小鼠肺泡灌洗液收集

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肺泡灌洗液细胞计数

肺泡灌洗液细胞计数1、开胸，游离出气管，，靠喉部结扎剪断气管。

2、向下贴着胸后壁分离出整个心肺。

3、留置针插入气管，350umL冰冻生理盐水灌洗，共3次，每次反复灌吸3个回合。

4、灌洗液1200g，4℃离心10分钟。

5、取上清保存-20℃冰箱用于蛋白检测，重悬浮下部细胞用于细胞计数。

1.小鼠肺泡灌洗时总量为350uL×3次，估计收集的好的话，有1mL回收。

立即放入ice中。

2.离心，弃上清，在沉淀中加入200uL 红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer），1分钟后加入1mL NS或者PBS，离心，3，弃上清，如果沉淀的红色还是很厉害，可以再做一次第二步。

4，沉淀用NS或者PBS 100mL 重悬，取10mL在计数板计数。

整个过程应该都在on ice的状态下进行，以防细胞死亡。

- Centrifuge 2000rpm 4°C 5min BAL- preparing CASY: empty measurement: if count >50 units, cleaning program, repeat empty measurement- fill tube with 10ml CASY fluid- SN of BAL to new Eppendorf tube, put in freezer- Pellet resuspend with 200µl cold PBS, shake it —> 10µl in CASY tube with 10ml CASY fluid - measure tube with CASY machine- after measurement, hit CLEAN, put a CASY tube under the probe, CYSA should never stay without tube covering the probe。

小鼠支气管肺泡灌洗术的改进

小鼠支气管肺泡灌洗术的改进姚茹;张锐虎;王璐;陈朝阳【摘要】目的改进制备小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的方法.方法动物分为3组,第1组和第2组采用传统方法:使用静脉留置针对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术;第3组采用改进方法:使用自制注射器对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术.每只动物灌洗3次,每次0.5 mL,并计时.支气管肺泡灌洗液离心,分离上清液准确测量其体积.结果灌洗液收集时间比较,第1组和第2组每只小鼠用时约10 min,第3组每只小鼠用时约4 min,差异有显著性(P< 0.05);小鼠支气管肺泡灌洗液体积测量比较,第3组分别多于第1组和第2组,差异有显著性(P< 0.05).结论改进后的方法可简便、经济、高效地收集支气管肺泡灌洗液,特别适合初学研究者使用.%Objective To improve the preparation of bronchoalveolar lavage fluid(BALF)in mice. Methods BALB/c mice were divided into 3 groups. In the first and second groups, the whole lung lavage was performed with the traditional method,using a vein detained needle and lavaged with sterile saline. The mice in the third group got whole lung lavage by the improved method, namely, using a self-made plastic rigid pipe connected with a syringe. Each mouse was lavaged for 3 times,with 0.5 mL of sterile saline for each time, and the time consumption was recorded. The collected BALF was centrifuged,the supernatant was separated and its volume was measured accurately. Results The time spent for BALF collection in each mouse in the third group was(4 ± 0.62)min, significantly shorter than that of(10 ± 0.75) and(12 ± 0.88)min,respectively in the first and second groups(P< 0.05). The volume of BALF collected in each mouse of the third g roup was(1.34 ±0.16)mL,significantly higher than that of(1.03 ± 0.25)and(1.13 ± 0.22)mL, respectively in the first and second groups(P< 0.05). Conclusions The improved method of BALF collection described in our study issimple,economical and efficient,and is useful for beginners especially.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2017(027)011【总页数】4页(P80-83)【关键词】小鼠;支气管肺泡灌洗液;技术改进【作者】姚茹;张锐虎;王璐;陈朝阳【作者单位】山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西省实验动物与人类疾病动物模型重点实验室,太原 030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西省实验动物与人类疾病动物模型重点实验室,太原 030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西省实验动物与人类疾病动物模型重点实验室,太原030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西省实验动物与人类疾病动物模型重点实验室,太原 030001【正文语种】中文【中图分类】R-33小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)主要用于细胞总数和分类计数、T淋巴细胞亚群、可溶成分、尘粒和矿物质以及感染性病原体等方面的检测，进一步为有关疾病的特征、诊断及预后等提供依据，为收集足够的灌洗液，医学生物研究者采用很多方法，但仍没有得到支气管灌洗的统一标准方法[1-3]。

应用小鼠灌胃针和点样吸头建立的大、小鼠肺泡灌洗新方法

应用小鼠灌胃针和点样吸头建立的大、小鼠肺泡灌洗新方法目的建立一套新型易操作的大、小鼠肺泡灌洗新方法。

方法依靠小鼠灌胃针和电泳点样吸头为工具，建立一套新型的大、小鼠肺泡灌洗操作系统。

分别使用10 ml或1 ml的无菌注射器配合插管工具完成肺泡灌洗操作。

研究中对10只雄性Wistar大鼠（体重220～250 g）和10只雄性CB17-SCID小鼠（体重24～28 g）进行插管和肺泡灌洗液收集。

结果共完成20次大、小鼠的插管和肺泡灌洗操作，成功收集到1×107个大鼠肺泡巨噬细胞和3×106个小鼠肺泡巨噬细胞。

结论应用小鼠灌胃针和电泳点样吸头完成的收集大、小鼠肺泡灌洗液新方法，能够被广泛用于大、小鼠呼吸系统疾病模型的研究。

[Abstract]Objective To develop a new method for easy rat and mouse alveolar lavage.Methods Mouse stomach needle and electrophoresis point sample suction head applied to develop a new alveolar lavage operation system in rat and mouse.Sterile syringe of 10 ml or 1 ml was used respectively to complete the alveolar lavage with the intubation tool.Ten male Wistar rats （weight was 220-250 g）and ten male CB17-SCID mice （weight was 24-28 g）were performed for intubation and alveolar lavage fluid collection.Results 20 times of intubation and alveolar lavage operation were completed.1×107 alveolar macrophages from rat and 3×106 alveolar macrophages from mouse were successfully collected.Conclusion A new method of alveolar lavage in rat and mouse set up applying mouse stomach needle and point sample suction head can be widely used in the study of respiratory disease model in rat and mouse.隨着呼吸系统相关疾病研究的深入，利用肺泡灌洗液中成分的变化及其在疾病中的意义，对研究各种因素所引发的肺相关疾病具有重要价值[1-2]。

人参补气实验报告

人参，作为一种传统中药材，自古以来就被视为滋补强壮的佳品。

其主要功效为补气、生津、安神等。

本研究旨在通过实验验证人参补气的功效，为临床应用提供科学依据。

二、实验目的1. 验证人参对小鼠气虚模型的补气作用；2. 探讨人参补气的作用机制；3. 为人参在临床上的应用提供参考。

三、实验材料1. 实验动物：清洁级雄性小鼠，体重（20±2）g，由山东中医药大学实验动物中心提供；2. 药品与试剂：人参粉（市售）、生理盐水、氢化可的松（以下简称氢可）、小鼠体重秤、血糖仪、酶标仪等；3. 仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、显微镜、酶标仪等。

四、实验方法1. 气虚模型制备：将小鼠随机分为空白组、模型组、人参组（低、中、高剂量），每组10只。

模型组给予氢可（5mg/kg）连续给药7天，以复制气虚模型；人参组分别给予人参粉（低剂量：0.5g/kg、中剂量：1.0g/kg、高剂量：2.0g/kg）连续给药7天。

2. 体重和进食量测定：实验期间，每天称量小鼠体重，记录进食量。

3. 血糖测定：实验第7天，禁食12小时后，采用血糖仪测定小鼠血糖。

4. 肝脏和脾脏指数测定：实验第7天，处死小鼠，取肝脏和脾脏，称重并计算脏器指数（脏器重量/体重）。

5. 肺泡灌洗液（BALF）细胞计数：实验第7天，取小鼠肺泡灌洗液，进行细胞计数。

6. 组织切片观察：取小鼠肺组织，进行HE染色，观察肺组织形态学变化。

1. 体重和进食量：与空白组相比，模型组小鼠体重明显减轻，进食量减少（P<0.05）；人参组小鼠体重和进食量均显著提高（P<0.05）。

2. 血糖：与空白组相比，模型组小鼠血糖明显升高（P<0.05）；人参组小鼠血糖显著降低（P<0.05）。

3. 肝脏和脾脏指数：与空白组相比，模型组小鼠肝脏和脾脏指数明显升高（P<0.05）；人参组小鼠肝脏和脾脏指数显著降低（P<0.05）。

4. 肺泡灌洗液细胞计数：与空白组相比，模型组小鼠肺泡灌洗液细胞计数明显升高（P<0.05）；人参组小鼠肺泡灌洗液细胞计数显著降低（P<0.05）。

小鼠哮喘实验报告

一、实验目的本研究旨在建立一种以粉尘螨提取液为致敏原的小鼠哮喘模型，并对其进行评估，以期为哮喘的病理生理研究及药物开发提供可靠的动物模型。

二、实验材料与方法1. 实验动物选用健康、体重约为20g的C57BL/6小鼠40只，随机分为哮喘组（n=20）和对照组（n=20）。

2. 实验试剂与仪器（1）试剂：粉尘螨提取液、生理盐水、豚鼠血清、乙二胺四乙酸（EDTA）、淋巴细胞分离液、RPMI-1640培养基、胎牛血清、ELISA试剂盒、荧光标记的IgE抗体、免疫组化试剂盒等。

