电镜测试标本送样须知
常规电镜测试须知
常规电镜测试须知1. 明确需要采用的仪器是：透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope ，TEM ） 扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope ，SEM ）；2. 标本送检前，请在中心实验室网页进行所用仪器的送样预约，并在 仪器公告 或附件 里 下载 填写 送样送样申请单申请单申请单，，所列内容均为必填项目内容均为必填项目，，请勿请勿留留白；3. 送样申请单送样申请单以及以及以及标本标记标本标记标本标记使用的使用的 学生姓名 联系方式 必须必须与与 在线申请账号 一致；4. 标本送检前，请按照电镜测试要求取材、固定，做好样品标签（具体要求见下页）；标记用标记用标签纸标签纸标签纸以及扫描电镜标本用以及扫描电镜标本用以及扫描电镜标本用小玻璃瓶小玻璃瓶小玻璃瓶请请自备自备，，标签标签与要求与要求与要求不不符者恕不接收者恕不接收；；5. 电镜室提供按照大于标本20倍体积的25%电镜级戊二醛原液，请送样之前来电镜室领取（自备冰盒和1.5ml Ep 管），4°C 避光保存，使用前用PBS 按1:9稀释成浓度为2.5%的工作液；6. 确保在线注册的导师账号中费用充足，方可进行送样预约，若不足，请充值：（1） 校本部校本部 导师签字后直接在财务转账到中心实验室后，在生科楼1楼 中心实验室 温老师 或 严老师 处提交《记账凭证》入账到导师账号（2） 附属医院 在医院借支票（交学校财务）或转账后，操作同（1）（3） 校外 转账到学校财务处（网址/cwc/），到账后，在财务处开发票（带回单位报销）及《记账凭证》（交生命科学楼1楼 中心实验室 温老师 或 严老师 入账到导师账号）7. 开发票前到电镜室或生科楼1楼填写《缴费凭证》和《检测预收费清单》交给学校财务开发票。
透射电镜透射电镜————用于观察细胞内部结构有髓有髓神经纤维神经纤维神经纤维 肝糖原聚集肝糖原聚集培养培养细胞中的自噬体细胞中的自噬体细胞中的自噬体 海藻海藻海藻常规透射电镜送样须知1. 透射电镜标本置于1.5ml Ep 管；2. 因电镜制样用包埋板尺寸限制，请使用姓名姓名姓名汉字汉字汉字和阿拉伯数字编号和阿拉伯数字编号和阿拉伯数字编号标记标本，参照下图所示的“张三1”；图一 标本标注方法3. 标签不得覆盖Ep 管，用中性笔中性笔中性笔注明姓名姓名姓名及及样品编号样品编号；严禁使用铅笔、记号笔或其他油性笔标记以免被洗脱；请勿使用能被液体浸润的标签纸（虽用封口膜等包裹也无济于事，见下图第4管），以防制样时脱落、模糊标记缺失；如下图显示被液体浸润的标签纸和油性笔标记的后果；参见参见展板展板展板实物实物戊二醛戊二醛固定后换固定后换PBS 加常规透射电镜送样须知——培养细胞样品（重要重要：：超微形态反超微形态反映映的是的是标本接触固定液标本接触固定液标本接触固定液瞬间瞬间瞬间的状态的状态的状态，，故必须必须及时及时及时固定固定固定））1. 细胞数细胞数量量的要求的要求：： 悬浮培养的细胞需要计数106/ml 、贴壁细胞则需选用6孔板长到对数生长期（融合度达70~80%），取其中1孔，使用细胞刮刮下细胞（自噬、凋亡类实验推荐）或胰酶消化细胞收集，数量可达106/ml ；2. 细胞细胞收集收集收集及注意事项及注意事项及注意事项：吸掉含有血清的培养基，加入无血清培养基或PBS 1ml 刮下细胞，移入1.5ml 尖底Ep 管，离心5min （离心速度800-2000rpm 之间，请根据离心机型号自行决定；也可以参考培养细胞时的离心速度），使细胞形成约0.5-1mm高的细胞团块；见照片左侧“标准1”管所示所示；注意注意：：细胞团过大、或呈絮状，如照片“标准2”和“标准3”的细胞团较大，都会影响固定效果；参见参见展板展板展板实物实物3. 细胞细胞固定固定固定：：吸去无血清培养基，轻柔地沿管壁缓慢加入500µl 已提前恢复至室温的2.5% 戊二醛，切勿吹悬，避免震荡；室温1Hr ，再4°C 冰箱静置3Hr 后，吸出戊二醛，加满PBS 于4°C 冰箱静置，或送电镜室。
农生环电镜室新手必读
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一、常规工作安排：
1. TEM生物制样在C101室，每周四（仅限这一天！遇假期则取消制样。
）上午9:00开始，整个程序较长，到次日上午结束！
2. 制样需要提前预约，而且需要提供有导师签字同意的测试申请单（见群文件）。
3. 电镜观察在B128室。
等切片准备好，老师会通知同学前来观察，请关注QQ消息。
二、怎样取样、送样
1. 仅对杭州以外用户开放样品委托制样。
2. 实验材料的取样固定：这一步决定了整个实验的成败，非常重要应选择新鲜样本，放置于1.5ml或2ml EP管中，迅速用固定液（2.5%戊二醛）充分固定，实验前，置4℃冰箱中保存。
（1）细胞、细菌等颗粒类样品：离心收集于管底，至少有小米粒大小，然后加入1-2ml戊二
醛固定液。
最后再悬浮起来，即可。
（2）植物标本：切成1x3x1mm3大小，对于块
体样本，往往都需要抽真空，让标本沉下来。
植物根的样品取样需要引起足够重视，根的不
同部位差异很大，一定要取相近的部位才能进
行比较。
（3）动物标本：特别需要快速操作。
动物被处
死以后，应该以最快的速度取样（此时可能比
较大块），并投入到戊二醛固定液中。
待空闲
时候，可以取出该组织块，切取表面的部分，
并切成1x3x1mm3大小，放进新鲜固定液中，4℃冰箱中保存。
