淀粉酶酶学性质的研究

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淀粉酶酶学性质的研究

生物化学学号：淀粉酶酶学性质的研究学生姓名：####指导教师：#####所在院系：生命科学学院所学专业：#######学号：######### 大学中国·哈尔滨2011 年12 月摘要：酶是酶是一种生物催化剂，它具有催化剂属性，同是也具有一些无机催化剂所不具有的特性。

催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。

是生物催化剂，能通过降低反应的活化能加快反应速度，但不改变反应的平衡点。

本实验通过利用淀粉酶水解还原糖，还原糖能使3，5-二硝基水杨酸还原，生成棕色的3-氨基-5硝基水杨酸。

淀粉酶活力与还原糖的量成正比，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位质量样品在一定时间内生成还原糖的量表示酶活力。

酶的活性又同时受到温度、PH、激活剂抑制剂等的影响。

关键词：淀粉酶活力温度 PH 激活剂和抑制剂前言：淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料，由于淀粉酶的高效性及专一性，酶退浆的退浆率高，退浆快，污染少，产品比酸法、碱法更柔软，且不损伤纤维。

淀粉酶的种类很多，根据织物不同，设备组合不同，工艺流程也不同，目前所用的退浆方法有浸渍法、堆置法、卷染法、连续洗等，由于淀粉酶退浆机械作用小，水的用量少，可以在低温条件下达到退浆效果，具有鲜明的环保特色。

此酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子和激活因子，也有部分淀粉酶为非Ca2+依赖型。

淀粉酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的α－1，4-链。

因此，其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，最终产物在分解直链淀粉时以葡萄糖为主，此外，还有少量麦芽三糖及麦芽糖，其中真菌a-淀粉酶水解淀粉的终产物主要以麦芽糖为主且不含大分子极限糊精，在烘焙业和麦芽糖制造业具有广泛的应用。

另一方面在分解支链淀粉时，除麦芽糖、葡萄糖、麦芽三糖外，还生成分支部分具有α-1，6-键的α-极限糊精（又称α-糊精）。

酶性质实验报告结果现(3篇)

