电镜测试标本送样须知

常规电镜测试须知
1.请在实验前一周内到电镜室取样品固定所需固定液
2. 2.5%戊二醛4℃避光保存，2周内有效
3. 2.5%戊二醛固定后标本4℃保存2月内有效
4.*戊二醛请避免超时使用
5.请按照要求取材、固定，做好样品标签
6.送样品时须按照200元人民币/例样品缴齐押金，样品测试结束、交齐测试费后，退回押金；
1)每例透射样品只随机切一张含有若干标本切片的200目铜网，如需要增加切
片数量，按100元/张切片、染色。

2)扫描电镜如仅需要喷镀，则制样费按100元/例收取
3)透射样品如在制样周期外要求制样，可选择自行处理或250元/例加急处理
4)取材不符合要求，电镜室拒收；如因取材、固定问题导致无满意结果，请自
行负责。

5)！！超出预约时间30min未到电镜室，按照100元/小时收取费用。

6)！！固定液：透射电镜工作液500μl/例，超出按10元/ml收费。

7)！！每学期寒暑假前1个月停止制样。

8)有疑问请联系工作人员电话：62789057，内线：89057
收费标准
1指在电镜下观察标本、拍照
2CCD数码照片
3透射电镜制样的全套！指由已固定样品到观察前所有步骤
4指由已固定样品到树脂块
5指a提供树脂块切片，b要求切片数量超出一张范围时
a指在电镜下观察标本、拍照
c扫描电镜制样的全套指由已固定样品到观察前所有步骤
d指由已固定样品到干燥
e指干燥的不需处理样品单纯喷镀
*校外人员开具税务发票，需另加6%的税点。

测试结束后，带电镜室缴款通知到学校办公楼一楼财务室缴费，自带记账凭证或税务发票到电镜室，退回押金。

扫描电镜用于表面观察，结果图示扫描电镜1生物材料表面生长细胞
扫描电镜2肾小球结构
透射电镜用于观察细胞内部结构，结果图示
透射电镜 1肝糖原聚集
透射电镜 2 培养细胞
常规透射电镜送样须知-培养细胞
请按要求取材
1)细胞数：106或25ml培养瓶达到生长面积的80%，贴壁细胞使用细胞刮刮下
细胞或消化液消化细胞；
2)使用4℃的PBS(0.2M pH7.4)或生理盐水对细胞进行离心漂洗2-3次。

离心速
度800rpm 5min/次；
3)使用1500μl EP（Eppendorf）管将漂洗好的细胞在1500~2000 rpm离心10min
成肉眼可见的约0.5-1mm高细胞团块，切勿超出1.5mm，见下图所示；
4)将3）中贴壁加入500μl4℃2.5% 戊二醛，避免震荡；于4℃冰箱静置3
天，送电镜室。

如未送检，自行吸出戊二醛，加PBS继续于4℃冰箱静置。

5)注意：送检样品请使用小标签纸做标签，如例所示标签不得覆盖EP管，用中性
笔注明姓名和样品编号；严禁使用记号笔以免被洗脱
标签位置包括姓名编号
张三1
500μl 2.5%戊二醛
0.5—1mm高细胞沉淀
*本方法包括所有游离细胞，如悬浮培养的细菌，精子，血细胞等
常规透射电镜送样须知-动物组织
请按要求取材
1)取材大小：
心肌、肝、脾、肺、肾、脑组织等：取0.5~1mm3小块2-3块
平滑肌、骨骼肌、神经、血管、皮肤、消化道等定向标本：取1×1×2mm3或0.5×0.5×1mm3的长条形标本2-3条（见图1示）；标本尽量去掉多余成分，例如要皮肤的真皮层，须去掉角质层和脂肪，反之亦然.
2)取材方法：动物麻醉后，先剪下一块尽量小的组织，在预置4℃ 2.5%戊二醛
的塑料板上使用手术刀或双面刀片切成1）中的长条、如果组织厚度≤1mm，直接切成0.5~1×1~2mm的长条（见图2示），投入盛有4℃ 2.5% 戊二醛的EP管中继续4℃固定4~24h后送电镜室。

如未送检，用PBS替换戊二醛，继续于4℃冰箱静置。

3)取材要求：
除去标本的大小及方向要求外，必须注意以下要求
①取内脏组织的动物能灌注固定最好，脑及神经等尽量灌注固定；
②取材速度要快，尽量在3min内完成；
③所用刀剪须锋利，避免对标本拉锯、挤压；
④戊二醛固定剂保持低温；
⑤标本取材位置一定要准确，如做肾小球需要取到皮质以确保标本有小球。

⑥容器：使用1500μl EP管；500μl 4℃戊二醛；标本一定要浸没于固定液
4)注意：送检样品请使用小标签纸做标签，如例所示标签不得覆盖EP管，用中性
笔注明姓名和样品编号；严禁使用记号笔以免被洗脱。

图 2取材方法
图 3取材方法
标签位置包括姓名编号张三1
500μl 2.5%戊二醛
2-3块测试标本
图 4送检样品标注
常规扫描电镜送样须知-培养细胞
1．悬浮细胞：
悬浮培养的细胞、细菌，血细胞，精子，等
细胞使用4℃的PBS 或生理盐水或无血清培养基离心漂洗后，用少量2.5%戊二醛固定液吹悬，滴加在小铝皿中。

小铝皿可预先放置在青霉素小瓶中4℃静止沉降3-5天，在小盘周围加入PBS或生理盐水，防止干燥。

小铝皿由电镜室提供，使用前用100%丙酮或乙醇清洗，晾干
青霉素瓶
2.5%戊二醛细胞
悬液
小铝皿
*青霉素瓶尽量选择平底的，瓶盖需要盖好，液体防止挥发。

2．贴壁培养细胞：
在培养皿中预先加入盖玻片，使细胞贴附于盖玻片上；低温的PBS（最好）或无血清培养基漂洗后，放置在青霉素小瓶中4℃固定3-5天，注意防止干燥。

2.5%戊二醛浸没
盖玻片盖玻片
*青霉素瓶尽量选择平底的，瓶盖需要盖好，液体防止挥发。

注意：送检样品请使用小标签纸做标签，如例所示标签不得覆盖EP管，用中性笔注明姓名和样品编号；严禁使用记号笔以免被洗脱。

常规扫描电镜送样须知-组织
1组织取材
1)样品观察表面可达8~10mm2，高度小于5mm左右；
2)样品表面在固定前必须清洁；使用低温的生理盐水或PBS冲洗掉表面的灰
尘，不应有的蛋白、粘液等。

明确标本的观察面。

消化道、血管等管腔内表面，尤其要注意清洗。

3)2.5%戊二醛4℃固定8小时以上。

2生物材料
如果观察材料上培养细胞等，需要预先测试材料成分对丙酮和乙酸异戊酯的耐受性，并在送样时说明，方便样品制备。

取材方法同（2）
*如不需生物处理及固定，请说明。

*样品使用青霉素小瓶装载。

固定液均使用2.5%戊二醛。

注意：送检样品请使用小标签纸做标签，如例所示标签不得覆盖EP管，用中性笔注明姓名和样品编号；严禁使用记号笔以免被洗脱。

*青霉素瓶尽量选择平底的，瓶盖需要盖好，液体防止挥发。

*固定液需要浸没标本
扫描电镜 Hitach S-3000N
透射电镜型号 Hitach 7500 CCD型号SIS Megaview Ⅲ。