华南紫萁组培快繁途径研究

2019年第14期现代园艺华南紫萁（），又名贯众、大凤尾蕨，真蕨目紫萁科紫萁属蕨类植物，原产于亚热带湿润地区，常野生于山地、草丛或溪边。

该种是薄囊蕨类中最原始的类群，也是现存厚囊蕨纲和薄囊蕨纲过渡的少数种类之一[1]。

植株高1~2m，树形美观、姿态优雅、终冬不凋，可供庭园、绿化带栽植或室内盆栽观赏，在植物造景和生态绿化中的作用日益凸显。

其嫩苗、根茎、叶柄髓部还可入药，具有清热解毒、止血生肌、健脾利湿、舒筋活络等功效。

华南紫萁普遍采用分株和孢子繁殖进行人工繁育，对环境条件要求高，且繁殖周期长，受季节限制，不能满足日益增长的市场需求。

李杨介绍并提出蕨类组培存在的问题[2]；葛佳等以扇蕨茎尖为外植体，通过绿球体（GGB）途径获得了再生植株[3]；王淼等研究了不同培养基和激素配比对东北蕨菜组培快繁的影响[4]。

本研究旨在探索出适宜华南紫萁离体诱导的快繁方法，为促进其高频、稳定、产业化生产提供参考依据，对缓解野生资源压力，满足市场需求，丰富生态内涵具有重要意义。

1外植体选择及预处理以徐州生物工程职业技术学院琴湖基地成功引种的健康华南紫萁种苗为试验材料，采集带有幼孢子囊群，未完全展开的叶片作外植体。

用软毛刷轻轻去除外植体表面污垢，流水冲洗30min后，转入75%乙醇浸泡20s，0.1%氯化汞振荡清洗4min，无菌水冲洗5~7次，得华南紫萁无菌幼叶孢子囊外植体。

2GGB诱导培养将外植体首尾切除，剪成2cm小段，按照极性方向接种到B5+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA培养基中，培养基添加30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂，每瓶1个外植体，共接种60瓶，置于光照度2000~3000Lx，14h/d，温度23~27℃，湿度75%~85%的环境下培养。

10d后观察发现，培养基表面有许多散落下来的绿色小孢子，其渐渐膨大，从基部产生不规则的突起，形成绿色球状体（GGB）。

培养30d，GGB诱导率可达66.67%。

3GGB的增殖与分化培养将诱导出的GGB分割成直径为3~5mm的绿球体小块，重新接种到B5+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA培养基中继续培养。

培养30d后发现，GGB增殖膨大明显，平均直径为2.15cm，增殖率达79.8%，但是未见有不定芽分化现象产生。

将增殖后的GGB接种至1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭分化培养基中，培养过程中观察到有不定芽的分化，60d产生的平均芽数可达35个，分化率达58.3%，且叶平展健壮，生长速度较快。

4壮苗生根培养当新生不定芽长到约2cm，带2~3片健康平展叶片时，切下单芽接种至生根培养基中进行不定根诱导。

生根培养基为1/2MS+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭。

30d更换1次培养基，60d后观察有数条不定根产生，生长状况良好，生根率达100%，平均根数达3.5条。

若将NAA浓度继续提高，不定芽基部有愈伤化趋势，生根的小苗长势缓慢、叶片发黄、状态不佳。

5炼苗移栽将高3~4cm，具3~4根健康根系的组培苗置于温度为20~25℃、光强2000Lx，12h/d的条件下进行驯化炼苗。

之后小心取出，去除根部培养基，用质量分数为0.125%多菌灵溶液清洗根部，种植于泥炭∶火山岩配比为3∶1的基质中，用薄膜和透光率30%的遮阳网覆盖，30d后统计成活率达91.8%，小苗生长健壮。

