生物显微镜技术6-显微操作技
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公司生产的MO-IM系列。
Leica转基因操作系统 LdcaASTP实现了把光学显微镜和显微操 作器的电控元件组合在同一控制部件内的第一台“转基因操作系 统”。用同一个控制器可以同步调控显微镜和显微操作器。
显微操作(NARISHIGE)系统 Nikon与NARISHIGE合作的结晶。 *采用油压传动的远程驱动*针对不同用途，可灵活选择不同 的配置方案
显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、 嵌合体技术、胚胎移植、显微切割、细胞膜 打孔、外源基因显微注射导入等，是现代生 物学重要的实验技能之一。
第一节 显微操作仪
显微操作仪目前使用较为广泛的有两类： 一类为球面、齿轮机械传动操作式，如德
国Leica公司生产的MicromanipulatorM； 一类为液压传动操作式，如日本Narishige
2、针具套管
Leica公司生产的针具套管包括针具、紧固 螺帽、引导圈、丝管和套管。
液压传动显微操纵器的针具套管及套管夹 持固定装置与机械传动显微操纵器基本相 同，但主要操作有所不同，它是通过液压 传动装置而非机械球面微动传动。液压传 动具有更稳定、操作简便及针具运作更安 全的特点。
针具、紧固螺帽、引导圈、丝管、套管
显微操作仪的基本部件包括显微镜和显微 操作器，附件配备有显微锻造器、拉针仪、 吸管研磨器、微型注射器等。
常用于显微操作观察的显微镜有倒置显微 镜、落射光或透射光显微镜及荧光显微镜 等，其要求视场、工作距离大，最好配备 有显微摄影装置或显微摄像装置，以便记 录和分析。
1、显微操纵器主机
主要有机械传动操 纵式和液压传动操 纵式两种。机械传 动操纵式以Leitz 公司生产的 Micromanipulator M为例。液压传动 操纵式以 Narishige公司生 产的MO-IM为例。
3、机械传动操作仪的操作步骤
(1)将显微镜及显微操作仪置于无震动的坚固实验台 上，此时应注意避湿、避水和避免阳光直射。
(2)调整显微操作仪的倾斜标尺为“0”；调整显微操 作仪，使其上罩盖和显微镜的载物台保持水平。
(3)调整针具套管上的针具进入显微镜视场中央，并 使横轴粗调节轮左右、纵轴粗调节轮前后具有一定的 调节动作范围，同时保持操纵杆和精细旋转调节柄相 对垂直，以便获得适中的操作范围。通常垂直调节在 28mm内，水平调节横轴粗调节轮在横向16mm内，纵轴 粗调节轮在纵向40mm内，水平调节精细旋转调节在 0.1-4mm之间可变，操纵杆总旋转度40°，倾斜调节 在15°可调。
(4)针具进入视场中央后，进一步进行显微镜的进 光和焦距等的调整，同时调整显微操作仪上各调 节螺栓，使针具在显微镜的视场内能在前后、左 右、上下及倾斜操作动作上均保持有合适的操纵 范围。
(5)为了针具的安全操作，特别需要注意显微操 作仪的横轴粗调节轮、纵轴粗调节轮上旋转调节 柄的运作幅度及倾斜范围，通过操纵杆动静螺圈 和幅度调节圈进行幅度控制及松紧调整，以获得 满意的效果。
第六章 显微操作技术
显微操作技术(micromanipulation technique)是在20世纪60年代后期随着细胞 学实验、细胞核移植技术和医学界显微外科 技术的开展而发展起来的。
显微操作技术具体是指在高倍复式显微镜下， 利用显微操作器(micromanipulator)进行细 胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器 是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动 的机械装置。
专用硬质毛细玻璃管(如硼硅酸盐玻璃毛细 管)外径lmm，可以向专业厂商购置。利用 针具锻造器、拉针器和研磨器及自制工具 可以制作各种显微玻璃管针具(工具)。针具 制造需要积累经验，不断摸索创造，熟能 生巧。
针具做好后竖插于放有海绵泡沫块的培养 皿内，并用烧杯罩住。
第二节 几种显微操作技术简介
克隆羊“多莉”
克隆羊之父维尔莫特
克隆羊“多莉” 和它生下的小羊
