实验一_苯酚的高效液相色谱法

实验一高效液相色谱法-紫外法测定水中的苯酚含量

一、实验目的

1、熟悉高效液相色谱仪的结构

2、掌握苯酚的高效液相色谱-紫外测定法

3、熟练掌握高效液相色谱仪的操作

二、实验原理

苯酚是最简单的酚，为无色固体，有特殊气味，显酸性。苯酚是有机化工工业的基本原料，可通过多种途径对环境水体造成污染，对人类、鱼类以及农作物带来严重危害。根据国家环保部门有关规定，工作场所苯酚的最高允许质量浓度为5 ×10 - 6 μg/ L，饮用水中为2μg/ L，地面水中为0.1 mg/ L。苯酚的测量方法有多种，如溴化容量法、比色法、高效液相色谱法等。但前两种方法分析速度较慢、精度较低，高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新技术，具有分析速度快、检测灵敏度高、操作简便、样品用量少等特点。

三、仪器和试剂

1、设备及试剂

安捷伦高效液相色谱仪1100，紫外检测器，C18色谱柱。

苯酚(分析纯) ，甲醇(色谱纯)，二次蒸馏水。

2、操作条件

色谱柱为C18柱；流动相为甲醇/ 二次蒸馏水= 80∶20 (体积比)；检测波长为270nm；流速为1.0 ml/ min；进样量为20μL。

四、实验步骤

1、标准曲线的制备

称取纯苯酚600 mg 于100.0 ml 容量瓶中，用适量甲醇溶解，用甲醇稀释至刻度。分别吸取该溶液(单位:ml) 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 于50 ml 的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。得到标准系列溶液。分别采用高效液相色谱-紫外法测定标准溶液，记录色谱峰面积，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

2、样品分析

将水样经过滤(0.45 um 滤膜) 处理后，测定其峰面积值，根据标准曲线进行定量。

五、实验数据

1 标准曲线的绘制

2 样品分析数据

六、数据处理

仪器和试剂1、仪器：⑴岛津（SHIMADZU）LC-20A液相色谱仪：①流动相：乙腈、MQ水（由铝箔纸包裹，防止其中产生藻类，堵塞进口）②高压输液泵：并联式微体积柱塞往复泵（Prominence LIQUID CHROMATOGRAPH）型号：LC-20AD 厂家：UFLC SHIMADZU ③色谱柱：固定相填充物：十八碳（C18）型号：Intertsil ODS-SP 参数：填充物粒径：5 μm 内径×长度：4.6×250 mm ④检测器：二极管阵列检测器（PDA）型号：SPD-M20A 电压：230V 厂家：SHIMADZU ⑤脱气装置：型号：DQO-20A5 ⑥进样装置：高压六通进样阀两个状态： Load：样品进入六通阀，未入色谱柱 Inject：位于六通阀的样品进入色谱柱种类：SIL-10A 、SIL-10Ai 、SIL-10ADVP

⑦淋洗液（洗针、洗阀）：甲醇⑵移液管 2 mL、5 mL各一支⑶具塞离心管

10 mL三支、1.5 mL一次性离心管一支 2. 试剂：甲醇（色谱纯）；苯酚标准使用溶液（10 mg/L）待测水样

四、实验步骤 1 标准系列配制取苯酚标准使用液0.50、1.00、2.00 mL于10 mL 的具塞离心管中，用甲醇定容至 5 mL，混匀。待测。 2 样品的制备取水样约1 mL于1.5 mL一次性离心管中。待测。 3 色谱参数色谱柱：C18 柱；流动相：乙腈、水；梯度洗脱程序：

洗脱时间 0:00 4:00 4:01 5:00 5:01 8:00 乙腈（%） 65 65 75 75 65 65 流速：1.0 mL/min；柱温：室温；进样量：20 μL；检测器：二极管阵列检测器，检测波长280 nm

测定测定标准系列，再测定样品。根据标准系列中苯酚的保留时间，定性确定样品中的目标物。记录标准系列和样品中目标物的峰面积。

五、数据记录与计算（1）标准系列c=4mg/mL的谱图及样品的谱图：样品谱图（图2）中，三个明显高的峰的记录数据如下表