我国蕨类植物资源丰富，种类繁多，约有2600多种，占全世界的1/5以上。

多数蕨类因其高雅飘逸的体态、碧绿青翠的叶色、精美的羽片图案、精致的脉序以及别致的孢子囊群排列[5]，已成为现代园林绿化行业的一个重要组成部分。

本研究提出了一种以幼孢子囊群诱导，GGB途径的华南紫萁组培繁殖方法，初步建立了其离体再生体系，有效解决了现有繁殖方法的弊端，为优质华南紫萁商品种苗生产提供了方法和途径。

GGB，又称绿色球状体（），是指由蕨类植物外植体诱导得到的绿色球状分生组织集合体，接种于分化培养基上，可以获得大量蕨类植物幼苗。

通过GGB诱导再生获得优质种苗，已是蕨类植物组培一种常见的研究途径。

本试验以华南紫萁幼孢子囊叶为外植体，在B5+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上，成功诱导出GGB，继续培养可对GGB进行有效增殖，但未见不定芽分化。

1/2MS配合1.0mg/L6-BA、0.1mg/L NAA及1.5g/L活性炭的情况下，分化率可达58.3%，说明低盐条件对不定芽分化的促进较明显。

生根培养以1/2MS+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭的培养基效果最好。

在泥炭∶火山岩配比为3∶1的基质中，组培苗成活率达91.8%，是华南紫萁组培苗移栽驯化的最佳基质。

华南紫萁组培快繁途径研究陶佩琳1马新永2高政平1（1徐州生物工程职业技术学院，江苏徐州221000；2徐州市铜山区大彭镇农机服务中心）摘要:以华南紫萁幼孢子囊叶为外植体，研究不同培养基对GGB诱导、增殖、分化及组培苗生根移栽的影响，初步建立了华南紫萁离体快繁体系。

关键词:华南紫萁；组培；快繁基金项目：2017年徐州市推动科技创新项目《观赏蕨类引种驯化和商品化繁殖技术研究》，（项目编号：KC17056）。

作者简介：陶佩琳（1984-），女，汉族，江苏南通人，硕士，副教授，研究方向：植物组织培养。

试验研究7--2019年第14期现代园艺GGB诱导繁殖作为蕨类组培繁育的一种有效途径，但也存许多亟待优化和解决的问题，如持续分生能力的保持、光照、温度等环境因子对其生长分化的影响等，期待下一步能够更加深入地进行研究。

参考文献[1]孙延军，莫贤华，徐晓晖，等.深圳马峦山华南紫萁群落及其物种多样性特征研究[J].植物研究，2011（1）[2]李杨，余蓉培，李慧，等.观赏蕨类植物组织培养研究进展[J].园艺学报，2012（9）[3]葛佳，路程，伍丹丹，等.扇蕨绿色小球体的诱导和植株再生[J].北方园艺，2010（1）[4]王淼，孙丽娜，吴春华，等.东北蕨菜的GGB组培移栽技术及驯化[J].园艺与种苗，2006（1）[5]吴兆洪，秦仁昌.中国蕨类植物科属志[M].北京：科学出版社，1991（责任编辑禾初）锦葵目的四大核心成员之一为锦葵科，锦葵科是进化最快的单系群，地球上大约有243个属以及4200余个种，目前大多分布在亚热带地区、热带，温带地区都有。

我国当前有20属80多种，有十分重要的用途，并且带来了十分乐观的经济效益，可以入药、纤维原料、观赏以及食用等等。

1锦葵科的现状和研究状况在系统学研究中，锦葵科一直有很大争议。

诸多研究人员把锦葵科各属分为不同的亚族以及族，本研究主要是以冯国楣分族法作为本次研究的基础，完成锦葵科的分类系统讨论。

锦葵科中成员的系统演化关系一直在讨论，关于族内系统演化关系，一大部分学者认为，在进化的早期已成为2支分别演化，但在每条分支上包含的属和其演化关系等方面还有很大的争议；在锦葵科各个族群间亲缘关系的探讨中，不同的研究人员对其在族之间的亲缘关系和其在系统中位置的确定有很大的争议。

