2014-05 扫描电镜操作注意事项
场发射扫描电子显微镜安全操作及保养规程
场发射扫描电子显微镜安全操作及保养规程电子显微镜是一种高精度的仪器，操作时需要遵循一定的安全规程和保养措施，以确保仪器的正常运行和使用者的安全。
下面是电子显微镜的安全操作和保养规程，供参考。
一、电子显微镜的安全操作规程：1.进入实验室前，要穿戴好实验室专用工作服，并佩戴好相应的防护用品，如手套、眼镜和口罩等。
2.在操作电子显微镜之前，应先了解设备的基本知识，熟悉仪器的使用方法和操作步骤。
3.在使用电子显微镜之前，要确保仪器的电源已经关闭，并检查仪器的相关连接线是否牢固。
4.在进行样品准备时，应使用专用工具进行操作，避免直接用手触摸样品和仪器部件。
5.在开机之前，应确认好样品装载台、真空系统和冷凝系统等设备是否运行正常。
6.在启动电子显微镜之前，要确保室内的温度和湿度适宜，尽量避免环境中的尘埃和静电干扰。
7.在启动电子显微镜后，应根据实际需要进行相关参数的调整，如电子束强度、放大倍数和对比度等。
8.在放大和观察样品时，要注意不要过度放大或观察过长时间，以免对样品和仪器造成损坏。
9.在操作电子显微镜时，要保持室内环境的安静和稳定，避免不必要的震动和干扰。
10.在关闭电子显微镜之前，要先将相关参数调整到初始位置，然后将电源关闭，并检查仪器是否有异常情况。
二、电子显微镜的保养规程：1.每天使用电子显微镜之前，要先清理设备外部的尘埃和杂物，并定期清洁仪器的内部部件，如样品台和镜筒等。
2.定期检查电子显微镜的电源线和电源插头是否有损坏或老化现象，并及时更换或维修。
3.定期检查仪器的真空系统和冷凝系统，保持其正常运行状态，如有异常情况，应及时修理或更换相关部件。
4.定期检查仪器的操作系统、数据存储系统和软件程序等，确保其正常运转和更新。
5.定期校准电子显微镜的各项参数和功能，以确保仪器的精度和准确性。
6.在仪器长时间不使用时，要将其储存在干燥、清洁和稳定的环境中，以免仪器受潮、腐蚀或受损。
7.在操作电子显微镜时，要避免使用尖锐或硬物品接触样品、仪器内部或镜筒，以免划伤或损坏仪器。
扫描电镜操作注意事项
扫描电镜操作注意事项
操作扫描电镜时需要注意以下几点：
1. 安全操作：戴上安全镜、手套和实验室服。
确保操作过程中没有任何危险物质泄漏或飞溅。
2. 仪器准备：确保仪器处于适当的状态。
检查电子束的对准情况，确保电镜的真空度符合要求。
3. 样品制备：样品制备对于扫描电镜至关重要。
样品必须表面平整、洁净，并且尽量避免气泡、杂质或其他可能干扰扫描电镜成像的情况。
通常需要使用特殊的样品制备技术，如金属溅射、冷冻干燥等。
4. 样品安装：将样品小心地安装在样品台上，确保样品在电镜扫描过程中固定不动，同时避免不必要的振动。
5. 电镜参数设置：根据实际需要，设置合适的电子束加速电压、放大倍数、对比度等参数。
根据样品性质，选择合适的扫描模式（如透射电镜、反射电镜等）和扫描速度。
6. 电磁干扰：保持实验环境的电磁干扰最小化。
尽量避免其他电器设备在扫描电镜附近操作，以减少电磁干扰对成像质量的影响。
7. 操作规范：遵循操作手册的操作步骤，并进行必要的校准和调试。
在操作中要小心移动任何操作部件，以防止意外损坏。
8. 操作结束：操作完成后，关闭电镜并清理工作区。
彻底清洁和保存样品，确保下次使用时样品的完整性。
以上是扫描电镜操作时需要注意的一些事项，操作时应严格按照操作手册和实验室操作规程进行操作。
如果对操作程序不熟悉或者遇到困难，应及时寻求相关专业人员的帮助和指导。
扫描电镜操作手册
扫描电镜操作手册扫描电镜操作手册一、目的本操作手册旨在为使用扫描电镜（Scanning Electron Microscope，简称SEM）的用户提供操作步骤和指南，以确保仪器的正确使用和延长其使用寿命。
二、操作步骤1、准备样品：根据SEM的要求，准备需要观察的样品。
确保样品具有足够的稳定性和导电性。
2、打开仪器：按顺序打开SEM的电源开关，并确保仪器稳定运行。
3、选择工作模式：根据样品的特性选择适当的工作模式（如高分辨率、低分辨率等）。
4、调整工作参数：根据需要，手动设置电子束加速电压、扫描速率、扫描分辨率等参数。
5、安装样品：将样品固定在样品台上，确保其稳定不动。
6、聚焦和校准：通过操作台面上的按钮或软件界面，调整电子束的聚焦位置和校准参数，确保图像的清晰度和准确性。
7、观察和记录：启动扫描过程，观察样品的微观结构，并使用计算机软件记录观察到的图像。
8、调整和优化：根据需要，对扫描参数进行调整和优化，以获得更好的图像质量。
9、关闭仪器：在完成观察后，按顺序关闭SEM的电源开关，并确保仪器完全停止运行。
三、注意事项1、在操作SEM之前，请务必阅读并了解仪器的操作手册和安全规范。
2、确保SEM的工作环境干燥、清洁，并避免强磁场、振动的干扰。
3、在安装和移动样品时，请避免与仪器碰撞，以免损坏设备。