（2）仪器：生物安全柜、超净工作台、酶标仪、倒置显微镜、组织切片机、石蜡切片机、病理切片扫描仪、肺功能检测仪等。

3. 实验方法（1）哮喘模型的建立哮喘组小鼠于实验第0、7、14天分别以粉尘螨提取液腹腔致敏，共3次，每次剂量为50μl。

对照组小鼠以同等剂量的生理盐水代替。

于实验第28天起，哮喘组小鼠以粉尘螨提取液滴鼻激发，连续7天，每天激发剂量为50μl。

对照组小鼠以同等剂量的生理盐水代替。

（2）哮喘模型评估1）肺泡灌洗液细胞计数和分类在最后一次滴鼻激发24小时后，对小鼠进行肺泡灌洗。

收集肺泡灌洗液，进行细胞计数和分类，包括淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等。

2）肺组织病理学检测取肺组织，进行HE染色，观察肺组织炎症细胞浸润、杯状细胞增生、黏液过度分泌及气道重塑等情况。

3）血清总IgE和rDer f 2-sIgE含量检测采用ELISA试剂盒检测哮喘组小鼠血清总IgE和rDer f 2-sIgE含量。

4）支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4和IFN-含量检测采用ELISA试剂盒检测哮喘组小鼠BALF中IL-4和IFN-含量。

三、实验结果1. 肺泡灌洗液细胞计数和分类哮喘组小鼠肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性粒细胞较正常组极显著增加（P<0.01）。

2. 肺组织病理学检测哮喘组小鼠肺组织可见明显的炎性细胞浸润，包括淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞。

