最全的动物疫病实验室检测方法
(完整版)动物免疫抗体血清学检测技术
2019.5.10
内容
一、血清学检测的意义 二、血清学检测内容和方法 三、血凝和血凝抑制实验 四、酶联免疫吸附实验 五、虎红平板凝集实验（初筛）
一、血清学检测的意义
动物免疫接种已经成为目前防御疫病传播的首选措施，只有给动 物进行有效的免疫接种后，才能产生一定的保护力，从而防止疫 病的侵入和蔓延。因此在群体接种疫苗前后对抗体水平进行检测， 准确了解动物疫病发生、传播和流行情况，掌握畜禽免疫抗体水 平和动物疫病保护情况， 从而更有效地采取综合防控措施。因此， 做好动物免疫抗体检测工作有着十分重要的临床意义和经济意义。
血凝素（HA） 柱状
血凝试验（HA)原理：
血凝抑制试验：
当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或 其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。 这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制反应，也称血凝抑 制反应，利用这种特性设计的试验称血凝抑制试验 (HI) 。 该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。 目的：检测有无病毒感染和免疫状态。
注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。 加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易 导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。
ELISA的比色测定主要由酶标仪进行。此处强调以下 几点：
（1）酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，室温宜 在15－30℃，使用前先预热仪器15－30分钟，测读 结果更稳定。各种酶标仪性能不同，使用前应详细 阅读说明书。
血凝试验操作步骤
4个100%血凝单位（即4HA100） 抗原的稀释倍数=使100%红细胞凝集的抗原最高稀释倍数/4
动物疫病实验室检测规范化流程
动物疫病实验室检测规范化流程1.采样前消毒工作台，保证采样过程无污染。
Before sampling, disinfect the workbench to ensure the sampling process is not contaminated.2.佩戴防护衣、口罩、手套等个人防护用品。
Wear personal protective equipment such as protective clothing, masks, and gloves.3.用专用器具采集样本，避免污染。
Collect samples with dedicated tools to avoid contamination.4.将样本标本装入标注清晰、密封良好的容器中。
Place the sample specimens in well-labeled and tightly sealed containers.5.将样本及时送往实验室进行检测。
Promptly transport the samples to the laboratory for testing.6.在实验室中建立标本接收区和标本处理区域。
Establish a specimen reception area and specimen processing area in the laboratory.7.在标本处理区域进行标本解封、分装等操作。
Carry out operations such as specimen unsealing and subpackaging in the specimen processing area.8.使用严密的生物安全柜进行病毒和细菌的分离与培养。
Use a tight biosafety cabinet for virus and bacteria isolation and culture.9.制备所需的病毒和细菌检测试剂。
动物疫病实验室检验采样方法
动物疫病实验室检验采样方法NY/T 541—2002前言动物病料样品的采集是动物疾病诊断、流行病学调查或免疫监测所不可缺少的重要步骤，在各国的兽医学标准中都把这一部分纳入第一重要内容，广泛应用于动物疾病流行病学调查、动物检疫和科研教学。
世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英)，Office Intentional des Epizootic(法)，OIE]推荐的诊断方法中，也将该部分内容列为第一部分内容。
本标准是依据世界动物卫生组织(OIE)《诊断试验和疫苗标准手册》(2000版)(Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines ，2000)第1·1.1章"Sampling Methods"的技术要求编写的。
本标准与该章的非原则性差异在于:——本标准结合本国实践经验对操作程序和条件作了更具体的陈述和规定；——本标准根据GB/T1.1-2000的规定和汉语习惯将该章的陈述性文本改为规范性标准文件。
本标准的附录A为规范性附录。
本标准由农业部畜牧兽医局提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:农业部动物检疫所。
本标准主要起草人:吴延功、杜元钊、朱万光、刘佩兰、仰惠芬。
1范围本标准规定了动物疫病诊断实验室的样品采集方法。
本标准适用于病因(原)学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。
2样品采集的一般原则和采集前的准备2.1样品采集所遵循的一般原则2.1.1凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等)有急性死亡时，如怀疑是炭疽，则不可随意解剖，应采取患畜的血液，万不得已时局部解剖作脾脏触片的显微镜检查。
只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。
2.1.2采取病料的种类，根据不同的疾病或检验目的，采其相应的脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料；进行流行病学调查、抗体检测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品的数量应满足统计学的要求。
动物疫情测报方法
动物疫情测报方法
一、流行病学调查
（一）调查内容
疫病发生情况，包括发病时间、发病地点、发病动物种类、发病数、死亡数、免疫情况、存栏量等。
（二）调查范围