3. 实验材料的携带或者邮寄：准备做电镜的标本，所有的环节都不能结冰标本携带或邮寄之前，检查一下，尽量让每个EP管都装满固定液，从而确保标本块不会跑到液体外面去。
戊二醛充分固定的样本通常可以常温运输，但夏季高温时段，应放置1、2个冰袋。
透射电镜送样须知
送样禁忌
以下样品不可进行测试
具有放射性和腐蚀性的样品。 具有磁性的样品需提前咨询，以便确定是否可以测试。
在真空中会释放大量气体的样品，例如：含有单体的聚合物、含有反应物或产物的
催化剂等，尤其释放的气体具有腐蚀性的样品。 易挥发和易升华的样品（例如：单质Na、K、 S、P、Zn、Se、As、I、Te、Hg和低分 子量的有机物等）。 有剧烈化学毒性和生物毒性的样品。 所有样品的氢、氦元素不能测试。
送样禁忌
（1）磁性样品谢绝测试。 （2）粒径<2nm的样品在JEM-2100透射电镜上图像 质量较差或无法分辨，建议至场发射透射电镜上 测试。 （3）氮含量<10 wt%的氮掺杂样品在JEM-2100透射 电镜的能谱仪上难以测出N元素，建议至场发射透 射电镜及能谱上测试。
X射线光电子能谱送样须知
制样要求
（1）常规样品需自行制备在透射电镜专用铜网上，晾干后 于网上预约测试日前一天或预约当日上午9：00以前送往透 射电镜室待测。 （2）需要包埋/固定/超薄切片的样品无需网上预约，请直 接携带样品至透射电镜室现场咨询、预约。 （3）细菌、病毒类样品需灭活后自行制备在铜网上并染色 后送往透射电镜室。 （4）其他需磷钨酸负染的样品可送至透射电镜室制样。 （5）JEM-2100透射电镜的能谱mapping测试一般要求待测样 品>50 nm，待测元素含量>5 wt%。测试铜元素时需使用钼 网制样，碳元素不适合做能谱。 （6）需要电解双喷/离子减薄前处理的样品可至透射电镜室 借用相关设备自行前处理。
透射电镜送样须知
仪器型号
预约和付费编号
JEM-2100
20114940
JEM-1400
20114941
扫描电子显微镜对样品的要求及样品的制备
扫描电子显微镜对样品的要求及样品的制备扫描电子显微镜是一种大型的分析仪器,主要功能是用于固态物质的形貌显微分析和对常规成分的微区分析,广泛应用于化工、材料、医药、生物、矿产、司法等领域.由于其价格昂贵及特殊的工作原理,它对样品制备有着较高的要求,样品的制备好坏,直接影响着样品分析是否成功,为此,本文着重介绍一下扫描电子显微镜应用中有关样品制备的相关知识和技术.1 扫描电子显微镜对样品的要求(1)样品必须是无毒、无放射性的物质,以保证工作人员的人身安全.(2)样品可以是块状、片状、纤维状;也可以是颗粒或粉末状,无论是什么样的样品都不能是有机挥发物和含有水分.如果将含有水分的样品放在镜筒内能产生三种严重不良后果:一是当真空达不到要求强行通高压时,其产生的水蒸汽遭遇高能电子流产生电离而放电引起束流大幅度波动,使所成的像模糊,或根本不能成像;二是造成镜筒污染;三是损坏灯丝,当高能电压通过灯丝时,温度高达2000Ο,碰到水蒸汽而氧化变质或熔断,因此,应先烘干样品中的水分.(3)无论是块状样品,还是粉末颗粒状样品,其化学、物理性质要稳定,在高真空中的电子束照射下,都要能保持成分稳定和形态不变.(4)表面受到污染的样品,要在不破坏样品表面结构的前提下,进行适当清洗、烘干.(5)无论是样品的表面,还是样品新断开的断口或断面,一般不需要进行处理,以保持其原始的结构状态.(6)对磁性样品要预先去磁,以免观察时电子束受到磁场的影响.(7)粉末样品要适量,不易过多;块状样品大小要适合仪器专用样品底座的尺寸,不能过大.一般小的样品座Φ3～5mm,大的样品座为Φ30～50mm,以分别用来放置不同大小的样品,样品的高度一般限制在5～10mm左右.2 样品的制备技术2.1 块状样品的制备对于块状导电样品,基本上不需要进行什么制备,只要其大小适合电镜样品底座尺寸大小,即可直接用导电胶带把样品黏结在样品底座上,放到扫描电镜中观察,为防止假象的存在,在放试样前应先将试样用丙酮或酒精等进行清洗,必要时用超声波清洗器进行清洗.对于块状的非导电样品或导电性较差的样品,要先进行镀膜处理,否则,样品的表面会在高强度电子束作用下产生电荷堆积,影响入射电子束斑和样品发射的二次电子运动轨迹,使图像质量下降,因此这类样品要在观察前进行喷镀导电层的处理,在材料表面形成一层导电膜,避免样品表面的电荷积累,提高图象质量,并可防止样品的热损伤。
扫描电镜样品取材须知
扫描电镜样品取材须知介绍扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描，将产生的二次电子用特制的探测器收集，形成电信号运送到显像管，在荧光屏上显示物体（细胞、组织）表面的立体构像，可照相。
以观察组织细胞表面结构为主的样品，应特别要注意保护好观察面，尽量避免取材器械与待观察面的接触，样品可以大一些，但其直径不宜超过5mm，高度控制在3mm内。
以观察细胞内部超微结构的样品，样品大小在直径2mm以内，高度在3mm左右。
同时要做好样品观察面的标记，否则，经过后续处理后会难以辨别观察面的位置。
另外，移动样品可用无齿镊子或用牙签转移，或用镊子借液体的张力移取组织块，注意不可用力夹。
注意事项1、扫描电镜对样品表面的要求非常严格，必须清洗干净，否则，可导致观察困难或错误判断。
2、取材时要做到“动作快、环境冷、部位准”。
固定前清洗的组织离体后应在2~3分钟清洗完毕并投入预冷固定液内；固定后清洗的组织离体后应在1分钟以内投入固定液。
固定液要预冷，取材部位必须准确。
3、实验动物取材部位不宜多，否则会延误取材时间，导致组织自溶等人为假象的发生。
标本清洗：1、固定前清洗法：指表面覆盖有大量黏液和杂质的组织，在3%戊二醛固定之前进行清洗。
