辣椒碱 辣椒精 辣椒粉 辣度HPLC检测方法

辣椒碱、辣椒精、辣椒粉、辣度HPLC检测方法
(一)辣椒碱检测
辣椒碱、二氢辣椒碱、总辣椒碱含量检测：
1、试剂和器材；
1.1乙腈色谱级或同等级；
1.2 冰醋酸,试剂级或同等级；
1.3 水,色谱级或同等级；
1.4 乙醇,95%分析纯；
1.5合成辣椒素、二氢辣椒素（进口）；
1.6高效液相色谱仪配置紫外可见检测器等。

2．液相色谱应用条件
2.1流动相: 60%水加入1%的醋酸:40%乙腈(V/V)；
2.2 流动速度1.5 ml/min；
2.3 LC-18,5微米,15厘米*4.6毫米；
2.4进样量20μl；
2.5柱温28℃；
2.6检测器在280 nm处测吸光值。

3．标样测量
3.1标准样的准备（分别用辣椒素和二氢辣椒素）
准称150mg（质量记为Mc和Md）左右标准品加入至100ml容量瓶中,用95%乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；
3.2用注射器移取标准稀释液溶液，加装过滤器注射到HPLC；
3.3分别运行并记录峰谱面积Sc和Sd。

4．样品测量
4.1样品的准备，准确称150mg（质量记为m）左右样品加入至100ml容量瓶中,用95%乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；
4.2用注射器移取标准液，加装过滤器(0.45um)注射到HPLC；
4.3运行并记录峰谱面积，按出峰前后，降二氢辣椒碱为N, 辣椒碱为C, 二氢辣椒碱为D。

5．计算
5.1辣椒碱含量=(C/Sc)*辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；
5.2二氢辣椒碱含量=(D/Sd)*二氢辣椒碱标样纯度*(Md/m)*100℅；
5.3其它辣椒碱含量,仅选取降二氢辣椒碱
其它辣椒碱含量=(N/Sc) *辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；
5.4总辣椒碱=辣椒碱含量+二氢辣椒碱含量+其它辣椒碱含量。

（二）辣椒精检测
1．试剂和器材
1.1乙腈色谱级或同等级；
1.2 冰醋酸,试剂级或同等级；
1.3 水,色谱级或同等级；
1.4 乙醇,95%分析纯；
1.5合成辣椒素、二氢辣椒素（进口）；
1.6高效液相色谱仪配置紫外可见检测器等；
1.7 丙酮,分析纯。

2．液相色谱应用条件
2.1流动相:60%水加入1%的醋酸:40%乙腈(V/V)；
2.2 流动速度1.5 ml/min；
2.3 LC-18 ,5微米,15厘米*4.6毫米；
2.4进样量20μl；
2.5柱温28℃；
2.6检测器在280 nm处测吸光值。

3．标样测量
3.1标准样的准备（分别用辣椒素和二氢辣椒素）准称150mg（质量记为Mc和Md）左右标准品加入至100ml容量瓶中,用95%乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；
3.2用注射器移取标准稀释液溶液，加装过滤器注射到HPLC；
3.3分别运行并记录峰谱面积Sc和Sd。

4．样品测量
4.1样品的准备，称样量据样品具体辣度值而定一般：10%取0.15g，1%取1.5g，以此推算。

将秤取样品加入至100ml容量瓶中,先加入5mL丙酮，溶解, 再用95%
乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；
4.2用注射器移取标准液，加装过滤器(0.45um)注射到HPLC；
4.3运行并记录峰谱面积，按出峰前后，降二氢辣椒碱为N, 辣椒碱为C, 二氢辣椒碱为D。

5．计算
5.1辣椒碱含量=(C/Sc)*辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；
5.2二氢辣椒碱含量=(D/Sd)*二氢辣椒碱标样纯度*(Md/m)*100℅；
5.3降二氢辣椒碱含量=(N/Sc) *辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；
5.4总辣椒碱=(辣椒碱+二氢辣椒碱+降二氢辣椒碱)*1.03。

（三）辣椒粉辣度检测
1．试剂和器材
1.1乙腈色谱级或同等级；
1.2 冰醋酸,试剂级或同等级；
1.3 水,色谱级或同等级；
1.4 乙醇,95%分析纯；
1.5合成辣椒素、二氢辣椒素（进口）；
1.6高效液相色谱仪配置紫外可见检测器等。

1.7 丙酮,分析纯
2．液相色谱应用条件；
2.1流动相:60%水加入1%的醋酸:40%乙腈(V/V)；
2.2 流动速度1.5 ml/min；
2.3 LC-18 ,5微米,15厘米*4.6毫米；
2.4进样量20μl；
2.5柱温28℃；
2.6检测器在280 nm处测吸光值。

3．标样测量
3.1标准样的准备（分别用辣椒素和二氢辣椒素）准确到0.0001mg（质量记为Mc和Md）左右标准品加入至100ml容量瓶中,用95%乙醇定容，摇匀，再移液稀释10倍；
3.2用注射器移取标准稀释液溶液，加装过滤器注射到HPLC；
3.3分别运行并记录峰谱面积Sc和Sd。

确称15。

4．样品测量
4.1样品的准备：
辣椒粉辣度一般介于0.1-0.6之间，称取辣椒粉3-6克(为保证测量准确，称样量尽量介于此范围内)于500ml 蒸馏瓶中，加入150ml 95%乙醇，加热冷凝回流萃取2个小时。

萃取完毕后，待冷却至室温后，过滤萃取液，滤渣用30ml 95%乙醇浸洗3遍,合并滤液并定容至250ml；
4.2用注射器移取样品液，加装过滤器(0.45um)注射到HPLC；
4.3运行并记录峰谱面积，按出峰前后，降二氢辣椒碱为N, 辣椒碱为C, 二氢辣椒碱为D。

5．计算
5.1辣椒碱含量=(C/Sc)*辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；
5.2二氢辣椒碱含量=(D/Sd)*二氢辣椒碱标样纯度*(Md/m)*100℅；
5.3降二氢辣椒碱含量=(N/Sc) *辣椒碱标样纯度*(Mc/m)*100℅；
5.4总辣椒碱=(辣椒碱+二氢辣椒碱+降二氢辣椒碱)*1.03。