各动物疫情测报单位主要以报告点所辖区域开展流行病学调查，并保持相对稳定，每个县级测报单位应设立3个以上报告点。
（三）调查时间和数量
每个报告点每月进行一次动物流行病学调查，每次至少调查2个村，每个村20个散养户，抽查规模猪、牛、羊、禽场（户）各一个。
当发现疑似动物疫病时，应扩大调查范围，并由县级测报单位做必要的实验室检测
（四）调查方法
由报告员定期定点深入场、户进行调查，据实填报。
二、实验室监测
（一）免疫效果监测
为了及时了解各种动物疫病疫苗的免疫效果，掌握疫苗免疫后在畜禽体内的抗体消长规律，科学指导养殖场（户）制定免疫程序，正确把握免疫时间，合理有效地开展免疫工
作，而定期采集畜禽血清进行相应疫病的抗体检测。
（二）疫情监测
为了切实了解各种动物疫病的流行规律和疫情动态，及时发现疫情及疫情隐患，运用血清学或病原学监测方法对畜禽群进行定期检测。
动物疫病控制—实验室检测
项目五：动物疫病控制
如何进行寄生虫学检测？
2.虫体检查--2：
• 蛛形纲虫虫体检查法：通常采用煤油浸泡法,将病料置于载 玻片上,滴加数滴煤油,上覆另一载玻片,用手搓动两玻片使 皮屑粉碎,镜检。对蜱等其他蛛形纲虫,常采用肉眼检查法。
动物防疫技术
项目五：动物疫病控制
如何进行寄生虫学检测？
定、酶免疫技术等，如猪瘟荧光抗体染色法检测猪瘟病毒。 • 检测病毒核酸：主要针对不同病原微生物具有特异性核酸序
列和结构进行检测。如核酸杂交技术、核酸扩增技术和基因 芯片技术等已研制出多种商品化试剂盒,
动物防疫技术
项目五：动物疫病控制
如何进行病毒学检测？
2.病毒的分离培养：
• 病料处理：主要作除菌处理，方法有滤器除菌、高速离心除 菌和利用抗生素处理3种。
猪 瘟 NY/SY 156-2000
正向间接血凝试验（IHA）
动物防疫技术
项目五：动物疫病控制
什么是动物疫病分子生物学监测？
分子生物学监测又称基因监测。主要是针对不同病原 微生物所具有的特异性核酸序列和结构进行测定。如PCR 技术、核酸探针技术、DNA芯片技术等。
动物防疫技术
一次性静脉 采血管
猪前腔静脉采血
动物防疫技术
项目五：动物疫病控制
免疫抗体监测的程序是什么？
鸡翅静脉采血
猪耳静脉采血
猪前腔静脉采血
牛颈静脉采血
动物防疫技术
项目五：动物疫病控制
免疫抗体监测的程序是什么？
3.抗体检测方法 ：常见动物疫病免疫抗体检测标准及方法， 如下表：
分类
国家 强制 免疫 的重 大动 物疫
• 显微镜检查：制片干澡后，滴加香柏油,用油浸镜观察细菌 的形态结构和染色特性。
动物疫病实验室检验采样方法
动物疫病实验室检验采样方法 (NY/T541-2002)1 范围本标准规定了动物疫病诊断实验室的样品采集方法。
本标准适用于病因(原)学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。
2 样品采集的一般原则和采集前的准备2.1 样品采集所遵循的一般原则2.1.1 凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等)有急性死亡时，如怀疑是炭疽，则不可随意解剖，应采取患畜的血液，万不得已时局部解剖作脾脏触片的显微镜检查。
只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。
2.1.2 采取病料的种类，根据不同的疾病或检验目的，采其相应的脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料；进行流行病学调查、抗体检测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品的数量应满足统计学的要求。
采样时应／jxjD,．谨慎，以免对动物产生不必要的刺激或损害和对采样者构成威胁。
在无法估计病因时，可进行全面的采集。
检查病变与采集病料应统筹考虑。
2.1.3 内肌病料的采取，如患畜已死亡，应尽快采集，最迟不超过6h。
2.1.4 血液样品在采集前一般禁食8h。
2.1.5 应做好人身防护，严防人畜共患病感染。
2.1.6 应防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和病害肉尸的处理。
2.2 使用器械的消毒刀、剪、镊子等用具煮沸消毒30min，使用前用酒精擦拭，用时进行火焰消毒。
器皿(玻制、陶制等)经103kPa高压30min，或经160C干烤2h灭菌；或放于0．5％一1％的碳酸氢钠(NaHCr~)水中煮沸10min 15rain，水洗后，再用清洁纱布擦干，保存于酒精、乙醚等溶液中备用。
注射器和针头放于清洁水中煮沸30rain。
一般要求使用“一次性”针头和注射器。
采取一种病料，使用一套器械与容器，不可用其再采其他病料或容纳其他脏器材料。
采过病料的用具应先消毒后清洗。
检查过传染性海绵状脑病的器械要放在2mol／L的氢氧化钠(NaOH)溶液中浸泡2h以上，才可再使用。
3 样品的采集3.1 血液3.1.1 采血部位大的哺乳动物可选用颈静脉或尾静脉采血，也可采胫外静脉和乳房静脉血。
动物疫病实验室检测规范化流程
动物疫病实验室检测规范化流程英文回答：Animal Disease Laboratory Testing Standardization.Standardization of laboratory testing procedures is essential for ensuring the accuracy, reliability, and consistency of diagnostic results in animal disease laboratories. A standardized testing protocol provides a set of guidelines that outlines the specific steps and techniques to be followed during the testing process. This helps to minimize variability between different operators and laboratories, resulting in more reliable and comparable results.The establishment of a standardized testing protocol involves the following steps:Validation: The testing protocol should be validated to ensure its accuracy, sensitivity, and specificity. Thisinvolves testing a known sample with the protocol and comparing the results to a