里氏木霉
里氏木霉几丁质酶基因的克隆及其同源转化研究
关键词：里 氏木霉 ；几丁质 酶； Ｂ 。 Ｎ ． 乙酰氨基 葡萄糖苷酶； ｎ ａ ｇ ｌ
中图分类号： Ｑ５ ５ 文献标识码 ： Ａ 文章编号： １ ０ ０ ３ ． ４ ２ ７ １ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３ ． ０ ３ １ ５ ． ０ ７
几 丁质（ Ｃ ｈ ｉ ｔ ｉ ｎ ） 是 由 Ｎ． 乙酰一 ｐ — Ｄ－ 氨基葡 萄糖 以 ｐ 一 １ ， ４糖 苷键 连 接 的不溶性 高 分子 聚合物 ，是 全球储 量仅 次于 纤维素的可再生资源… ，同时也是真菌、 原生动物、 节肢动物的重要生理结构物质． 几丁质酶可专一性地水解几 丁质 ，在动物 、植物 、微 生物 中广泛 存在 ， 参 与诸 多重 要 的生理 过程 ．不仅在 食 品、饲 料工 业 中有着 巨大 的发 展 前景； 对植物病虫害的防治具有安全、 无污染等优点；同时， 在人类传染性疾病和肿瘤抑制等方面的也具有重要 研究 价值 ｌ － 引 ．
第３ ９卷 第 ３期
眠
族 ｕｒ ｍ ｎｍ ｎ ａ ｏｆＳ ｌ ｏｆＳ ｏｕｔ ｈｗ ｈｗｅ ｅ ｓ ｔ Ｕｎｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｒ Ｎａｔ ｉ ｏｎａ ｔ ｌ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ Ｎ － ａ ｔ ｕ ｒ ａ Ｉ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ
摘
要： 丝状真 菌里 氏木 霉（ Ｔ ｒ ｉ ｃ ｈ ｏ ｄ ｅ ｒ ｍａ ｒ ｅ ｅ ｓ ｅ ｉ ） ９ ￣ 切几丁质 酶具有 Ｂ ． Ｎ ． 乙酰氨基 葡萄糖苷酶活性．根据里 氏木霉基 因组
数据库 获得 了一 个编号 为 ２ １ ７ ２ ５的外切 几丁质酶 ｎ ａ ｇ ｌ 基 因序 列， 根据检 索结果，从里 氏木 霉 ＱＭ９ ４ １ ４基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 中克 隆获得 １ ． ９ ｋ ｂ的基因片段 ．构建 了以 ｃ ｂ ｈ ｌ为启动子和终止子 的重组质粒 ｐ Ｃ ｂ ｈ Ｎａ ｇ ，与含有 ｐ ｙ ｒ ４基因的质粒 ｐ Ｓ Ｋ ｐ ｙ ｒ ４共
一种里氏木霉及其应用的制作方法技术
一种里氏木霉及其应用的制作方法技术里氏木霉（Rhizopus oligosporus）是一种常见的真菌，被广泛应用于食品发酵工业中，比如制作豆豉、豆腐等。
下面将详细介绍一种里氏木霉及其应用的制作方法技术。
第一步：筛选和培养菌种从自然环境中收集到的分离物中筛选出里氏木霉的分离菌株。
将分离菌株转移到含有理想培养基的平板上，用微量酵母爆发培养基增殖，确保菌株的纯度和增殖能力。
第二步：制备里氏木霉培养基选择合适的培养基成分制备里氏木霉培养基。
常见的培养基配方包括麦芽提取物、葡萄糖、酵母提取物、氨基酸等。
将所有成分按照一定比例加入到蒸馏水中，并调整pH值至适宜范围。
第三步：菌种发酵和扩大培养将筛选和培养得到的菌种接种到里氏木霉培养基中，利用摇床、发酵罐等发酵设备进行培养，控制培养温度、转速、通气速率等因素使得菌种能够充分发酵。
通过扩大培养，得到足够的里氏木霉菌体以供下一步操作使用。
第四步：提取和制备里氏木霉将发酵得到的里氏木霉菌体经过离心、洗涤等操作，去除培养基中的杂质，然后将菌体冻干或者通过其他方法进行干燥。
干燥的木霉菌体即为制备得到的里氏木霉。
第五步：里氏木霉的应用将制备得到的里氏木霉用于食品和饮料的发酵过程中。