4、在操作过程中，请勿将身体任何部位置于仪器内部，以防意外伤害。
5、若遇到任何操作问题，请及时联系专业人员进行处理。
四、维护与保养为了保持SEM的性能和延长其使用寿命，建议定期进行以下维护与保养工作：1、清洁真空系统：定期清洗或更换真空系统的组件，以确保仪器在高真空状态下运行。
2、检查电子枪：定期检查电子枪及其组件，确保其正常工作。
如需要，请更换老化的组件。
3、校准和调整：定期进行仪器的校准和调整，以保证图像的准确性和清晰度。
4、更换消耗品：根据需要，更换老化的真空泵油、过滤器等消耗品。
5、软件更新：定期更新SEM的软件系统，以确保其兼容性和稳定性。
扫描电子显微镜的操作步骤和注意事项
扫描电子显微镜的操作步骤和注意事项扫描电子显微镜的操作步骤与注意事项一、样品制备将分散好的样品滴于铜片上，干燥后将载有样品的铜片粘在样品座上的导电胶带上（对于大颗粒样品可直接将样品粘在导电胶带上）。
对于导电性不好的样品必须蒸镀导电层，通常为蒸金：将样品座置于蒸金室中，合上盖子，打开通气阀门，对蒸金室进行抽真空。
选择好适当的蒸金时间，达到真空度定好时间后加电压并开始计时，保持电流值，时间到后关闭电压，关闭仪器。
取出样品。
（注意：打开蒸金室前必须先关闭通气阀门，以防液体倒流。
）二、扫描电镜的操作1.安装样品1) 按“Vent”直至灯闪，对样品交换室放氮气，直至灯亮；2) 松开样品交换室锁扣，打开样品交换室，取下原有的样品台，将已固定好样品的样品台，放到送样杆末端的卡抓内（注意：样品高度不能超过样品台高度，并且样品台下面的螺丝不能超过样品台下部凹槽的平面）；3) 关闭样品交换室门，扣好锁扣；4) 按“EVAC”按钮，开始抽真空，“EVAC”闪烁，待真空达到一定程度，“EVAC”点亮；5) 将送样杆放下至水平，向前轻推至送样杆完全进入样品室，无法再推动为止，确认“Hold”灯点亮，将送样杆向后轻轻拉回直至末端台阶露出导板外将送样杆竖起卡好。
（注意：推拉送样杆时用力必须沿送样杆轴线方向，以防损坏送样杆）2.试样的观察（注意：软件控制面板上的背散射按钮千万不能点，以防损坏仪器）1) 观察样品室的真空“PVG”值，当真空达到9.0×10-5Pa时，打开“Maintenance”，加高压5kv，软件上扫描的发射电流为10μA，工作距离“WD”为8mm，扫描模式为“Lei”（注意：为减少干扰，有磁性样品时，工作距离一般为15mm左右）；2) 操作键盘上按“Low Mag”、“Quick View”，将放大倍率调至最低，点击“Stage Map”，对样品进行标记，按顺序对样品进行观察；3) 取消“Low Mag”，看图像是否清楚，不清楚则调节聚焦旋钮，直至图像清楚，再旋转放大倍率旋钮，聚焦图像，直至图像清楚，再放大……，直到放大到所需要的图；4) 聚焦到图像的边界一致，如果边界清晰，说明图像已选好，如果边界模糊，调节操作键盘上的“X、Y”两个消像散旋钮，直至图像边界清晰，如果图像太亮或太暗，可以调节对比度和亮度，旋钮分别为“Contrast”和“Brightness”，也可以按“ACB”按钮，自动调整图像的亮度和对比度；5) 按“Fine View”键，进行慢扫描，同时按“Freeze”键，锁定扫描图像；6) 扫描完图像后，打开软件上的“Save”窗口，按“Save”键，填好图像名称，选择图像保存格式，然后确定，保存图像；7) 按“Freeze”解除锁定后，继续进行样品下一个部位或者下一个样品的观察。
扫描电子显微镜的操作步骤和注意事项-心得教学提纲
扫描电子显微镜的操作步骤和注意事项-心得扫描电子显微镜的操作步骤与注意事项一、样品制备将分散好的样品滴于铜片上，干燥后将载有样品的铜片粘在样品座上的导电胶带上（对于大颗粒样品可直接将样品粘在导电胶带上）。
对于导电性不好的样品必须蒸镀导电层，通常为蒸金：将样品座置于蒸金室中，合上盖子，打开通气阀门，对蒸金室进行抽真空。
选择好适当的蒸金时间，达到真空度定好时间后加电压并开始计时，保持电流值，时间到后关闭电压，关闭仪器。
取出样品。
（注意：打开蒸金室前必须先关闭通气阀门，以防液体倒流。
）二、扫描电镜的操作1.安装样品1) 按“Vent”直至灯闪，对样品交换室放氮气，直至灯亮；2) 松开样品交换室锁扣，打开样品交换室，取下原有的样品台，将已固定好样品的样品台，放到送样杆末端的卡抓内（注意：样品高度不能超过样品台高度，并且样品台下面的螺丝不能超过样品台下部凹槽的平面）；3) 关闭样品交换室门，扣好锁扣；4) 按“EVAC”按钮，开始抽真空，“EVAC”闪烁，待真空达到一定程度，“EVAC”点亮；5) 将送样杆放下至水平，向前轻推至送样杆完全进入样品室，无法再推动为止，确认“Hold”灯点亮，将送样杆向后轻轻拉回直至末端台阶露出导板外将送样杆竖起卡好。