reference standard.Documentation: The standardized testing protocol should be documented in detail. This includes describing the equipment, reagents, and procedures used, as well as the interpretation of results.Training: Laboratory personnel should be trained on the standardized testing protocol to ensure that they are following the procedures correctly.Quality control: A system for quality control should be implemented to monitor the performance of the standardized testing protocol and ensure that it is consistently producing reliable results.The benefits of using a standardized testing protocol in animal disease laboratories include:Improved accuracy and reliability of results: By following a standardized protocol, laboratories canminimize variability between different operators and laboratories, resulting in more accurate and reliable diagnostic results.Enhanced comparability of results: When different laboratories use the same standardized protocol, they can be confident that their results are comparable, allowingfor more effective disease surveillance and outbreak investigations.Increased efficiency and cost-effectiveness: Standardized testing protocols can help to increase efficiency and cost-effectiveness in the laboratory by reducing the need for duplicate testing and by streamlining the testing process.Improved communication and collaboration: Standardized testing protocols provide a common language for communication between laboratories, facilitating the sharing of information and collaboration on disease investigations.In addition to the steps outlined above, the following considerations are important for the successful implementation of standardized testing protocols in animal disease laboratories:Collaboration: Standardization efforts should involve collaboration between different laboratories, regulatory agencies, and professional organizations.Flexibility: Standardized protocols should be flexible enough to accommodate minor variations in equipment and reagents, as well as to allow for the incorporation of new technologies and advances in diagnostic methods.Continuous improvement: Standardized testing protocols should be reviewed and updated regularly to ensure that they remain current and effective.中文回答：动物疫病实验室检测规范化流程。
动物性病原微生物的实验室检测常规方法简述 (1)
动物病原微生物的常规实验室检测方法简述随着我国动物养殖业的飞速发展，动物传染病逐渐呈现出非典型性症状和混合感染的征状日趋严重，许多病例仅靠临床和病理诊断很难进行确诊，而实验室检测已逐渐成为动物病原微生物确诊的依据。
目前，动物病原微生物实验室检测经常使用的方法主要包括病原学诊断，血清学诊断、分子生物学诊断。
本文对动物病原微生物的实验室诊断方法进行简要的概括，为实验室诊断的初学者提供一些参考。
1 病原学检测1.1 涂片镜检对于送检样品首先一般要进行涂片镜检，首先将样品涂片，然后根据临床诊断疑似感染病原情况进行染色，常用的染色方法主要有革兰氏染色、美蓝染色、姬姆萨染色和抗酸性染色法等，最后在光学显微镜下观察微生物形态，得出初步的结论。
对于疑似的病毒性感染需要进行电镜观察，电镜是以电子束来代替可见光束，观察物体时，分辨率就没有波长要在可见光谱之内的限制，因此其放大倍数和分辨率都比光学显微镜高得多。
病毒颗粒极其微小，在17-300nm之间，光学显微镜无法观察，只有电镜才可以发现其形态。
1.2 分离培养病原分离是病原微生物检测应用较广泛的方法，细菌、真菌、螺旋体和支原体需要将样品处理后接种到其特定的培养基中进行扩增培养，然后划线或涂到固体培养基上进行分离培养，通过其生长形态、生化特性作出鉴定。
立克次体、衣原体、病毒则需要将样品接种到鸡胚或特定的细胞分离病毒，通过病变情况鉴定病原。
分离培养需要的时间较长，且分离的病原可能不是致病主要因素，但是它是病原微生物的基本鉴定方法，是病原学检测的基础。
1.3 动物接种将样品处理后或分离培养的病原根据其不同的特性接种对待检病原敏感的实验动物，通过观察其是否发病和发病症状来进行判断，甚至还可以对发病实验动物继续分离培养病原。