细胞核移植技术流程
①供体体细胞经细胞培养后，提取细胞核；
②提取卵巢卵母细胞，在其减数分裂第二次 分裂中期除去细胞核，制成无核细胞质；
③将供体核与无核卵母细胞质融合，并培养 成早期胚胎；
④将早期胚胎移植到代孕母体子宫内，发育 成新个体。
细胞核移植技术，主要是用来研究胚胎发育过程中， 细胞核和细胞质的功能，以及二者间的相互关系； 探讨有关遗传，发育和细胞分化等方面的一些基本 理论问题。
细胞核移植技术已有几十年的历史。
迄今为止，已有下面9种供核类型的体细胞核移植 后代产生：胎儿成纤维细胞 、成体乳腺细胞 、卵 丘/颗粒细胞 、输卵管/子宫上皮细胞 、肌肉组织 的细胞 、成体耳部成纤维细胞、睾丸支持细胞 、 小鼠尾尖细胞 、初乳的乳腺上皮细胞
体 细
去核
胞
？？
核 移
体细胞
供体细胞导入
植
去核的卵 母细胞
wk.baidu.com
过
程
流 程
物理、化学 方法激活
重组细胞 重组胚胎
图
移入受体子宫
？？
个体
动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁 殖的技术。生产遗传结构与细胞核供体相同 动物个体。
怎样获得克隆动物？
一、细胞核移植 细胞核移植（nuclear transplantation）就是将供体细
胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿 透等有性过程而经过无性繁殖即可被激活、分裂并发 育成新个体，使得核供体的基因得到完全复制。
就是将一个细胞核用显微注射的方法放进另一个细胞 里去。前者为供体，可以是胚胎的干细胞核，也可以 是体细胞的核。受体大多是动物的卵子。因卵子的体 积较大，操作容易，而且通过发育，可以把特征表现 出来
(6)操作完毕，针具退出视场，关闭光源，擦拭 清洁显微镜及显微操作仪器，并给予保养，盖好 防尘布罩。
4、显微操作仪附件设备
显微操作仪附件设备主要有显微针具锻造 器、磨针器、拉针器、显微注射器及毛细 玻璃管针具等。
烧针器 主要是用来加热锻造玻璃管针具
拉针器
磨针器
研磨器主要是通过机械研磨将玻璃针尖加 工成各种斜角、粗细角、钝锐角等
Leica转基因操作系统 LdcaASTP实现了把光学显微镜和显微操 作器的电控元件组合在同一控制部件内的第一台“转基因操作系 统”。用同一个控制器可以同步调控显微镜和显微操作器。
显微操作(NARISHIGE)系统 Nikon与NARISHIGE合作的结晶。 *采用油压传动的远程驱动*针对不同用途，可灵活选择不同 的配置方案
显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、 嵌合体技术、胚胎移植、显微切割、细胞膜 打孔、外源基因显微注射导入等，是现代生 物学重要的实验技能之一。
第一节 显微操作仪
显微操作仪目前使用较为广泛的有两类： 一类为球面、齿轮机械传动操作式，如德
国Leica公司生产的MicromanipulatorM； 一类为液压传动操作式，如日本Narishige
2、针具套管
Leica公司生产的针具套管包括针具、紧固 螺帽、引导圈、丝管和套管。
液压传动显微操纵器的针具套管及套管夹 持固定装置与机械传动显微操纵器基本相 同，但主要操作有所不同，它是通过液压 传动装置而非机械球面微动传动。液压传 动具有更稳定、操作简便及针具运作更安 全的特点。
针具、紧固螺帽、引导圈、丝管、套管
显微操作仪的基本部件包括显微镜和显微 操作器，附件配备有显微锻造器、拉针仪、 吸管研磨器、微型注射器等。
常用于显微操作观察的显微镜有倒置显微 镜、落射光或透射光显微镜及荧光显微镜 等，其要求视场、工作距离大，最好配备 有显微摄影装置或显微摄像装置，以便记 录和分析。
1、显微操纵器主机
主要有机械传动操 纵式和液压传动操 纵式两种。机械传 动操纵式以Leitz 公司生产的 Micromanipulator M为例。液压传动 操纵式以 Narishige公司生 产的MO-IM为例。
3、机械传动操作仪的操作步骤
(1)将显微镜及显微操作仪置于无震动的坚固实验台 上，此时应注意避湿、避水和避免阳光直射。