清洗之前可用低浓度蛋白水解酶（胰蛋白酶、糜蛋白酶等）或其他具有水解作用的溶液（N-乙酰半胱氨酸）对样品进行黏液处理，之后再选择等渗生理盐水或缓冲液在震荡器中进行清洗或用注射器加压冲洗，冲洗时间可根据样品附着物的情况来定。
2、固定后清洗法：是指表面比较干净的组织，取材后经过戊二醛固定2小时之后，用等渗生理盐水或缓冲液进行冲洗。
3、离心清洗法：指游离细胞、微生物以及其他微小生物样品的清洗。
具体步骤如下：将固定好的样品放入离心管内，注入等渗生理盐水或缓冲液（样品体积20倍的量），轻轻摇匀后，置4℃4000转/分钟离心3~5分钟，弃去上清夜，再注入上述清洗液，同样操作3~4次即可。
由于电镜样本制备过程中会不可避免地损失掉一部分细胞，因此细胞必须达到一定数量，即为离心后细胞量至少为黄豆样大小。
各仪器对送检样品的要求
各仪器对送检样品的要求1. 核磁共振波谱仪：（1）送检样品纯度一般应>95% ，无铁屑、灰尘、滤纸毛等杂质。
一般有机物须提供的样品量：1H谱>5mg，13C谱>15mg ，对聚合物所需的样品量应适当增加。
（2）本仪器配置仅能进行液体样品分析，要求样品在某种氘代溶剂中有良好的溶解性能，送样者应先选好所用溶剂。
本室常备的氘代溶剂有氯仿、重水、甲醇、丙酮、DMSO 、苯、邻二氯苯、乙腈、吡啶、醋酸、三氟乙酸。
（3）请送样者尽量提供样品的可能结构或来源。
如有特殊要求（如检测温度、谱宽等）请于说明。
2. 红外光谱仪：为了保护仪器和保证样品红外谱图的质量，送本仪器分析的样品，必须做到：（1）样品必须预先纯化，以保证有足够的纯度；（2）样品须预先除水干燥，避免损坏仪器，同时避免水峰对样品谱图的干扰；（3）易潮解的样品，请用户自备干燥器放置；（4）对易挥发、升华、对热不稳定的样品，请用带密封盖或塞子的容器盛装并盖紧，同时必须在样品分析任务单上注明；（5）对于有毒性和腐蚀性的样品，用户必须用密封容器装好。
送样时必须分别在样品瓶标签的明显位置和分析任务单上注明。
3.有机质谱仪：适合分析相对分子质量为50 ~ 2000u 的液体、固体有机化合物样品，试样应尽可能为纯净的单一组分。
4. 气相色谱- 质谱联用仪：气相色谱仪均使用毛细管柱（不能使用填充柱）。
进入气相色谱炉的样品，必须是在色谱柱的工作温度范围内能够完全汽化。
5. 液相色谱- 质谱联用仪：（1）易燃、易爆、毒害、腐蚀性样品必须注明。
（2）为确保分析结果准确、可靠，要求样品完全溶解，不得有机械杂质；未配成溶液的样品请注明溶剂，已配成溶液的样品请标明浓度。
（3）请尽可能提供样品的结构式、分子量或所含官能团，以便选择电离方式；如有特殊要求者，请提供具体实验条件。
（4）液相色谱–质谱联用时，所有缓冲体系一律用易挥发性缓冲剂，如乙酸、醋酸铵、氢氧化四丁基铵等配成。
002样品送样流程及注意事项
鑫文编号：
保定市鑫硕地质勘查有限公司
样品送样流程及注意事项
关于我单位样品的送样事宜，应严格遵循以下流程：
1、准备样品、填写送样单
由报告负责人整理好样品，填写制式送样单4份,要求填写完整、清楚、规范。
样品连同送样单一并送交办公室。
2、办公室联系化验室送样
办公室接到送样单，核对信息，签字，做好登记，联系化验室，送样。
送完样后，送样单交回各处（一份交回填表人、一份存办公室、一份交由总工办、一份送实验室）。
3、签收化验报告
办公室签收化验报告，缴纳化验费，做好登记工作。
连同送
样单交回档案室。
4、归档
档案室将化验报告、送样单作为原始资料归档。
总之，要求做到流程通畅，签字完整、资料保管齐全、无遗失。
附：送样单、送样登记表
保定市鑫硕地质勘查有限公司
2011年12月24日
送样登记表
第页。
透射电镜样品取材方法及要求
透射电镜样品取材⽅法及要求透射电镜样品取材⽅法及要求⼀、透射电镜样品取材⽅法（⼀）组织和器官取材⽅法：事先准备好所需的器械和固定液，并把它放4℃冰箱内预冷备⽤。
如为穿刺物（肾组织、肝组织、脾组织等）、剪取物（胃镜剪取物、⽀⽓管镜剪取物、肠镜剪取物等）、⼿术切除物（肿瘤组织以及实验动物脏器等），均应在离体后迅速⽤⽣理盐⽔冲洗后或直接投⼊预冷的2.5%戊⼆醛固定液（保质期为1个⽉）内，并把它放4℃冰箱内保存，⼀般要求在两分钟内完成。
在处理⼿术切除物时，应事先准备好两把锋利的⼑⽚（如剃须⼑或⼿术⼑）和蜡板，把固定液滴在蜡板上，再把切下来的脏器⽤⼿术⼑切成⼩块，放在蜡板上的固定液中，接着⽤双⼑⽚拉锯法在固定液中将组织切成约1⽴⽅毫⽶⼤⼩或横切⾯约1平⽅毫⽶的长条形，然后⽤⽛签或镊⼦（轻轻夹住，禁⽌挤压）把组织移⼊装有固定液的⼩瓶内，瓶⼦建议⽤带螺纹密封的样本瓶（见下图），确保固定液不会溢出，固定液⼀定要加注到瓶⼦的九成满。
如为肺组织，应在固定液中充分震荡，使其完全沉到瓶底为⽌。
（⼆）游离细胞取材法：组织培养和游离细胞（如⾎细胞、脱落细胞以及细菌病毒等），常悬浮分散在介质中，⾸先必须将其凝集成团，然后进⾏固定，具体做法如下：1、⾎浆凝集法：将抗凝全⾎离⼼分层（2000转/每分钟，10—20分钟），⽤⽑细吸管沿着管壁轻轻的将上清夜吸取（不要破坏⽩细胞层），接着⽤吸管吸取固定液，并沿着管壁将2.5%戊⼆醛固定液慢慢地加⼊进⾏固定，然后把它放在4℃冰箱内保存。
2、⾎浆（⾎清）混合法：如为细菌、病毒、脱落细胞、培养细胞则先将它们制成悬液放置于离⼼管内（最好是玻璃的），离⼼成团（1000～3000转/分钟，10分钟，下同），去上清液后加⼊2.5%戊⼆醛固定10分钟左右，离⼼，再弃去多余的固定液，然后和少量抗凝⾎浆或⾎清混合均匀，离⼼成团，去上清液（留少许），⽤吸管吸取2.5%戊⼆醛固定液沿着离⼼管壁缓慢滴⼊，尽量避免团块分散，静置于4℃冰箱内保存备⽤。
测试中心送样须知