2 分子生物学检测2.1 PCR多聚酶链式反应，是目前病原检测的最常用的分子生物学技术，具有高敏感性的特征，即使少量的感染也可以检出，同时该方法也是许多其它检测方法的基础。
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施猪链球菌病是一种由猪链球菌引起的传染病，可引起猪只呼吸道疾病和泌尿系统感染。
病原体主要通过呼吸道、消化道和皮肤黏膜侵入宿主，引起鼻咽部粘膜炎、支气管炎、肺炎等呼吸道感染，甚至引起败血症、心内膜炎等全身性疾病。
猪链球菌病对养猪业造成了严重的危害，有必要及时进行实验室鉴定并采取相应的防治措施。
一、实验室鉴定猪链球菌病的实验室鉴定可以利用细菌培养和荧光抗体技术来进行。
细菌培养是指将患病猪体内的猪链球菌分离培养出来，并通过对其生理生化特性和对抗生素的敏感性进行鉴定。
荧光抗体技术则是通过将患病猪的标本与特异性荧光抗体结合来鉴定病原体的存在，并观察其在标本中的分布情况，从而判断是否感染了猪链球菌。
二、防治措施1. 疫苗预防猪链球菌病的预防主要依靠疫苗预防。
疫苗可以提高猪只的免疫力，减少感染猪链球菌的风险。
目前市面上已经有了针对猪链球菌的疫苗，养猪场可以根据自身情况选择适合的疫苗进行预防接种。
2. 牲畜管理科学合理的牲畜管理也可以有效预防猪链球菌病。
保持猪舍的清洁卫生，定期清理粪便和更换饲料，提高养猪的环境卫生条件。
要加强对猪只的监测和检疫工作，及时发现患病猪只并进行隔离和治疗。
3. 用药防治对于已经感染猪链球菌的猪只，可以通过用药防治来进行治疗。
选择适当的抗生素进行治疗，根据养猪场的具体情况和患病猪只的症状来确定用药方案。
4. 消毒防治消毒是防治疫病的重要手段之一。
养猪场要定期对饲料槽、饮水设施、猪舍等场所进行消毒，杀灭猪链球菌和其他病原菌，减少感染的风险。
猪链球菌病是一种对养猪业造成严重危害的传染病，及时进行实验室鉴定并采取合理的防治措施对于控制和预防猪链球菌病具有重要意义。
养猪场要加强对该病的防范意识，做好猪只的管理和卫生防护工作，保障猪只的健康生长。
动物疫病检测实验操作中的小技巧
动物疫病检测是保护动物健康的重要手段，而实验操作中的小技巧可以提高实验效率和准确性。
下面我们就来介绍一些动物疫病检测实验操作中的小技巧，希望对您有所帮助。
一、样本采集在进行动物疫病检测实验之前，首先需要进行样本采集。
在采集样本时，有几点小技巧可以帮助提高样本的质量和数量：1. 确保采集工具干净卫生，避免交叉污染；2. 在采集样本时，要注意避免过度刺激动物，以免影响后续实验结果；3. 采集样本时要注意标注清楚样本的来源和采集时间，以便后续分析和比对。
二、实验操作在进行动物疫病检测实验时，一些小技巧可以帮助提高实验的准确性和稳定性：1. 严格控制实验环境和操作流程，避免外界因素对实验结果的影响；2. 采用适当的质控方法，监测实验过程中的变化并及时调整；3. 注意实验操作中的细节，比如样本处理的温度、时间等，这些都会影响实验结果的准确性；4. 在实验过程中要做好实验记录和数据管理，确保实验结果可追溯和复现。
三、实验分析在实验完成后，需要进行实验数据的分析和解读。
一些小技巧可以帮助提高数据分析的准确性和结果的可解释性：1. 采用适当的数据分析方法，以确保数据的真实性和可靠性；2. 对实验结果进行多方面的比对和验证，避免结果的偶然性和误导性；3. 在解读实验结果时要全面考虑实验设计和样本特点，避免盲目解读和误判。
通过上述小技巧，可以在动物疫病检测实验中提高实验效率和准确性，为保护动物健康和人类健康提供可靠的数据支持。
希望您在今后的实验中能够有所收获！在实验操作中，确保实验环境和操作流程的严格控制非常重要。
动物疫病检测实验需要在洁净、安全的实验室环境下进行，避免外来污染的影响。
在实验过程中，需要经常对实验室环境进行清洁和消毒，并定期检查和维护设备的状态，确保实验设备的正常运转。
实验操作过程中也需要注意避免交叉污染，使用一次性操作工具或对操作工具进行严格的消毒处理，避免样本之间的污染和干扰。
另外，采用适当的质控方法也是非常重要的。
动物疫病实验室检测规范化流程(最新)
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8
7.检测后样品的处理
◆ 检测室完成检测工作后，将已检样品放回 样品保管室保存。
◆ 检完样品的保存期为三个月。 ◆ 超过保存期的样品，由实验室负责人批准
后作无害化处理。
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9
8.检测报告
检测报告应供尽可能祥实的信息：
◆ 样品名称、数量；
◆ 样品惟一性标识；
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1
1.样品的接收
◆ 按送检方出具的“抽样登记
表”或“检测委托书”等送 检凭证检查样品状态，清点 数量，核实无误后，办理接 收手续,填写“送检样品登记 表”
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2
2.样品的编号、登记
◆ 样品包装外贴XX-XXX编号，并注明样品类 别、样品数、要求检测项目的总标签；该 样品编号作为唯一性标识，直至检测工作 结束。
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3
3.样品的发放
◆ 按程序要求填写检测任务书，送相应检测室检测。
◆ 主检人员领取样品，进行样品交接签字，再次对样品进行核实。
◆ 凡委托检测或仲裁检测样品应欢有迎备下载份。可修改
4
4.样品的检测 检测方法选择： ◆ 国家或行业标准规定的技术方法; ◆ 行业主管部门规定的技术方法; ◆ 国际通用的技术方法; ◆ 经确认可靠并经用户认可的新研究方法; ◆ 有标准或合格证书的诊断试剂。
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14、抱最大的希望，作最大的努力。2020年10月29日星期 四上午11时49分18秒11:49:1820.10.29
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15、一个人炫耀什么，说明他内心缺 少什么 。。2020年10月上午11时49分20.10.2911:49October 29, 2020
畜禽疫病鉴定方法
畜禽疫病鉴定方法畜禽疫病是指危害畜禽健康，引起大面积死亡和经济损失的疾病。
为了及时鉴定畜禽疫病，制定相应的防控措施，以下是一种畜禽疫病鉴定的方法。
首先，对发生疫情的地区进行现场勘查。
留意畜禽的行为和症状，观察是否有死亡或生病的动物，畜禽是否出现不正常的饮食和行为。
收集病死动物的组织标本，如器官、血液、粪便等，用于后续的实验室检测。
其次，根据临床症状进行初步判断。