（注意：推拉送样杆时用力必须沿送样杆轴线方向，以防损坏送样杆）2.试样的观察（注意：软件控制面板上的背散射按钮千万不能点，以防损坏仪器）1) 观察样品室的真空“PVG”值，当真空达到9.0×10-5Pa时，打开“Maintenance”，加高压5kv，软件上扫描的发射电流为10μA，工作距离“WD”为8mm，扫描模式为“Lei”（注意：为减少干扰，有磁性样品时，工作距离一般为15mm左右）；2) 操作键盘上按“Low Mag”、“Quick View”，将放大倍率调至最低，点击“Stage Map”，对样品进行标记，按顺序对样品进行观察；3) 取消“Low Mag”，看图像是否清楚，不清楚则调节聚焦旋钮，直至图像清楚，再旋转放大倍率旋钮，聚焦图像，直至图像清楚，再放大……，直到放大到所需要的图；4) 聚焦到图像的边界一致，如果边界清晰，说明图像已选好，如果边界模糊，调节操作键盘上的“X、Y”两个消像散旋钮，直至图像边界清晰，如果图像太亮或太暗，可以调节对比度和亮度，旋钮分别为“Contrast”和“Brightness”，也可以按“ACB”按钮，自动调整图像的亮度和对比度；5) 按“Fine View”键，进行慢扫描，同时按“Freeze”键，锁定扫描图像；6) 扫描完图像后，打开软件上的“Save”窗口，按“Save”键，填好图像名称，选择图像保存格式，然后确定，保存图像；7) 按“Freeze”解除锁定后，继续进行样品下一个部位或者下一个样品的观察。
台式扫描电镜操作规程
台式扫描电镜操作规程引言：台式扫描电镜(SEM)是一种常用的显微镜仪器，广泛应用于材料科学、生物科学、纳米科学等领域。
为了确保SEM的正常运行和保证操作人员的安全，制定一套操作规程是非常必要的。
本文将详细介绍SEM的操作规程，包括准备工作、开机和关机操作、常规操作和安全注意事项等内容。
一、准备工作：1.操作人员需穿戴好个人防护装备，包括实验室服、手套、护目镜等。
2.检查SEM设备是否处于正常工作状态，包括电源、冷阱和真空恢复系统等。
3.准备好所需的样本，确保样本符合SEM的要求。
同时，确保样本干燥、清洁，尽量避免灰尘和污物。
二、开机操作：1.打开SEM控制软件，并登录系统。
2.打开SEM设备的电源，确保系统电源稳定。
3.打开真空恢复系统开关，等待真空稳定。
4.打开冷阱开关，确保冷阱工作正常。
5.进行电子束的对准操作，确保电子束的准直性。
三、常规操作：1.在样品台上固定好样本，并通过样品台调节电子束焦点和位置。
2.设置所需的加速电压、探针电流、显微放大倍数等参数。
3.检查SEM图像，并进行必要的图像调整和优化。
4.对样本进行显微观察，记录所需的显微图像。
5.在操作过程中，若需要更换样品或对设备进行其他操作，应先将电子束关闭，避免辐射伤害。
四、关机操作：1.保存操作数据，并关闭SEM控制软件。
2.将电子束调节至合适位置，并关闭加速电压。
3.关闭冷阱和真空恢复系统，并等待真空泄压完成。
4.关闭SEM设备的电源，并断开电源线。
五、安全注意事项：1.操作人员需严格遵守实验室安全规程，确保自身安全。
2.在操作过程中，注意保持SEM设备的稳定和平衡，避免碰撞或摔落。
3.使用SEM时，应注意防止静电产生和电磁干扰，以避免对设备造成损坏。
4.操作结束后，应集中处理样品残留物，并清理工作区域。
5.定期对SEM设备进行维护和保养，确保其正常运行并延长使用寿命。
6.严禁未经授权人员操作SEM设备，以免造成不必要的损坏和安全事故。
扫描电镜操作注意事项PPT
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5．重复步骤3。 6. 2%单宁酸过滤后洗2次，每次30min。 7．重复步骤3。 8. 梯度乙醇脱水（50 75 90 100）%×2次，
每 次30min，也可在75或90%乙醇中过夜。 9. 醋酸异戊酯置换乙醇40min。
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10. 六甲基二硅胺烷原液（HMDS）5-10min替 代临界点干燥，放青霉素瓶中抽真空后密 封。
2. 根据不同样品，采用不同的干燥方法，防止 因干燥时间过长，压力过大造成样品过度收缩 和断裂。样品厚而贴不牢不平，造成喷镀不均， 样品边缘空白，发亮而出现充电现象和边缘效 应。图像漂移。为此可降低电压（1-5 KV）减 少充电和边缘效应。
3. 用单宁酸的目的为提高二次电子发射率，耐
受电子轰击，防止样品断裂。
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4. 样品脱水干燥贴牢后，需放置玻璃密封真空（加干 燥剂）干燥器皿内。样品喷镀后，最好当天观察， 照相,如看不完，还需放干燥器中密封真空保存，防 灰尘潮气进入。最好勿超过3个月。
5. 因条件有限，无临界点干燥仪，我们采用六甲基二 胺烷（HMDS）代替临界点干燥仪，优点是快速经 济，不受仪器限制，看普通标本，组织细胞支架材 料，与常规临界点干燥处理效果基本一致；看精细 材料（ECM）的分辨率还是有差距。