大、小鼠支气管肺泡灌洗术的研究进展

２０１７年１２月第２７卷㊀第１２期中国比较医学杂志ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＭＥＤＩＣＩＮＥＤｅｃｅｍｂｅｒ，２０１７Ｖｏｌ．２７㊀Ｎｏ．１２［基金项目］贵州省科技计划（黔科合外Ｇ字［２０１５］７００１号）；中央引导地方科技科技发展专项（黔科中引地［２０１６］４００１号）；环境化学与生态毒理学国家重点实验室开放基金（ＫＦ２０１６－２１）；遗传资源与进化国家重点实验室开放课题（ＧＲＥＫＦ１７－１５）㊂［作者简介］龙隆（１９９１－）男，硕士研究生，专业：公共卫生－环境医学与卫生监督㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：４９７１９２９７９＠ｑｑ．ｃｏｍ［通讯作者］谭红（１９５９－）女，研究员，研究方向：食品安全㊁环境监测㊁新化学物质毒理测试研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｔａｎ⁃ｈｏｎｇ＠ｔｏｍ．ｃｏｍ研究报告大㊁小鼠支气管肺泡灌洗术的研究进展龙㊀隆１，２，赵显莉２，谭㊀红２∗，张爱华１，杨鸿波２，何锦林２（１．贵州医科大学公共卫生学院，贵阳㊀５５００２５；２．贵州省分析测试研究院，贵阳㊀５５０００２）㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀支气管肺泡灌洗术是研究呼吸系统及其病变的一种重要的动物实验技术，它可以获得呼吸道及肺部深处多种生化因子㊁炎症介质和免疫细胞等，为动物实验研究提供重要的评价指标和参考依据，是探讨呼吸系统性疾病的一种有效可靠的方法㊂目前应用于人的支气管肺泡灌洗术已经逐步标准化并在临床广泛开展，但没有一套针对实验动物大小鼠的支气管肺泡灌洗操作的标准㊂支气管肺泡灌洗液的检测结果受诸多因素共同影响，如灌洗液㊁灌注压力㊁灌洗量和回收量以及灌洗液在肺部停留时间等，成功而高效获取灌洗标本是研究和评价呼吸系统性疾病的关键所在㊂本文总结了目前国内外研究人员常用的灌洗操作方法，为今后进一步开展相关的实验研究提供参考㊂ʌ关键词ɔ㊀支气管肺泡灌洗术；动物实验；呼吸系统ʌ中图分类号ɔＲ－３３㊀㊀ʌ文献标识码ɔＡ㊀㊀ʌ文章编号ɔ１６７１⁃７８５６（２０１７）１２⁃０１１５⁃０５ｄｏｉ：１０３９６９．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－７８５６２０１７１２０２０ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｉｎｒａｔｓａｎｄｍｉｃｅＬＯＮＧＬｏｎｇ１，２，ＺＨＡＯＸｉａｎ⁃ｌｉ２，ＴＡＮＨｏｎｇ２∗，ＺＨＡＮＧＡｉ⁃ｈｕａ１，ＹＡＮＧＨｏｎｇ⁃ｂｏ２，ＨＥＪｉｎ⁃ｌｉｎ２（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈｏｆＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５００２５，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｕｉｚｈｏｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｅｓｔｉｎｇａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００２）㊀㊀ʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔａｎｉｍａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｓｔｅｍａｎｄｉｔｓｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓ．Ｉｔｃａｎａｃｑｕｉｒｅａｖａｒｉｅｔｙｏｆｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｅｄｉａｔｏｒｓａｎｄｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｓｆｒｏｍｔｈｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔａｎｄｌｕｎｇｓ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｅｖａｌｕａｔｉｏｎｉｎｄｅｘａｎｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒａｎｉｍａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｉｓａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｉｔｈａｓｂｅｅｎｇｒａｄｕａｌｌｙｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄａｎｄｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｐｒａｃｔｉｃｅａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅｉｓｎｏｓｅｔｏｆｓｔａｎｄａｒｄｆｏｒｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｉｎｒａｔｓａｎｄｍｉｃｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄａｒｅａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｍａｎｙｆａｃｔｏｒｓ，ｓｕｃｈａｓｔｈｅｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ，ｓｕｃｔｉｏｎｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｔｈｅａｍｏｕｎｔｏｆｌａｖａｇｅａｎｄｒｅｃｏｖｅｒｙ，ａｎｄｔｈｅｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄｉｎｔｈｅｌｕｎｇｓ．Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎｏｆｌａｖａｇｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｉｓｔｈｅｋｅｙｔｏｔｈｅｓｔｕｄｙａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｌａｖａｇｅｍｅｔｈｏｄｓｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｂｙｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｄｆｏｒｅｉｇｎｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｔｈｅｔｈｉｓｆｉｅｌｄ．ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ＢｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒＬａｖａｇｅ；Ａｎｉｍａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｓｔｅｍ㊀㊀支气管肺泡灌洗术（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅ，ＢＡＬ）是研究人和动物呼吸系统性疾病的一种十分重要的实验技术，该技术方法在临床试验和动物实验研究中都得到了广泛应用与研究［１－３］，但在实验动物相关研究中并未得到应有的重视㊂如今有关大小鼠的实验与日俱增，在实验研究中的地位越发重要，而环境空气污染愈发严重，对人健康危害极大［４］，了解动物呼吸系统的病变，并将其研究成果应用于我们人类显得格外重要，尤其是在吸入毒性试验中，同时支气管肺泡灌洗液（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ，ＢＡＬＦ）也广泛用于研究吸入纳米颗粒物㊁大气颗粒物以及工人们在某些特定的职业场所吸入空气中的悬浮颗粒物后所引起的肺损伤，例如实验动物染毒后ＢＡＬＦ中的肺泡巨噬细胞㊁中性粒细胞的数量㊁磷脂和总蛋白的浓度的显著性改变，是肺部炎症损伤程度的重要生物标志物［５］，ＢＡＬＦ的检测结果显得十分关键［６－８］㊂但目前国内外学者对于实验动物大小鼠支气管肺泡的灌洗并没有形成一种准确㊁可靠而规范的一套操作方法，研究人员的肺泡灌洗方法千差万别，导致相关实验研究之间缺乏可比性，ＢＡＬＦ的检测结果受到诸多因素影响，不同的灌洗操作方法对ＢＡＬＦ意义重大，对灌洗液的回收率和灌洗液中细胞及细胞因子活性的影响都不容忽视，这一点细小的差异可能会对整个实验研究结果产生深远的影响，如灌洗液被污染混入血液㊁抽吸压力大小㊁灌洗量和灌洗液的种类等㊂因此，建立一种可靠㊁准确㊁成功率高的标准灌洗方法尤为重要，本文总结了国内外学者的支气管肺泡灌洗方法，为今后进一步开展相关实验研究提供参考和依据㊂１㊀麻醉动物手术前的麻醉不仅是为了减轻动物的痛苦，满足动物福利的要求，也是为了保证动物手术顺利进行的前提，目前国外大多数实验研究采用的麻醉方式都是通过腹腔注射（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＩＰ）戊巴比妥钠，戊巴比妥钠已经成为了国外学者首选的麻醉药，在比较发达的国家和地区，则倾向采用更为安全㊁效率更高的吸入异氟烷麻醉，异氟烷被动物吸入体内后几乎不参与体内代谢，对实验结果干扰较小㊂国内使用的吸入麻醉药还包括乙醚，但乙醚会对动物的呼吸道造成强烈的刺激㊂吸入麻醉相比传统的麻醉方式具有以下明显的优点：麻醉作用快㊁动物苏醒迅速㊁麻醉深度易于控制以及实验动物的病死率低，然而吸入麻醉成本较高，术前准备及麻醉操作相对复杂，国内应用并不多见㊂而国内实验人员选择的麻醉药除了戊巴比妥钠外也有用水合氯醛，尽管戊巴比妥钠和水合氯醛等麻醉剂使用较为方便，麻醉过程平衡且稳定，维持时间长，但也存在明显的缺点：动物苏醒时间较长，更重要的是麻醉药对呼吸系统和循环系统存在明显的抑制作用［９－１０］，给开展部分实验带来较大的干扰㊂因此麻醉药和麻醉剂量要依据自己实验的要求和目的来选择，不同品系的大小鼠对不同种类麻醉药的敏感性也不同，这就需要我们根据自己实践的结果并结合参考文献来选择适合的麻醉方式㊂现阶段常用的大小鼠腹腔注射戊巴比妥钠麻醉剂量为３０５０ｍｇ／ｋｇ，浓度１％３％，水合氯醛麻醉剂量为３００４００ｍｇ／ｋｇ，浓度１０％，乌拉坦由于具有较强的致癌作用应用较少㊂当下同时研究授试物与麻醉药对机体联合及交互作用的研究并不多见，部分药物的动力学及药效学尚不完全清楚，这也许会给实验结果带来困扰，是授试物造成的结局亦或是麻醉药影响了特定生化指标的改变还需要更进一步的探讨㊂２㊀灌洗液选择合适的灌洗液是目前ＢＡＬ中争议最大的环节，也是整个灌洗过程中最混乱的一部分，国内外实验人员在选择灌洗液种类㊁温度以及灌洗量上都存在较大差异㊂常用的灌洗液包括生理盐水（ｐＨ６２７４）㊁磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ，ｐＨ７４）以及Ｄ⁃Ｈａｎｋｓ液（ｐＨ７９）㊂史菲等［１１］通过导管吸取３７ħ预热的生理盐水缓慢注入大鼠左侧肺内，并来回抽吸１０次，每只大鼠的单次肺泡灌洗量为２５ｍＬ㊂曹君等［１２］选用无菌ＰＢＳ对小鼠进行单侧肺泡灌洗，单次灌洗量为０５ｍＬ㊂国内学者大多选用生理盐水和磷酸盐缓冲液［３，１２］进行灌洗，但很少有学者约定灌洗液的温度和ｐＨ值，值得一提的是，国外实验人员偏爱ｐＨ７４含有钙镁离子并且预热的ＰＢＳ，他们认为其更有利于灌洗液中细胞因子的活性［１３－１５］㊂灌洗液的种类㊁ｐＨ值以及温度高低的差异可能对呼吸道的刺激作用不同，对收集的灌洗液中细胞因子活性的影响也不一样，给灌洗液后续检测分析结果带来一定干扰，国内的相关研究几乎处于一片空白㊂能否进行成功的灌洗，收集到准确而可靠的结果，标准化ＢＡＬ的操作，选择合适的灌洗液显得尤为重要，很多试验中并没有对该问题引起重视，在实验方法中简略描述，今后相关实验研究需要注重ＢＡＬＦ的收集方法且具体化，并增加必要的讨论㊂３㊀灌洗部位大小鼠的肺叶分部与我们人存在明显差异，左肺为单叶，右肺由上㊁中㊁下及副叶组成，因此根据实验目的决定是全肺灌洗或单肺灌洗，如果要求灌洗标本更多，则选取灌洗全肺或右肺，如果对组织病理学要求更高，则选择左肺进行灌洗，国内外实验人员对于选取实验动物灌洗部位也有着明显的差别，国内实验人员