《兽医免疫学》实验课件：实验九(1)疑似病例的诊断—综合

材料
1、鸡胚 10日龄 2、病毒（或病料） 3、照蛋灯 4、打孔器 5、注射器 6、石蜡 7、蛋座 8、酒精棉球、碘酊棉球
鸡胚的结构与功能
➢卵壳 ➢壳膜
➢气室 ➢绒毛尿囊膜 ➢尿囊腔
内含有尿囊液
受精卵的选择
➢最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 ➢受精卵的壳最好是白色的 ➢受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。
孵育
➢孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃ ➢相对湿度：50%-60% ➢必须保证具有充分的新鲜空气流通，特别是在
孵化5-6天以后 ➢每天翻卵一次。
检卵（照蛋）
➢未受精卵：只见模糊的卵黄卵影，不见血管和 鸡胚痕迹
➢活 胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡 胚还可见到胚动。
➢死 胚：血管昏暗模糊，没有胚动。
接种前处理
➢用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室和胚 胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。
➢对鸡胚进行消毒。
接种途径
1、绒毛尿囊膜接种 2、尿囊腔接种 3、卵黄囊接种 4、眼球接种 5、羊膜腔接种 正粘病毒和副粘病毒 6、脑内接种 狂犬病毒 7、静脉接种 蓝舌病毒
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
主要用尿于囊正腔粘接V和种副粘V
如流感V、新城疫V的分离和增殖。 1、选用10-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位 2、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒 3、用钢锥穿一小孔 4、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入0.2ml接种 物 5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并检卵 一次，24h内死亡者废弃。 6、24－72小时内死亡或存活的鸡胚用于收毒
实验九 疑似病例的实验室诊断
现有一疑似新城疫病毒和（或）禽流感病毒感染的病 鸡，请你用实验室检测技术对其进行确诊。
疑似病例的实验室诊断
一、鸡胚接种
病毒培养的宿主系统：
✓ 本动物 ✓ 实验动物：家兔、小白鼠、大白鼠、豚鼠、鸡胚 ✓ 体外培养的器官、组织细胞
鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，病毒 易于增殖，可选择不同的日龄和接种途径，感 染病毒的组织和液体中含大量病毒。
三、实验设计B
根据所给材料设计诊断禽流感病毒与新城 疫病毒的实验方法并利用该方法对疑似病 例进行实验室诊断。
实验材料： 新城疫病毒的阳性抗体 禽流感病毒的阳性抗体、 1%鸡红细胞 血凝板
作业
完成实验设计A 完成实验设计B，并利用该方法对疑似病
例进行检测分析。
收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱1小时以上，冻 死胚胎，防止收毒时出血。
二、实验设计A
设计检测禽流感病毒（AIV）的ELISA检 测方法及实验步骤
实验材料： 酶标板、 鸡抗AIV- NP蛋白抗体、兔抗AIV抗 体、酶标记羊抗兔IgG（ IgG-HRP ）、AIV、 健康鸡组织浸出液、被检材料、PBS缓冲液、 封闭液、包被液、洗涤液、底物液、终止液。