染色（ironstain；IS）中的细胞外铁反映骨髓中铁的储存量，细胞内铁反映骨髓中可利用铁的量。

[临床意义]1）鉴别缺铁性贫血骨髓细胞外铁减少甚至消失，铁粒幼细胞的阳性率明显减低，经有铁剂治疗后，细胞外铁增多。

作为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的方法。

2）有助于铁粒幼细胞贫血的诊断和鉴别诊断。

铁粒幼细胞贫血时出现较多的环形铁粒幼细胞，铁粒幼细胞也增多，所含的铁颗粒数目也较多，颗粒也粗大，有时还可见铁粒红细胞。

作为诊断铁粒幼细胞贫血的重要方法。

3）骨髓增生异常综合征是铁粒幼细胞的百分比可增高，其所含铁颗粒的数目可增多，环铁粒幼细胞常见。

4）非缺铁性贫血如溶血贫、营养性巨幼贫、再障和白血病细胞外铁正常或增高，铁粒幼细胞正常或增高，。

5）感染、肝硬化、慢性肾炎及尿毒症、血色病及多次输血后，骨髓细胞外铁增加。

6。