高效液相色谱法-仪器
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
对活塞和液缸的密封要求高、更换溶液不方便、 价格昂贵
主要用于微柱液相色谱或超临界流体色谱仪
百度文库复型泵
工作原理 电机带动凸轮转动，凸轮驱动一活塞杆作往复运动， 通过单向阀的开启和关闭，定期将贮存在液缸里（0.10.5ml）的液体以高压连续输出
优点 可在高压下连续以恒定的流量输液 液缸容积很小，只有几十至几百微升，其柱塞尺寸小 易于密封，柱塞、单向阀的阀球和阀座使用人造红宝 石材料，造价低，更换溶剂方便，特别适用于梯度洗 脱
40~50MPa· cm-2。 输出流量范围宽。一般为0.1~10mL/min。 输出流量稳定，重复性高。流量控制的精密度
应小于1%。
高压泵的种类
恒压泵：
又称气动放大泵，是输出恒定压力的泵。目前 这种泵只用于装填色谱柱。
恒流泵
恒流泵可输出恒定体积流量的流动相。 恒流泵又分为注射型泵（注射式螺旋泵）和往
复式泵。
注射型泵
工作原理： 用一台步进电机驱动注射泵的活塞把液流从 泵腔中挤出，泵腔体积较大（250－500mL）， 密封性好的活塞把泵腔中的液体等速流出。
优点： 在高输出压力下给出精确无脉动、可重现的 流量
缺点：
泵液缸容积有限，每次流动相输完后需重新吸 入，当流量较大时不利于连续工作
进
分
检
数据
液
样
离测
处理
系
器
柱
器
系统
统
1.高压输液系统
溶剂贮存器 过滤器 脱气装置 高压泵 阻尼器 梯度洗脱装置
溶剂贮存器
材料：耐腐蚀，玻璃、不锈钢、氟塑料等 容积：分析型0.5-2升 放置：高于泵体，保持一定的静压差 密闭：防止溶剂挥发、空气重新溶解
过滤器
二仪器
高效液相色谱仪可分为
{ { 分析型
整机型
制备型
组合型
{ 凝胶色谱仪 离子色谱仪 氨基酸分析仪
工业用高效液相色谱系统
常见的高效液相色谱仪
高效液相色谱仪和气相色谱仪的流程基 本相同。从构成仪器功能块可分为五大 系统：流动相供给和输送系统、进样器、 分离柱、检测器、数据处理系统。
输
自动进样器
高压梯度
采用两台或两台以上的高压泵按比例控制流量 输出溶剂直接混合成流动相相进行洗脱。
低压梯度
几种不同的溶剂由比例 阀控制各个溶剂进入低 压混合室的量，混合后 由高压泵输入进入色谱 系统进行洗脱。
梯度洗脱与定度洗脱
梯度速度
梯度曲线
注意问题
溶剂的互溶性 溶剂纯度 混合溶剂的粘度 脱气
溶剂纯度
2.进样系统
进样系统包括进样口、注射器和进样阀等， 它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱 上进行分离。
高效液相色谱仪采用阀进样方式。分手动 进样和自动进样。
手动进样
定量环进样
装样
（ＬＯＡＤ）
进样阀
开始分析
（ＩＮＪＥＣＴ）
废液
淋洗液
淋洗液
废液
样品
至分离柱 样品环
样品
至分离柱
缺点：
输出的流量存在脉动
往复式恒流柱塞泵
阻尼器
梯度淋洗装置
梯度洗脱指采用两种（或多种）不同极性的溶剂， 在分离过程中按一定程序连续变化流动相组成比 和极性的一种洗脱模式，使每个流出的组分都有 合适的容量因子，样品中的所有组分可在最短的 分析时间、以合适的分离度获得圆满地选择性地 分离。对于复杂混合物，特别是保留性能相差较 大的混合物的分离梯度洗脱是一种极为重要的手 段。梯度洗脱装置可分为高压梯度或低压梯度两 种模式。
脱气装置
流动相进入高压泵前必须脱气，否则容易 在系统的低压部分放出气泡，影响高压泵 工作，色谱柱的分离效率和检测器的稳定， 使固定相或样品发生化学反应。
脱气方法：
减压：可能影响流动相组成 吹氦：简单方便，氦气贵 超声：方便，普遍使用