根据畜禽的病变特点，可初步判断畜禽疫病的种类。
例如，鸟类的上呼吸道病变、呼吸困难等症状可能是鸟流感；猪的粪便增多、食欲不振等是猪瘟的典型症状。
通过这些初步判断可以先行采取相应的防控措施，以减少病情扩散。
再次，将收集到的组织标本送至实验室进行检测。
采用分子生物学技术，比如核酸检测和PCR技术，可以分析标本中的病原体DNA或RNA。
这些检测方法可以迅速确定病原体的种类，并且具有高度的敏感性和特异性。
同时，还可以通过病原体培养、抗原检测和血清学检测等方法来进一步确认病原体。
最后，根据实验室检测结果进行病原学鉴定。
根据标本中的病原体种类和数量，可以判断出畜禽疫病的具体种类。
根据鉴定结果，制定相应的防控策略和药物治疗方案。
同时，还需对可疑病例进行隔离和处理，以防止疫情进一步蔓延。
此外，还应建立疫病监测系统，追踪疫病的传播和变异情况，及时调整和改进防控措施。
总的来说，畜禽疫病的鉴定方法包括现场勘查、临床症状判断、实验室检测和病原学鉴定。
这要求相关部门和人员具备一定的专业知识和操作技能，以快速准确地鉴定畜禽疫病，从而实施有效的防控措施，保障畜禽的健康和生产的稳定。
在畜禽养殖中，疫病的鉴定非常重要。
只有准确鉴定出疫病的种类，才能制定出有效的防控措施，最大限度地减少疫情的发生和传播。
以下是一些常见的畜禽疫病鉴定方法。
首先，现场勘查是畜禽疫病鉴定的基础。
通过现场勘查能够观察到动物的行为和症状，掌握疫病的传播情况和趋势。
一般来说，畜禽疫病的初期症状比较隐蔽，容易被忽视。
正确采集和送检动物疫病检测样品的方法
正确采集和送检动物疫病检测样品的方法采集和送检动物疫病检测样品是确保动物健康和预防疫病传播的重要步骤。
下面将介绍正确的采集和送检动物疫病检测样品的方法。
1.选择合适的样品类型：根据疾病类型和检测要求，选择适合的样品类型。
常见的样品类型包括血液、组织、粪便、尿液、唾液、脑脊液等。
2.准备采样工具和消毒液：确保采样工具和容器干净且消毒良好。
常用的采样工具包括无菌采血针、无菌采样管、无菌拭子等。
消毒液可选择常见的酒精、碘酒等。
3.采集血液样品：首先消毒样品采集区域，通常在动物的耳根、颈部或前肢内侧静脉进行采血。
用无菌采血针采集适量的血液，放入无菌采样管中。
采血后在采样点按压数分钟，以防止出血。
4.采集组织样品：选择合适的组织（如肌肉、肺、肠道等），消毒采样区域，用无菌手术刀或剪刀切取组织样品，放入无菌采样袋或离心管中。
注意保持样品的完整性和干燥，避免污染。
5.采集粪便样品：使用无菌容器收集新鲜的粪便样品，避免杂质的污染。
可采用无菌拭子或勺子将样品转移到采样管中。
样品应该保持湿润，避免缺氧和干燥。
6.采集尿液样品：消毒动物的泌尿部位，用无菌容器收集动物的尿液。
尽量避免尿液污染，如土壤、皮毛等。
如需要定量采样，可使用无菌尿道导管。
7.采集唾液样品：使用无菌拭子或无菌吸管，激发动物产生唾液，将唾液收集到无菌采样管中。
唾液样品可以用于许多疾病的检测，如口蹄疫等。
8.采集脑脊液样品：对于神经系统相关的疾病检测，可以采集脑脊液样品。
这通常需要进行脑部解剖，使用无菌针头从脑脊液池中吸取适量的脑脊液，放入无菌收集管中。
10.存储和运输样品：将采集好的样品存放在低温或冷藏条件下，避免样品变质。
如果无法立即送检，可以选择使用干冰或冷冻保存设备进行保存。
在运输时，保持样品的稳定和避免温度变化。
11.委托专业实验室进行检测：根据样品类型和检测需求，选择有资质和经验的实验室进行检测。
确保送检时填写准确的样品信息和检测要求。
总之，采集和送检动物疫病检测样品需要严格执行规范的操作流程和消毒措施，确保样品的完整性和准确性。
实验室血清学常用检测方法
常用血清学检测方法介绍一、酶联免疫吸附试验诊断技术目前，该项技术已在兽医学上得到广泛的应用，大多数动物传染病都已经研制成ELISA检测方法。
1、酶联免疫吸附试验的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。
再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
2、ELISA的类型根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型：①.双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA，就是根据这种原理设计的。
②.双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似。
用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。
与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。
乙肝HBs的检测常采用本法。
本法关键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。
此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于于间接法。
此外，该方法不受被检动物种属差异的限制。
③.间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。
其原理为利用酶标记的抗体（抗免疫球蛋白抗体），检测与固相抗原结合的受检抗体（见图1）。
动物疫病实验室检测规范化流程
动物疫病实验室检测规范化流程1.样品采集：首先，必须根据具体的检测需求进行样品采集。
根据不同的疫病类型，可能需要采集动物的血液、尿液、粪便、组织等样品。
采样过程需要在洁净的环境中进行，避免交叉污染。
3.样品处理：接收样品后，需要进行样品处理。
这可能包括样品的预处理、离心、稀释等操作。
样品处理的目的是为了提取目标物质，并准备好进行后续实验的样品。
4.DNA/RNA提取：对于一些疫病，需要提取样品中的DNA或RNA。
DNA/RNA提取的方法因样品类型而异。
目前，常用的DNA/RNA提取技术包括酚-氯仿法、磁珠法及商业化试剂盒提取等。
5.聚合酶链反应（PCR）：PCR是一种常用的检测方法，可用于检测目标病原体的DNA或RNA。
在PCR反应中，需要制备适当的PCR试剂和引物，根据反应湿度和时间在温控仪中进行PCR反应。
6.结果分析：PCR反应后，需要进行结果分析。
常用的方法包括凝胶电泳、酶联免疫吸附实验（ELISA）和即时PCR分析等。
这些方法可以显示出PCR反应后的目标产品，以判断样品是否含有目标疫病。
7.数据记录和结果报告：对于每个样品，都需要记录结果数据。
这些记录应包括检测结果、样品处理步骤、实验参数和备注等信息。
最终，这些数据应以适当的形式进行结果报告。
8.质量控制：为确保结果的准确性和可靠性，实验室应该执行严格的质量控制措施。
这包括采用阳性和阴性对照样品、检测线性范围等。
质控数据应记录并纳入最终的结果分析中。