第1篇一、实验目的本次实验旨在通过一系列的实验操作，观察和分析不同因素对酶活性的影响，探究酶的专一性、激活剂与抑制剂的作用以及酶的最适温度。

二、实验材料与仪器1. 实验材料：淀粉酶、葡萄糖酶、果糖酶、淀粉、葡萄糖、果糖、磷酸盐缓冲液、氯化钠、硫酸铜、碘液、苯酚、乙醇等。

2. 实验仪器：恒温水浴锅、离心机、分光光度计、移液器、容量瓶、试管等。

三、实验方法1. 酶的专一性实验（1）将淀粉酶分别与淀粉、葡萄糖、果糖混合，置于恒温水浴锅中，在一定温度下反应一定时间。

（2）将反应后的溶液进行离心，取上清液。

（3）用碘液检测上清液中淀粉的含量，用苯酚-硫酸法检测葡萄糖和果糖的含量。

2. 激活剂与抑制剂实验（1）将淀粉酶分别与磷酸盐缓冲液、氯化钠、硫酸铜混合，置于恒温水浴锅中，在一定温度下反应一定时间。

（2）将反应后的溶液进行离心，取上清液。

（3）用碘液检测上清液中淀粉的含量。

3. 酶的最适温度实验（1）将淀粉酶分别置于不同温度的恒温水浴锅中，反应一定时间。

（2）将反应后的溶液进行离心，取上清液。

（3）用碘液检测上清液中淀粉的含量。

四、实验结果与分析1. 酶的专一性实验结果实验结果显示，淀粉酶对淀粉的催化效果明显，而对葡萄糖和果糖的催化效果较差。

这表明淀粉酶具有高度的底物专一性，只能催化淀粉的水解反应。

2. 激活剂与抑制剂实验结果实验结果显示，氯化钠对淀粉酶的活性有促进作用，而磷酸盐缓冲液和硫酸铜对淀粉酶的活性有抑制作用。

这说明氯化钠可以作为淀粉酶的激活剂，而磷酸盐缓冲液和硫酸铜可以作为淀粉酶的抑制剂。

3. 酶的最适温度实验结果实验结果显示，淀粉酶在40℃时的活性最高，而在其他温度下，酶的活性逐渐降低。

这表明淀粉酶的最适温度为40℃。

五、讨论与心得1. 酶的专一性是酶催化反应的一个重要特点，本实验验证了淀粉酶对淀粉的专一性，为后续研究酶的应用提供了理论依据。

2. 激活剂和抑制剂在酶催化反应中起着重要作用。

本实验发现氯化钠可以作为淀粉酶的激活剂，而磷酸盐缓冲液和硫酸铜可以作为淀粉酶的抑制剂，为酶的调控提供了参考。

萌发小麦淀粉酶酶学性质的研究

应用前景
由于萌发小麦淀粉酶具有较高的活性和底物特异性，它被广泛应用于食品、酿造和医药等领域。例如，可以将该酶添加到面包和啤酒等食品中，以提高其口感和品质；也可以将其用于制备麦芽糖和其他淀粉水解产物，以满足医药和化工等领域的需求。
底物特异性
尽管已经对萌发小麦淀粉酶的酶学性质进行了较为详细的研究，但是仍存在一些不足之处。例如，目前对该酶的分子机制和结构特征尚未进行深入的研究，这可能会影响对其性质和功能的全面理解。
未来可以对萌发小麦淀粉酶进行更为深入的研究，包括其分子机制、结构特征以及应用方面的研究。例如，可以通过基因工程技术手段对淀粉酶进行改造和优化，以提高其活性和热稳定性；同时也可以将其应用于其他领域，如生物燃料和环境保护等领域。
研究不足
展望
05
CHAPTER
参考文献
该研究通过对萌发小麦淀粉酶的提取和纯化，对其酶学性质进行了深入探讨。实验结果表明，萌发小麦淀粉酶具有较高的活性，且在适宜的温度和pH条件下表现出良好的稳定性。此外，该研究还对该酶的最适底物浓度、Km值、Vmax等动力学参数进行了测定和分析。
研究目的：通过对萌发小麦淀粉酶的酶学性质进行系统研究，揭示其催化机制、活性调节及底物特异性等方面的特征。
研究内容
萌发小麦淀粉酶的分离纯化及活性测定。
酶学性质（如最适温度、最适pH值、热稳定性等）的研究。
底物特异性及催化机制的研究。
活性调节及信号转导途径的研究。
02
CHAPTER
材料与方法
选用健康、无病虫害的小麦种子。
萌发小麦淀粉酶酶学性质的研究
汇报人：
日期:
目录
引言材料与方法实验结果讨论参考文献
01
CHAPTER
引言

淀粉酶酶学性质的研究

淀粉酶酶学性质的研究摘要淀粉酶可将淀粉水解为麦芽糖和少量葡萄糖，它们遇碘呈现不同的颜色，根据这个性质对淀粉酶进行不同条件下的研究。

通过在不同条件下对酶的性质进行研究发现萌发小麦种子中淀粉酶的最适温度在40℃，随着温度的升高或降低都会对酶活性产生影响；萌发的小麦种子的淀粉酶最适pH在5.6左右，低于或高于最适pH酶的活性逐渐降低；研究还发现Cl¯是淀粉酶的激活剂而Cu²+则对淀粉酶有抑制作用。

关键词：淀粉酶 .不同条件性质淀粉是植物最主要的储藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。

淀粉经淀粉酶水解后生成葡萄糖和麦芽糖等小分子物质而被机体利用。

通过对小麦种子中淀粉酶酶学性质的研究可以用于农业研究用于食品¸工业原料等，还可以提高小麦的应用范围和利用率。

⒈材料与方法⒈⒈实验材料萌发的小麦种子⒈⒉实验设计称取2g萌发3天的小麦种子，置于研钵中，加入少量2ml蒸馏水，研磨匀浆。

将匀浆倒入刻度试管中，定容至25ml。

提取液在室温下放置提取15-20min，每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。

然后在4000r/min转速下离心10min，将上清液倒入一个干净的试管中，即为淀粉酶粗酶液。

⒈⒊实验方法与结果⒈⒊⒈温度对淀粉酶活性的影响取8支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。

管号 A a B b C c D d缓冲液（pH5.6）/ml 1.0 — 1.0 — 1.0 — 1.0 —淀粉溶液/ml 2.5 — 2.5 — 2.5 — 2.5 —淀粉酶提取液/ml — 1.0 — 1.0 — 1.0 — 1.0预保温/10min 4℃室温40℃沸水浴混合A→a B→b C→c D→d酶促反应（10min）4℃室温40℃沸水浴碘液各加3滴（滴管应先冷却至室温）显色浅蓝色无色无色蓝色低温时酶的活性低，但没有失活，随着温度升高，酶的活性越来越高，后来又降低当温度到达很高时酶失活。

五、α-淀粉酶酶学性质测定I2010(精)

4.1 最适pH值的测定—α-淀粉酶
• 以下表内容测定最适pH值 pH值指标
OD660 （测三次平均值）酶活（U/g）
3.0 4.0 5.0 6.0 7.2 8.0
4.2 最适反应温度的测定—α-淀粉酶
• 以下表内容测定最适温度
温度 5 ℃ 指标
20 （冰 ℃( 箱）室温) 30 ℃ 40 ℃ 50 ℃ 60 ℃ 70 ℃ 80 ℃
3.2 器材（每组）
15ml 大试管20支 5ml 移液管10支 1ml 移液管10支 10ml 移液管10支 200ml 烧杯2个 100ml 烧杯2个玻棒 2支双蒸水1瓶（50ml）比色皿1套（4个）、玻璃皿1套、洗瓶1个吸耳球 2个记号笔2支陶瓷盘1个试管架2个
另外，酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到1000C，其活性并无明显变化。但在1000C的溶液中却很快地完全失去活性。参考：α-淀粉酶最适温度55-700C；最适 pH4.5－7.0。
3.仪器试剂
3.1 试剂 3.1.1 1%α-淀粉酶液（双蒸水配制500ml，教师准备） 3.1.2 3.1.3 稀碘液
生物技术专业系统实验（四）
—酶（蛋白质）工程实验V
五、α-淀粉酶酶学性质测定I（最适pH值及最适度的测定)• 1.目的意义
• 3.仪器设备 • 5.实验报告
2.实验原理
4.实验方法 6.思考题
1.目的意义
• 影响酶促反应的因素有：底物浓度（S），pH，T，激活剂，抑制剂等。酶促反应是在非常温和的条件下（常温、常压、中性pH）高效专一地完成催化反应的过程。酶对温度和酸碱条件极其敏感，这些条件的变化可导致酶活性下降甚至丧失。 • 通常情况下α-淀粉酶的最适作用pH一般在2到12之间变化。真菌和细菌类α-淀粉酶的最适pH在酸性和中性范围内，如芽孢杆菌α-淀粉酶的最适pH为3。碱性α-淀粉酶的最适pH在9到12之间。另外，温度和钙离子对一些α-淀粉酶的最适pH会有一定的影响，能够改变其最适作用范围pH。 • 不同微生物来源的α-淀粉酶的最适作用温度存在着较大差异，其中最适作用温度低的只有25℃-30℃，而最高的能达到100℃-130℃。

