人脐血及骨髓淋巴细胞免疫表型的比较及其意义
简述淋巴细胞的临床意义
简述淋巴细胞的临床意义淋巴细胞是一种免疫细胞，主要存在于淋巴系统中。
它们在机体免疫系统中起着关键的作用，参与调节免疫应答、识别和攻击病原体以及维持免疫的平衡。
因此，淋巴细胞在临床上具有重要的意义。
首先，淋巴细胞的数量和功能状态反映了机体的免疫状态。
淋巴细胞的数量通常通过血液或其他体液样本的细胞计数进行测定。
正常情况下，淋巴细胞占周围血液白细胞总数的20-40%。
当免疫系统处于活跃状态时，淋巴细胞数量会增加。
例如，在感染或炎症反应中，T淋巴细胞和B淋巴细胞的数量都可能增加。
相反，一些免疫缺陷疾病或免疫抑制药物的应用可能导致淋巴细胞数量减少。
因此，淋巴细胞的数量可以用于判断机体的免疫功能是否正常，以及了解疾病的发展和治疗效果。
其次，淋巴细胞亚群的分析可以提供有关免疫功能和病理过程的进一步信息。
淋巴细胞主要分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)等亚群。
这些亚群各自具有不同的免疫机制和功能。
通过测量不同亚群的比例或数量，可以帮助医生判断机体免疫功能的特点，并确定免疫相关疾病的诊断和分类。
例如，T淋巴细胞亚群的分析可以帮助鉴别各种免疫缺陷病和自身免疫病。
B淋巴细胞在抗体产生中起着重要作用，而NK细胞则在抗肿瘤和抗病毒免疫中发挥作用。
因此，淋巴细胞亚群的分析有助于了解机体针对不同病原体的特定免疫应答。
此外，淋巴细胞的功能状态和表型也与一些重要的临床指标相关。
例如，淋巴细胞凋亡和增殖可以反映疾病的严重程度和预后。
在一些感染性疾病和自身免疫病中，淋巴细胞凋亡增加，导致免疫功能受损。
而在肿瘤和移植排斥反应等情况下，淋巴细胞的增殖增加，反映了免疫应答的激活。
此外，淋巴细胞表型的分析可以帮助鉴别不同类型的淋巴瘤，并指导治疗选择。
最后，淋巴细胞还可以用于免疫治疗的评估和监测。
免疫治疗是一种新兴的治疗方法，通过调节或增强机体免疫系统来治疗一些疾病。
淋巴细胞在免疫治疗中发挥着重要的作用，包括使用自身免疫细胞疗法(例如CAR-T细胞治疗)和免疫检查点抑制剂等。
淋巴细胞各项免疫表型的临床意义
淋巴细胞各项免疫表型的临床意义通过流式细胞仪分析淋巴细胞免疫表型，对于了解淋巴细胞的分化、功能，鉴别新的淋巴细胞亚群有重要价值；更重要的是，通过研究大多数疾病的特异性淋巴细胞亚群或某些细胞表面标志的存在、缺乏、过度表达等，对一些疾病，如免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤等诊断、治疗、免疫功能重建和器官移植监测等有重要的临床意义。
一．T细胞1.总淋巴细胞数（1）增多：见于百日咳、传染性单核细胞增多症、慢性淋巴细胞白血病、麻疹、腮腺炎、结核、传染性肝炎等。
（2）减少：见于传染病急性期、放射病和细胞免疫缺陷等。
2.总T细胞（CD3+细胞）（1）增高：提示体内的T细胞免疫功能增强，见于临床某些自身免疫性疾病（如SLE）、重症肌无力、慢性活动性肝炎、甲状腺功能亢进、淋巴细胞性甲状腺炎、器官移植排斥反应、T细胞性白血病等。
（2）降低：提示体内的T细胞免疫功能减弱，见于某些白血病、应用免疫抑制药、放疗过程中、先天性细胞免疫缺陷、艾滋病、多发性骨髓瘤、传染性单核细胞增多症，以及过劳等造成机体免疫功能处于相对较低的其他一些情况。
3.T4细胞（CD3+CD4+细胞）（1）增高：提示体内存在细菌等病原微生物感染，主要见于临床各种细菌性感染性疾病。
（2）降低：提示体内存在病毒等病原微生物感染，主要见于临床各种病毒感染性疾病，以HIV感染时减少最为明显。
T4细胞减少也见于γ免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良、严重联合免疫缺陷病、严重创伤、大手术等。
4.T8细胞（CD3+CD8+细胞）（1）增高：提示体内存在病毒或胞内寄生菌等病原微生物感染，主要见于HBV、CMV、EB等病毒及结核杆菌感染等。
（2）降低：T8细胞减少见于γ免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良、严重联合免疫缺陷病、糖尿病等。
5.T4/ T8细胞比值（1）增高：可以是T4淋巴细胞增高或T8淋巴细胞减少所致，见于某些自身免疫性疾病，如SLE、多发性硬化、器官移植排斥反应等。
（2）降低：可以是T4淋巴细胞减少或T8淋巴细胞增加所致，见于艾滋病、再生障碍性贫血、某些白血病、传染性单核细胞增多症、免疫缺陷综合征、某些病毒感染、恶性肿瘤、结核病等。
脐血与成人外周血中淋巴细胞分化抗原含量的比较