测试中心送样须知各仪器对送检样品的要求1. 核磁共振波谱仪：（1）送检样品纯度一般应>95% ，无铁屑、灰尘、滤纸毛等杂质。
一般有机物须提供的样品量：1H谱>5mg，13C谱>15mg ，对聚合物所需的样品量应适当增加。
（2）本仪器配置仅能进行液体样品分析，要求样品在某种氘代溶剂中有良好的溶解性能，送样者应先选好所用溶剂。
本室常备的氘代溶剂有氯仿、重水、甲醇、丙酮、 DMSO 、苯、邻二氯苯、乙腈、吡啶、醋酸、三氟乙酸。
（3）请送样者尽量提供样品的可能结构或来源。
如有特殊要求（如检测温度、谱宽等）请于说明。
2. 红外光谱仪：为了保护仪器和保证样品红外谱图的质量，送本仪器分析的样品，必须做到：（1）样品必须预先纯化，以保证有足够的纯度；（2）样品须预先除水干燥，避免损坏仪器，同时避免水峰对样品谱图的干扰；（3）易潮解的样品，请用户自备干燥器放置；（4）对易挥发、升华、对热不稳定的样品，请用带密封盖或塞子的容器盛装并盖紧，同时必须在样品分析任务单上注明；（5）对于有毒性和腐蚀性的样品，用户必须用密封容器装好。
送样时必须分别在样品瓶标签的明显位置和分析任务单上注明。
3.有机质谱仪：适合分析相对分子质量为50 ~ 2000u 的液体、固体有机化合物样品，试样应尽可能为纯净的单一组分。
4. 气相色谱 - 质谱联用仪：气相色谱仪均使用毛细管柱（不能使用填充柱）。
进入气相色谱炉的样品，必须是在色谱柱的工作温度范围内能够完全汽化。
5. 液相色谱 - 质谱联用仪：（1）易燃、易爆、毒害、腐蚀性样品必须注明。
（2）为确保分析结果准确、可靠，要求样品完全溶解，不得有机械杂质；未配成溶液的样品请注明溶剂，已配成溶液的样品请标明浓度。
（3）请尽可能提供样品的结构式、分子量或所含官能团，以便选择电离方式；如有特殊要求者，请提供具体实验条件。
（4）液相色谱–质谱联用时，所有缓冲体系一律用易挥发性缓冲剂，如乙酸、醋酸铵、氢氧化四丁基铵等配成。
实验室仪器对送检样品的要求
各仪器对送检样品的要求1. 核磁共振波谱仪：（1）送检样品纯度一般应>95% ，无铁屑、灰尘、滤纸毛等杂质。
一般有机物须提供的样品量：1H谱>5mg，13C谱>15mg ，对聚合物所需的样品量应适当增加。
-（2）本仪器配置仅能进行液体样品分析，要求样品在某种氘代溶剂中有良好的溶解性能，送样者应先选好所用溶剂。
本室常备的氘代溶剂有氯仿、重水、甲醇、丙酮、 DMSO 、苯、邻二氯苯、乙腈、吡啶、醋酸、三氟乙酸。
（3）请送样者尽量提供样品的可能结构或来源。
如有特殊要求（如检测温度、谱宽等）请于说明。
2. 红外光谱仪：为了保护仪器和保证样品红外谱图的质量，送本仪器分析的样品，必须做到：（1）样品必须预先纯化，以保证有足够的纯度；（2）样品须预先除水干燥，避免损坏仪器，同时避免水峰对样品谱图的干扰；（3）易潮解的样品，请用户自备干燥器放置；（4）对易挥发、升华、对热不稳定的样品，请用带密封盖或塞子的容器盛装并盖紧，同时必须在样品分析任务单上注明；（5）对于有毒性和腐蚀性的样品，用户必须用密封容器装好。
送样时必须分别在样品瓶标签的明显位置和分析任务单上注明。
红外光谱分析制样方法在红外光谱分析的具体操作中，对于固体样品，常用的制样方法有以下四种：（１）压片法，是把固体样品的细粉，均匀地分散在碱金属卤化物中并压成透明薄片的一种方法；（２）粉末法，是把固体样品研磨成２μm以下的粉末，悬浮于易挥发溶剂中，然后将此悬浮液滴于KBr片基上铺平，待溶剂挥发后形成均匀的粉末薄层的一种方法；（３）薄膜法，是把固体试样溶解在适当的的溶剂中，把溶液倒在玻璃片上或KB窗片上，待溶剂挥发后生成均匀薄膜的一种方法；（４）糊剂法，是把固体粉末分散或悬浮于石蜡油等糊剂中，然后将糊状物夹于两片KBr等窗片间测绘其光谱。
其中最常用的是压片法，但此法常因样品浓度不合适或因片子不透明等问题需要一再返工。
对于液体样品，常用的制样方法有以下三种：（１）液膜法，是在可拆液体池两片窗片之间，滴上１～２滴液体试样，使之形成一薄的液膜。
电镜标本取材要求
电镜标本取材要求
1、组织取材要求
快：切除组织要快，一分钟内即要浸入电镜前固定液。
小：一般0.5-1.0mm3，允许切成3×1×1mm长的小条，观察面与长轴垂直。
为方便辨认，观察面可制成梯形。
准:选择部位准确无误，无关部分必须切去。
冷：固定后尽快送达我室，若因故迟送，应放在冰箱中4℃保存。
注意：取材时先取较大块浸入前固定液固定后1小时后再安上规定修块，（长条状样品要求观察面与长轴垂直）。
2、贴壁培养细胞：
1）先将培养液倒掉。
2）加入前固定液，固定15分钟。
3）用细胞刮子将细胞刮下。
4）以2000-3000转/分钟离心10分钟，使细胞在离心管尖端沉淀结块。
3、悬浮培养细胞：
1）加入等量前固定液，固定30分钟。
2）以1000转/分钟离心5分钟使细胞沉淀。
3）把上清液吸掉。
4）加入前固定液，固定30分钟。
5）以2000-3000转/分钟离心15分钟，使细胞沉淀结块。
注：样品送检前必须放冰箱4℃保存。
如细胞不能沉淀结块，可在离心前加入牛血清蛋白，或者50℃溶化的琼脂，再离心，使细胞沉淀结块。
4、骨头样品应先脱钙处理。
中心电镜室预约测试管理规定扫描电镜
中心电镜室预约测试管理规定扫描电镜1. 每周二周五上午9点-11点预约制样，预约时必须携带样品和预约表，为了保证测试时效，每位同学每次预约的样品不能超10个，样品编码为数字1、2、3…….，按照管理员的要求把样品粘到样品台上。
2. 为了缓解同学们提出的样品台较少的问题，电镜室将样品台数量增加到原来的2倍，总计约100个，用以缓解同学们的送样压力。
3. 为提高设备运行效率，预约测试的同学请提前认真、详细地填写预约表，预约登记时必须携带导师亲笔签字的预约表。