α-淀粉酶产生菌的分离筛选及酶学性质研究

安徽农业科学１６０ｒ／ｖａｉｎ摇床培养１２ｈ／’种子液以１０％的接种量接种于产酶发酵培养基上，３７℃、１６０ｒ／ｍｉｎ摇床培养２４ｈ后发酵液５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清液测酶活力。

选取酶活力较高的菌株作为试验菌种。

１．４．Ｌ３酶活力的测定一１。

仅一淀粉酶能将淀粉水解为长短不一的短链糊精和少量的还原糖，而使淀粉对碘呈蓝紫色的特异反应逐渐消失，可以用这种显色消失的速度来衡量酶的活力。

用ＹｏｕｎｇＪ．Ｙ００改良法：取５ｒＩｌｌ０．５％可溶性淀粉溶液，在４０℃水浴中预热１０ｍｉｎ，然后加入适当稀释的酶液０．５ｍｌ，反应５ｍｉｎ后用５Ｉｌｌｌ０．１ｍｏｌ／ＬＨ２Ｓ０４溶液终止反应。

取０．５ｍ１反应液与５ｌＩｌｌ工作碘液显色，在６２０ｎｍ波长处测光密度。

以０．５ｍｌ水代替０．５ｒＩｌｌ反应液为空白，以不加酶液（加相同的水）的管为对照。

，酶活力单位定义为：在４０℃、５ｖａｉｎ内水解ｌｎ蟮淀粉（０．５％淀粉）的酶量为１个活力单位。

酶活力计算公式如下：酶活力（ｕ／ＩＩｌｌ）＝（民一Ｒ）／ＲｏＸ５０ＸＤ式中，尺。

、Ｒ分别为对照、反应液的光密度；Ｄ为酶的稀释倍数，调整Ｄ使（Ｒ一尺）／民在０．２～０．７。

１．４．２酶学性质的研究。

１．４．２．１酶反应最适温度的确定。

设置４０、６０、８０℃３个温度梯度，测定反应体系在不同温度下的酶活力，确定酶反应的最适温度。

１．４．２．２酶反应最适ｐＨ值的确定。

用不同的缓冲液设置ｐＨ值为４、６、ｌＯ３个梯度值，测定反应系在不同ｐＨ值下的酶活力，确定酶反应的最适ｐＨ值。

１．４．２．３ｃａ２＋对酶热稳定性的影响。

在１００℃下调整酶液中Ｃａ２＋的不同浓度，测定不同时间Ｆ的酶活力，确定ｃｄ＋对酶热稳定性的影响。

２结果与分析２．１Ｏｒ＂淀粉酶生产菌株的分离筛选２．１．１初筛结果。

采用碘熏法从淀粉筛选平板｝＝挑出ｌＯ株有明显淀粉水解圈（图１）的菌株。

图１菌种的水解圈Ｆｉｇ．１Ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄｃｉｒｃｌｅｏｆｓｔｒａｉｎ２．１．２复筛结果。

中温α-淀粉酶的酶学性质研究

１２％。１．７酶学性质
１．７．１分子量测定用ＳＤＳ．ＰＡＧＥ法测定酶的分子量，根据已知分子量
的标准蛋白在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ中的相对迁移率Ｒｆ，作ＲｇｌｏｇＭｒ图，求得其分子量。
１．７．２最适反应温度及热稳定性在不同温度下按照标准方法测定酶活，以酶活最高
者为１００％。将酶液在５５、６０、７０＂Ｃ，分别保温１５、３０、４５、６０ｍｉｎ，放置冰上迅速冷却至室温，按标准方法，测残余酶相对活力，以未保温的酶液的酶活为１００％。
凝胶过滤层析等纯化步骤后，最终酶的比活提高了２９．９６倍，酶活回收率为２０．０６％。将酶蛋白样品进行ＳＤＳ— ＰＡＧＥ凝胶电泳，表明为一条带，电泳结果见图１，以上各步提纯结果列于表１。
Ｔａｂｌｅ１
表１淀粉酶纯化总表Ｓｕｍｍａｒｙｏｆ０【－ａｍｙｌａｓｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
２．２酶的基本性质
中温仪一淀粉酶的酶学性质研究
刘洋，沈微，石贵阳，王正祥· （江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡
２１４１２２）
摘要：通过盐析、ＤＥＡＥ．ＦＦ和Ｓｕｐｅｒｄｅｘ．７５，对ＢａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓＭ２３产生的伍·淀粉酶进行了纯化，得到电泳纯的ａ．淀粉酶，纯化倍数为２９．６ｌ，活力回收率为２０．０６％。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得该酶的分子量为５８ｋＤ。该酶的最适反应温度为５５℃，最适反应ｐＨ值为６．０。纯酶液在ｐＨ７．Ｏ～１０．０缓冲液中室温放置２４ｈ，可保持８０％以上活力。５５℃保温１５ｍｉｎ，基本丧失活力，添加１０ｍｍｏｌ／Ｌ的ｃａ２＋能显著提高酶的热稳定性。Ｃａ２＋、Ｍ９２＋和Ｃ０２＋具有激活该酶活性的作用，ＥＤＴＡ抑制酶的活性。６０℃，以可溶性淀粉为底物的Ｋｍ，Ｖ一，分别为４．３３９／Ｌ、１．１９９／Ｌ·ｒａｉｎ。薄层层析结果表明该酶水解淀粉生成糊精和寡聚糖。关键词：Ｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ；ａ．淀粉酶；纯化；性质

萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究

萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究
淀粉酶是一类重要的酶，它们在各种植物的发芽过程中发挥着重要的作用。

在小麦种
子萌发过程中，淀粉酶起着决定性的作用。

本文旨在研究萌发小麦种子中淀粉酶的酶学性质。

首先，我们选择小麦种子在实验中进行分离，以初步确定淀粉酶来源。

实验结果表明，小麦种子中含有淀粉酶，它们主要来自小麦种子里的胚乳和淀粉质泡沫，而小麦种子表皮
则有较低含量的淀粉酶。

其次，我们利用粒度分级、沉淀分离技术对淀粉酶分离、纯化并收集淀粉酶样品，淀
粉酶完成从原始材料分离纯化后，样品中淀粉酶的浓度和纯度都比原始材料的含量的高。

继而，我们观察了温度、pH值、聚集剂和胰蛋白酶对淀粉酶活性的影响，结果表明，淀粉酶的最佳活性状态为30℃时的pH8.0条件下，加入聚集剂NaCl和胰蛋白酶；同时，
淀粉酶对温度和pH值的变化具有一定的耐受性，在30℃-45℃pH7.0-8.5范围内淀粉酶仍
可保持较高的活性。

最后，我们测定了萌发小麦种子中淀粉酶的最大活性，结果显示，30℃时的pH8.0条
件下，淀粉酶的最大活性为250 U/ml。

此外，经过NaCl聚集处理和加入胰蛋白酶处理后，淀粉酶的活性都有所提高，分别达到280 U/ml和290 U/ml。

生淀粉酶细菌菌株的筛选及其酶学性质研究

ｅｚｍａｉｐｏｅｔｅｅｌｄｔａｐｉｍｍｐｒｔｒｓａ０ ℃ ａｄｐ．．Ｔｅｅｚｍｅｈｄｇｏｎｙｔｒｐｒｒｖａｅｈｔｏｔｃｙｍｕｔｅｅａｕｅｗａｔ５ｎＨ６５ｈｎｙａｏｄ
ＮＣ、馏水１０，Ｈ７２～．１１ｏ菌ａ１ｇ蒸５００ｍＬｐ．７４，２Ｃ灭
２ｉ。其中可溶性淀粉在１５ｏ０ｍｎ０Ｃ下干热灭菌２ｈ，然后在常温下无菌操作加人。
能产生淀粉酶的微生物种类较多，报道最多的是黑曲霉、根霉和芽孢杆菌Ｉ］６。本文筛选出能产生淀粉酶的细菌，对其进行初步鉴定并进行了酶学性质
定该菌为Ｓａｈｌｏｃｓｉｅｅｉ。该茵产生的生淀粉酶最适温度为５ｔｙ适ｐ为６５该酶Ｈ．，
具有良好的热稳定性。Ｎ、、ａ对该酶有激活作用，ｅ、ｎ和ｃ对该酶有抑制作用。ａＫＣＦ¨ Ｚｕ关键词：淀粉糖化酶；菌；学性质生细酶
ｔｅｍａｔｂｉｔ．Ｔｈｎｙｃｉｉｓａｔｖｔｄｂ，ＫａｄＣａａｄｒｓｒｉｅｙＦｅＺｎｈｒｌｓａｌｙｉｅｅｚｍｅａｔｔｗａｃｉａｅｙＮａｖｙｎｎｅｔａｎｄｂ ’ 。
可以将淀粉传统工艺中的糊化、化和糖化合并为液
一
步直接进行糖化，果将其应用于无蒸煮的酒精如

植物淀粉生物合成酶的酶学特性分析

植物淀粉生物合成酶的酶学特性分析摘要论述了植物淀粉生物合成酶的酶学特性，主要包括ADPase催化合成ADP-葡萄糖、GBSS合成直链淀粉、多种SSS合成支链淀粉、SBE参与支链淀粉形成、DBE参与支链淀粉的合成等内容。

关键词植物；淀粉合成酶；酶学特性淀粉是植物体中贮存的养分，存在于种子和块茎中，各类植物中的淀粉含量都较高，其中大米中含淀粉62%～86%。

淀粉是人类食物的主要组成成分，仅禾谷类籽粒中的淀粉就提供了人类70%～80%的能量所需，同时淀粉也是食品和化学工业的重要原料。

随着淀粉工业的发展，淀粉深加工产品的数量不断增加，淀粉的应用范围不断扩大，对淀粉品质的要求也越来越高。

高等植物淀粉的生物合成在质体中进行，由ADP-葡萄糖焦磷酸化酶（ADPglucose Pyrophosphorylase，AGPase）、淀粉合（成）酶（Starch Synthase，SS）、淀粉分支酶（Starch Branching Enzyme，SBE）和淀粉脱支酶（Starch Debranching Enzyme，DBE）等协同完成。

整个淀粉生物合成途径可分为3个相关的过程：①ADP葡萄糖的产生；②支链淀粉的合成和淀粉粒的形成；③直链淀粉的合成（见图1）。

稻米淀粉的合成是由几个重要的酶所催化的。

蔗糖是合成淀粉的主要原料，在淀粉合成的最后阶段涉及到3类关键性的酶：ADPG焦磷酸化酶、淀粉合成酶和淀粉分支酶。

这些酶在淀粉合成和代谢中起重要作用。

决定淀粉的组成与结构的第1个酶是淀粉合成酶，细胞内ADPG焦磷酸化酶和可溶性淀粉合成酶活性的变化对淀粉产量的影响较大，淀粉粒结合淀粉合成酶与直链淀粉的合成有关，而分支酶则与支链淀粉的合成有关。