脱气效率
高压泵
要求：
泵体材料能耐化学腐蚀。 能在高压下连续工作。通常要求耐压
主要用于微柱液相色谱或超临界流体色谱仪
百度文库复型泵
工作原理 电机带动凸轮转动，凸轮驱动一活塞杆作往复运动， 通过单向阀的开启和关闭，定期将贮存在液缸里（0.10.5ml）的液体以高压连续输出
优点 可在高压下连续以恒定的流量输液 液缸容积很小，只有几十至几百微升，其柱塞尺寸小 易于密封，柱塞、单向阀的阀球和阀座使用人造红宝 石材料，造价低，更换溶剂方便，特别适用于梯度洗 脱
40~50MPa· cm-2。 输出流量范围宽。一般为0.1~10mL/min。 输出流量稳定，重复性高。流量控制的精密度
应小于1%。
高压泵的种类
恒压泵：
又称气动放大泵，是输出恒定压力的泵。目前 这种泵只用于装填色谱柱。
恒流泵
恒流泵可输出恒定体积流量的流动相。 恒流泵又分为注射型泵（注射式螺旋泵）和往
复式泵。
注射型泵
工作原理： 用一台步进电机驱动注射泵的活塞把液流从 泵腔中挤出，泵腔体积较大（250－500mL）， 密封性好的活塞把泵腔中的液体等速流出。
优点： 在高输出压力下给出精确无脉动、可重现的 流量
缺点：
泵液缸容积有限，每次流动相输完后需重新吸 入，当流量较大时不利于连续工作
进
分
检
数据
液
样
离测
处理
系
器
柱
器
系统
统
1.高压输液系统
溶剂贮存器 过滤器 脱气装置 高压泵 阻尼器 梯度洗脱装置
溶剂贮存器
材料：耐腐蚀，玻璃、不锈钢、氟塑料等 容积：分析型0.5-2升 放置：高于泵体，保持一定的静压差 密闭：防止溶剂挥发、空气重新溶解
过滤器
二仪器
高效液相色谱仪可分为
{ { 分析型
整机型
制备型
组合型
{ 凝胶色谱仪 离子色谱仪 氨基酸分析仪
工业用高效液相色谱系统
常见的高效液相色谱仪
高效液相色谱仪和气相色谱仪的流程基 本相同。从构成仪器功能块可分为五大 系统：流动相供给和输送系统、进样器、 分离柱、检测器、数据处理系统。
输
自动进样器
高压梯度
采用两台或两台以上的高压泵按比例控制流量 输出溶剂直接混合成流动相相进行洗脱。
低压梯度
几种不同的溶剂由比例 阀控制各个溶剂进入低 压混合室的量，混合后 由高压泵输入进入色谱 系统进行洗脱。
梯度洗脱与定度洗脱
梯度速度
梯度曲线
注意问题
溶剂的互溶性 溶剂纯度 混合溶剂的粘度 脱气
溶剂纯度
2.进样系统
进样系统包括进样口、注射器和进样阀等， 它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱 上进行分离。
高效液相色谱仪采用阀进样方式。分手动 进样和自动进样。
手动进样
定量环进样
装样
（ＬＯＡＤ）
进样阀
开始分析
（ＩＮＪＥＣＴ）
废液
淋洗液
淋洗液
废液
样品
至分离柱 样品环
样品
至分离柱
缺点：
输出的流量存在脉动
往复式恒流柱塞泵
阻尼器
梯度淋洗装置
梯度洗脱指采用两种（或多种）不同极性的溶剂， 在分离过程中按一定程序连续变化流动相组成比 和极性的一种洗脱模式，使每个流出的组分都有 合适的容量因子，样品中的所有组分可在最短的 分析时间、以合适的分离度获得圆满地选择性地 分离。对于复杂混合物，特别是保留性能相差较 大的混合物的分离梯度洗脱是一种极为重要的手 段。梯度洗脱装置可分为高压梯度或低压梯度两 种模式。
脱气装置
流动相进入高压泵前必须脱气，否则容易 在系统的低压部分放出气泡，影响高压泵 工作，色谱柱的分离效率和检测器的稳定， 使固定相或样品发生化学反应。
脱气方法：
减压：可能影响流动相组成 吹氦：简单方便，氦气贵 超声：方便，普遍使用
脱气效率
高压泵
要求：
泵体材料能耐化学腐蚀。 能在高压下连续工作。通常要求耐压