若预约表填写信息不详细，导师签字为代签或签名章，电子签名等，则此次预约无效，取消预约。
预约表模板请见科技大厦通知栏、中心电镜室（有机楼112）。
4. 为缓解测试排队时间长的问题，扫描电镜管理员增加至8人，每年4月份报名，有直博意向的同学优先，5月份确定入选名单，之后安排上机操作培训（大约2个月）、辐射安全考试（国资处统一安排考试时间）、特殊职业体检，三项全部通过后国资处发放辐射剂量笔即可上岗测试（由于需要国资处统一安排考试和体检等原因，落实需要等到下学期）。
5. 正常情况下扫描电镜的预约测试周期大概为2周，若扫描电镜预约样品过多，测试周期超过2周，允许同学将样品外送测试。
同学们在了解中心的外送流程及报销流程后，对于测试周期超过两周的样品外送前找赵建玲老师签字即可。
切片机原子力显微镜透射电镜1. 每周二周五上午10点-11点预约登记，预约时必须携带样品和预约表，为了保证测试时效，每位同学每次预约的样品不能超10个，样品袋上标记同学姓名，样品编码为数字1、2、3……2. 为提高设备运行效率，预约测试的同学请提前认真、详细地填写预约表，预约登记时必须携带导师亲笔签字的预约表。
若预约表填写信息不详细，导师签字为代签或签名章，电子签名等，则此次预约无效，取消预约。
预约表模板请见科技大厦通知栏、中心电镜室（有机楼112）。
3. 原子力显微镜管理员2人，每年4月份报名，有直博意向的同学优先，5月份确定入选名单，之后安排上机操作培训（大约2个月）。
透射电镜送样须知
透射电镜送样须知1、观察对象和检测周期：（一）通过超薄切片方法观察细胞的细胞壁,细胞膜以及细胞器等细胞内部超微结构，分辨率1nm左右。
通常固定好的样品任选周四之前任意一个工作日的早上9点半开始制样，到下6点左右结束当天制样工作，我实验室技术人员负责后期的包埋、切片、染色的环节。
从样品制备到观察需要两周的时间。
（二）病毒、蛋白、细菌或者细胞器等亚细胞结构通过滴染到铜网上的方法直接进行观察，分辨率1nm左右。
通常情况送检当天取得观察结果。
2、送检样品状态：（一）切片类样品用化学固定这一常规方法制样时，初固定是保证样品结构最大程度接近初始状态的最关键的一步。
初固定液的组分：与细胞环境相适应的缓冲液以及醛类物质。
通常样品缓冲液为0.1M，PH=7.2~7.4的PB缓冲液（对缓冲液有特殊要求的生物样品请酌情调配，如高盐，嗜酸，嗜碱，胚胎等富水组织等）。
用此缓冲液将固定剂母液稀释到使用的浓度，其固定剂成分是终浓度为2.5%的戊二醛和2%的多聚甲醛的混合物。
1）微生物类单细胞样品的取样和固定A、细胞量：低速离心细胞沉淀约20微升（尚未固定的细胞尽可能低速离心）。
B、固定：加入1ml体积固定液，将沉淀吹吸混匀，室温固定（保证每个细胞均被第一时间充分固定）2小时后放置4℃冰箱保存；特殊需求可低温固定。
C、针对对条件变化敏感的样品如厌氧菌等，可先固定后离心收集。
2）植物类样品的取样和固定A、取材：先将含目标组织在内的大块组织粗略剪裁到固定液中，快速切割下1mm3或者1*1mm2大小的目标组织块（尽可能取靠近边缘位置最先被固定液固定的样品）放入1毫升的固定液中，对切片方向有要求的样品请在取材时通过切取组织块的一个小角或者取材时通过样品块的长宽不同来作以区分。
以一个火柴为例，我们切片的方向是从火柴头切向火柴杆。
B、叶片等含有气孔的组织需要真空抽气,让样品快速下沉，促进固定液的渗透。
取材后放置在室温固定2小时后4℃冰箱保存，特殊需求的样品可低温固定。
生物透射电镜样品送样注意事项
透射电镜生物样品制作方法及注意事项：1.为了能得到良好的电镜结果，用户必须严格按照取材方法和注意事项去做。
2.每一例标本切取3-5小块组织进行固定，样品大小标准为1mm*1mm *1mm，不可取太大太多组织块，固定到2ml离心管内。
3.所取样品必须要在 4℃条件下先固定48h，或室温条件下固定2h，再送到测试中心电镜室来，途中要做好样品的低温保存。
4.细菌、细胞样品量要足够多（1.5ml的离心管底部离心后约5mm高）；5.特殊样品取材，可事先与电镜室老师联系、商讨。
6.每月满50个样品做一批，最多不超过80个，每月只做一批样品。
7.每月15-20日集中送样，21-25日处理样品；8.样品前处理结束后，两周后方可预约超薄样品透射电镜观察时间；9.用户观察超薄样品前，需先查文献，明确自己的研究目的和结果；10.取材不符合要求，电镜室拒收，如因取材、固定问题导致无满意结果，请自行负责。
透射电镜样品前处理操作流程：1.取材（1mm*1mm *1mm）——前固定（2.5% 戊二醛，4 ℃冰箱，2小时以上）——漂洗（0.1M 磷酸缓冲液，3-4 次，15 分钟/次）——后固定 (1% 锇酸，动物2小时，植物4小时）——漂洗（0.1M 磷酸缓冲液，3-4 次，15 分钟/次）——梯度脱水【30%、50%、70%（过夜）、80%、90%、95%、100% 酒精各 15 分钟】——丙酮脱水，15分钟——丙酮（加无水硫酸钠）脱水，15分钟——浸透（丙酮：树脂=1：1，1小时；丙酮：树脂=1：2，2小时；纯树脂，2小时）——包埋——聚合（37℃烘箱12 小时， 60℃烘箱 48 小时）；2.包埋成块后按照老师规定时间统一磨样；3.切片：按照一天10个样品计算，切片时间约5-10天，具体时间视样品数目确定；4.染色：柠檬酸铅、醋酸铀双染色，每批次染15个样品，每天染一批，染色时间约4-7天，具体时间视样品数目确定；5.电镜观察：染完后即可陆续上透射电镜观察样品，按预约样品前后顺序排队，每个样品观察约30min-1h，每天观察约10个样品，电镜观察所需时间约5-10天。
各仪器样品送样须知