淀粉合成酶和淀粉分支酶共同影响淀粉颗粒的结构和特性，是影响淀粉品质的关键酶。

1ADPase催化合成ADP-葡萄糖在植物体内，淀粉合成的直接前体是ADP-葡萄糖。

ADP-葡萄糖由AGPase 催化合成，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。

黑曲霉淀粉酶酶学性质研究

黑曲霉淀粉酶酶学性质研究作者：徐圣佳刘明启应家振来源：《中国科技纵横》2012年第23期摘要:本实验对黑曲霉JLSP-15淀粉酶的酶学性质进行了研究。

该淀粉酶的最适温度为60℃,其热稳定性较差;最适pH为pH 6.0,在pH4.0-8.0范围内稳定性较好。

Ca2+对淀粉酶活性具有显著促进作用,而Fe3+和Cu2+对其活性具有强烈的抑制作用。

关键词:淀粉酶黑曲霉酶学性质淀粉酶是生物工艺学中最早实现工业生产的酶制剂品种,用途广,产量大。

淀粉酶根据作用的方式可分为α-淀粉酶（EC 3.2.1.1）与β-淀粉酶（EC 3.2.1.2）[1]。

α-淀粉酶是淀粉酶的一种,其作用于淀粉时,可从分子内部切开α-1,4 键而生成糊精和还原糖。

α-淀粉酶作为一种重要的工业酶制剂,被广泛地用于食品,发酵,纺织,造纸业,制药业和化学药品工业等工业,此外还扩展到临床,医学,分析化学等其他领域。

国内早期开发α- 淀粉酶主要来源来自细菌,其安全性与酶学特性限制其在食品工作中的应用。

黑曲霉是美国FDA公布的40多种安全微生物菌种之一,可以产生蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等。

本研究以实验室分离的黑曲霉JLSP-15为菌种,采用固体发酵（SSF）获得黑曲霉淀粉酶,系统研究了其酶学性质。

1、材料与方法1.1 菌种及固体发酵黑曲霉JLSP-15为本实验室分离、鉴定。

固体发酵培养基:新鲜麸皮9.5g,(NH4)2SO40.3g,KH2PO4 0.05g,(NH4)2SO4 0.15g,加入到250ml三角瓶中,再加入蒸馏水10.0ml,121℃灭菌。

固体发酵条件:向灭菌后的固体发酵培养接入1ml黑曲霉JLSP-15菌种,30℃恒温培养60h。

1.2 淀粉酶酶活测定方法在培养后的三角瓶中按1:20ml加入0.9%生理盐水,常温静置6h,然后过滤,滤液即为粗酶液。

淀粉酶活性测定采用DNS法[2,3]。

淀粉酶活力单位(U)定义为:在最适反应条件下,以每1min生成1μmol还原糖（以D-葡萄糖）所需的酶量作为一个酶活力单位。

高产淀粉酶菌株的分离鉴定及酶学性质研究PPT课件

06
结论
研究成果总结
确定了该菌株的最佳生长条件，包括温度、pH 和培养基成分。
通过基因工程技术对菌株进行改造，提高了淀粉酶的产量和性能。
成功分离出高产淀粉酶的菌株，经过鉴定为革兰氏阳性菌。
酶学性质研究表明，该菌株产生的淀粉酶具有较高的活性和稳定性，适用于多种淀粉类物质的降解。
对实际生产的指导意义
针对市场需求，研究开发具有更高活性和稳定性的淀粉酶突变体，提高产品的竞争力。
谢谢观看
菌株分离方法
采用适当的培养基和培养条件，通过划线分离、涂布分离、稀释分离等方法，将菌株从样本中分离出来。
分离得到的菌株鉴定
形态学鉴定
观察菌落的形状、大小、颜色、质地等特征，以及菌体细胞的形态、染色反应等，初步确定菌株的分类地位。
生化鉴定
通过测定菌株对碳源、氮源、维生素等物质的利用以及产生的代谢产物，进一步确定菌株的分类学特征。
高产淀粉酶菌株的分离鉴定及酶学性质研究ppt课件
目录
• 引言 • 高产淀粉酶菌株的分离 • 酶学性质研究 • 菌株遗传特性研究 • 实验结果与讨论 • 结论
01
引言
研究背景与意义
淀粉酶在食品、造纸、纺织等工业领域具有广泛应用，因此高产淀粉酶菌株的分离鉴定及酶学性质研究具有重要的实际意义。
酶活力的测定
在确定的发酵条件下，测定菌株产淀粉酶的活力，为后续的酶学性质研究提供依据。
03
酶学性质研究
酶活力的测定
酶活力定义
酶活力是指酶催化特定化学反应的能力，通常以单位时间内底物消耗或产物生成的量来表示。
酶活力测定方法
通过在一定条件下，测定酶促反应的初速度来计算酶活力，常用的方法有紫外可见吸收法、荧光法、电化学法等。