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扫描电镜的优点
景深长，视野广，图像呈三维立体结构，样 品制作较透射电子显微镜简单，功能多，根 据样品性质不同，其处理方法也有所区别， 下面主要介绍组织工程支架、细胞、细胞外 基质等样品的制作技术。
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一. 样品制作处理步聚
取样→清洗→第一次固定（戊二醛）→第二 次固定（锇酸）→缓冲液中漂洗→梯度脱水 →醋酸戊酯置换→临界点干燥（改成六甲基 二硅胺烷HMDS代替临界点干燥）→表面喷 镀→扫描电镜中观察。根椐我们的具体情况 加以改进。
扫描电子显微镜的操作步骤与技巧
扫描电子显微镜的操作步骤与技巧扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种非常重要的科学研究工具，广泛应用于材料科学、生物学、医学等领域。
通过使用扫描电子显微镜，我们可以观察和研究微小的物体结构和形貌。
然而，要正确操作该设备并获得高质量的显微图像，并不是一件简单的事情。
在本文中，我们将讨论扫描电子显微镜的基本操作步骤和一些技巧。
首先，确保准备工作的完整。
操作扫描电子显微镜之前，应确保待观察样品已经被充分准备。
这包括样品的固定和处理，以确保其表面平整和干燥。
如果样品表面不平整或存在水分，则可能会导致扫描电子显微镜的成像效果不佳。
因此，在开始操作之前，应仔细检查样品的处理程度以及其是否符合操作要求。
其次，正确设置和校准设备。
扫描电子显微镜有许多参数和控制选项，而正确设置和校准这些参数至关重要。
首先，我们需要选择适当的加速电压和电流，以确保样品能够正常激发和产生电子束。
其次，在显微镜的对准方面，我们要关注电子束和样品之间的距离以及投射角度。
调整这些参数可以最大程度地提高成像质量。
除了基本的操作步骤之外，还有一些技巧可以帮助我们获得更好的成像效果。
首先，要避免电子束损伤。
当样品处于高于正常加速电压的情况下，电子束可能引起样品的电离和热损伤。
因此，我们应尽量选择低电压和电流，并在操作过程中控制好作用时间，以避免这种损伤。
其次，要注意电子束的扫描速度。
快速扫描速度可能会导致成像模糊，而过慢的扫描速度可能会导致成像时间变长。
合理调节扫描速度可以获得清晰且高效的显微图像。
此外，掌握样品准备技巧也是操作扫描电子显微镜的重要一环。
在扫描电子显微镜中，样品的导电性对成像起着至关重要的作用。
对于不导电的样品，需要涂覆一层导电剂，以提供导电性。
而对于易挥发性的样品，则需要低温固定和冷冻来保持其形态。
掌握这些样品处理技巧可以更好地应对不同的样品类型，并获得高质量的显微图像。
最后，及时的设备维护和保养也是操作扫描电子显微镜的关键。
SEM操作手册
扫描电镜基本操作步骤和注意事项一、基本操作步骤：1. 块状样品尺寸不宜过大（形状不规则的样品应咨询管理老师如何测试，不能想当然），用铜导电胶；粉末样品，则需碳导电胶带，用牙签制样，尽可能少量，并用洗耳球吹掉粘结不牢的粉末样品；做好样品后，把导电胶带等放入抽屉，并收拾好桌面。
2. 测样品时需换鞋，请同学们注意保持实验室卫生。
实验完毕后将拖鞋放回鞋架。
3. 观察屏幕右下角“Status”栏里的参数是否正常，尤其是Emission Current值是否正常。
测试前应在SEM记录本上记录IGP1、IGP2和Emission Current的值。
每次实验要在实验记录本上记录：时间，样品名称，数量，测试人姓名，仪器是否正常。
4. 未测试前系统处于“Pump”状态（黄色），按“Vent”键往样品室充高纯氮气（变黄色），约2分钟后“Vent”键变灰色可以轻轻缓慢的拉开样品室的门（如果打不开门，马上联系管理人员）。
5. 将附有样品的铝台，用洗耳球吹洗干净，并放入。
放臵样品时切忌对着样品室说话，并且样品室的门不能开着太久，以保证样品室的清洁。
（正常的操作：右手握住带有样品的镊子，左手轻轻拉开门，马上把样品放臵在支架（Holder）上，并立刻用左手“轻推”，右手扶住门正上端边缘的中间部位，双手配合，以防止门和电镜系统接触时过大的撞击，一直到门和电镜完全接触）6. 放好样品后，轻轻将样品室门推入保证接触，将右手指放在门上接触边缘缝隙处，左手点击“Pump”，当右手指感觉到门缝渐渐变紧时说明泵抽气正常。
鼠标左键选中左上窗口，按住鼠标中间滚轮往上拉，样品台会上升，视样品具体情况，控制样品台和极靴之间的距离（Work Distance, WD），Work Distance不能小于6mm。
等待操作界面右下角“Chamber Presure”真空优于8*10-3 Pa时，设臵好高压和Spot的加上高压。
值，方可点击“High Voltage”钮去掉窗口锁定，点击方框钮，选定一个合适7. 鼠标左键选择一个成像窗口，点击“||”大小的区域聚焦和消像散。