比如，在豆豉的制作过程中，将豆子进行煮沸、凉干后与里氏木霉混合发酵，控制发酵时间和温度，使得豆子能够充分发酵，产生特殊的香味和风味。
在豆腐的制作过程中，将大豆磨浆，煮沸凝结后与里氏木霉混合发酵，使得豆腐口感更加细腻鲜嫩。
除了在食品发酵工业中的应用，里氏木霉还可以用于生物酶的生产和环境污染治理等领域。
通过在培养基中添加特定的底物和条件，可以使得里氏木霉产生丰富的酶类物质，比如纤维素酶、脂肪酶等。
这些酶可以应用于农产品加工、纺织工业中。
此外，里氏木霉还可以利用其菌丝结构，去除废水中的有机废弃物和重金属离子等，起到环境保护的作用。
总结：以上是一种里氏木霉及其应用的制作方法技术的简要介绍。
通过筛选和培养菌种、制备培养基、发酵和扩大培养、提取和制备菌体等步骤，可以制备得到里氏木霉菌体。
里氏木霉
毛霉菌|毛霉|毛豆腐菌种一、毛霉菌概述：毛霉菌又叫黑霉、长毛霉。
毛霉菌是接合菌亚门接合菌纲毛霉目毛霉科真菌中的一个大属。
以孢囊孢子和接合孢子繁殖。
毛霉在土壤、粪便、禾草及空气等环境中存在。
在高温、高湿度以及通风不良的条件下生长良好。
毛霉的用途很广，常出现在酒药中，能糖化淀粉并能生成少量乙醇，产生蛋白酶，有分解大豆蛋白的能力，我国多用来做豆腐乳、豆豉。
许多毛霉能产生草酸、乳酸、琥珀酸及甘油等，有的毛霉能产生脂肪酶、果胶酶、凝乳酶等。
常用的毛霉主要有鲁氏毛霉和总状毛霉。
腐生，广泛分布于酒曲、植物残体、腐败有机物、动物粪便和土壤中。
有重要工业应用，如利用其淀粉酶制曲、酿酒；利用其蛋白酶以酿制腐乳、豆豉等。
代表种如总状毛霉、高大毛霉、鲁氏毛霉等。
毛霉菌菌种可在10～38℃左右生长，最适温度在20～25℃。
本菌种菌丝洁白浓密似兔毛状，可在豆腐上旺盛生长，做出的腐乳的风味优良。
二、毛霉菌公司产品介绍：毛霉的作用原理：在豆腐的发酵过程中，毛霉产生的蛋白酶将将豆腐中的蛋白质分解为肽和氨基酸。
豆腐坯上接种毛霉，经过培养繁殖，分泌蛋白酶、淀粉酶、谷氨酰胺酶等复杂酶系，在长时间后发酵中与淹坯调料中的酶系、酵母、细菌等协同作用，使腐乳坯蛋白质缓慢水解，生成多种氨基酸，加之由微生物代谢产生的各种有机酸，与醇类作用生成酯，形成细腻、鲜香等豆腐乳特色。
毛霉发酵腐乳的两个步骤：（1）促长和控长：即先创造适宜的条件让毛霉生长，当发酵到一定程度时，再加盐抑制毛霉的生长。
加卤汤的作用有两个方面，一是进一步控制毛霉和其他杂菌的生长，避免腐乳腐败，延长腐乳的贮藏时间；二是改变腐乳的口感和风味。
（2）后发酵：前期发酵完成后，腐乳还有一定的生味，此时并不适合直接食用，需要一周以上的后期发酵才能达到最佳效果。
后期发酵利用的是被杀死后的毛霉裂解释放出来的各种分解酶的作用，经过后期发酵，腐乳就能直接食用了。
使用方法：（1）将硬实一点的新鲜豆腐切成3厘米见方的小方块，蒸熟，均匀放在平盘上。
里氏木霉
里氏木霉一、里氏木霉概述：里氏木霉是多细胞的真核微生物，红褐肉座菌的无性型,隶属于丛梗孢目木霉属。
其作为工业菌株用于生产分解不同植物材料的酶类，包括纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等，已有多年历史。
里氏木霉所产生的一种主要的纤维酶一纤维二糖水解酶，由单拷贝基因编码，其产量可达里氏木霉胞外分泌性蛋白总量的50%。
由此可见，纤维二糖水解酶启动子是很强的启动子。
因此在对里氏木霉的遗传改造中，常利用纤维二糖水解酶的启动子与终止子序列构建载体，并利的前导肽序列引导重组蛋白进行分泌性表达。
里氏木霉具有极好的合成蛋白和分泌蛋白的能力；并具有真核的分泌机制，很可能还具有与哺乳动物系统相似的蛋白修饰性能，如：高甘露糖型和N-糖基化等。