除此之外，翅果麻属归属是历史遗留问题，有很大的争议，研究人员的看法均不相同；秋葵属在系统中的位置也有争议，研究者曾通过分子生物学和形态学研究秋葵属要归属木槿属还是独立为属进行了激烈的讨论，最新分析生物学研究证明，秋葵属是单系群，木槿属是其起源。

基因的选择性表达决定了花粉的形态特征，外界环境的影响只占一小部分，有较强的稳定性以及遗传保守性，以上这些特征是鉴定植物物种的依据之一，还为研究植物亲缘关系、演化以及起源提供了证据。

科学家曾经用扫描电镜以及光镜较全面地探究锦葵科花粉的属间界限以及演化趋势，外国科学家对外国部分地区的锦葵科花粉开展了系统学和形态分析；我国有关锦葵科花粉的研究中，王丽萍等对我国部分锦葵科中部分种类进行光学显微镜观察，科技的飞速发展，透射电镜技术和扫描电镜也应用到了锦葵科的研究过程中，以前由于科学技术的限制，只停止在对锦葵科花粉形态的研究上，研究种、属十分少，有很大的空白区域。

科学家收集了我国十五属锦葵科植物以及外类群的花粉材料，对以上植物进行了光学显微镜以及扫描电镜的观察，为今后锦葵科的系统学研究提供证据。

其中一部分植物花粉是第一次进行光学显微镜观察报道，另一部分植物花粉是第一次进行电子显微镜观察报道，弥补了我国在这方面研究的空缺。

2结论2.1锦葵科花粉演化趋势研究人员通过充分分析花粉形态，并且结合前辈的研究，能够推断出锦葵科花粉演化趋势。

花粉大小：中等＜较大＜巨大；萌发孔：三孔沟＜数量较少散孔＜更多散孔；刺状纹理：短尖＜长尖或者钝；基部膨大＜基部平；有单型刺＜有二型刺。

由上述可以看出，锦葵科花粉逐渐演化方向是中等大小、三孔沟、有基部膨大短尖刺花粉体积增大、多个散孔。

2.2锦葵科花粉形态分类学的价值锦葵目有4个核心科亲缘关系很近，因此，科之间的界限有很大争议，一些属的位置一直在这四科之间改变。

人们认为锦葵科与木棉科的亲缘关系最近。

研究证明，锦葵科植物的花粉为圆球形，有刺状纹理，有三孔沟或者散孔，有网状纹理，两科间花粉的形态有十分明显的差异。

而木槿族以及翅果麻属的花粉和锦葵科的特征十分相似，应归入锦葵科中。

2.3锦葵科花粉形态系统学意义浅谈锦葵科植物花粉形态以及系统学的意义张妙娟（山西运城农业职业技术学院，山西运城044000）摘要:本次研究主要是对我国十五属锦葵科的花粉特征进行了光学显微镜以及扫描镜观察和对比分析，其中一部分植物花粉是第一次进行光学显微镜观察报道，另一部分植物花粉是第一次进行电子显微镜观察报道，为接下来的花粉形态研究提供了依据。

根据结果可以看出：我国锦葵科中有十五属植物花粉粒径较大，形状为圆形，直径大约在53.7～217.7μm，表面有刺状纹理，有孔沟或者散孔；演变趋势为中等大小、三孔沟、有基部膨大短尖刺花粉体积增大、多个散孔。

锦葵科花粉在形态特征上划分有十分重要的意义，根据花粉形态划分可以将其分为4族。

木槿族以及翅果麻属曾经被放入到木棉科中，但根据研究发现木槿族以及翅果麻属和锦葵科有明显的差异，将这2类群归在锦葵科，将翅果麻属归入木槿族中。

花粉学的研究证明了锦葵族与棉族有较紧密的亲密关系，苘麻亚族有可能是锦葵族最原始的类群关键词:花粉形态；系统学；锦葵科；锦葵目作者简介：张妙娟（1982-），女，山西运城人，硕士研究生，讲师，研究方向：植物系统学和资源开发利用研究。

试验研究8--。