胞） 、 Ｎ Ｋ 细胞 （ Ｃ Ｄ １ ６ Ｃ Ｄ ５ ６ 细 胞 ） 的含 量 均 明显 高于 脐 血 （Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） ， 而 Ｂ淋 巴细 胞 （ Ｃ Ｄ １ ９ 细胞 ） 的 含 量 明显 低 于
脐 血（ Ｐ＜ ｎ ０ ０ １ ） 。辅助性 Ｔ淋 巴细胞 （ Ｃ Ｄ ３ 、 Ｃ Ｉ Ｍ 细胞 ） 、 Ｃ Ｉ Ｍ ／ Ｃ Ｄ ８ 细胞比值脐血与外周血相 比， 两者比较 差异
【 关键词】 淋巴细胞分化抗原 ； 脐血 ； 成人外周血
Ｃｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ａ ｂ ｏ ｕ ｔ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ＣＤ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ｏ ｆ ｌ ｙ ｍｐ ｈ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｕ ｍｂ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｏ ｒ ｄ
中国实用 医刊 ２ ０ １ ３年 １月第 ４ ０卷第 ２期
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆＰ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ３， Ｖ ｏ １ ． ４ ０ ， Ｎ ｏ ． ２
・
７・
脐 血 与成 人 外 周 血 中淋 巴细胞 分 化 抗 原 含 量 的 比较
０ ． ０ ５ ） ， 代表记忆性 Ｔ细胞重要表 型 Ｃ Ｄ ４ ５ Ｒ Ｏ 淋 巴细胞 的含量成Ｚ － ￣ ｌ ＂ 周血 明显 多于脐血 （ Ｐ ＜０ ． ０ １ ） 。结论
人脐带间充质干细胞的分离、培养及鉴定
人脐带间充质干细胞的分离、培养及鉴定韩华;薛改;张俊勤;闫萍;李艳丽【摘要】目的：探讨人脐带华通胶间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及冻存、复苏的方法。
方法收集健康足月新生儿脐带组织，采用组织块贴壁法分离、培养脐带间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表面抗原，将细胞冻存3个月后复苏，鉴定复苏后细胞的特性。
结果组织块贴壁法获得脐带间充质干细胞成功率高；细胞表面高表达CD29、CD44、CD90和CD105，不表达造血干细胞表型CD34、CD45等；冻存后再复苏细胞活性高达80％～90％。
结论组织块贴壁法可以从人脐带华通胶中较好的分离、培养出间充质干细胞，为干细胞移植实验研究和临床治疗提供了理想的细胞来源。
%Objective To exploreisolating,culturing,identifying,freezing and thawing mesenchymal stem cells(MSCs)approach from Wharton j elly of human umbilical cord.Methods The MSCs were isolated from neonate umbilical cord,cultured by tissue explants adherent method.The surface markers were identified by flow cytometry.Passage cells,frozen 6 months, were thawed,then their biological characteristics were identified.Results MSCs were easily obtained from Wharton j elly of human umbilical cord via the proposed approach of tissue adherence.The flow cytometry analysis showed that MSCs expressed CD29,CD44,CD90 and CD105 positively,but negatively for CD34,CD45.The living cells of MSCs were 80%-90% after having been frozen and the thawed cells had the same characteristics as the previous.Conclusion MSCs can be successfully isolated from Wharton j elly of human umbilical cord by this method. The stem cells derived from Wharton j elly of humanumbilical cord may be a novel alternative source of human MSCs for experimental and clinical applications.