由于里氏木霉具有以上优良性能，再加之其工业化规模发酵条件已比较成熟，这些都促进了对里氏木霉的遗传改造，为同源或异源分泌性蛋白的产生提供了一条行之有效的途径。
里氏木霉不仅具有适于蛋白生产的诸多优点，且对人没有毒性，在产酶条件下也不产生真菌毒素和抗生素。
近年来的实践表明，经过基因工程手术改造的里氏木霉重组菌株是安全无害的。
二、里氏木霉使用说明：里氏木霉主产纤维素酶-纤维二糖水解酶，具有极好的合成蛋白和分泌蛋白的能力，一般采用的发酵方法有两种：固态发发酵和液体深层培养发酵生产纤维素酶，产生的纤维素酶是胞外酶。
现在的固体发酵比较的成熟，液态发酵一般采用的是流加发酵。
主要用于秸秆腐熟剂添加使用。
用途：作为饲料添加剂使用,作饲料用：1.提高饲料原料中营养物质的转化，提高原料的消化能力和代谢能力，提高动物生产性能。
2.提高内源酶的分泌及活性，促进营养物质的消化吸收，提高饲料利用率。
3.促进动物肠道内有益菌的生长从而抑制有害菌的繁殖，有效提高了动物的免疫力，并有效防止腹泻。
使用量：建议添加80-100克/吨。
添加方法：均匀的混合于粉料中保存方法:25℃以下低温干燥保存注意事项:防暴晒、雨淋，避免高温或阳光直射；防止与皮肤或粘膜性物质接触。
里氏木霉运用在食品方面的例子
里氏木霉运用在食品方面的例子
里氏木霉是一种广泛存在于自然界中的真菌，也被称为木壳霉。
它可以分解木质纤维素，并生产出一种名为纤维素酶的酶类物质。
纤维素酶在食品加工、酿造等领域中被广泛应用。
在食品加工中，纤维素酶可以帮助加速果蔬的软化和腐烂，促进果蔬中的营养物质释放出来，提高果蔬的食用价值。
同时，它还可以用于制作果蔬汁和果蔬酸奶等产品，使得产品口感更加细腻、光滑。
在酿造领域中，纤维素酶可以帮助酿酒师加速酒酵过程，提高酒的产量和质量。
同时，它还可以对啤酒花进行处理，使得啤酒的苦味更加柔和、口感更加醇厚。
除此之外，里氏木霉还可以用于生产生物燃料、制造纸浆等领域。
由此可见，里氏木霉在工业生产中有着广泛的应用前景，也能够为人们的生活和健康带来不少好处。
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里氏木霉及其纤维素酶高产菌株的研究进展_覃玲灵
绿色木霉 ( T richoderm a virid e)因其在 1944年第 二次世界大战期间一直在毁坏驻扎于东南亚所罗门 群岛上的美军的棉衣和帆布帐篷而被人们发现 [ 35 ] 。
关注。此外, 一些 T richoderm a 属还具有抗性特征, 能够作为生物控制菌对抗植物病原体 [ 29- 31] 。
T richoderm a 的概念最早由 P ersoon[ 32] 引 入, 开 始概括的 T richod erm a 主要有 4 个菌种, 即 T. aure um、T. nigrescens、T. roseum 以及 T. viride, 不同分生孢 子的颜色是种间的区别, 现在人们已经认识到它们 是彼此无 关的种类。T richoderma 现在仅 用于描述 以 T. viride为代表的绿色类型的真菌 [ 34] 。 R ifa it[ 33] 依据微观特征, 界定了 T richoderm a 属。T richoderm a 属的分生孢子梗排列成规则的树状结构而且是重复
( Institute of B io log ical and Environm ental Science& T echnology, Central South University of Forestry and Technology, Changsha 410004)