9.仪器维护和校准：实验室的仪器和设备应定期进行维护和校准，以保证其良好的工作状态，并且有助于减少内部变异和提高准确性。
10.回顾和改进：实验室应该定期回顾其操作流程和结果，以发现潜在的问题和改进的空间。
这可能包括技术交流、培训和采用新技术等。
总的来说，动物疫病实验室的检测规范化流程需要包括样品采集、处理、分析和结果报告等环节。
这些流程应按照科学的方法进行，并且要进行质量控制和仪器维护。
规范化的流程能够确保实验室的工作结果准确可靠，有助于提高疫病检测的效率和科研水平。
动物疫病实验室检验采样方法
动物疫病实验室检验采样方法第一篇：动物疫病实验室检验采样方法动物疫病实验室检验采样方法NY/T 541—2002前言动物病料样品的采集是动物疾病诊断、流行病学调查或免疫监测所不可缺少的重要步骤，在各国的兽医学标准中都把这一部分纳入第一重要内容，广泛应用于动物疾病流行病学调查、动物检疫和科研教学。
世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英)，Office Intentional des Epizootic(法)，OIE]推荐的诊断方法中，也将该部分内容列为第一部分内容。
本标准是依据世界动物卫生组织(OIE)《诊断试验和疫苗标准手册》(2000版)(Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines，2000)第1·1.1章“Sampling Methods”的技术要求编写的。
本标准与该章的非原则性差异在于: ——本标准结合本国实践经验对操作程序和条件作了更具体的陈述和规定；——本标准根据GB/T1.1-2000的规定和汉语习惯将该章的陈述性文本改为规范性标准文件。
本标准的附录A为规范性附录。
本标准由农业部畜牧兽医局提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:农业部动物检疫所。
本标准主要起草人:吴延功、杜元钊、朱万光、刘佩兰、仰惠芬。
1范围本标准规定了动物疫病诊断实验室的样品采集方法。
本标准适用于病因(原)学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。
2样品采集的一般原则和采集前的准备 2.1样品采集所遵循的一般原则2.1.1凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等)有急性死亡时，如怀疑是炭疽，则不可随意解剖，应采取患畜的血液，万不得已时局部解剖作脾脏触片的显微镜检查。
只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。
2.1.2采取病料的种类，根据不同的疾病或检验目的，采其相应的脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料；进行流行病学调查、抗体检测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品的数量应满足统计学的要求。
最全的动物疫病实验室检测方法
最全常见疫病实验室检测方法目录常见疫病实验室检测方法 (1)目录 (1)常见ELISA操作方法 (2)亚洲1型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒 (2)猪瘟抗原检测试剂盒 (4)猪瘟病毒抗体阻断ELISA试验 (10)猪瘟单抗酶联免疫吸附试验 (11)口蹄疫结构蛋白检测方法（3ABC-I-ELISA） (12)口蹄疫抗体液相阻断-酶联免疫吸附试验 (14)PRRS抗体间接酶联免疫吸附试验 (17)犬细小病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (19)犬瘟热病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (20)常见PCR操作方法 (22)猪伪狂犬病毒PCR诊断试剂剂盒 (22)猪圆环病毒PCR诊断试剂盒 (24)常见RT-PCR操作方法 (26)口蹄疫病毒分子检测诊断试剂盒 (26)H5亚型禽流感病毒RT-PCR^测试剂盒说明书（20次） (28)新城疫病毒RT-PCR检测试剂盒 (30)猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒 (32)凝集、血凝实验操作方法 (34)弓形虫间接血凝试验（IHA）试剂使用说明书 (34)伪狂犬病乳胶凝集试验试剂盒 (35)猪细小病毒病乳胶凝集试验〈1人7〉诊断试剂盒使用说明书 (36)猪传染性萎缩性鼻炎乳胶凝集试验〈LAT〉操作程序 (37)猪瘟正向间接血凝试验试剂使用说明书及实验操作程序 (38)口蹄疫正向间接血凝试验 (40)高致病性禽流感血凝（HA和血凝抑制（HI）试验程序 (41)琼脂扩散试验 (43)鸡马立克氏病 (43)禽流感琼脂凝胶免疫扩散试验 (45)荧光抗体检测 (46)猪瘟荧光抗体试验操作程序 (46)对狂犬病疑似动物脑组织的直接免疫荧光（dFA）检测 (47)血清学诊断检测常用试剂配方 (48)禽流感HA和HI试验用溶液的配制 (48)补充实验 (50)猪流感病毒H1亚型Hl试验抗原与阴、阳性血清说明书 (50)实验 ............................................................................. 54 一、 ....................................... 布鲁氏菌病试管凝集试验抗原与阴、阳性血清 56二、 ..................................................... 布鲁氏菌病虎红平板凝集试验57动物结核病诊断操作规程 (57)常见ELISA 操作方法亚洲1型口蹄疫抗体液相阻断 ELISA 检测试剂盒试剂盒内含物 亚洲1型口蹄疫阳性对照血清（己稀释浓度为1:8） 亚洲1型口蹄疫阴性对照血清.圭寸板膜.灭活亚洲I 型口蹄疾病毒抗原 .亚洲I 型口蹄疫病毒兔抗血清 .亚洲I 型口蹄疫病毒豚鼠抗血清 .兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物二器材准备（需用户自备）1. 移液器:5-50 4移液器、0.2 — 10pl 移液器、50—200 U 移液器、50— 300认12 道移液器各一把。
疫病实验室诊断的方法
疫病实验室诊断的方法
疫病实验室诊断的方法主要包括以下几种：
1. 病料涂片镜检：通过采集患病动物的血液、分泌物等样本，进行涂片、染色、镜检，观察病原体形态特征，以确定病原体的种类。
2. 血清学诊断：通过采集患病动物的血清样本，检测血清中的特异性抗体，以确定动物是否感染某种疫病。
3. 分子生物学诊断：利用分子生物学技术，如PCR、基因测序等，检测病
原体核酸片段或基因序列，以确定病原体种类和基因型。