通常灌洗左肺［１，１１］，为了避免气管插管进入复杂的右肺肺叶，也有学者灌洗全肺［１３］，虽然全肺灌洗可以获得更多的灌洗标本，但也在一定程度上限制了动物的有效利用，同时增加实验动物数量，违反了实验动物的减量化（ｒｅｄｕｃｉｎｇ）㊁再利用（ｒｅｕｓｉｎｇ）和再循环（ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ）原则，反之，国外学者更偏向于结扎左主支气管灌洗右肺［１４－１６］，Ｓｈｉｎ等［１４］用３ｍＬ预热的含有Ｃａ２＋㊁Ｍｇ２＋离子的磷酸盐缓冲液对右肺进行了１４次灌洗㊂Ｋｉｍ等［１５］同样使用了含有Ｃａ２＋㊁Ｍｇ２＋离子的磷酸盐缓冲液对右肺进行了４次灌洗，他们的操作方法基本一致㊂国外学者认为ＢＡＬ是一项十分重要的操作技术，ＢＡＬＦ中各种细胞因子㊁免疫因子以及细胞涂片等的检测结果至关重要，大小鼠右肺组织明显多于左肺，因而灌洗右肺能够获得更多的标本，可供参考的数据更多更准确，也遵循了动物福利，这也是他们绝大部分实验选择灌洗右肺的根本原因㊂４㊀灌洗方式灌洗方式是指离体操作或在体操做，在体灌洗只需通过手术暴露实验动物整个肺组织及气管并行插管后对其进行灌洗，相比之下，离体灌洗就稍显复杂，还需要将肺部及气管完整的取出后再进行灌洗，两种方式都存在明显的利弊，虽然在体灌洗对ＢＡＬＦ中的细胞因子活性影响较小，但灌洗液回收率比较低，尽管离体灌洗时灌洗液回收量比较大，然而对细胞活性影响比较大，同时离体灌洗还需要对肺部进行手术分离，稍有不慎就可能刺穿肺叶，影响灌洗，导致整个实验失败，使得灌洗操作变得更加复杂，费时费力，值得注意的是在对小鼠进行操作时应格外小心，如果没有剥离干净，在行气管插管时，血管可能被手术器械挑破，导致血液流出不仅会干扰插管的视野，还会导致ＢＡＬＦ污染，影响ＢＡＬＦ生化因子和细胞成分的分析㊂当前并没有实验研究明确揭示在体灌洗与离体灌洗的差异，对细胞活性有着怎样的影响，国内外研究人员也并未对其进行深入探讨，这应当是今后相关实验研究的一个重点㊂５㊀灌洗液的处理收集到ＢＡＬＦ之后，为了分离灌洗液中的多种成分，将对其离心，使相关细胞因子留在上清液中用于相关细胞因子的检测，而细胞等成分则沉淀下来通过重悬，给沉淀细胞一个合适的环境，并使其形态保持完整性后行染色涂片㊁细胞计数以及显微镜镜检㊂国内外实验研究人员对于离心速度㊁离心时间㊁离心温度和细胞重悬所用的液体都没有一个统一的标准，这也使得相关实验数据的结果缺乏可比性㊂国外实验人员ＢＡＬ汇总如表１所示㊂６㊀灌洗过程的注意事项及讨论６１㊀气管插管的选取由于大小鼠实验动物的气管管径不同，行ＢＡＬ时所使用的导管也略有不同，小鼠气管直径１５ｍｍ左右，大鼠气管２２５ｍｍ左右，灌洗套管太粗不容易插进去，还会损伤气管，致使起到穿孔，灌洗管太细又容易导致液体外溢，使回收率降低，因此选用适合的导管十分关键㊂史菲等［１１］采用外径为１８ｍｍ的静脉导管作为气管插管㊂酆孟洁等［２８］使用２４Ｇ静脉留置套管针收集小鼠ＢＡＬＦ，在灌洗液中观察到大量嗜酸性粒细胞，成功收集到了哮喘小鼠模型ＢＡＬＦ㊂曹君等［１２］采用２２Ｇ静脉留置针套管行气管插管收集ＢＡＬＦ，与酆孟洁等使用的气管插管方法基本一致㊂６２㊀抽吸力度和速度灌洗操作过程中的抽吸速度㊁抽吸力度和抽洗次数同样也是收集ＢＡＬＦ的关键，极容易被人忽视，在灌洗过程中，抽吸速度过快㊁力度过大，不仅灌洗不彻底，影响实验结果，还会导致管腔压力剧增，灌洗液溢出，甚至细胞变形破裂，包浆丢失，灌注压力过大会使灌洗液从肺组织表面渗出，抽吸力度过大易导致气管和静脉导管变形，反而不容易吸出液体㊂反复抽吸的次数过多，虽然收集到的标本中的细胞会相应增多，但灌洗量却会随之减少，导致回收率降低，此外抽吸次数过多还可能导致细胞受挤压变形而破裂严重干扰实验结果，国外研究人员大多抽吸２４次㊂表１㊀支气管肺泡灌洗术汇总表Ｔａｂ．１㊀Ｓｕｍｍａｒｙｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ动物模型Ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓ术前处理Ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ灌洗液Ｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ灌洗部位Ｌａｖａｇｅｓｉｔｅｓ灌洗次数Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ离心速度和时间Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎｓｐｅｅｄａｎｄｔｉｍｅ参考文献ＲｅｆｅｒｅｎｃｅｓＦ３４４大鼠Ｆ３４４／ＤｕＣｒｌＣｒｌｊｒａｔｓ腹腔注射戊巴比妥钠ＰｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌａｎｅｓｔｈｅｓｉａＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ２７００ｒ／ｍｉｎ，５ｍｉｎ１９６０ｒ／ｍｉｎ，４ħ，１０ｍｉｎ［１７］Ｆ３４４大鼠Ｆ３４４／ＤｕＣｒｌＣｒｌｊｒａｔｓ戊巴比妥钠麻醉ＰｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌａｎｅｓｔｈｅｓｉａＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ２７００ｒ／ｍｉｎ，５ｍｉｎ１９６０ｒ／ｍｉｎ，４ħ，１０ｍｉｎ［１８］Ｆ３４４大鼠（Ｆ３４４）／ＣｒｌＢＲｒａｔｓ安乐死ＥｕｔｈａｎａｓｉａＰＢＳ全肺Ｗｈｏｌｅｌｕｎｇ５［２７］Ｆ３４４大鼠Ｆ３４４／ＤｕＣｒｌＣｒｌｊｒａｔｓ戊巴比妥ＰｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌａｎｅｓｔｈｅｓｉａＰＢＳ左肺Ｌｅｆｔｌｕｎｇ３１０００ｒ／ｍｉｎ４ħ１０ｍｉｎ［２５］Ｆ３４４大鼠Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４ｒａｔｓ安乐死ＥｕｔｈａｎａｓｉａＰＭＮｂｕｆｆｅｒ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ１０１３ｍＬ１５００ｒ／ｍｉｎ４ħ１５ｍｉｎ［２６］ＳＤ大鼠ＳＤｒａｔｓ１ｍＬ／ｋｇ戊巴比妥钠Ｅｎｔｏｂａｒ（１ｍＬ／ｋｇ）Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＰＢＳ（ｐＨ７４）右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ１４ｍｌ１７００ｒ／ｍｉｎ７ｍｉｎ［１４］ＳＤ大鼠ＳＤｒａｔｓ安乐死Ｅｕｔｈａｎａｓｉａ０９％Ｎａｃｌ（ｐＨ７４）右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ４１７００ｒ／ｍｉｎ７ｍｉｎ［２０］ＳＤ大鼠ＳＤｒａｔｓ戊巴比妥钠１ｍＬ／ｋｇＥｎｔｏｂａｒ（１ｍＬ／ｋｇ，ｉ．ｐ）Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＰＢＳ（ｐＨ７４）右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ４１７００ｒ／ｍｉｎ７ｍｉｎ［１５］Ｗｉｓｔａｒ大鼠Ｗｉｓｔａｒｒａｔｓ硫喷妥钠安乐死Ｔｈｉｏｐｅｎｔｏｎｅｉ．ｐ．Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ２１５００ｒ／ｍｉｎ，４ħ１０ｍｉｎ［１６］Ｗｉｓｔａｒ大鼠Ｗｉｓｔａｒｒａｔｓ麻醉放血ＥｘｓａｎｇｕｉｎａｔｉｏｎＰＢＳ全肺Ｗｈｏｌｅｌｕｎｇ２［２３］Ｗｉｓｔａｒ大鼠Ｗｉｓｔａｒｒａｔｓ戊巴比妥钠Ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌｉ．ｐ．ＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ１５１５００ｒ／ｍｉｎ１０ｍｉｎ［２４］Ｗｉｓｔａｒ大鼠Ｗｉｓｔａｒｒａｔｓ异氟醚麻醉ＩｓｏｆｌｕｒａｎｅａｎｅｓｔｈｅｓｉａＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ２［１９］Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｃ５７ＢＬ／６Ｊｍｉｃｅ戊巴比妥钠Ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌｉ．ｐ．Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＰＢＳ（ｐＨ７４）全肺Ｗｈｏｌｅｌｕｎｇ４１９６０ｒ／ｍｉｎ４ħ５ｍｉｎ［２１］ＣＤ１小鼠ＣＤ１ｍｉｃｅ安乐死ＥｕｔｈａｎａｓｉａＤＰＢＳ全肺Ｗｈｏｌｅｌｕｎｇ３６４００ｒ／ｍｉｎ１５ｍｉｎ［２２］６３㊀灌洗量和停留时间众所周知大鼠肺组织容量大于小鼠，因此大鼠和小鼠的肺泡灌洗量也有所区别，灌洗液量过大将导致肺内压力急剧升高，严重时可导致灌洗液由肺组织包膜渗入胸腔中，过小则会导致回收不全，影响实验结果㊂常用的大鼠肺泡单次灌洗量为３５ｍＬ，小鼠为０２１ｍＬ，除此之外，灌洗液在肺组织内停留时间的长短对实验结果的影响也不容忽视，停留时间过短也会导致灌洗液回收不彻底，目前，绝大多数实验都将１５３０ｓ作为灌洗液在肺组织内最合适的停留时间㊂６４㊀回收率值得提出的是，我们不难发现肺泡灌洗操作过程一点的不同，ＢＡＬＦ的回收率千差万别，同时ＢＡＬＦ回收率也饱受争议，在实际操作过程中想要每一个灌洗标本都得到一个较高的回收率并不容易，尤其是第一个灌洗标本的回收量是最少的，再者如果只行单侧肺泡灌洗，回收率将进一步降低，回收率是否应当纳入标准肺泡灌洗还需更进一步的探讨㊂鉴于ＢＡＬ对今后开展呼吸系统相关研究的意义重大［２９－３３］，必然会对研究实验动物呼吸道㊁肺部疾病做出更大贡献，同时也应该看到灌洗液的种类㊁灌洗方式以及灌洗操作等均会对ＢＡＬＦ的检测结果产生干扰，在研究不同疾病时，ＢＡＬ的操作可能不尽相同，因此有必要对其深入探讨，相关研究有待进一步深化㊂参考文献：［１］㊀宋一平，崔德健，茅培英，等．慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道重塑及生长因子的研究［Ｊ］．中华结核和呼吸杂志，２００１，２４（５）：２８３－２８７．［２］㊀ＫｅｌｌｙＥＡ，ＲｏｄｒｉｇｕｅｚＲＲ，ＢｕｓｓｅＷＷ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｅｇｍｅｎｔａｌｂｒｏｎｃｈｏｐｒｏｖｏｃａｔｉｏｎｗｉｔｈａｌｌｅｒｇｅｎｏｎａｉｒｗａｙｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，１９９７，１５６（５）：１４２１－１４２８．［３］㊀湛孝东，姜玉新，李良怿，等．不同浓度卵蛋白变应原对小鼠哮喘模型建立的影响［Ｊ］．中国实验动物学报，２０１２，２０（４）：１６－２０．［４］㊀黄鹂鸣，王格慧，王荟，等．南京市空气中颗粒物ＰＭ１０㊁ＰＭ２５污染水平［Ｊ］．中国环境科学，２００２，２２（４）：３３４－３３７．［５］㊀ＨｅｎｄｅｒｓｏｎＲＦ．Ｕｓｅｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｔｏｄｅｔｅｃｔｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｉｎｈａｌｅｄｍａｔｅｒｉａｌ［Ｊ］．ＥｘｐＴｏｘｉｃｏｌＰａｔｈｏｌ，２００５，５７（１）：１５５－１５９．［６］㊀ＷａｒｈｅｉｔＤＢ，ＬａｕｒｅｎｃｅＢＲ，ＲｅｅｄＫＬ，ｅｔａｌ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｓｉｎｇｌｅ⁃ｗａｌｌｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌＳｃｉ，２００４，７７（１）：１１７－１２５．［７］㊀ＬａｍＣＷ，ＪａｍｅｓＪＴ，ＭｃｃｌｕｓｋｅｙＲ，ｅｔａｌ．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｈｅａｌｔｈｒｉｓｋｓ［Ｊ］．ＣｒｉｔＲｅｖＴｏｘｉｃｏｌ，２００６，３６（３）：１８９－２１７．［８］㊀ＢｅｒｍｕｄｅｚＥ，ＭａｎｇｕｍＪＢ，ＡｓｇｈａｒｉａｎＢ，ｅｔａｌ．