Abstrac:t A s w ide ly deve lopm ent and utilization of ce llulose in the fie ld of energy, m ate rials and chem istry industry, T r ichoderma reesei has been caught m ore and m ore attention for its be ing a k ind of im portant ce llu lase stra in for industry. Fo r enhanc ing its cellu lase product, peop le hav e done a lot of work on it, and ob tained seve ra l cons iderably good mutant strains. T o learn the genom e o fT r ichoderma reesei and its mu tant strains is he lp fu l to us understand its system o f ce llulase hype rproduction, also he lp fu l to people construct its g enet ic eng ineering stra in in the future. T h is article introduced the background o f T richoderma reesei and part of its hyperce llulase product stra ins, a lso elabo rated the research deve lopm ent of its m utan t strains genom e in the recent yea rs.
里氏木霉纤维素酶
“里氏木霉纤维素酶”资料合集目录一、里氏木霉纤维素酶基因转录调控因子鉴定及纤维素酶高产菌株构建二、里氏木霉纤维素酶基因的克隆及其在毕赤酵母中表达的研究三、里氏木霉纤维素酶的分离纯化与酶学性质研究四、里氏木霉纤维素酶基因转录调控因子yr1功能研究及铜离子响应高效表达体系的建立五、里氏木霉纤维素酶的分离纯化及酶学性质六、里氏木霉纤维素酶的分离纯化及应用的研究里氏木霉纤维素酶基因转录调控因子鉴定及纤维素酶高产菌株构建本文旨在鉴定里氏木霉纤维素酶基因的转录调控因子，并通过基因工程手段构建高产纤维素酶的菌株。
我们利用基因组学和生物信息学方法，对里氏木霉的纤维素酶基因进行全面的分析，找出可能的转录调控因子。
接着，通过基因敲除和互补实验，对这些因子的调控作用进行验证。
我们将这些调控因子整合到一个高产纤维素酶的底盘菌株中，以期实现酶产量的进一步提升。
本研究不仅有助于深入理解里氏木霉纤维素酶基因的转录调控机制，同时也为工业化生产纤维素酶提供了新的策略和工具。
关键词：里氏木霉；纤维素酶；基因转录调控；高产菌株；基因工程随着生物技术的快速发展，利用微生物生产纤维素酶已经成为了一个研究的热点。
里氏木霉是一种能够高效降解纤维素的真菌，其产生的纤维素酶在工业上有广泛的应用。
然而，目前里氏木霉的纤维素酶产量还有待提高，因此研究其基因转录调控机制，并构建高产菌株具有重要意义。
利用基因组学和生物信息学的方法，对里氏木霉的纤维素酶基因进行全面的分析，找出可能的转录调控因子。
通过同源重组技术，对筛选出的转录调控因子进行敲除或互补，观察其对纤维素酶表达的影响。
将筛选出的转录调控因子整合到一个高产纤维素酶的底盘菌株中，以期实现酶产量的进一步提升。
通过基因组学和生物信息学分析，我们成功地鉴定出了多个可能影响纤维素酶表达的转录调控因子。