4. 分离培养与鉴定：将采集的病料接种在适宜的培养基上，培养出病原体后进行形态学、生化特性等方面的鉴定，以确定病原体的种类和特性。
5. 病理组织学诊断：通过对患病动物的组织样本进行病理学检查，观察组织病理学变化，以确定疫病的类型和病变程度。
这些方法各有优缺点，应根据具体情况选择合适的方法进行实验室诊断。
同时，实验室诊断时应遵循相关法律法规和标准，确保实验室安全和生物安全。
动物检疫中实验室检验的主要方法
动物检疫中实验室检验的主要方法在动物检疫中，实验室检验是重要的手段之一，可以对进出口动物及动物产品进行检测，以确保其健康状况和合规性。
实验室检验的主要方法包括免疫学检验、分子生物学检验和微生物学检验。
免疫学检验是一种常用的动物检疫方法。
免疫学检验基于动物免疫系统产生的抗体或细胞免疫反应，可以检测动物体内是否存在某些病原体或其抗体。
例如，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）可以检测动物体内是否存在某种特定病原体的抗体，从而判断其是否曾经感染或接触过该病原体。
免疫学检验的优点是灵敏度高、特异性强，可以广泛应用于动物疫病的诊断和监测。
分子生物学检验是另一种常见的动物检疫方法。
它通过检测动物体内的遗传物质（如DNA或RNA）来确定是否存在某些特定的病原体。
分子生物学检验多样化且灵敏度高，可以针对各种病原体进行检测，包括细菌、病毒和寄生虫等。
常用的分子生物学检验方法包括聚合酶链反应（PCR）、实时定量PCR和序列分析等。
这些方法可以检测出病原体的存在，甚至能够确定其血统和亚型，对于疫病的早期诊断和追踪传播有重要意义。
微生物学检验是动物检疫中的另一种重要方法。
它主要通过培养和鉴定动物体内的微生物，确定是否存在某些致病菌和寄生虫。
常用的微生物学检验方法包括细菌培养、真菌培养和寄生虫鉴定等。
这些方法依赖于人工培养和观察微生物的形态和生理特性，能够准确诊断出某种病原体的存在，并为疫病的控制和预防提供科学依据。
除了以上主要的实验室检验方法，还有其他一些辅助的技术和方法被广泛应用于动物检疫中。
例如，生物传感技术可以利用生物分子与特定病原体之间的相互作用，通过测量光信号、电信号或质量信号等来检测病原体的存在。
同时，近年来基因组学和蛋白质组学等高通量技术的发展，也推动了动物检疫方法的更新和改进。
实验室检验在动物检疫中具有不可替代的作用。
通过科学而精确的检验方法，可以及早发现和定位动物疫病的存在和传播，防止瘟疫的蔓延和扩大。
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最全常见疫病实验室检测方法目录常见疫病实验室检测方法 (1)目录 (1)常见ELISA操作方法 (3)亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒 (3)猪瘟抗原检测试剂盒 (6)猪瘟病毒抗体阻断ELISA试验 (12)猪瘟单抗酶联免疫吸附试验 (14)口蹄疫结构蛋白检测方法（3ABC-I-ELISA） (16)口蹄疫抗体液相阻断-酶联免疫吸附试验 (18)PRRS抗体间接酶联免疫吸附试验 (22)犬细小病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (24)犬瘟热病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (26)常见PCR操作方法 (28)猪伪狂犬病毒PCR诊断试剂剂盒 (28)猪圆环病毒PCR诊断试剂盒 (31)常见RT-PCR操作方法 (34)口蹄疫病毒分子检测诊断试剂盒 (34)H5亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒说明书(20次) (36)新城疫病毒RT-PCR 检测试剂盒 (38)猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒 (41)凝集、血凝实验操作方法 (44)弓形虫间接血凝试验(lHA)试剂使用说明书 (44)伪狂犬病乳胶凝集试验试剂盒 (45)猪细小病毒病乳胶凝集试验〈LAT〉诊断试剂盒使用说明书 (46)猪传染性萎缩性鼻炎乳胶凝集试验〈LAT〉操作程序 (47)猪瘟正向间接血凝试验试剂使用说明书及实验操作程序 (48)口蹄疫正向间接血凝试验 (51)高致病性禽流感血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验程序 (52)琼脂扩散试验 (54)鸡马立克氏病 (54)禽流感琼脂凝胶免疫扩散试验 (56)荧光抗体检测 (58)猪瘟荧光抗体试验操作程序 (58)对狂犬病疑似动物脑组织的直接免疫荧光(dFA)检测 (59)血清学诊断检测常用试剂配方 (61)禽流感HA和HI试验用溶液的配制 (61)补充实验 (64)猪流感病毒H1亚型Hl试验抗原与阴、阳性血清说明书 (64)猪流感病毒RT-PCR检测 (67)猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒猪繁殖与呼吸综合症（Nsp2 1594~1680变异株）RT-PCR检测实验 (69)一、布鲁氏菌病试管凝集试验抗原与阴、阳性血清 (72)二、布鲁氏菌病虎红平板凝集试验 (73)动物结核病诊断操作规程 (74)常见ELISA操作方法亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒一试剂盒内含物.说明书亚洲 1 型口蹄疫阳性对照血清( 己稀释浓度为 1:8) .96 孔 ELISA 板亚洲 1 型口蹄疫阴性对照血清.液体稀释槽 3% 双氧水.U 型96孔抗原抗体反应板 25×PBST洗涤液(稀释时准确量取).封板膜豚鼠抗血清稀释液.灭活亚洲Ⅰ型口蹄疾病毒抗原 (用冰决包裹 ) 终止液.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒兔抗血清包被缓冲液(碳酸盐)胶囊.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒豚鼠抗血清底物 (柠檬酸 -磷酸盐)缓冲液片剂.兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物 OPD 片剂二器材准备 ( 需用户自备 )1.移液器:5-50µl移液器、0.2—10µl移液器、50—200µl移液器、50—300µl 12道移液器各一把。
2.移液枪尖 (若干)。
3.抗原抗体反应板:微量血凝板(U型、V型均可)5块,本试剂盒配备两块,用于被检血清的稀释和抗原抗体反应。
注:抗原抗体反应板可重复使用,实验后,用水冲洗干净,然后用无离子水沸水浴30秒,晾干,待用。
4.超纯水 , 无离子水或蒸馏水。
三、试剂准备(需用户完成)1.包被缓冲液(PH9.6)将本试剂盒配备的碳酸盐缓冲液胶囊1粒小心打开,将胶囊内粉末倒入100ml无离子水中溶解即可。