Ｌｏｎｇ⁃ｔｅｒｍｐｕｌｍｏｎａｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｔｈｒｅｅｌａｂｏｒａｔｏｒｙｒｏｄｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓｔｏｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆｐｉｇｍｅｎｔａｒｙｔｉｔａｎｉｕｍｄｉｏｘｉｄｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌＳｃｉ，２００２，７０（１）：８６－９７．［９］㊀周昆，屈彩芹．动物实验常用麻醉剂的比较与选择［Ｊ］．实验动物科学，２００８，２５（２）：４１－４３．［１０］㊀李志勇，孙建宁，张硕峰．水合氯醛和戊巴比妥钠对ＳＤ大鼠麻醉效果的比较［Ｊ］．四川动物，２００８，２７（２）：２９９－３０２．［１１］㊀史菲，邱晨．大鼠支气管肺泡灌洗术标准化操作的探讨［Ｊ］．中国现代医学杂志，２００２，１２（２４）：６７－６９．［１２］㊀曹君，陈平，杨悦，等．烟雾暴露所致肺气肿小鼠模型的建立与评价［Ｊ］．中国实验动物学报，２０１０，１８（４）：２７８－２８２．［１３］㊀应杏秋，曾群力，祝慧娟，等．纳米ＳｉＯ２与标准ＳｉＯ２致大鼠急性肺损伤的作用［Ｊ］．中华劳动卫生职业病杂志，２００６，２４（２）：１１６－１１７．［１４］㊀ＳｈｉｎＪＨ，ＨａｎＳＧ，ＫｉｍＪＫ，ｅｔａｌ．５ｄａｙｒｅｐｅａｔｅｄｉｎｈａｌａｔｉｏｎａｎｄ２８ｄａｙｐｏｓｔｅｘｐｏｓｕｒｅｓｔｕｄｙｏｆｇｒａｐｈｅｎｅ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１５，９（８）：１０２３－１０３１．［１５］㊀ＫｉｍＪＫ，ＳｈｉｎＪＨ，ＬｅｅＪＳ，ｅｔａｌ．２８⁃ｄａｙｉｎｈａｌａｔｉｏｎｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｇｒａｐｈｅｎｅｎａｎｏｐｌａｔｅｌｅｔｓｉｎＳｐｒａｇｕｅ⁃Ｄａｗｌｅｙｒａｔｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１６，１０（７）：８９１－９０１．［１６］㊀ＦｒａｎｃｉｓＡＰ，ＧａｎａｐａｔｈｙＳ，ＰａｌｌａＶＲ，ｅｔａｌ．Ｏｎｅｔｉｍｅｎｏｓｅ⁃ｏｎｌｙｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆＭＷＣＮＴｓｅｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｏｘｉｃｉｔｙｂｙｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔｓａｃｒｉｆｉｃｅｉｎＷｉｓｔａｒｒａｔｓ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌＲｅｐ，２０１５，２（３）：１１１－１２０．［１７］㊀ＵｍｅｄａＹ，ＫａｓａｉＴ，ＳａｉｔｏＭ，ｅｔａｌ．Ｔｗｏ⁃ｗｅｅｋｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｍｕｌｔｉ⁃ｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｂｙｗｈｏｌｅ⁃ｂｏｄｙｉｎｈａｌａｔｉｏｎｅｘｐｏｓｕｒｅｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＪＴｏｘｉｃｏｌＰａｔｈｏｌ，２０１３，２６（２）：１３１－１４０．［１８］㊀ＫａｓａｉＴ，ＵｍｅｄａＹ，ＯｈｎｉｓｈｉＭ，ｅｔａｌ．Ｔｈｉｒｔｅｅｎｗｅｅｋｓｔｕｄｙｏｆｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｆｉｂｅｒｌｉｋｅｍｕｌｔｉｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｗｉｔｈｗｈｏｌｅｂｏｄｙｉｎｈａｌａｔｉｏｎｅｘｐｏｓｕｒｅｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１５，９（４）：４１３－４２２．［１９］㊀Ｍａ⁃ＨｏｃｋＬ，ＳｔｒａｕｓｓＶ，ＴｒｅｕｍａｎｎＳ，ｅｔａｌ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｉｎｈａｌａｔｉｏｎｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｍｕｌｔｉ⁃ｗａｌｌｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓ，ｇｒａｐｈｅｎｅ，ｇｒａｐｈｉｔｅｎａｎｏｐｌａｔｅｌｅｔｓａｎｄｌｏｗｓｕｒｆａｃｅｃａｒｂｏｎｂｌａｃｋ［Ｊ］．ＰａｒｔＦｉｂｒｅＴｏｘｉｃｏｌ，２０１３，１０（１）：２３－４２．［２０］㊀ＨａｎＳＧ，ＫｉｍＪＫ，ＳｈｉｎＪＨ，ｅｔａｌ．ＰｕｌｍｏｎａｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆＳｐｒａｇｕｅ⁃Ｄａｗｌｅｙｒａｔｓｉｎｓｉｎｇｌｅｉｎｈａｌａｔｉｏｎｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｇｒａｐｈｅｎｅｏｘｉｄｅｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄＲｅｓＩｎｔ，２０１５２０１５ＡｒｔｉｃｌｅＩＤ３７６７５６．［２１］㊀ＭｅｒｃｅｒＲＲ，ＳｃａｂｉｌｌｏｎｉＪＦ，ＨｕｂｂｓＡＦ，ｅｔａｌ．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｆｉｂｒｏｔｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｉｎｈａｌａｔｉｏｎｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｍｕｌｔｉ⁃ｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓ［Ｊ］．ＰａｒｔＦｉｂｒｅＴｏｘｉｃｏｌ，２０１３，１０（１）：３３－４７．［２２］㊀ＢｌｕｍＪＬ，ＲｏｓｅｎｂｌｕｍＬＫ，ＧｒｕｎｉｇＧ，ｅｔａｌ．Ｓｈｏｒｔ⁃ｔｅｒｍｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆｃａｄｍｉｕｍｏｘｉｄｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓａｌｔｅｒｓｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｙｎａｍｉｃｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄｒｅｐａｉｒｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＩｎｈａｌＴｏｘｉｃｏｌ，２０１４，２６（１）：４８－５８．［２３］㊀ＬａｎｄｓｉｅｄｅｌＲ，Ｍａ⁃ＨｏｃｋＬ，ＨｏｆｍａｎｎＴ，ｅｔａｌ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｈｏｒｔ⁃ｔｅｒｍｉｎｈａｌａｔｉｏｎｓｔｕｄｉｅｓｔｏａｓｓｅｓｓｔｈｅｉｎｈａｌａｔｉｏｎｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ［Ｊ］．ＰａｒｔＦｉｂｒｅＴｏｘｉｃｏｌ，２０１４，１１（１）：１６－４２．［２４］㊀ＫａｄｏｙａＣ，ＬｅｅＢＷ，ＯｇａｍｉＡ，ｅｔａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｕｌｍｏｎａｒｙｓｕｒｆａｃｔａｎｔｉｎｒａｔｌｕｎｇｓａｆｔｅｒｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ：ｆｕｌｌｅｒｅｎｅｓ，ｎｉｃｋｅｌｏｘｉｄｅａｎｄｍｕｌｔｉ⁃ｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１６，１０（２）：１９４－２０３．［２５］㊀ＡｉｓｏＳ，ＹａｍａｚａｋｉＫ，ＵｍｅｄａＹ，ｅｔａｌ．ＰｕｌｍｏｎａｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌｌｙｉｎｓｔｉｌｌｅｄｍｕｌｔｉｗａｌｌｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｉｎｍａｌｅＦｉｓｃｈｅｒ３４４ｒａｔｓ［Ｊ］．ＩｎｄＨｅａｌｔｈ，２０１０，４８（６）：７８３－７９５．［２６］㊀ＭｏｒｉｍｏｔｏＹ，ＩｚｕｍｉＨ，ＹｏｓｈｉｕｒａＹ，ｅｔａｌ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｗｅｌｌ⁃ｄｉｓｐｅｒｓｅｄｃｅｒｉｕｍｏｘｉｄｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌｉｎｓｔｉｌｌａｔｉｏｎａｎｄｉｎｈａｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＮａｎｏｐａｒｔＲｅｓ，２０１５，１７（１１）：４４２－４５８．［２７］㊀ＢｅｒｍｕｄｅｚＥ，ＭａｎｇｕｍＪＢ，ＷｏｎｇＢＡ，ｅｔａｌ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｍｉｃｅ，ｒａｔｓ，ａｎｄｈａｍｓｔｅｒｓｔｏｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆｕｌｔｒａｆｉｎｅｔｉｔａｎｉｕｍｄｉｏｘｉｄｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌＳｃｉ，２００４，７７（２）：３４７－３５７．［２８］㊀酆孟洁，邱晨，刘雯雯．支气管肺泡灌洗术在哮喘小鼠模型中的应用［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１２，３３（１９）：２３０５－２３０６．［２９］㊀ＣｈａｎｅｚＰ，ＶｉｇｎｏｌａＡＭ，ＯＳｈａｕｇｎｅｓｓｙＴ，ｅｔａｌ．ＣｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｒｅｖｅｒｓｉｂｉｌｉｔｙｉｎＣＯＰＤｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｆｅａｔｕｒｅｓｏｆａｓｔｈｍａ［Ｊ］．ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，１９９７，１５５（５）：１５２９－１５３４．［３０］㊀ＶａｓａｋｏｖａＭ，ＳｔｅｒｃｌｏｖａＭ，ＫｏｌｅｓａｒＬ，ｅｔａｌ．ＣｙｔｏｋｉｎｅｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓａｎｄＢＡＬＦｃｙｔｏｋｉｎｅｌｅｖｅｌｓｉｎｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｌｕｎｇｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＲｅｓｐｉｒＭｅｄ，２００９，１０３（５）：７７３－７７９．［３１］㊀ＤｒｅｎｔＭ，ｖａｎＮｉｅｒｏｐＭＡ，ＧｅｒｒｉｔｓｅｎＦＡ，ｅｔａｌ．ＡｃｏｍｐｕｔｅｒｐｒｏｇｒａｍｕｓｉｎｇＢＡＬＦ⁃ａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓａｓａｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｔｏｏｌｉｎｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｌｕｎｇｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，１９９６，１５３（２）：７３６－７４１．［３２］㊀ｖａｎＲｉｊｔＬＳ，ＫｕｉｐｅｒｓＨ，ＶｏｓＮ，ｅｔａｌ．Ａｒａｐｉｄｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄｃｅｌｌｓｉｎｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓｏｆａｓｔｈｍａ［Ｊ］．ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ，２００４，２８８（１－２）：１１１－１２１．［３３］㊀毕玉田，王彦，吴奎，等．屋尘螨致敏／激发小鼠气道变态反应性炎症模型的构建［Ｊ］．中国实验动物学报，２００７，１５（５）：３３８－３４１．收稿日期２０１７－０４－１９。