扫描电镜的使用流程解
扫描电镜的使用流程解析1. 简介扫描电镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种利用电子束来扫描样品表面并对电子束与样品间的相互作用进行分析的仪器。
它能提供高分辨率的表面图像，并对样品的形貌和组织结构进行详细研究。
本文将介绍扫描电镜的使用流程，帮助用户了解如何正确操作扫描电镜。
2. 准备工作在使用扫描电镜之前，需要进行以下准备工作：•清洁工作台和样品架，确保无尘。
•检查电镜是否处于正常工作状态，例如电源是否连接、真空泵是否正常工作等。
•准备好待观察的样品，并确保其表面干净、平整。
3. 样品装载使用扫描电镜之前，需要将待观察的样品进行装载。
以下是样品装载的具体步骤：1.将待观察的样品放置在样品架上。
2.将样品架插入扫描电镜的样品台中。
3.确保样品架与样品台连接牢固，以避免在扫描过程中发生移动或倾斜。
注意：在进行样品装载时，要避免直接用手接触待观察的样品，以防留下指纹或污染样品表面。
4. 真空操作在样品装载完成后，需要进行真空操作，以确保扫描电镜内部处于高真空状态。
以下是真空操作的步骤：1.打开真空泵，启动真空泵工作。
2.等待一段时间，直到真空泵将电镜内部抽成高真空状态。
3.监测真空度，确保真空度达到所需的工作要求。
注意：在真空操作期间，避免在电镜周围产生灰尘或其他粉尘，以免影响观察结果。
5. 参数设置在进行实际观察之前，需要设置扫描电镜的参数。
以下是常用的参数设置：•加速电压：根据样品性质和观察要求设置合适的加速电压。
•探针电流：根据样品性质和观察要求设置合适的探针电流。
•焦距：根据样品距离和观察要求设置合适的焦距。
•扫描速度：根据样品的细节和观察要求设置合适的扫描速度。
6. 图像观察设置参数完成后，即可进行实际的图像观察。
以下是图像观察的步骤：1.通过调节焦距和放大倍数，找到合适的观察尺寸和焦距。
2.调节扫描速度和图像对比度，以获得清晰的图像。
3.使用不同的检测方式（如二次电子检测和反射电子检测），观察样品的不同表面形貌。
扫描电镜使用技巧
扫描电镜使用技巧
扫描电镜是一种高分辨率的显微镜，被广泛用于表面形态、颗粒大小及其分布等的观测。
下面是一些扫描电镜使用的技巧：
1. 样品的制备：
在观察前，需要对样品进行制备以提高扫描电镜观察的质量。
首先，样品应该尽量纯净，避免杂质的干扰。
其次，样品需要被固定在导电性的基底上，以便进行导电镀膜。
一种常用的导电基底是碳薄膜。
最后，样品需要被干燥，以免过高的水分干扰电子束的透射。
2. 系统的准备：
在使用扫描电镜之前，需要先对仪器进行一些准备工作。
首先，检查仪器的真空度是否达到要求，以确保电子束的稳定性和样品表面的清晰度。
其次，根据样品的要求，选择合适的加速电压和放大倍数。
最后，确保电子束的聚焦和对准，以获得更好的图像质量。
3. 观察的技巧：
在进行观察时，需要注意一些技巧以获得更好的图像。
首先，选择一个合适的工作距离，以获得所需的放大倍数和深度。
其次，调整电子束的亮度和对比度，以获得清晰的图像。
最后，在观察过程中尽量减少样品的移动，以避免图像模糊。
4. 数据的分析：
扫描电镜观察得到的图像通常是黑白的，可以通过图像处理软件进行颜色增强和对比度调整。
此外，如果需要精确的测试样
品的尺寸和形态，可以使用扫描电镜配套的测量工具进行测量。
总结起来，扫描电镜使用的技巧包括样品制备、系统准备、观察技巧和数据分析。
通过正确地操作和调整仪器，并注意一些细节和技巧，可以获得高质量的扫描电镜图像，从而更好地观察和分析样品的微观结构和形态。
扫描电镜操作注意事项
猪ECM胶原 ECM胶原
犬神经胶原
脐带ECM胶原 脐带ECM胶原
背根神经节基质
F. 常规脱水临界点干燥处理后的样品和六甲 基=硅胺烷（HMDS）处理的比较 硅胺烷（HMDS）处理的比较
常规处理
HMDS处理 HMDS处理
三． 注意事项和要求
1. 取材大小适宜，准确定位，首先洗去赘生物 后立即固定，防组织细胞的结构自溶或变形。 污染物造成图像表面出现絮状物，轮廓不清。 2. 根据不同样品，采用不同的干燥方法，防止 因干燥时间过长，压力过大造成样品过度收缩 和断裂。样品厚而贴不牢不平，造成喷镀不均， 样品边缘空白，发亮而出现充电现象和边缘效 应。图像漂移。为此可降低电压（1-5 KV）减 应。图像漂移。为此可降低电压（1 KV）减 少充电和边缘效应。 3. 用单宁酸的目的为提高二次电子发射率，耐 受电子轰击，防止玻璃器皿需泡酸、蒸溜水清冼后灭菌备用。 2）磷酸缓冲液（PBS-0.1M PH-7.4）配制：磷 ）磷酸缓冲液（PBSPH-7.4）配制：磷 酸二氢钠2.964g 磷酸氢二钠29.011g加三蒸水 酸二氢钠2.964g , 磷酸氢二钠29.011g加三蒸水 1000ml，也可用不加酚红无菌Dhankes液代替。 1000ml，也可用不加酚红无菌Dhankes液代替。 3）固定液的配制：用PBS缓冲液配成2.5%戍 ）固定液的配制：用PBS缓冲液配成2.5%戍 二醛和1%的四氧化锇。 二醛和1%的四氧化锇。