六α淀粉酶酶学性质测定II改

4.2 数据处理
• 各管在700nm测定OD700nm值（注意，比色皿务必洗净擦干）。
• 由于光密度（OD700nm）与显色，显色与底物浓度成正比，反应时间均为30min。计算1/V，以1/V为纵坐标作图。
• 由于测定所用单位为mg·mL-1换算为Km单位g·L-1 。 • 由1/V对1/[S]作图，求得回归方程，计算α-淀粉酶催化可
40℃ 5min
α-淀粉酶（ml）
1
反管加入0.25M醋酸10ml 取1ml反应液加入预先加入试管中的0.005%碘液中，振荡混匀
A(OD700nm) 1/A
1/[S]( mg·ml-1)
注意：每组（不同底物浓度）都需要设置D0为对照，计算出 U值。
chenhuicheng@
米氏常数的意义
• 由米氏方程可知，当反应速度等于最大反应速度一半时,
即V = 1/2Vmax时, Km = [S] 。
• 上式表示,米氏常数是反应速度为最大值的一半时的底物浓度。
• 因此,米氏常数的单位为mol/L(在本实验中单位为g/L)。
• 不同的酶具有不同Km值，它是酶的一个重要的特征物理常数。
六、α-淀粉酶酶学性质测定II
（米氏常数Km值的测定)
1.目的意义
由Leonor Michaelis和Maud Menten在1913年提出的米氏方程（Michaelis-Menten Equation）是酶学中表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的、表示一个酶促反应的起始速度V与底物浓度[S]关系的方程。
4.1 测定—取12支试管，分别标记，按照下表操作。
编号
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小麦种子中α-淀粉酶酶学性质的研究

Ｋｅｗｏｄｄ —ａｌｓｔｍｐｅａｕｅｐｖｌｅｉｈｉｉｏｓａｓｒｔｎｅｙｒｓｍｙａｅｅｒｔｒＨａｕｎｂｔｒｂｏｂｃａ
本实验以萌发种子为材料，提取得到了淀粉酶，利用Ｏ一淀粉酶和１ｔ３一淀粉酶对温度的差异，离出分了一粉酶，淀然后测定了仅一淀粉酶的活性并对淀粉酶的活性影响因素进行了讨论。不同的温度、Ｈｐ
ＡｂｔａｔＴｈｍｙａｅａｔｉｓｍｅｓｒｄｂｓｄｏａｕｅｎｔｏｈｕｎｔｙｏｌｏｅｔｒｕｇｔｒｈｄ — ｓｒｃｅａｌｓｃｉｔｉａｕｅａｅｎｍｅｓｒｍｅｆｔｅｑａｉｆｍａｔｓｈｏｈｓａｃｅｖｙｔ
ＳｕｄｎｔｚｍｏｏｙＣｈｒｃｅｆ仪一ＡｍｙａｅＦｒｍｈａｅｄｔｙｏｈｅＥｎｙｌｇａａｔｒｏｌｓｏＷｅｔＳｅｓ
ＷｕＨｕｔｏＬｅＷａｇＹａｉａａＩｒｕｎｌ
化合物（４ｍ处有最大吸收峰）其颜色深浅与麦芽糖浓度成正比，５０ａ，利用分光光度法测定棕红色的氨基化合物吸光值，从而得到产物麦芽糖的量，来表示酶的活性。定性的分析了温度、Ｈ值及激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响。ｐ
由此可得到酶活性的最适宜的温度和ｐＨ值，以及抑制剂的种类和用量。关键词淀粉酶温度ｐＨ值抑制剂吸光度
ｖｌｅｏｅｒｄｉｒｗｍｉｏｃｍｐｕｄｙｔｅｓｅｔｐｏｏｔｔｅｕｎｔｆｌｓａｈｗｅａｔ — ａｕｆｈｅｄｓｂｏｎａｎｏｏｎｓｂｈｐｃｒｈｔｍｅｒｏｇｔａｔｙｏｔｅｔｔｏｓｔｃｉｔｈｏｙ，ｑｉｍａｏｈｓｈｖ

萌发小麦淀粉酶酶学性质的研究

萌发小麦淀粉酶酶学性质的研究Enzymatic properties of the diastase from germinant wheat东北农业大学生命科学学院摘要：本文主要以萌发小麦为原材料，制作出麦芽糖标准曲线，再提取出淀粉酶粗酶液，研究温度、pH、激活剂及抑制剂对淀粉酶的活性的影响，测定萌发小麦种子不同位置α淀粉酶和总酶活力。

用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位质量样品一定时间生成的麦芽糖的量表示酶活力。

淀粉酶将淀粉水解，通过碘遇淀粉变蓝的性质及变色现象，可以判定反应速度以及最适温度、pH，同时激活剂可以增强酶活性和抑制剂可以抑制酶活性。

由实验可知低温抑制酶活性，高温使酶失活，40℃是小麦淀粉酶的最适温度；酶的催化活性受pH极为显著，酶在最适PH值时，表现活性最高，高于或低于最适pH值时，活性逐渐较低。

对于淀粉酶，酸性失活、碱性抑制，最适pH=5.6；氯离子是小麦淀粉酶的激活剂，铜离子是小麦淀粉酶的抑制剂。

关键词：酶活性淀粉酶温度 pH值激活剂抑制剂生物体内的新陈代谢是一切生命活动的基础。

新陈代谢是由许多复杂而有规律的化学反应组成，酶是生物体系中的催化剂，生物体内的各种化学反应包括物质转化和能量转化，都是在特定的酶催化下反应的，由于自然界中生物长期进化和组织功能分化的结果，酶在机体中受到严格的调控，使错综复杂的代谢过程有序进行。