麻杏石甘汤实验报告

麻杏石甘汤，源于东汉张仲景的《伤寒论》，是我国传统中医药中的经典方剂。

该方剂由麻黄、杏仁、石膏和炙甘草组成，具有宣肺平喘、清热解毒、止咳化痰的功效。

近年来，麻杏石甘汤在临床应用中表现出显著的疗效，尤其在治疗呼吸系统疾病方面。

为了进一步验证麻杏石甘汤的药效，本实验采用动物模型进行观察和评价。

二、实验目的1. 观察麻杏石甘汤对小鼠肺炎模型的治疗作用；2. 评价麻杏石甘汤的止咳、平喘、抗炎等药理作用；3. 探讨麻杏石甘汤在临床应用中的潜在价值。

三、实验材料与方法1. 实验动物：健康雄性小鼠60只，体重（18±2）g，购自某实验动物中心。

2. 实验药物：麻杏石甘汤（自制，剂量为0.5g/kg体重），阳性对照药为氨茶碱（剂量为10mg/kg体重）。

3. 实验方法：（1）肺炎模型建立：采用细菌感染法建立小鼠肺炎模型。

将实验小鼠随机分为5组，每组12只，分别为正常组、模型组、麻杏石甘汤低剂量组、麻杏石甘汤中剂量组和氨茶碱组。

除正常组外，其余各组小鼠均采用细菌感染法建立肺炎模型。

模型建立后，正常组、模型组和麻杏石甘汤低剂量组给予生理盐水灌胃，麻杏石甘汤中剂量组和氨茶碱组分别给予相应药物灌胃。

（2）观察指标：1）临床症状：观察小鼠的呼吸频率、咳嗽次数和活动能力等；2）肺组织病理学观察：取小鼠肺组织，进行HE染色，观察肺组织炎症程度；3）肺泡灌洗液指标：收集肺泡灌洗液，检测白细胞计数、中性粒细胞百分比等；4）血清指标：检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等炎症因子水平。

4. 统计学方法：采用SPSS 19.0软件进行统计分析，数据以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），以P<0.05为差异有统计学意义。

1. 临床症状：与模型组相比，麻杏石甘汤中剂量组和氨茶碱组小鼠的呼吸频率、咳嗽次数和活动能力明显改善（P<0.05）。

动物疫病实验室检验采样方法

动物疫病实验室检验采样方法一、血液采样血液采样是常见的疾病诊断的首选方法之一，适用于血液传播的疾病。

采样方法根据动物的类型和体重的不同而有所差异，常见的采样方法有以下几种：1.小动物（如小鼠、大鼠等）可通过眼眶窝、尾静脉、颈静脉或心室穿刺等方式采集血液样本；2.畜禽动物（如猪、牛、鸡等）可通过耳静脉、颈静脉或脚背静脉等方式采集血液样本；3.对于需要大量血液样本的实验，可通过动物异种输血的方式将所需血液直接从供血动物体内采集。

二、组织采样组织采样适用于疾病病变发生在特定组织或器官的情况下，通过对病变组织的检验可以更准确地确定病因。

常用的组织采样方法有以下几种：1.活体组织采样：通过活体活检或切除术获取需要的组织样本，并注意保持组织的完整性和无菌性；2.死体组织采样：在动物死亡后，及时进行尸检采集配合影像学检查，从病变部位取出组织标本以供病理学诊断。

3.对于牙齿、骨骼等较硬的组织，可通过取物钳、无菌手术刀等工具进行切割或剪取。

三、粪便采样粪便采样是用于检测消化系统感染的重要方法之一，如寄生虫感染、肠道病原菌等。

常见的粪便采样方法有以下几种：1.收集新鲜粪便：可使用专门的粪便容器，用手套将新鲜粪便取样放入容器中，并尽快送至实验室；2.采用拴带法：可将带子系在宠物或家禽的后腹部，等待其自然排泄后收集粪便样本；3.粪便培养：将粪便样本置于含有适宜培养基的培养皿中，培养一段时间后观察细菌、寄生虫的生长情况。

四、呼吸道分泌物采样呼吸道分泌物采样是检测呼吸道感染的常见方法，如猪流行性腹泻病毒、禽流感等。

常用的呼吸道分泌物采样方法有以下几种：1.咽拭子采样：通过使用无菌棉签或尖端呈折叠形状的棉絮，取样擦拭动物的咽部黏膜；2.肺泡灌洗：使用无菌注射器将生理盐水或培养基注入动物的气管并吸回，重复数次后将灌洗液用离心机进行离心，离心上清液即为样本。

总结起来，动物疫病实验室检验采样方法包括血液采样、组织采样、粪便采样和呼吸道分泌物采样等。

肺泡灌洗液标准

肺泡灌洗液（Bronchoalveolar Lavage Fluid, BALF）的检查标准可以从几个方面来描述：
1.样本采集和处理标准：
o支气管肺泡灌洗术（Bronchoalveolar lavage, BAL）应当按照临床实践指南进行，确保样本获取的正确性。

o标准化的采集流程包括达到规定的灌洗液回收量，通常期望的回收率在50%以上，总量取决于灌洗液注入和回收的体积。

o灌洗液应当尽可能纯净，不混有血液（红细胞比例不超过一定限度，如10%以内），避免过多的上皮细胞（通常<3%）和其他非肺实质
细胞成分。

2.细胞学分类标准：
o正常肺泡灌洗液的细胞分类百分比通常为：
▪巨噬细胞 >85%
▪淋巴细胞≤15%
▪中性粒细胞≤3%
▪嗜酸性粒细胞≤1%
3.细胞总数标准：
o正常肺泡灌洗液中的细胞总数正常范围一般为7000-20000个细胞/微升（cells/μL）。