4℃存放,1月内有效。
2. 洗涤液(PBST)将本试剂盒配备的 25 倍浓缩 PBST 液(可能有结晶形成,用时微热溶化)用无离子水或蒸馏水做1:25稀释。
(如果PH降低,务必用NaOH调至7.4)3.底物溶液取1片柠檬酸—磷酸盐片剂(本试剂盒配备)溶于100mL无离子水中,溶化后,取50mL 溶液, 再加1片邻苯二胺(OPD)片剂,充分溶解,分装（5mL/ 瓶或 10Ml∕瓶 ), 避光之-2O℃保存。
用前避光溶化 ,临时每1mL上述溶液加 10µL 本试剂盒配备的 3% 的双氧水(H202) 。
务必加双氧水!四、操作步骤1.用包被缓冲液稀释亚洲 1 型口蹄疫病毒兔抗血清至工作浓度(1:1000), 在ELISA 板上每孔加 50µl, 振荡 , 封板或置湿盒内，室温过夜。
2. 抗原抗体(阴阳性对照血清及待检血清)反应根据不同的需要,选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。
图 1 为抗体滴度测定 (定量) 检测 10 份样品布局图;图 2 为抗体滴度测定( 定量 )检测 20 份样品布局图。
以图 1 为例 , 在 U 型血凝板上按 50 µl/孔量用 PBST 将待检血清从1:4开始做2倍连续稀释至 1:512。
同时,按图示稀释阴阳性对照血清 , 然后每孔加入 50 µl 用PBST 稀释到使用浓度的亚Ⅰ洲型口蹄疫病毒抗原 (1:4,即1份病毒抗原、加3份PBST), 病毒抗原对照孔加100µl。
振荡混匀,封板,4℃过夜。
加入病毒抗原后血清的稀释度变为从1:8开始的2倍稀释。
3.用洗涤液 (1×PBST) 洗 ELISA板5 次,在洗水纸上甩干,再将抗原抗体混合物从抗原抗体反应板上按次序转移至ELISA板上的相对应孔,每孔50µl封板,37℃温育1小时。
4.同上洗板5次, 甩干。
用豚鼠抗血清稀释液稀释亚洲1型口蹄疫病毒豚鼠抗血清至工作浓度 (1:1000), 每孔加50µl,封板,37℃温育1小时。
5.同上洗板 5 次 , 甩干。
用 l×PBST 稀释兔抗豚鼠酶结合物至工作浓度(1:500), 每孔加 50 µl 封板 ,37 ℃温育 1 小时。
6. 同上洗板5次,每孔加50µl底物溶液 (务必加双氧水),37℃温育15分钟。
每孔再加50µl终止液终止反应,立即在492nm波长下读取光吸收值(OD492nm值)。
五结果判定1. 试验认可标准每块板设 4 孔病毒抗原对照,病毒抗原对照不加任何血清,直接用PBST稀释至使用浓度,与血清/病毒抗原复合物同步加入ELISA板孔,50µl/孔,病毒抗原对照OD492nm 值应在1.5±0.5范围内。
阳性对照抗体效价应在1:1024±1滴度以内,阴性对照血清抗体效价应＜1:8。
2.病毒抗原对照平均OD492nm 值50%计算(临界值)抗原对照是4孔,弃去最高和最低OD492nm值,计算剩余2孔的平均OD492nm值,再除以2,即50%对照值。
该值即为临界值，表示阻断50%反应的对照OD492nm值。
3.结果判定以病毒抗原对照平均OD492nm 值的50%为临界值,被检血清稀释孔OD492nm值大于临界值的孔为阴性孔,小于或等于临界值的孔为阳性孔,阳性孔的OD492nm值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。
例如病毒抗原对照平均OD492nm值为1.2,则其50%为0.60。
若某一待检血清在1:128时OD492nm值为0.6,则该份待检血清的抗体滴度为1:128 。
若临界值处于两个滴度之间 ,如处于1：64与1：128之间，则抗体滴度取中间值为1:9O。
定性检测中 , 两个重复孔只要有一孔为阳性孔 , 则抗体滴度判定为1:128, 两孔均为阳性孔 , 则判定为抗体滴度＞1:128 。
ELISA抗体效价≥1:128,判定为亚洲 1 型口蹄疫抗体阳性。
ELISA抗体效价与保护力的关系:牛、羊:抗体效价≥1:128,99% 保护；效价≤1:16, 不保护；效价在1:22-90之间,50%保护。
猪瘟抗原检测试剂盒Classical Swine Fever Virus Antigen Test kit(CSFVAg)概述猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、边界病病毒(BDV)都是瘟病毒科黄病毒属的成员。
猪瘟病毒自从成为一种重要的病原体以来，给养猪业造成了巨大的经济损失，并引起猪的严重死亡。
感染高致病力猪瘟病毒后，猪在出现临床症状前会排出大量的病毒。
耐过急性或亚急性感染的动物会产生抗体并且不再散毒。
低致病力温和病毒会造成猪的隐性感染，病猪将会持续或间歇排出病毒直至死亡。
怀孕母猪与猪瘟病毒接触后可能通过胎盘感染胎儿。
先天性感染可能导致流产，木乃伊胎儿，死产和/或弱仔及畸形胎儿。
先天性感染低毒力病毒的结果是产出持续性感染的仔猪，仔猪出现免疫耐受，不表现任何症状向外排毒。
猪也有可能感染BVDV或BDV。
尽管这些感染通常呈温和经过并且是自限性的，但将它们同猪瘟病毒有效区分是很重要的。
原理本ELISA检测试剂盒是用来检测外周血白细胞、全血、细胞培养物以及组织样本中的猪瘟病毒抗原。
采用双抗体夹心ELISA，将CSFV单克隆抗血清包被微量反应板，可与样品中的CSEV抗原结合。
猪瘟病毒的特异性单克隆抗体形成了夹心的上层。
形成的单克隆抗体+样品+单克隆抗体夹心可以用辣根过氧化物酶标记物检测。
加入与辣根过氧化物酶反应的底物，在酶的作用下形成有色产物。
通过酶标仪测定其吸光度。
可以用450nm单波长或450nm 与620m双波长测定各孔吸光度。
试剂本试剂盒采用96孔板，可以一次检测92个样品(每个样品1孔，每个对照2孔)或46个样品(每个样品2孔，每个对照2孔)；或分6次使用，每次用2个板条，设2个对照，测定6个样品(每个样品2孔)。
为了检测结果的准确性，最好每个样本都设重复。
试剂数量1、多克隆羊抗血清包被板条8孔×12条(96孔)2、10倍浓缩样品稀释液(10x) 55ml足以配制550mL直接使用的1x稀释液3、10倍浓缩洗涤液(10x) 125ml足以配制1、25L直接使用的洗涤液工作浓度(1x)4、CSFV单克隆抗体，含防腐剂4ml5、阳性对照，含有防腐剂 1.5ml6、阴性对照，含有防腐剂 1.5ml7、100倍浓缩辣根过氧化物酶标记物(100x)，辣根过氧化物酶标记抗鼠IgG，含有防腐剂200μl8、酶标抗体稀释液15ml9、底物液，TMB/H2O2溶液12ml10、终止液，1M HCI(小心，强酸) 12ml注意事项1、仔细阅读并遵守操作说明；2、试剂盒试剂于2～7℃冷藏保存。
建议将浓缩的洗涤液(10x)保存在18～25℃室温，以免形成结晶。
3、所有试剂在使用前必须恢复至室温。
4、未使用的包被板应该密封保存在配备的塑料袋中，于2～7℃冷藏保存。
5、不要将不同批次的说明书以及试剂盒成分混合使用。