目录场发射扫描电子显微镜（FESEM）-----------------------------1 X射线衍射仪（XRD）----------------------------------------1 小角X射线散射仪（SAXS）----------------------------------2 动态激光光散射仪(DLLS)------- ----------------------------2 凝胶渗透色谱-光散射联用仪(GPC-DLLS)-----------------------3 核磁共振波谱仪(NMR)---------------------------------------3 傅立叶红外光谱仪（FTIR）----------------------------------5 气质联用仪（GC-MS）---------------------------------------5 紫外可见光谱仪(UV)----------------------------------------7 高分辨透射电镜（TEM）-------------------------------------8 稳态/瞬态荧光光谱仪(QM/TM)--------------------------------9 原子力显微镜(AFM)-----------------------------------------9 扫描电子显微镜（SEM）-------------------------------------10 溶液/熔体高级旋转流变(ARES)------------------------------11 六硼化镧透射电子显微镜（TEM）----------------------------12 电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP)--------------------------13 元素分析仪(EA)-------------------------------------------13 激光显微拉曼光谱仪(RAMAN)--------------------------------14场发射扫描电子显微镜（FESEM）：※样品要求1.样品中不得含有水、有机小分子等易挥发、易分解成分。
场发射扫描电子显微镜sem送样须知.doc
（一）场发射扫描电子显微镜（SＥＭ）送样须知应用范围:固体样品的微观形貌、结构，样品的微区元素成份及线分布、面分布，广泛应用于纳米技术、材料、物理、生物、化学、热能、地球科学、环境、光电子等领域。
☆粉末、微粒样品形态的测定；☆金属、陶瓷、矿物、水泥、半导体、纸张、塑料、食品、农作物、细胞等材料的显微形貌分析;☆界面特性的研究；☆材料中元素定性分析、定量分析、线分析、面分析;☆材料及电子器件失效分析。
来样须知:☆样品中不得含有铁(Fｅ）、钴（Ｃｏ)、镍（Ni）;☆样品不得具有磁性，并且不易被磁化；☆样品中不得含有水分;☆样品粉末状为宜,形状不规则样品需加工表面整洁，厚度小于0。
5ｃm；☆多孔类或易潮解的样品,请提前真空干燥处理；☆样品应具有导电性，若样品不导电，需要进行镀金导电膜的处理.检测项目：☆表面形貌观察；☆微区元素分析;可以检测的元素范围B5~Ｕ9２。
可以检测微区元素的线分布、面分布.提供ＥDS数据分析处理。
（二)激光粒度分析仪（ＰＣＳ）送样须知应用范围:☆测量纳米颗粒的粒径，同时给出粒径的分布；☆应用于纳米材料、生物分子（如蛋白质、脂质体)、化工产品、食品、农业化学品、日用化学品、制药等领域.来样须知:☆样品应该为澄清溶液，溶液中无肉眼可见的絮状物或漂浮物;☆样品浓度不低于0.1ｍg/ml,不高于4０%固含量;☆样品量大于5ｍＬ；☆被测颗粒形状应尽可能接近球形，且尽可能是单分散样品(即样品中的颗粒尺寸单一）。
☆请提供被测颗粒的折射率，分散介质的折射率和粘度数据。
检测项目：☆纳米颗粒粒径。
（三)X射线荧光光谱仪(XＲF）送样须知应用范围：☆样品可以是固体、粉末、熔融片，液体;☆适用于炼钢、有色金属、水泥、陶瓷、石油、玻璃等行业样品。
来样须知:☆样品有足够的代表性;☆试样在X射线照射及真空条件下应该稳定、不变形、不引起化学变化;☆固体:试样均匀,表面平整、光洁、无裂纹,无污染；尺寸要求（mm）大小：１０×10～45×4５；厚度：金属陶瓷1～2０、塑料等有机质基体 5～2０.☆粉末:ａ）压片法:样品均匀、粒度＞2０0 目,样品量＞5g，样品需干燥处理，压片成形性较好；ｂ）熔片法：样品均匀、粒度＞2０0 目，样品量＞2g,硫化物、金属单质样品需特殊注明.☆定量分析须用户自备标样。
扫描电镜和红外送样须知
尊敬的用户/ 客户：为了提高本中心仪器的使用效率、保证检测质量，并向您提供满意的服务，请您在送样之前仔细阅读以下各仪器对送检样品的要求。
同时，为了实验室工作人员的健康和仪器的安全，请您在送样时，对有毒性、腐蚀性、刺激性、易燃、易爆、放射性、磁性等对人员和仪器有害的样品（包括溶剂和分散介质），务必向本中心工作人员说明，并在送样单上注明。
谢谢您的合作！北京工业大学环境与能源工程学院基础化学实验中心2010 年6月28 日各仪器对送检样品的要求1. 红外光谱仪：为了保护仪器和保证样品红外谱图的质量，送本仪器分析的样品，必须做到：（1）样品必须预先纯化，以保证有足够的纯度；（2）样品须预先除水干燥，避免损坏仪器，同时避免水峰对样品谱图的干扰；（3）易潮解的样品，请用户自备干燥器放置；（4）对易挥发、升华、对热不稳定的样品，请用带密封盖或塞子的容器盛装并盖紧，同时必须在样品分析任务单上注明；（5）对于有毒性和腐蚀性的样品，用户必须用密封容器装好。