4.微生物学检查标准：
o微生物检测结果应结合临床表现和影像学证据，没有明显微生物感染的肺泡灌洗液不应检出病原微生物。

5.生化及其他实验室指标：
o可通过肺泡灌洗液检测蛋白含量、乳酸脱氢酶、溶菌酶、免疫球蛋白等生化指标，这些指标异常可能提示肺部疾病的存在。

请注意，不同文献和实验室可能对正常范围的具体数值略有差异，而且随着医疗技术和研究进展，这些正常范围可能会有所更新。

在进行肺泡灌洗液的采集、送检和结果解读时，应参照最新的临床指南和实验室手册。

在实际临床工作中，医师会结合患者的实际情况和检测结果，对可能存在的肺部疾病做出诊断和治疗决策。

小鼠实验方法1

小鼠不同组织细胞的提取1.麻醉小鼠：将小鼠以0.1ml/10g的量注射4%水合氯醛进行麻醉，3-5分钟待小鼠麻醉后用小图钉将小鼠四肢固定于泡沫板上并喷洒适量酒精于小鼠皮肤表面，用吸水纸轻轻吸干。

2.肺泡灌洗液的制备和细胞分离：用剪刀剪开小鼠颈部皮肤用小图钉固定，分离颈部脂肪组织与肌肉层暴露气管，用一毫升注射器针头在气管接近咽喉上端轻轻扎孔，将灌洗软管由开孔处引入气管内约0.5cm，并用细线将气管与软管扎好避免灌洗时漏液。

用一毫升注射器吸取Hank’s液反复灌洗(300μl/次，灌洗4次)，并在灌洗时进行胸部轻轻按摩，收集灌洗液体1800转室温离心8分钟，收集上清备用，后用完全1640重悬离心管底部细胞并计数。

3.小鼠心脏灌注：将小鼠由腹部剪开至胸腔，打开胸腔暴露心脏，于右心房开一小口，针头由左心室心尖进入，用1×PBS进行灌注至灌洗液无明显红色、肝脏等器官泛白止。

4.气管组织单细胞悬液的制备：分离气管周围多余组织，取气管，放入装有Hank’s的15ml离心管中置于冰上，提取细胞时先用Hank’s洗涤两遍，于六孔板中剪碎气管组织并加入2‰的胶原酶(10ml不完全1640+10μlDNase+20mgⅠ型胶原酶)消化1.5h后取消化液过滤、洗涤并离心，弃上清后用完全1640重悬并计数。

5.肺组织单细胞悬液的制备：分离肺部周围多余组织，取全肺，放入装有Hank’s的15ml离心管中置于冰上，提取细胞时先用Hank’s洗涤两遍，于六孔板中剪碎肺组织并加入2‰的胶原酶(10ml不完全1640+10μlDNase+20mgⅠ型胶原酶)消化1.5h后取消化液过滤、洗涤并离心；获得的细胞里含有部分红细胞，用红细胞裂解液重悬裂解5分钟后加入Hank’s终止裂解并过滤，1800转室温离心8分钟，弃上清，用完全1640重悬并计数。

6.脾组织单细胞悬液的制备：分离脾部周围多余组织，取全脾，放入装有Hank’s的15ml离心管中置于冰上，提取细胞时先用Hank’s洗涤两遍，于100μlm filter中用高压灭菌五毫升注射器的活塞轻轻研磨，边研磨边加入Hank’s冲洗；将获得的滤液离心弃上清，用过Hank’s重悬平铺在ficoll液面上2200转室温离心20分钟(升7降0)。

小鼠肺泡灌洗

把小鼠喉咙处皮肤剪开，用镊子把气管周围的组织分离开，气管暴露出来。

注射器7号针头，针尖剪掉，再磨平，把动物仰位固定，针头从嘴巴里进去，伸到气管里。

和平时灌胃一样，只是现在伸到气管。

在甲状腺（气管显得稍宽处）下面，针头就伸到这里，大约甲状腺过3毫米处。

然后拿一根线，从气管下穿过，把针头和气管一起结扎了，其实就是把针头固定在里面，不让它跑出来。

打结时用点力，手拨动针头时明显感觉针头动不了就可以了。

然后注射器吸取液体推进气管，第一次一般吸不完全，没关系，第二次的液体推进去后就能吸出来很多了。

我基本能全部吸出来的。

希望能帮上忙。

标题：小鼠肺泡灌洗标准操作规程关键词：肺泡灌洗；细胞分类计数；细胞因子目的：检查小鼠各种病理生理状态(特别是肺部疾病)下，肺部出现的各种病理改变。

例：哮喘模型中检测嗜酸细胞的分类数有否提高，灌洗液中各种细胞因子，如IL-4,IL-5,IL-10,IFN-r等水平。

主体内容（操作步骤）：实验的准备实验的器材、仪器、药品：4℃遇冷的单纯PBS和4℃遇冷的含1%BSA 的PBS；手术器械：眼科剪，眼科镊，穿刺针或4号半头皮针；血细胞计数板；低温离心机实验操作规程：灌洗分单侧和双侧。

单侧一般为颈部和胸部解剖，气管和一侧肺叶结扎。

再用穿刺针插入气管上端，0.3mlPBS反复冲洗,一般为3遍，每遍冲洗次数根据需要决定，一般3-5次即可。

双侧灌洗则只需要进行颈部解剖，暴露气管进行插管。

PBS灌洗量增高到0.8ml.灌洗次数同上。

结果判定：1.回收的灌洗液4℃，1500r离心10分钟，回收上清置于-20℃等待进行细胞因子检测；2.用1ml含有1%BSA的PBS重悬细胞沉淀，取10ul重悬液进行细胞计数。

余液再次4℃离心，参数同上；3.离心后去上清，不需太彻底，可根据第二步细胞计数所得结果和需要涂片张数决定需要残留多少上清重悬细胞沉淀。

一般如果细胞总数有10*6次方/ml的话，用80-100ul重悬可以涂三张片，这样玻片上细胞密度比较适中。

制备小鼠支气管肺泡灌洗液方法的改进

部分支气管灌洗液会从小鼠的口鼻中溢出，体积波动较大，结果不理想。经探索和实践，本实验使用结扎远心端气管并
直接采用２ｍＬ注射器制备支气管肺泡灌洗液，取得了良好
的效果，并节约了费用，现介绍如下。１材料与方法
许可证号ＳＣＸＫ一２０１２－０００４。标记动物后，分笼颗粒饲料饲养，温度ｌ８— ２４℃ ，光暗周期１２ｈ，自由饮水进食。本实验符合河北北方学院实验动物伦理委员所制定的伦理学标准。
支气管肺泡灌洗术是一种通过对支气管肺泡灌洗技术，获取肺泡灌洗液进行免疫细胞、炎症因子和可溶性物质检查
学分析，结果以 ±Ｓ表示，采用独立样本ｔ检验进行两组间
ＤｉａｇｎＣｙｔｏｐａｔｈｏｌ，２００４，３０（１）：７—１３．
［２］ＴａｅＨＪ，ＬｉｍＤＪ，ＢａｅｋＫＨ，ｅｔａ１．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｖａｌｕｅｏｆｕｌｔｒａ．
制备小鼠支气管肺泡灌洗液方法的改进
张效云，辇晓峰，王文栋
关键词：支气管肺泡灌洗液；细胞计数；注射器
中图分类号：Ｒ３３２文献标志码：Ｂ文章编号：１００１ — ７３９９（２０１７）０１ — ０１０９— ０２
接受日期：２０１６—１１ —３０基金项目：张家口市科技局自然科学基金资助（１２１１０４６０Ｄ一１）作者单位：河北省张家口市河北北方学院医学检验学院生化教研室

小鼠支气管肺泡灌洗液(balf)中的白细胞分类

小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中的白细胞分类在研究小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中的白细胞分类之前，我们首先需要了解BALF的概念和特点。

BALF是一种常用的实验方法，通过向小鼠气道灌注生理盐水，然后通过肺部灌洗的方式收集肺泡灌洗液。

在收集到的BALF中，包含了众多细胞成分，其中白细胞是其中之一。

而白细胞的分类对于研究小鼠肺部疾病的病理过程和免疫反应有着重要的意义。

在BALF中，白细胞主要分为淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞。

这些不同类型的白细胞在小鼠肺部免疫应答中起着不同的作用，因此对它们进行准确的分类和分析，有助于科学家深入了解小鼠肺部疾病的发生和发展机制。

我们来谈谈淋巴细胞。

BALF中的淋巴细胞是一种重要的免疫细胞，它们主要参与体液免疫反应。

淋巴细胞的分类又可以分为T淋巴细胞和B淋巴细胞，它们在抗体介导的免疫应答和细胞介导的免疫应答中起着重要作用。

在研究小鼠支气管肺泡灌洗液中的淋巴细胞时，需要准确地区分T淋巴细胞和B淋巴细胞，并分析它们在肺部免疫过程中的作用和数量变化。

中性粒细胞在BALF中也是一个重要的细胞类型。

它们是免疫系统中的重要组成部分，主要参与细胞因子介导的免疫反应和炎症过程。

中性粒细胞的增多和活化常常伴随着肺部炎症性疾病的发生，因此对BALF中的中性粒细胞进行分类和分析，可以帮助科学家更全面地了解小鼠肺部疾病的免疫炎症过程，为疾病的诊断和治疗提供重要依据。