4. 样品脱水干燥贴牢后，需放置玻璃密封真空（加干 燥剂）干燥器皿内。样品喷镀后，最好当天观察， 照相, 照相,如看不完，还需放干燥器中密封真空保存，防 灰尘潮气进入。最好勿超过3 灰尘潮气进入。最好勿超过3个月。 5. 因条件有限，无临界点干燥仪，我们采用六甲基二 胺烷（HMDS）代替临界点干燥仪，优点是快速经 胺烷（HMDS）代替临界点干燥仪，优点是快速经 济，不受仪器限制，看普通标本，组织细胞支架材 料，与常规临界点干燥处理效果基本一致；看精细 材料（ECM）的分辨率还是有差距。 材料（ECM）的分辨率还是有差距。 6. 胶原纤维样品梯度脱水前的漂洗液我们采用无菌的 三蒸水洗2 三蒸水洗2次，防止盐结晶沉积在样品表面，影响 与超微纳米胶原的混淆。
国检检测扫描电镜操作规程
国检检测电子扫描显微镜操作规程一．启动系统1、开启设备总电源开关2、启动主机后面板上的电镜电源开关MAIN ELB。
3、在主机前面板上的EV AC真空控制面板上将钥匙转动到START位置，然后放手，系统开启。
4、等待计算机进入操作界面，按确定键启动软件。
二、安装样品1、在控制面板上按AIR按钮，系统开始放气。
2、等到放气结束电脑显示可更换样品时，带上清洁手套，测量安装在样品托上的整个样品的高度，然后打开样品室，将安装有样品的样品托放入样品室。
3、关上样品室，按EV AC键1～2秒，设备开始抽真空，约两分钟后可开始观察样品。
三、样品扫描1、待控制面板显示抽真空结束时，按操作软件左上角的ON按钮，开始加载加速电压。
2、加速电压加载完毕后，可开始扫描操作。
四、更换样品1、按操作软件左上角的OFF按钮，开始卸载加速电压。
2、按HOME键，将样品调整至最初位置。
3、按AIR键按1～2秒，样品室开始放气，待放气完毕即可开始更换样品。
五、关闭设备1、关闭设备前，要保持样品室是真空状态。
2、直接点击操作软件右上角的关闭键，关闭软件。
3、关闭电脑4、将前控制面板上的钥匙旋转至OFF位置。
5、关闭主机后面板上的电镜电源开关MAIN ELB。
6、关闭设备总电源开关六、注意事项1、样品在放入样品室之前必须要干燥、清洁。
2、更换样品须带上清洁手套，不允许用赤裸的手握样品或样品托。
3、开关机顺序和更换样品顺序都必须按照规定步骤进行。
4、测量样品高度时，误差不得超过4mm，否则会导致镜头损坏。
七、维护保养1、一个星期对空压机进行排水，以保证空压机的性能。
2、一个星期检查压力计、压力开关和安全阀一次。
3、一个月对螺栓、螺钉、螺母的进行拧紧一次。
扫描电镜安全操作规程
扫描电镜安全操作规程扫描电镜安全操作规程一、设备安全操作环境要求：环境温度：17℃—24℃相对湿度： < 80%场地磁场：同步：<3x10-7T异步：<1x10-7T振动：对于主动式电磁减振： <10um/s 低于30HZ<20um/s 高于30HZ噪声：小于60dBC海拔：低于3000m二、设备硬件主要由UPS 、氮气瓶、真空泵、电镜主机部分组成1. 电镜用电安全：a) 只有工程师才能对电镜的主电源，UPS 电源线和UPS 开关进行维修操作。
b) 用户负责熟悉设备保养和安装。
电镜工作所需要的高电压是有危险性的。
2. 电镜使用UPS 时：a) 开机：首先确认市电是否正常，电池开关处于闭合状态。
按面板上的开关键（3—5秒）后放开，待UPS 内部自检完毕开机。
换样品时卸至标准气压UPS 供电电镜主机供电电脑开启真空泵开启氮气瓶更换样品换好样品后抽真空软件控制真空状态b)关机：首先确认电源负载设备断掉。
按面板上的开关键（3—5秒），此时UPS处于旁路状态。
依次关闭蓄电池组开关及市电开关。
3.电镜使用氮气时：a)使用时不可将钢瓶内的气体全部用完，一定要保留0.05MPa以上的残留压力。
b)使用时要把钢瓶牢牢固定，以免摇动或翻到。
c)开关气门阀要慢慢地操作，切不可过急地或强行用力把它拧开，防止压力过大造成损伤。
4.电镜使用nXDS10i完全无油干式涡旋泵时：a)注意防止液体侵入；b)注意防止灰尘堆积；c)注意环境不当的温度波动。
5.电镜样品室开关操作：a)样品室内标准气压时可以直接开启；b)样品室内真空状态需要先开启氮气瓶准备通入氮气，在软件内选择卸压，设备允许时进行开仓操作。
扫描电镜操作规程
扫描电子显微镜操作规程1. 打开墙上配电箱里的空气开关（见标签上开下关）2. 打开变压器电源（正常电压应为100v）3. 打开主机电源：钥匙拧到START位置，停两秒松手，钥匙回到I位置。
