淀粉酶酶学性质的研究

生物化学学号：

淀粉酶酶学性质的研究

学生姓名：####

指导教师：#####

所在院系：生命科学学院

所学专业：#######

学号：#####

#### 大学

中国·哈尔滨

2011 年12 月

摘要：

酶是酶是一种生物催化剂，它具有催化剂属性，同是也具有一些无机催化剂所不具有的特性。催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。是生物催化剂，能通过降低反应的活化能加快反应速度，但不改变反应的平衡点。本实验通过利用淀粉酶水解还原糖，还原糖能使3，5-二硝基水杨酸还原，生成棕色的3-氨基-5硝基水杨酸。淀粉酶活力与还原糖的量成正比，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位质量样品在一定时间内生成还原糖的量表示酶活力。酶的活性又同时受到温度、PH、激活剂抑制剂等的影响。

关键词：

淀粉酶活力温度 PH 激活剂和抑制剂

前言：

淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料，由于淀粉酶的高效性及专一性，酶退浆的退浆率高，退浆快，污染少，产品比酸法、碱法更柔软，且不损伤纤维。淀粉酶的种类很多，根据织物不同，设备组合不同，工艺流程也不同，目前所用的退浆方法有浸渍法、堆置法、卷染法、连续洗等，由于淀粉酶退浆机械作用小，水的用量少，可以在低温条件下达到退浆效果，具有鲜明的环保特色。

此酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子和激活因子，也有部分淀粉酶为非Ca2+依赖型。淀粉酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的α－1，4-链。因此，其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，最终产物在分解直链淀粉时以葡萄糖为主，此外，还有少量麦芽三糖及麦芽糖，其中真菌a-淀粉酶水解淀粉的终产物主要以麦芽糖为主且不含大分子极限糊精，在烘焙业和麦芽糖制造业具有广泛的应用。另一方面在分解支链淀粉时，除麦芽糖、葡萄糖、麦芽三糖外，还生成分支部分具有α-1，6-键的α-极限糊精（又称α-糊精）。一般分解限度以葡萄糖为准是35-50%，但在细菌的淀粉酶中，亦有呈现高达70%分解限度的（最终游离出葡萄糖）。

通过研究淀粉酶的性质，能使我们更好的了解它，并充分利用于工业生产、食品加工、医疗等产业。

1材料与方法

1.1材料

萌发的小麦种子（芽长约1cm）

1.2主要实验仪器及试剂

离心机分光光度计容量瓶研钵

电炉恒温水浴离心管

标准麦芽糖溶液（1mg/ml）

3，5-二硝基水杨酸

0.1 mol/l的柠檬酸缓冲液

1% 淀粉溶液等

1.3方法

1.3.1芽糖标准曲线的制作

取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表13-1加入试剂

表13-1 麦芽糖标准曲线制作

管号 1 2 3 4 5 6

麦芽糖标准液/ml 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0

蒸馏水/ml 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0

麦芽糖含量/ml 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0

3,5-二硝基水杨酸/ml 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0

光密度值0 0.038 0.103 0.166 0.231 0.299

摇匀，置沸水浴煮沸5分钟。取出后流水冷却，加蒸馏水定容只20ml. 以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定光密度。以麦芽糖含量为横坐标，光密度纵坐标，绘制标准曲线。

实验数据的记录如表13-2

麦芽糖含量0 0.4 0.8 1.2 1.6 2

光密度值0 0.036 0.1 0.161 0.226 0.283

标准曲线绘制如图13-3

图13-3 标准曲线

1.3.2粉酶液的制备

称取1g萌发3d的小麦种子（芽长约1cm），置于研钵中，加少量石英砂和2ml

蒸馏水，研磨匀浆，用6ml蒸馏水粉刺将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置

提取15—16 min , 每隔数分钟搅拌一次，使其充分提取。然后在3000 r/min

转速下离心10min ，将上清液倒入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液，用于淀粉酶活性的测定。

1.3.3活力的测定

取8支干净试管，编号，按表13-4加入试剂

表13-4 酶活力的测定

项目总淀粉酶活性的测定

试管号II-1 II-2 II-3 II-4 淀粉酶原液（ml）0 0 0 0 钝化-淀粉酶置于70℃水浴中15min,冷却

酶稀释液 (ml) 1.0 1.0 1.0 1.0 预保温将各试管和淀粉溶液置于40℃水浴中保温10min

PH5.6缓冲液（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0

0.4mol/LNaoH(ml) 4.0 0 0 0

1%淀粉（ml） 2.0 2.0 2.0 2.0 保温在40℃恒温水浴中5min

0.4mol/L NaoH(ml) 0 4.0 4.0` 4.0 将各试管摇匀，分别取2ml放入25ml刻度管中，再加入2mlDNS试剂混匀沸水浴

煮沸5min取出冷却，再用蒸馏水稀释至25ml混匀，在分光光度计上540nm处进

行比色，测定光密度值，记录测定结果。

原始数据记录：

编号II-1 II-2 II-3 II-4

光密度值0.017 0.193 0.175 0.194

结果计算：

查表得： B=1.4052 B’=0.1971

(α+β)-淀粉酶活性=[(1.405-0.1971)×8×258×50]/[2.05×2] =2946.59

1.3.4 淀粉酶学性质研究

1.3.4.1淀粉粉酶液的制备

称取2g萌发3d的小麦种子(芽长约1cm)，置于研钵中，加少量石英砂和2ml蒸馏水，研磨匀浆。将匀浆倒入刻度试管中，定容至25ml.提取液在室温下放置提取15-20min, 每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。然后在4000r/min转速下离心，将上清液倒入一个干净的试管中，即为淀粉酶液。

1.3.4.2温度对淀粉酶活性的影响

取10支试管，编号，按表13-5加入试剂，并记录观察到的结果

表13-5温度对淀粉酶活性的影响

管号 A a B b C c D d E e 缓冲（PH=5.6） 1 - 1 - 1 - 1 - 1 - 淀粉溶液/ml 2.5 - 2.5 - 2.5 - 2.5 - 2.5 - 淀粉酶提取/ml - 1 - 1 - 1 - 1 - 1 预保温10min 4℃室温40℃沸水浴沸水浴混合A倒入a B倒入b C倒入c D倒入d E倒入e 酶促反（10min）4℃室温40℃沸水浴

碘液各3滴

显色蓝色无色无色无色蓝色

1.3.4.3 PH对淀粉酶活性的影响

取三支试管，编号，按表13-6记录观察到的颜色