这些因子包括转录因子、miRNA等。
通过基因敲除和互补实验，我们发现这些转录调控因子对纤维素酶的表达具有显著的影响。
里氏木霉原生质体的制备及转化
里氏木霉原生质体的制备及转化摘要本实验通过将含潮霉素B抗性标记的质粒pAN7-1转化至里氏木酶原生质体中，在含100ug/ml潮霉素B的PDA平板上筛选转化子。
并予以验证，结果表明，在1kb处有潮霉素抗性基因组，其中浓度为107个/ml的转化子效果最好。
关键词里氏木酶原生质制备转化前言纤维素是自然界提供给人类的最宝贵的财富，植物每年通过光合作用产生数千亿吨的纤维素，但目前只有一小部分用于纺织、造纸、建筑和饲料等方面。
木霉属是迄今被认为纤维素酶成分最全面，分解天然纤维素活力最高的一类菌。
在育种方面利用高能电子、紫外线、亚硝基胍处理和原生质体融合等方法，使酶的活力得到很大的提高。
本试验对里氏木霉原生质体的制备及转化进行了研究,为进一步的育种工作奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株及质粒来源里氏木霉QM9414和质粒pAN7-1由深圳大学生命科学学院S402实验室刘刚老师提供。
1.1.2试剂及培养基的配制1.1.2.1 Mandels 营养盐浓缩液配制(NH4)2SO4 14 g，尿素 3 g，KH2PO420 g，CaCl2⋅2H2O 4 g，MgSO4⋅7H2O 3 g，ddH2O 定容至1L1.1.2.2 Mandels 微量元素浓缩液配制FeSO4⋅7H2O 5 g，ZnSO4⋅7H2O 1.7 g，CoCl2⋅6H2O 23.7 g，MnSO4⋅H2O 1.6 g，ddH2O 定容至1L1.1.2.3 1 M柠檬酸缓冲液配制柠檬酸210 g，NaOH（纯度96 %）78 g，ddH2O 750 ml，冷却后定容至1L1.1.2.4 60％的PEG400050 mM CaCl2，10 mM Tris·Cl（pH 7.5），60 g PEG4000加水定容到100 ml1M CaCl25ml，1M Tris·Cl（pH 7.5）1ml，PEG4000 60g，ddH2O定容至100 ml1.1.2.5 STC山梨醇218.6g（所需浓度为1.2 M），1M Tris·Cl（pH 7.5）10ml（所需浓度为10 mM），1M CaCl2 50ml（所需浓度为50 mM），ddH2O 定容至1L1.1.2.6 PDA培养基去皮土豆200g，葡萄糖20g，琼脂(Agar) 15g，ddH2O定容至1L其中20 %土豆浸出液制作方法如下：将土豆去皮切碎，每20 g土豆加水100 ml，置电炉上煮20分钟，用纱布过滤，定容。
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木霉菌
产品用途：作为肥料添加剂使用,主要功能有:
1.用于秸秆还田，加快秸秆等有机物中纤维素、半纤维素的腐熟过程。
2.释放多种促进植物生长的物质，能够促进作物根系发育，生长健壮，增强抗病等抗逆性，减少病虫害发生。
3.木霉菌能加速有机质的分解，为作物制造速效养分提供动力，能分解连作有毒有害物质，防治重茬；同时补充土壤中有益微生物数量，进一步促进土壤中物质和能量转化，腐殖质的形成和分解，提高肥料利用率。
使用量：根据产品和作用需求适量添加，推荐添加量500克——1000克/吨混合料。
添加方法：先用预混料拌匀，再扩大混合于全料中
保存方法:25℃以下低温干燥保存
保质期：阴凉干燥下12个月
注意事项:1.防暴晒、雨淋，避免高温或阳光直射；
2.本产品严禁与杀菌剂同时使用，若与杀菌剂使用，间隔时间应在一周以上。