可以说，没有酶的参与，生命活动即告终止[1]。

酶是一种具有催化活性的蛋白质，由氨基酸通过肽链连接而成,只有在适当的温度、pH和离子强度下才具有生物活性,有些酶还需要辅酶或者辅因子[2]。

酶有两种功能:其一，催化各种生化反应,是生物催化剂；其二，调节和控制代谢的速度、方向和途径，是新陈代谢的调节元件。

酶对细胞代谢的调节主要有两种方式:一是通过激活或抑制以改变细胞内已有酶分子的催化活性；另一种是通过影响酶分子的合成和降解，以改变酶分子的含量。

这种酶水平的调节机制是代谢的最关键的调节[3]。

萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究

萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究（黑龙江省哈尔滨市东北农业大学邮编：150030）摘要：测定萌发小麦种子中淀粉酶的活性并对淀粉酶的活性影响因素进行讨论，对淀粉酶活性的测定是通过测定淀粉酶分解淀粉所得产物——麦芽糖的量来表示酶的活性。

麦芽糖能和3,5-二硝基水杨酸还原成棕红色的氨基酸化合物（540nm出有最大吸收峰），其颜色与麦芽糖浓度成正比，利用分光光度计测定棕红色氨基酸化合物吸光值，从而得到麦芽糖的量，来表示酶的活性。

定性分析了温度，PH值及激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响（利用分解剩余的淀粉和碘液呈蓝色的程度来比较）。

由此得到最适宜的温度和PH值，以及抑制剂的种类。

关键词：淀粉酶、温度、PH、淀粉酶活度、抑制剂、激活剂。

本实验以萌发的小麦种子为材料，提取得到了淀粉酶，利用α-淀粉酶和β-淀粉酶的活性对温度的差异，分离出α-淀粉酶，并测定了α-淀粉酶的活性和α-淀粉酶和β-淀粉酶的总活性，计算出β-淀粉酶得活性，然后对淀粉酶活性影响因素进行了讨论。

不同温度、PH值条件下和抑制剂情况下淀粉酶对淀粉水解的程度不同通过定性的分析温度、PH值和抑制剂对淀粉酶活性的影响。

由此得到酶活性的最适宜的温度和PH值，以及抑制剂的种类。

1 材料与方法1.1 材料实验材料为小麦（Triticum aestivum L.），由东北农业大学生命学院生化教研室提供。

1.2 方法1.2.1 淀粉酶粗酶液的提取称取2g萌发3天的小麦种子，置于研钵中，加入少量石英砂和2mL蒸馏水，研磨匀浆。

将匀浆到入刻度试管中，定容至25.00mL。

提取液在室温下放置提取15-20min，每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。

然后在4000r/min转速下离心10min，将上清液倒入一个干净的试管中，即为淀粉酶粗酶液。

1.2.2 温度对淀粉酶活性的影响取8支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。

温度对淀粉酶活性的影响管号 A A B B C C D d缓冲液（PH5.6）/mL 1 1 1 1淀粉溶液/mL 2.5 2.5 2.5 2.5淀粉酶提取液/mL 1 1 1预保温/min 4℃室温40℃沸水浴混合A倒入a中B倒入b中C倒入c中D倒入d中酶促反应（10min）4℃室温40℃沸水浴碘液各3滴（滴管应先冷却至室温）显色1.2.3 pH对淀粉酶活性的影响取3支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。

β-淀粉酶小罐发酵及酶学性质分析的开题报告

β-淀粉酶小罐发酵及酶学性质分析的开题报告
一、选题背景
β-淀粉酶是一种能够将淀粉、糊粉等多糖分解为低聚糖的酶类，广
泛应用于食品、饲料、纺织、医药等领域。

β-淀粉酶小罐发酵是一种高
效生产β-淀粉酶的方法，对其进行酶学性质分析有助于了解其生产、精制、应用等方面的特点和优势。

二、研究目的
1. 确定β-淀粉酶小罐发酵的最优化条件；
2. 分析不同生产批次β-淀粉酶的酶学性质，包括酶活力、pH、温度等。

三、研究内容
1. β-淀粉酶小罐发酵的最优化条件：通过单因素实验和正交实验确
定最适宜的发酵条件，包括发酵温度、发酵时长、发酵pH等；
2. β-淀粉酶的酶学性质分析：对生产的β-淀粉酶进行酶学性质分析，包括测定其酶活力、pH值、温度稳定性等。

四、研究方法
1. β-淀粉酶小罐发酵：选用高产β-淀粉酶的菌株，通过单因素实验
和正交实验优化发酵条件；
2. β-淀粉酶酶学性质分析：测定β-淀粉酶的酶活力、pH值、温度
稳定性等酶学性质，探究其最适应的生产条件。

五、预期成果
1. 确定β-淀粉酶小罐发酵的最优化条件；
2. 分析不同生产批次β-淀粉酶的酶学性质，为β-淀粉酶生产的优化提供理论基础和实验数据。

真菌淀粉酶的酶学特性及其在酒类酿造中的运用研究

詢真菌淀粉酶的酶学特性及其在酒类酿造中的运用研究■文I田莉河北廊坊三河市市场监督管理扃甘*菌淀粉酶又名真菌a-淀粉酶（1,4-a-D-葡聚具T糖水解酶），是由米曲霉瓦尔经深层培养、提取等工序精制而成’近年来，我国进出口贸易环境不断改善，酿酒需求呈现了明显的上升趋势.探究真菌淀粉酶的酶学特性及其在酒类酿造中的运用，有助于优化酒类酿造环境，打破传统的酒类酿造框架限制，提高酿酒速度和成品酒的质量。

