辣椒碱 辣椒精 辣椒粉 辣度HPLC检测方法

辣椒碱、辣椒精、辣椒粉、辣度HPLC检测方法

(一)辣椒碱检测

辣椒碱、二氢辣椒碱、总辣椒碱含量检测：

1、试剂和器材；

1.1乙腈色谱级或同等级；

1.2 冰醋酸,试剂级或同等级；

1.3 水,色谱级或同等级；

1.4 乙醇,95%分析纯；

1.5合成辣椒素、二氢辣椒素（进口）；

1.6高效液相色谱仪配置紫外可见检测器等。

2．液相色谱应用条件

2.1流动相: 60%水加入1%的醋酸:40%乙腈(V/V)；

2.2 流动速度1.5 ml/min；

2.3 LC-18,5微米,15厘米*4.6毫米；

2.4进样量20μl；

2.5柱温28℃；

2.6检测器在280 nm处测吸光值。

3．标样测量

3.1标准样的准备（分别用辣椒素和二氢辣椒素）

准称150mg（质量记为Mc和Md）左右标准品加入至100ml容量瓶中,用95%乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；

3.2用注射器移取标准稀释液溶液，加装过滤器注射到HPLC；

3.3分别运行并记录峰谱面积Sc和Sd。

4．样品测量

4.1样品的准备，准确称150mg（质量记为m）左右样品加入至100ml容量瓶中,用95%乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；

4.2用注射器移取标准液，加装过滤器(0.45um)注射到HPLC；

4.3运行并记录峰谱面积，按出峰前后，降二氢辣椒碱为N, 辣椒碱为C, 二氢辣椒碱为D。

5．计算

5.1辣椒碱含量=(C/Sc)*辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；

5.2二氢辣椒碱含量=(D/Sd)*二氢辣椒碱标样纯度*(Md/m)*100℅；

5.3其它辣椒碱含量,仅选取降二氢辣椒碱

其它辣椒碱含量=(N/Sc) *辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；

5.4总辣椒碱=辣椒碱含量+二氢辣椒碱含量+其它辣椒碱含量。

（二）辣椒精检测

1．试剂和器材

1.1乙腈色谱级或同等级；

1.2 冰醋酸,试剂级或同等级；

1.3 水,色谱级或同等级；

1.4 乙醇,95%分析纯；

1.5合成辣椒素、二氢辣椒素（进口）；

1.6高效液相色谱仪配置紫外可见检测器等；

1.7 丙酮,分析纯。

2．液相色谱应用条件

2.1流动相:60%水加入1%的醋酸:40%乙腈(V/V)；

2.2 流动速度1.5 ml/min；

2.3 LC-18 ,5微米,15厘米*4.6毫米；

2.4进样量20μl；

2.5柱温28℃；

2.6检测器在280 nm处测吸光值。

3．标样测量

3.1标准样的准备（分别用辣椒素和二氢辣椒素）准称150mg（质量记为Mc和Md）左右标准品加入至100ml容量瓶中,用95%乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；

3.2用注射器移取标准稀释液溶液，加装过滤器注射到HPLC；

3.3分别运行并记录峰谱面积Sc和Sd。

4．样品测量

4.1样品的准备，称样量据样品具体辣度值而定一般：10%取0.15g，1%取1.5g，以此推算。将秤取样品加入至100ml容量瓶中,先加入5mL丙酮，溶解, 再用95%

乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；

4.2用注射器移取标准液，加装过滤器(0.45um)注射到HPLC；

4.3运行并记录峰谱面积，按出峰前后，降二氢辣椒碱为N, 辣椒碱为C, 二氢辣椒碱为D。

5．计算

5.1辣椒碱含量=(C/Sc)*辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；

5.2二氢辣椒碱含量=(D/Sd)*二氢辣椒碱标样纯度*(Md/m)*100℅；

5.3降二氢辣椒碱含量=(N/Sc) *辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；

5.4总辣椒碱=(辣椒碱+二氢辣椒碱+降二氢辣椒碱)*1.03。

（三）辣椒粉辣度检测

1．试剂和器材

1.1乙腈色谱级或同等级；

1.2 冰醋酸,试剂级或同等级；

1.3 水,色谱级或同等级；

1.4 乙醇,95%分析纯；

1.5合成辣椒素、二氢辣椒素（进口）；

1.6高效液相色谱仪配置紫外可见检测器等。

1.7 丙酮,分析纯

2．液相色谱应用条件；

2.1流动相:60%水加入1%的醋酸:40%乙腈(V/V)；

2.2 流动速度1.5 ml/min；

2.3 LC-18 ,5微米,15厘米*4.6毫米；

2.4进样量20μl；

2.5柱温28℃；

2.6检测器在280 nm处测吸光值。

3．标样测量

3.1标准样的准备（分别用辣椒素和二氢辣椒素）准确到0.0001mg（质量记为Mc和Md）左右标准品加入至100ml容量瓶中,用95%乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；

3.2用注射器移取标准稀释液溶液，加装过滤器注射到HPLC；

3.3分别运行并记录峰谱面积Sc和Sd。确称15。

4．样品测量

4.1样品的准备：

辣椒粉辣度一般介于0.1-0.6之间，称取辣椒粉3-6克(为保证测量准确，称样量尽量介于此范围内)于500ml 蒸馏瓶中，加入150ml 95%乙醇，加热冷凝回流萃取2个小时。萃取完毕后，待冷却至室温后，过滤萃取液，滤渣用30ml 95%乙醇浸洗3遍,合并滤液并定容至250ml；

4.2用注射器移取样品液，加装过滤器(0.45um)注射到HPLC；

4.3运行并记录峰谱面积，按出峰前后，降二氢辣椒碱为N, 辣椒碱为C, 二氢辣椒碱为D。

5．计算

5.1辣椒碱含量=(C/Sc)*辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；

5.2二氢辣椒碱含量=(D/Sd)*二氢辣椒碱标样纯度*(Md/m)*100℅；

5.3降二氢辣椒碱含量=(N/Sc) *辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；

5.4总辣椒碱=(辣椒碱+二氢辣椒碱+降二氢辣椒碱)*1.03。