(2)调整显微操作仪的倾斜标尺为“0”；调整显微操 作仪，使其上罩盖和显微镜的载物台保持水平。
(3)调整针具套管上的针具进入显微镜视场中央，并 使横轴粗调节轮左右、纵轴粗调节轮前后具有一定的 调节动作范围，同时保持操纵杆和精细旋转调节柄相 对垂直，以便获得适中的操作范围。通常垂直调节在 28mm内，水平调节横轴粗调节轮在横向16mm内，纵轴 粗调节轮在纵向40mm内，水平调节精细旋转调节在 0.1-4mm之间可变，操纵杆总旋转度40°，倾斜调节 在15°可调。
(4)针具进入视场中央后，进一步进行显微镜的进 光和焦距等的调整，同时调整显微操作仪上各调 节螺栓，使针具在显微镜的视场内能在前后、左 右、上下及倾斜操作动作上均保持有合适的操纵 范围。
(5)为了针具的安全操作，特别需要注意显微操 作仪的横轴粗调节轮、纵轴粗调节轮上旋转调节 柄的运作幅度及倾斜范围，通过操纵杆动静螺圈 和幅度调节圈进行幅度控制及松紧调整，以获得 满意的效果。
第六章 显微操作技术
显微操作技术(micromanipulation technique)是在20世纪60年代后期随着细胞 学实验、细胞核移植技术和医学界显微外科 技术的开展而发展起来的。
显微操作技术具体是指在高倍复式显微镜下， 利用显微操作器(micromanipulator)进行细 胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器 是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动 的机械装置。
专用硬质毛细玻璃管(如硼硅酸盐玻璃毛细 管)外径lmm，可以向专业厂商购置。利用 针具锻造器、拉针器和研磨器及自制工具 可以制作各种显微玻璃管针具(工具)。针具 制造需要积累经验，不断摸索创造，熟能 生巧。
针具做好后竖插于放有海绵泡沫块的培养 皿内，并用烧杯罩住。
第二节 几种显微操作技术简介
克隆羊“多莉”
克隆羊之父维尔莫特
克隆羊“多莉” 和它生下的小羊
细胞核移植技术流程
①供体体细胞经细胞培养后，提取细胞核；
②提取卵巢卵母细胞，在其减数分裂第二次 分裂中期除去细胞核，制成无核细胞质；
③将供体核与无核卵母细胞质融合，并培养 成早期胚胎；
④将早期胚胎移植到代孕母体子宫内，发育 成新个体。
细胞核移植技术，主要是用来研究胚胎发育过程中， 细胞核和细胞质的功能，以及二者间的相互关系； 探讨有关遗传，发育和细胞分化等方面的一些基本 理论问题。
细胞核移植技术已有几十年的历史。
迄今为止，已有下面9种供核类型的体细胞核移植 后代产生：胎儿成纤维细胞 、成体乳腺细胞 、卵 丘/颗粒细胞 、输卵管/子宫上皮细胞 、肌肉组织 的细胞 、成体耳部成纤维细胞、睾丸支持细胞 、 小鼠尾尖细胞 、初乳的乳腺上皮细胞
体 细
去核
胞
？？
核 移
体细胞
供体细胞导入
植
去核的卵 母细胞
wk.baidu.com
过
程
流 程
物理、化学 方法激活
重组细胞 重组胚胎
图
移入受体子宫
？？
个体
动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁 殖的技术。生产遗传结构与细胞核供体相同 动物个体。
怎样获得克隆动物？
一、细胞核移植 细胞核移植（nuclear transplantation）就是将供体细
胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿 透等有性过程而经过无性繁殖即可被激活、分裂并发 育成新个体，使得核供体的基因得到完全复制。
就是将一个细胞核用显微注射的方法放进另一个细胞 里去。前者为供体，可以是胚胎的干细胞核，也可以 是体细胞的核。受体大多是动物的卵子。因卵子的体 积较大，操作容易，而且通过发育，可以把特征表现 出来
(6)操作完毕，针具退出视场，关闭光源，擦拭 清洁显微镜及显微操作仪器，并给予保养，盖好 防尘布罩。
4、显微操作仪附件设备
显微操作仪附件设备主要有显微针具锻造 器、磨针器、拉针器、显微注射器及毛细 玻璃管针具等。
烧针器 主要是用来加热锻造玻璃管针具
拉针器
磨针器
研磨器主要是通过机械研磨将玻璃针尖加 工成各种斜角、粗细角、钝锐角等