Trizol说明书

Trizol说明书

产品简介：

本公司生产的Trizol试剂适用于从细胞或组织中分离总RNA，结果产量高、完整性好、纯度高，省时、省力。提取的总RNA可用于cDNA合成、RT-PCR、Northern Blot、Dot blot、Primer Extension、Poly A RNA筛选、体外翻译或其他基因工程用途。

该试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提

（mRNA 的RNA琼脂糖凝胶电泳时，可见许多介于7kb和15kb之间不连续的高分子量条带，

和hnRNA成分）两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S)，28S与18S

电泳条带亮度比值约为2：1，低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。

TRizol试剂保存于4℃可达12个月。

下图从K562细胞总提取的总RNA电泳效果图

下表从组织和细胞中提取的总RNA量

组织或细胞（mg、1×106 ）总RNA产量（ug）

肝、脾8~20

肾3~5

骨骼肌、脑组织1~5

胎盘1~5

上皮细胞8~20

纤维母细胞5~20

试剂盒组成

产品编号131904 131905 保存条件

Trizol 50ml 100ml 4℃

说明书 1 份

操作者提供及注意事项

1、新的氯仿、异丙醇、70%酒精（0.1% DEPC-H2O配制）、4℃离心机（速度约12000rpm）

2、1.5ml离心管，1ml、200ul、20ul的吸头，需经过0.1% DEPC-H2O 37℃处理过夜，高压消毒烤干待用；研磨器用水洗干净后，需要180℃高温干烤3小时。

3、在抽提RNA过程中任一环节的不正确操作都可能导致RNA酶的污染。由于RNA 酶的活性很难完全抑制，预防其污染十分必要。全程佩戴一次性手套、口罩。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。

4、请勿接触皮肤或不慎吞服，会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求正确的治疗方案。

操作步骤

1、根据样品的类型，在室温（冰浴更佳）下，选择下面合适的处理方法，样品的体积请勿超过加入Trizol的10%，否则会引起裂解不充分，导致DNA污染RNA。

（1）组织匀浆或研磨

用匀浆器匀浆组织样品，每50~100mg组织加1ml Trizol。如果裂解物中，未研碎的组织过多，12000rpm离心3分钟，再取上清继续操作后续步骤。

（2）单层生长的贴壁细胞

吸掉培养基，用无菌的PBS液或Hank’s液轻轻冲洗后，弃掉上清，直接往培养瓶或培养板中加入1ml Trizol，用移液器或滴管吹打均匀。根据培养板的面积决定所需的Trizol的量，每10cm2加1ml Trizol。

（3）悬浮生长的细胞

离心收集细胞，弃掉培养基；用无菌的1×PBS液或Hank’s液洗涤一次，离心后弃掉上清，加入1ml Trizol，用移液器吹打均匀。

2、将裂解的样品在室温下孵育5分钟，使核蛋白体完全分离。

3、1 ml Trizol 加0.2ml氯仿，盖紧样品管盖，用力摇晃15秒，室温孵育2~3分钟。

4、4℃，12000rpm离心10分钟，可见上层为无色透明液体，中间为一层薄薄的蛋白，下层为粉色液体。

5、小心吸取上层无色透明液体到一个新的1.5ml离心管，加入0.5ml异丙醇，轻轻上下颠倒混匀，室温孵育10分钟。

6、4℃，12000rpm离心10分钟，可见一白色沉淀，即为RNA，弃掉上清。

7、加入1ml 75%酒精，轻轻上下颠倒混匀，4℃，9000rpm离心5分钟，弃掉上清。

8、室温干燥5~10分钟，加入30~100ul 的0.1% DEPC-H2O，用移液器吹打均匀，-70℃保存。因RNA保存后，极容易降解，为了给后续实验带来不必要的麻烦，建议立即进行后续实验。

常见问题分析

1、抽提得率低

（1）样品匀化或裂解不完全。减少样品的量或增加Trizol的量。

（2）样品量太少。增加样品量。

2、A260/A280 比值<1.65

（1）样品匀浆化时所加的Trizol量太少。增加Trizol量。

（2）加入Trizol后样品没有在室温下放置5分钟。增加此步骤。

（3）吸取上层无色透明液体时，吸到了下层有机相。小心吸取，勿吸下层有机相。

（4）自己配置的DEPC-H2O不合格。可选用我公司的RNase-Free H2O。

3、RNA降解

（1）从动物取下的组织没有立即进行抽提或冰冻保存。

（2）用于抽提的组织或RNA样品保存于-5~-20℃，而不是存放于-70℃~-80℃。

（3）细胞经胰酶过度消化。

（4）水溶液或试管污染有RNA酶。

（5）用于琼脂糖凝胶电泳的甲醛pH低于3.5。

4、DNA污染

（1）样品匀浆化时所加的Trizol量太少，裂解不完全。增加Trizol量。

（2）用于抽提的样品包含有机溶剂（例如，乙醇，DMSO），强缓冲液，或碱性溶液。温馨提示：不可用于临床治疗。