4. 打开电脑电源5. 点击桌面图标，等待6. 当HT图标显示蓝色后，点VENT排气（排气时vent闪，排完气vent不闪），排完气方可打开样品室7. 正确选择Z轴高度（需要估计样品高度，Z轴大于样品高度放入样品，关闭样品台，点击EV AC抽气，抽气时推着样品室门，听到机械泵响声后松手8. 打开HT图标（此图标在非真空下是灰色，真空位蓝色，打开灯丝拍照为绿色）9. 选择扫描模式、加速电压（0.5-30KV之间选择，一般微生物类样品选10左右）、WD工作距离（10-15之间选择）、SS电子束斑（一般选30-40）10. 在SCAN2下调焦、调整对比度及亮度、调消象散（放大时照片晃动、或者样品变形、或者整体移动可点WOBBLE（一般10000倍左右调节有效果）调节光缆使照片不晃动）11. 高倍下调清晰度，低倍下拍照，拍照选择photo(曝光40秒)或者SCAN4（曝光80秒），拍完选择FREEZE并保存照片12. 拍完照后关闭灯丝，点VENT排气（排气时vent闪，排完气vent不闪），排完气方可打开样品室，取出样品台；关闭样品台，点击EV AC抽气，抽气时推着样品室门，听到机械泵响声后松手13. 依次关闭软件、电脑、主机电源、变压器、空开注意事项1.注意Z轴的距离要足够高不要让样品碰到探头2.慢慢调节光缆，防止调节过快看不到被观察物3.取、放前一定要卸真空，再抽真空4.关机的时候，要在真空状态下关机5.拍完照后要及时关闭灯丝6.请不要使用UBS接口，要拷贝数据请使用一次性光盘，光盘插入直接复制数据即可7.实验前后都要填写仪器使用登记表，实验完成后填写仪器使用记录；8.正确操作仪器，使用过程中如发现仪器出现异常情况，应及时与实验室管理人员联系；9.要求用托盘盛放药品，避免药品直接放在实验台上，实验结束及时清洁实验台，带走所有实验试剂及样品；10.仪器使用人员有义务打扫实验室卫生；11.仪器使用人员有义务和责任负责实验室内实验仪器的安全；12.仪器使用人员有义务和责任负责实验室内水、电安全。
扫描电镜操作指南及注意事项
扫描电镜操作指南及注意事项
扫描电镜操作指南及注意事项
1、开机：打开循环水泵，开启主机DISPLAY。
刷卡上机，
进入系统后，打开电镜软件。
2、上样：按AIR，拔开进样仓，将样品台插在样品杆上，
旋转锁定。
再关闭进样仓，按EVAC抽真空，等到“嘀”
声响后，按OPEN，等到“嘀”声响后，将样品杆推到底，旋转放开，拔出样品杆，然后按CLOSE，关闭舱门。
3、观察：首先每天第一次使用需要进行FLASH操作，然后
调整电压，再低倍下找到样品，转换到高倍进行观察，选取好放大倍数和位置后，进行合轴校准。
调整焦距，再调整像散。
最后切换到慢扫模式进行拍照。
4、下样：归中样品，改为低倍，关闭电压。
然后按照上样
的反向进行下样。
5、关机：刷卡下机，将样品仓抽真空。
然后按顺序关闭软
件、关闭电脑，关闭DISPLAY，关闭循环水泵。
负责人：许碧超。
原位扫描电镜安全操作及保养规程
原位扫描电镜安全操作及保养规程原位扫描电镜（In-situ Scanning Electron Microscope，ISEM）是一种可以在动态范围内研究材料微结构变化的高分辨率显微镜。
在进行原位扫描电镜实验时，为了保证实验的有效性和安全性，应该按照一定的规程进行操作和保养。
安全操作规程1.在进行原位扫描电镜实验之前，应该先学习基本的电子显微镜操作基础知识，并通过相应的测试验收。
2.在操作原位扫描电镜之前，请先确认设备整体的安全性以及所有的电路状态和电源设备工作是否正常。
3.在操作电子枪时，请注意防止束流直接照射到显微镜屏幕上，以免对显示屏造成不可逆的损伤。
并且电子束也会带来一定的辐射，应注意防护。
4.注意操作环境的洁净度和干燥程度。
请勿将湿度过高、灰尘过多的样品放入电子显微镜中。
应该在样品表面进行清理，并在样品入室前对其进行封装保护。
5.严格按照安全规定进行样品表面清理的预处理，注意不要使用化学药品来清理样品表面，在保持表面光洁度的同时还应防止药品刺激产生的电子气体污染设备。
6.在操作过程中，请勿将任何带电的物品或液体放置在电子显微镜附近和样品表面，以免造成电磁干扰和放电。
7.在使用不同的检测器时，请注意对其进行正确的接线，并根据不同的检测器类型进行各自的标定操作。
8.注意操作设备时，保持室内的温度和湿度的稳定和正确性，避免因环境变化而影响电子显微镜的调整。
9.设备的使用须有足够的通风量，确保放置的设备不会过热，以免产生气味甚至引发火灾等事故。
10.在进行显微镜样品移动时，请务必保持手套的清洁，防止样品表面受到污染和磨损。
设备保养规程1.在使用电子显微镜后，请先关闭真空泵、电源，然后将显微镜上黑色防护罩相应的合上。
2.定期检查镜头和警戒线，确保电子显微镜每一个器件都没有意外损伤，以免造成无法修复的损失。
3.定期清洗样品台、样品夹、电子枪和显微镜屏幕。
在清洁样品之前，首先应该对其进行空气透过性的清洗，然后再开始对其表面进行清洁，以保护装置的成像效果。
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高分辨率成像时参数设定
1. EHT 高电压，电子束波长短，分辨率高，但同时电子束样品作用体积大，空间分辨率降低。