一、真菌淀粉酶的酶学特性1.真菌淀粉酶的性状。

真菌淀粉酶外观呈粉末状，主要应用于食品行业，温度适应范围为45°C-65°C,最适温度为45°C-55°C,酶活为3000u/mI-100000u/ml,无异味。

真菌淀粉酶为内切淀粉酶，可以迅速水解胶凝淀粉、直链淀粉和支链淀粉水溶液内部的a-1.4葡萄糖昔键，产生可溶性糊精及少数麦芽糖和葡萄糖：真菌淀粉酶的性状决定了其在酒类酿造中的优良应用前景，长时间反应会产生大量麦芽糖和少量葡萄糖的糖浆，这是真菌淀粉酶在啤酒酿造中应用的关键；在红曲黄酒酿造过程中.真菌淀粉酶能够起到糖化作用，全面优化酿造工艺，提高成品酒的质量，改善成品酒的口味，降低酿酒成本。

真菌淀粉酶的温度感应性较高，不同温度条件下的活力具有明显的差异性，因此，将真菌淀粉酶应用于食品行业时要结合实际生产条件和生产需求，对酶的作用温度进行合理控制'另外，pH值也将直接影响真菌淀粉酶的作用效果，相关金属离子则对真菌淀粉酶具有较强的抑制作用和激活作用，其中具有较强抑制作用的金属离子主要包括Fe3\Ba"、Cu2\Mn"和Fe",具有较强激活作用的金属离子主要为Ca"。

2.貢菌淀粉酶的分类。

按照酶学性质，可将真菌淀粉酶分为中性真菌淀粉酶、耐热或耐酸性真菌a-淀粉酶、具有生淀粉酶活力的真菌a-淀粉酶，其中，生淀粉酶能将未经蒸煮糊化的生淀粉直接转化成葡萄糖等发酵型糖供微生物生长和代谢.比传统的高温蒸煮糖化节约25%-30%的能耗'目前，真菌淀粉酶主要应用于食品行业，主要生产方式包括微生物发酵、枯草杆菌地衣、芽抱杆菌产生以及真菌（黑曲霉、米曲霉和根霉等）发酵。

六α淀粉酶酶学性质测定II改

六、α-淀粉酶酶学性质测定II
（米氏常数Km值的测定)
1.目的意义
由Leonor Michaelis和Maud Menten在1913年提出的米氏方程（Michaelis-Menten Equation）是酶学中表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的、表示一个酶促反应的起始速度V与底物浓度[S]关系的方程。
4.1 测定—取12支试管，分别标记，按照下表操作。
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
底物浓度[S]（mg·mL-1）
4
6
8
10
12
14
16
18
20
10mg/ml淀粉溶液（ml） 0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
醋酸缓冲液（ml）
2.6
2.4
2.2
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
预热
V V max[S] Km [S]
1 Km 1 1
V V max
[S]
V max
用1/V 对1/[S]作图，即可得到一条直线，该直线在Y轴的截距即为1/Vmax，在X轴上的截距即为 1/Km的绝对值，斜率为Km/Vmax。如图所示：
Km=-1/x
3.仪器设备
3.1 试剂
➢ 10mg/ml 可溶性淀粉 1500ml ➢ 0.005% 碘液 2000ml ➢ 0.25M 醋酸溶液 ➢ 0.4M pH6.0醋酸缓冲液
米氏方程形式如下所示：
V V max[S] Km [S]
• 其中，Vmax表示酶被底物饱和时的反应速度，Km值称为米氏常数，是酶促反应速度V为最大酶促反应速度值一

实验七、酶的特性(唾液淀粉酶性质的研究)

实验七、酶的特性（唾液淀粉酶性质的研究）［目的要求］1、进一步学习和了解酶的性质。

2、学会检查酶的性质的原理和方法。

［实验原理］酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度特异（专一）性，即一种酶只能对一种底物或一类底物（此类底物在结构上通常具有相同的化学键）起催化作用，对其他底物无催化反应。

例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都是催化糖苷键的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖。

还原糖产物可用本乃狄试剂鉴定。

通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素与酶活性的关系。

温度、PH对淀粉活性影响酶的催化活性受到温度的影响，在一定温度范围内，酶才有活性，且在最适温度下，酶反应速度最大。

大多数动物酶的最适温度为37℃-40℃，植物酶的最适温度为50℃-60℃。

对温度的稳定性与其存在形式有关，有些的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显变，但在100℃的溶液中很快地完成失去活性。

低温能降低或抑制的活性，但不能使失活。

酶的激活和抑制作用酶是具有高效专一催化活性的蛋白质，其活性常受温度PH及些物质的影响。

某些物质可以增加其活性，称为激活剂；某些物质能降低其活性，称为抑制剂。

很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且这种作用常常具有特异性。

但要注意的是激活剂和抑制不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂时却为另一种酶的抑制剂，而在高浓度时则为该酶的激活剂（如NaCl）。

［实验材料与设备］器材：试管和试管架、试管夹、恒温水浴箱、烧杯、冰浴（冰箱）、沸水浴（电磁炉）、移液管。

试剂：0.2%淀粉-0.3% NaCl液、0.1%淀粉、1%淀粉-0.3% NaCl液、1%CuSO4、1%NaCl、1%Na2SO4、2%蔗糖溶液，碘化钾-碘溶液，斑氏试剂。

［实验步骤］一、酶液的提取。

（1）唾液淀粉酶的制备。

二、酶的活性检验（1）温度对酶活性的影响。

摇匀，保持各自温度继续反应，5分钟后每隔1分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2min，各加1滴碘液，混匀。