送样时必须分别在样品瓶标签的明显位置和分析任务单上注明。
2.扫描电子显微镜-X 射线能谱仪：送检样品必须为干燥固体，块状、片状、纤维状、颗粒或粉末状均可。
应有一定的化学、物理稳定性，在真空中及电子束轰击下不会挥发或变形；无磁性、放射性和腐蚀性。
对含水份较多的生物软组织样品，要求用户预先进行临界点干燥前的固定、清洗、脱水及用醋酸（异）戊酯置换等处理，最后进行临界点干燥处理。
一般情况下，样品尽量小块些( ≤ 5x5x2mm 较方便) 。
粉末样品每个需1克左右。
纳米样品一般需超声波分散，不导电或导电性太差的样品需要喷金处理。
需要喷金的同学预约时请注明。
每周一下午喷金。
电镜标本取材方法及要求
电镜标本取材方法及要求•组织和器官取材方法事先准备好所需的器械和固定液，并把它放 4 ℃冰箱内预冷备用。
如为穿刺物（肾组织、肝组织、脾组织等）、剪取物（胃镜剪取物、支气管镜剪取物、肠镜剪取物等）、手术切除物（肿瘤组织以及实验动物脏器等），均应在离体后迅速用生理盐水冲洗后或直接投入预冷的 2.5% 戊二醛固定液（保质期为 1 个月）内，并把它放 4 ℃冰箱内保存，一般要求在两分钟内完成。
在处理手术切除物时，应事先准备好两把锋利的刀片（如剃须刀或手术刀）和蜡板，把固定液滴在蜡板上，再把切下来的脏器用手术刀切成小块，放在蜡板上的固定液中，接着用双刀片拉锯法（具体做法请向我室工作人员咨询）在固定液中将组织切成约 1 立方毫米大小或横切面约 1 平方毫米的长条形，然后用牙签或镊子（轻轻夹住，禁止挤压）把组织移入装有固定液的小瓶内，用医用胶布封好并做好标记。
如为肺组织，应在固定液中充分震荡，使其完全沉到瓶底为止。
•游离细胞取材法组织培养和游离细胞（如血细胞、脱落细胞以及细菌病毒等），常悬浮分散在介质中，首先必须将其凝集成团，然后进行固定，具体做法如下：1 、血浆凝集法：将抗凝全血离心分层（2000 转/ 每分钟，10 ～20 分钟），用毛细吸管沿着管壁轻轻的将上清夜吸取（不要破坏白细胞层），接着用吸管吸取固定液，并沿着管壁将 2.5% 戊二醛固定液慢慢地加入进行固定，然后把它放在 4 ℃冰箱内保存。
2 、血浆（血清）混合法：如为细菌、病毒、脱落细胞、培养细胞则先将它们制成悬液放置于离心管内（最好是玻璃的），离心成团（3000 转/ 分钟，10 分钟），去上清液后加入 2.5% 戊二醛固定10 分钟左右，再弃去多余的固定液，然后和少量抗凝血浆或血清混合均匀，离心成团，去上清夜，用吸管吸取 2.5% 戊二醛固定液沿着离心管壁缓慢滴入，尽量避免团块分散，静置于 4 ℃冰箱内固定备用。
3 、琼脂预包埋法：有些游离细胞离心后容易散开，可用此法处理。
透射电镜样品取材、运输基本要求
透射电镜生物样品取材基本要求1.取材准备1）试剂所需2.5%戊二醛、0.1M PH7.35的磷酸盐缓冲液，注明配制日期及启用日期，置于4摄氏度冰箱预冷（2.5%戊二醛预冷至少1小时以上；磷酸盐缓冲液不宜长时间预冷，容易结晶）。
2）仪器与器材锋利刀片（手术刀片或飞鹰双面刀片）、镊子、低温操作台、1.5mlEP 管、培养皿（或者硬纸卡，盛戊二醛用）、注射器（植物组织用）、冷冻离心机（细菌、细胞、藻类等需要离心的样品使用）2.取材要求1）快取材动作要迅速，材料离体后1min钟内必须进入戊二醛固定液，使组织、细胞尽可能保持原来生活状态，解剖器械要用锋利的刀片（新的手术刀片或飞鹰双面刀片）划切，避免牵拉或挤压，尽量减少取材中的机械损伤。
（动物处死后5min内完成此步骤，时间越短越好！）2）准取材要准确①器官要准确；②部位要准确：如观察肾脏肾小球或脑神经元需取皮质而不要取髓质，观察胰岛尽量取胰尾。
③胃肠道、皮肤、角膜、视网膜、耳蜗、骨骼肌等要注意方向性（横切或纵切），取材成条状（0.5mm×1mm×3mm），确保要观察的部位在较长的切面上。
3）冷取材过程应在0~4摄氏度的操作台上操作（或者是冰上操作，但要注意切勿使组织直接接触或贴近冰面，需要以操作面板隔离，以免操作时间过长而造成组织结冰出现冰晶损伤），所有器械、容器、2.5%戊二醛、PBS需4℃预冷足够长的时间。
4）小不定位组织大小为1mm×1mm×1mm（尽可能小，可以更小为0.5mm×0.5mm×1mm，越薄越好），如肝、肺、脾等不需要看特定结构的非定位器官组织；定位组织如神经、骨骼肌、肾、脑、肠、血管、胰岛等组织取材大小为0.5mm×1mm×3mm的长条状（越薄越好）。
生物器官组织取材1.浸入固定麻醉（1%戊巴比妥钠铵5ml/kg体重腹腔注射）或断头急性处死，解剖出所需器官，用解剖刀（锋利刀片）取一小块组织，立即（越快越好，1~3min完成此操作）放入盛有预冷2.5%戊二醛的培养皿（或硬纸片上）中，随后立即沿小块组织边缘（已经被固定）用锋利刀片取1mm×1mm×1mm或0.5mm×1mm×3mm大小组织置于盛有预冷2.5%戊二醛1.5mlEP管中继续固定，4℃保存（请勿靠近冰箱边上造成标本冷冻结冰！！！）。
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常规电镜测试须知
1.请在实验前一周内到电镜室取样品固定所需固定液
2. 2.5%戊二醛4℃避光保存，2周内有效
3. 2.5%戊二醛固定后标本4℃保存2月内有效
4.*戊二醛请避免超时使用
5.请按照要求取材、固定，做好样品标签
6.送样品时须按照200元人民币/例样品缴齐押金，样品测试结束、交齐测试费后，退回押金；
1)每例透射样品只随机切一张含有若干标本切片的200目铜网，如需要增加切
片数量，按100元/张切片、染色。
2)扫描电镜如仅需要喷镀，则制样费按100元/例收取