2. Probe current 小束流，小光阑，束斑小，分辨率高 3. 探测器选择 HV使用SE，低真空使用VPSE+BSD，环境真空使用EPSE+BSD
4. 工作距离（WD) SE2：7-10mm
扫描电镜操作注意事项
龙胜 应用技术专员
Confidential confidential
Contents
1
电镜室的环境要求
2
3 4
扫描电镜试样制备
扫描电镜操作技巧 安全注意事项
Confidential
Contents
1
电镜室的环境要求
2
3 4
扫描电镜试样制备
扫描电镜操作技巧 安全注意事项
Confidential
Confidential
不同电压下分辨率对比
1KV 100K
10KV 100K
Confidential
不同电压下的表面形貌像对比
• 低电压条件下表面细节清晰 • 高电压下电子束穿透深度大，表面细节被掩盖
10KV
2KV
20KV
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元素分析
1.大光阑，保证足够多的计数率，以提高精度与节约时间 2.选择最佳工作距离 3.对于需要元素面分布的样品，需要样品尽量平整
样品台
平台 特殊形状
预倾角
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样品台支架
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块状样品，表面形貌观测
1. 固定 2. 导电处理
Confidential
粉末状样品
1. 尺寸小于100纳米 • 少量粉末置于分散液中（酒精） • 超声分散 • 取液滴滴在光滑平面上（铝箔）
2. 尺寸大于1微米 • 将样品散在导电胶带或导电浆上 • 用压缩气体或洗耳球将未固定牢的粉末吹走
Confidential
截面样品
1. 切割 2. 镶嵌 3. 打磨抛光
4. 清洗
5. 固定
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导电浆液/胶带
Confidential
镀导电膜
对膜材料的要求：导电性好，二次电子产额高，晶粒小，分布均匀 常用的膜材料：Au, Au/Pd, Pt, Cr, C, etc. 厚度：通常 2-20 nm 镀膜厚，导电性好，但是会造成对原始形貌的遮盖，形成假象
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Carl Zeiss, N.N., Division Date tbd. 26
Thanks
Confidential
电镜室环境
1. 杂散磁场，噪音，震动要求 高倍图像时看不到明显干扰，如图像细条纹，抖动等 2. 温nfidential
震动干扰下的图像
Confidential
Contents
1
电镜室的环境要求
2
3 4
扫描电镜试样制备
扫描电镜操作技巧 安全注意事项
Confidential
Confidential
样品台撞到极靴或探测器
1. 控制样品最高点与物镜极靴距离，如过小：
潜在危险：撞极靴或探测器
2. 控制样品台倾斜角度，如过大： 潜在危险：撞极靴或探测器 3. 样品高低起伏过大 潜在危险：小工作距离观测样品凹陷处时，样品突出部分可能撞到极靴 尽量在CCD观察模式下移动样品台高度或倾斜样品，实时观察样品与极靴或探测器的距离
电 镜
能 谱 最优工作距离
试样
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背散射成分衬度像
1. 大光阑，保证足够多的背散射电子发射 一般使用30μm或者更大的光阑
2. EHT：设定在较高值, 如10KV
3. 探测器信号收集程度设定：level选择为high
4. 工作距离：7-10mm
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不同电压下背散射电子成像衬度对比
电压越大，信号越丰富，成分衬度越明显
2KV
10KV
20KV
Confidential
不同工作距离下背散射电子成像衬度对比
EHT: 20KV WD: 11.9mm
EHT: 20KV WD: 7.0mm
Confidential
Contents
1
电镜室的环境要求
2
3 4
扫描电镜试样制备
扫描电镜操作技巧 安全注意事项
Confidential
样品仓进样
制样以及放样品过程中带手 套，防止样品台污染。
Confidential
Contents
1
电镜室的环境要求
2
3 4
扫描电镜试样制备
扫描电镜操作技巧 安全注意事项
Confidential
扫描电镜拍照步骤
1. 聚焦 2. 消像散
3. 电子束对中：wobble 调整
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