嗜酸性粒细胞和单核细胞在BALF中也具有重要意义。

嗜酸性粒细胞是一类主要参与过敏反应和寄生虫感染的免疫细胞，它们的数量变化可以反映小鼠肺部的过敏炎症情况。

而单核细胞则是一类具有多功能性的免疫细胞，它们可以分化为巨噬细胞和树突状细胞，参与免疫调节和抗原递呈过程。

在研究小鼠支气管肺泡灌洗液中的白细胞时，对嗜酸性粒细胞和单核细胞的分类和分析同样具有重要意义。

对BALF中的白细胞进行准确的分类和分析，可帮助科学家全面了解小鼠肺部的病理过程和免疫反应。

ngs肺泡灌洗液收集标准

ngs肺泡灌洗液收集标准
肺泡灌洗液（BAL）是一种用于收集肺部疾病诊断和研究的标准
化方法。

在进行肺泡灌洗液收集时，需要遵循一定的标准操作程序，以确保样本的质量和准确性。

以下是收集肺泡灌洗液时的一些标准
操作：
1. 术前准备，在进行肺泡灌洗液收集之前，需要对患者进行充
分的评估，包括病史记录、身体检查和必要的影像学检查。

确保患
者了解并同意进行该程序。

2. 仪器准备，确保使用干净、无菌的设备和仪器进行操作。

包
括用于灌洗的生理盐水或其他合适的灌洗液、吸引器、采样容器等。

3. 患者准备，在进行肺泡灌洗液前，需要对患者进行适当的麻
醉和镇静，以减轻不适感并确保操作顺利进行。

4. 操作步骤，将灌洗液通过气管插管或支气管镜导入到肺部，
然后通过吸引器将灌洗液抽出收集到采样容器中。

在操作过程中需
要注意避免气道异物进入、避免灌洗液污染、避免过度灌洗等情况。

5. 样本保存，收集到的肺泡灌洗液样本需要妥善保存，避免污染和温度变化，以确保后续实验和检测的准确性。

6. 记录和标本送检，在收集肺泡灌洗液后，需要准确记录操作过程和采集的样本信息，并及时送检实验室进行进一步的检测和分析。

总之，收集肺泡灌洗液需要严格遵循操作规程，确保操作的安全性和样本的准确性，以提供可靠的诊断和研究数据。

小鼠balf灌洗液提取方法

小鼠balf灌洗液提取方法嘿，朋友们！今天咱就来聊聊小鼠 balf 灌洗液提取这个事儿。

这可真是个有点小复杂，但又超级有趣的过程呢！你想想看，那小小的小鼠，身体里藏着我们想要的宝贝——balf 灌洗液。

就好像一个小宝藏等着我们去挖掘。

首先呢，得把小鼠给准备好呀。

就像要去挖掘宝藏得先找到入口一样。

把小鼠安安稳稳地放在那儿，让它别乱动。

这可不是件容易的事儿哦，小鼠那小身板可灵活着呢，一不小心就不知道跑哪儿去啦！然后呢，就得小心翼翼地给小鼠来个小手术啦。

这可不是闹着玩的，得特别特别小心，就跟拆一个特别珍贵的礼物似的，生怕给弄坏了。

找到合适的位置，轻轻地切开，就像打开宝藏盒子的盖子一样。

接着呀，就是关键的一步啦，把灌洗液慢慢地送进去。

这可得掌握好力度和角度，不能太粗鲁啦，不然小鼠可就遭罪了。

这就好比给花浇水，得轻轻的，让水均匀地滋润花朵。

等灌洗液进去后，再慢慢地把它抽出来。

哎呀呀，这感觉就像从宝藏盒子里把宝贝小心翼翼地拿出来一样。

可得稳住手，不能有一点儿马虎。

提取出来的 balf 灌洗液，那可真是来之不易呀！就好像经过千辛万苦才找到的宝贝，得好好珍惜。

在整个过程中，每一步都得特别特别细心。

就像走钢丝一样，稍微有一点儿差错可能就前功尽弃啦。

但当你成功地提取出那珍贵的 balf灌洗液时，那种成就感，哇塞，简直没法形容！朋友们，小鼠balf 灌洗液提取虽然有点难度，但只要我们用心去做，就一定能成功。

这就像我们生活中的很多事情一样，只要我们有耐心，有决心，就没有什么做不到的！加油吧，让我们一起在这个小小的实验中发现大大的乐趣！。

实验动物肺泡灌洗液制备及相关测试

健康养殖·管理2021.01 畜牧业环境39摘　要：肺泡灌洗液技术是一种通过对肺泡灌洗，获取肺泡灌洗液进行免疫细胞、炎症因子和可溶性物质检查的技术，为某些呼吸道疾病的病情观察、诊断和预后判定提供新方法新途径。

关键词：肺泡灌洗液制备；肺泡灌洗液测试；呼吸道疾病1　肺脏灌注在试验动物被解剖后，对动物肺脏进行重力灌注和肺泡灌洗液的制取。

首先将动物麻醉后放血安乐死，打开胸腔，取出胸腺，心脏，纵膈淋巴结，肺门淋巴结和肺脏，将肺脏称重并记录；取出肺脏时应特别注意，以免切开气管或主支气管的壁。

用手术缝合线将左肺支气管结扎并在靠近左肺一端剪开取下左肺，将手术缝合线套在左肺剩余支气管上，保留左肺和主气管制备肺泡灌洗液。

左肺支气管插入重力流仪器针头，保证针头到固定液液面垂直距离为20～30cm，系紧手术缝合线，打开固定液开关开始灌注，灌注时间至少2h。

2　肺泡灌洗液制备根据肺脏重量计算注射PBS溶液的剂量（26-28ml/kg）并抽取PBS溶液。

将手术缝合线套在主气管顶端，把钝角针头和注射器接好后插入主气管，系紧手术缝合线。

缓慢注射PBS溶液使右肺胀大，全部注射进右肺后缓慢抽出，使右肺恢复到原来大小，反复至少3次，制取的肺泡灌洗液要保证在抽取的PBS溶液的60%以上。

将注射器中得到的肺泡灌洗液装入离心管中。

3　肺泡灌洗液测试3.1　离心灌洗液制备后尽快在4 ℃以400g离心10min。

上清液用来测定LDH、白蛋白和总蛋白等生化指标。

细胞聚合物用1ml 磷酸盐缓冲液（PH 7.4）重悬作总细胞计数，用日本Sysmex XT-2000i全自动血液分析仪进行细胞计数。

3.2　指标检测非细胞的支气管肺泡灌洗液中LDH活性、蛋白等生化指标的测定：肺泡灌洗液应在室温保存，不冷冻，在制备的当天进行测定。

使用日立-7180型自动生化分析仪来测定这些生化指标。

细胞计数和差异计数：肺泡灌洗液重悬液离心后，弃去上清液，制成涂片，用瑞氏-姬姆萨染液染色。

小鼠肺泡灌洗液收集

小鼠肺泡灌洗液收集
20161008
实验材料
1. 1.5mL 离心管
2.5mL 流式管
3.18-G滞留针
4.眼科器械
5.EDTA-生理盐水/PBS/HBSS
6.3-4%福尔马林（甲醛）溶液
实验步骤
1.小鼠眼球取血
2.处死小鼠，剪开胸廓，暴露气管
3.气管上切开小口，将滞留针插入气管，滞留针头伸入一半长度（切忌过度伸
入，以防刺穿肺脏）
4.注射器中吸入0.5mL EDTA-生理盐水，接上滞留针头，注射入肺内
5.轻按摩胸腔10s，吸出EDTA-生理盐水，加入1.5mL离心管
6.重复一次，加入同一个1.5 mL 离心管
7. 1.5mL 离心管离心：300g 5min。

收集沉淀细胞用于流式检测，上清用于细
胞因子和Ig检测
8.重复抽吸8次，加入5mL 流式管同样离心细胞与之前混合后细胞计数备用
9.1/2肺脏加入3-4%福尔马林溶液，作为切片染色样本
10.½肺脏用于组织裂解，流式染色
11.。