3)透射样品如在制样周期外要求制样，可选择自行处理或250元/例加急处理
4)取材不符合要求，电镜室拒收；如因取材、固定问题导致无满意结果，请自
行负责。
5)！！超出预约时间30min未到电镜室，按照100元/小时收取费用。
6)！！固定液：透射电镜工作液500μl/例，超出按10元/ml收费。
7)！！每学期寒暑假前1个月停止制样。
8)有疑问请联系工作人员电话：62789057，内线：89057
收费标准
1指在电镜下观察标本、拍照
2CCD数码照片
3透射电镜制样的全套！指由已固定样品到观察前所有步骤
4指由已固定样品到树脂块
5指a提供树脂块切片，b要求切片数量超出一张范围时
a指在电镜下观察标本、拍照
c扫描电镜制样的全套指由已固定样品到观察前所有步骤
d指由已固定样品到干燥
e指干燥的不需处理样品单纯喷镀
*校外人员开具税务发票，需另加6%的税点。
测试结束后，带电镜室缴款通知到学校办公楼一楼财务室缴费，自带记账凭证或税务发票到电镜室，退回押金。
扫描电镜用于表面观察，结果图示扫描电镜1生物材料表面生长细胞
扫描电镜2肾小球结构
透射电镜用于观察细胞内部结构，结果图示
透射电镜 1肝糖原聚集
透射电镜 2 培养细胞
常规透射电镜送样须知-培养细胞
请按要求取材
1)细胞数：106或25ml培养瓶达到生长面积的80%，贴壁细胞使用细胞刮刮下
细胞或消化液消化细胞；
2)使用4℃的PBS(0.2M pH7.4)或生理盐水对细胞进行离心漂洗2-3次。
离心速
度800rpm 5min/次；
3)使用1500μl EP（Eppendorf）管将漂洗好的细胞在1500~2000 rpm离心10min
成肉眼可见的约0.5-1mm高细胞团块，切勿超出1.5mm，见下图所示；
4)将3）中贴壁加入500μl4℃2.5% 戊二醛，避免震荡；于4℃冰箱静置3
天，送电镜室。
如未送检，自行吸出戊二醛，加PBS继续于4℃冰箱静置。
5)注意：送检样品请使用小标签纸做标签，如例所示标签不得覆盖EP管，用中性
笔注明姓名和样品编号；严禁使用记号笔以免被洗脱
标签位置包括姓名编号
张三1
500μl 2.5%戊二醛
0.5—1mm高细胞沉淀
*本方法包括所有游离细胞，如悬浮培养的细菌，精子，血细胞等
常规透射电镜送样须知-动物组织
请按要求取材
1)取材大小：
心肌、肝、脾、肺、肾、脑组织等：取0.5~1mm3小块2-3块
平滑肌、骨骼肌、神经、血管、皮肤、消化道等定向标本：取1×1×2mm3或0.5×0.5×1mm3的长条形标本2-3条（见图1示）；标本尽量去掉多余成分，例如要皮肤的真皮层，须去掉角质层和脂肪，反之亦然.
2)取材方法：动物麻醉后，先剪下一块尽量小的组织，在预置4℃ 2.5%戊二醛
的塑料板上使用手术刀或双面刀片切成1）中的长条、如果组织厚度≤1mm，直接切成0.5~1×1~2mm的长条（见图2示），投入盛有4℃ 2.5% 戊二醛的EP管中继续4℃固定4~24h后送电镜室。
如未送检，用PBS替换戊二醛，继续于4℃冰箱静置。
3)取材要求：
除去标本的大小及方向要求外，必须注意以下要求
①取内脏组织的动物能灌注固定最好，脑及神经等尽量灌注固定；
②取材速度要快，尽量在3min内完成；
③所用刀剪须锋利，避免对标本拉锯、挤压；
④戊二醛固定剂保持低温；
⑤标本取材位置一定要准确，如做肾小球需要取到皮质以确保标本有小球。
⑥容器：使用1500μl EP管；500μl 4℃戊二醛；标本一定要浸没于固定液
4)注意：送检样品请使用小标签纸做标签，如例所示标签不得覆盖EP管，用中性
笔注明姓名和样品编号；严禁使用记号笔以免被洗脱。
图 2取材方法
图 3取材方法
标签位置包括姓名编号张三1
500μl 2.5%戊二醛
2-3块测试标本
图 4送检样品标注
常规扫描电镜送样须知-培养细胞
1．悬浮细胞：
悬浮培养的细胞、细菌，血细胞，精子，等
细胞使用4℃的PBS 或生理盐水或无血清培养基离心漂洗后，用少量2.5%戊二醛固定液吹悬，滴加在小铝皿中。
小铝皿可预先放置在青霉素小瓶中4℃静止沉降3-5天，在小盘周围加入PBS或生理盐水，防止干燥。
小铝皿由电镜室提供，使用前用100%丙酮或乙醇清洗，晾干
青霉素瓶
2.5%戊二醛细胞
悬液
小铝皿
*青霉素瓶尽量选择平底的，瓶盖需要盖好，液体防止挥发。
2．贴壁培养细胞：
在培养皿中预先加入盖玻片，使细胞贴附于盖玻片上；低温的PBS（最好）或无血清培养基漂洗后，放置在青霉素小瓶中4℃固定3-5天，注意防止干燥。
2.5%戊二醛浸没
盖玻片盖玻片
*青霉素瓶尽量选择平底的，瓶盖需要盖好，液体防止挥发。
注意：送检样品请使用小标签纸做标签，如例所示标签不得覆盖EP管，用中性笔注明姓名和样品编号；严禁使用记号笔以免被洗脱。
常规扫描电镜送样须知-组织
1组织取材
1)样品观察表面可达8~10mm2，高度小于5mm左右；
2)样品表面在固定前必须清洁；使用低温的生理盐水或PBS冲洗掉表面的灰
尘，不应有的蛋白、粘液等。
明确标本的观察面。
消化道、血管等管腔内表面，尤其要注意清洗。
3)2.5%戊二醛4℃固定8小时以上。
2生物材料
如果观察材料上培养细胞等，需要预先测试材料成分对丙酮和乙酸异戊酯的耐受性，并在送样时说明，方便样品制备。
取材方法同（2）
*如不需生物处理及固定，请说明。
*样品使用青霉素小瓶装载。
固定液均使用2.5%戊二醛。
注意：送检样品请使用小标签纸做标签，如例所示标签不得覆盖EP管，用中性笔注明姓名和样品编号；严禁使用记号笔以免被洗脱。
*青霉素瓶尽量选择平底的，瓶盖需要盖好，液体防止挥发。
*固定液需要浸没标本
扫描电镜 Hitach S-3000N
透射电镜型号 Hitach 7500 CCD型号SIS Megaview Ⅲ。