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P21-23)【关键词】脐带;间充质干细胞;胎血【作者】韩华;薛改;张俊勤;闫萍;李艳丽【作者单位】河北省人民医院妇产科，河北石家庄 050051;中国人民解放军白求恩国际和平医院药剂科，河北石家庄 050082;河北省人民医院妇产科，河北石家庄 050051;河北省人民医院妇产科，河北石家庄 050051;中国人民解放军第二六○医院病理科，河北石家庄 050041【正文语种】中文【中图分类】R394.2干细胞是一群具有自我更新和分化潜能的细胞，根据发育状态可以分为胚胎干细胞和成体干细胞。
免疫表型——精选推荐
免疫表型——精选推荐免疫系统作为人体内最重要的防御工具之一，扮演着抵御疾病侵袭的关键角色。
免疫表型在近年来的研究中逐渐引起了人们的关注。
免疫表型是指个体在特定环境下的免疫状态，包括免疫细胞的活性、功能和数量等方面的特征。
通过对免疫表型的研究，可以更好地了解个体抵抗疾病的能力，从而为疾病治疗和预防策略的制定提供依据。
免疫表型的研究近年来得到了飞速发展。
一些免疫细胞的表型标记已经成为临床和研究的重要工具。
例如，对于免疫细胞CD4+和CD8+的表型进行测定可以帮助医生评估病人的免疫状态，并且根据这些信息制定最佳治疗方案。
此外，研究人员还发现了一些新的免疫细胞和表型标记，这些标记在疾病诊断和治疗过程中具有重要的潜力。
一种常见的免疫表型研究方法是流式细胞术。
流式细胞术通过使用流式细胞仪，将细胞在发光物质激发下，测量其发射的荧光信号来分析免疫细胞的特征。
这种方法具有高通量、高准确性和高灵敏度的优点，并且可以同时测定多种细胞表型标记。
流式细胞术的广泛应用使得免疫表型的研究变得更加便捷和高效。
免疫表型的研究对于疾病的预防和治疗具有重要意义。
例如，在肿瘤免疫疗法中，通过分析肿瘤患者的免疫表型，可以确定最佳的治疗方案。
一些肿瘤患者的免疫细胞对肿瘤细胞具有强烈的杀伤能力，而另一些患者的免疫细胞则对肿瘤细胞几乎没有任何反应。
通过分析这些患者的免疫表型，可以选择适合的免疫疗法，从而提高治疗效果。
在感染性疾病的研究中，免疫表型也扮演着重要的角色。
通过分析感染者的免疫表型，可以判断感染的类型和严重程度，并制定相应的治疗方案。
例如，在病毒感染研究中，研究人员发现不同个体的免疫表型对于感染病毒后的临床表现有显著影响。
通过测定感染者的免疫表型，可以预测其感染后的病情，便于医生进行早期干预和治疗。
除了在临床研究中的应用，免疫表型的研究也在基础免疫学研究中发挥着重要作用。
通过对免疫细胞的表型变化进行观察，可以进一步了解免疫细胞的功能和调控机制。
全血淋巴细胞亚群免疫分型
全血淋巴细胞亚群免疫分型背景知识即使在早期通过形态学特征来区分不同功能的淋巴细胞的检测中，对直接识别和计数方法的研究一直在进行。
吸附方法在历史上有重要地位，这个方法首次假设了通过一些新的分子探针来检测膜上的受体或配体来识别细胞。
单克隆抗体被证明是检测这种表面分子极其有效的探针；此后CD 命名协会统一命名了与这些表面分子结合的种类繁多的抗体。
将单克隆抗体进行荧光标记后与白细胞反应，然后在流式细胞仪上检测，这个基本步骤使流式细胞仪在临床实验室中应用被大大拓宽。
对外周血淋巴细胞免疫分型在诊断和分型免疫缺陷性疾病中意义重大。
如检测与X染色体相关丙球蛋白贫乏症患者外周血淋巴细胞CD19、CD20和CD21时，会发现在疾病状态中的患者不存在成熟B淋巴细胞（CD19+，CD20+，CD21）。
另一个例子是分析CD43的表达，它在Wiskott-Aldrich 综合症患者的淋巴细胞的表达降低。
区分严重的联合免疫缺陷症病例，是通过患者淋巴细胞表面CD3、CD4、CD8和CD38的表达来将新诊断病例来进行的。
进一步的有关淋巴细胞分型在免疫缺陷症在临床中的应用请参阅其他文献资料(Keren et al., 1994)。
HIV病毒感和获得性免疫缺乏综合症，是流式细胞仪免疫分型外周血淋巴细胞运用最为广泛的适用病种。
CD4阳性T细胞是HIV感染的主要靶分子，通过几种机制它们被催毁,并且其数量随着疾病的进程而下降。
根据一些学术机构的报告，临床上对潜在的感染危协而进行的抗病毒或预防治疗决定，是依据对CD4+T细胞的计数而做出的；因此对这些病人的淋巴细胞亚群的精确检测就显得十分重要。
毫无疑问，全球数量不断增加的HIV/AIDS病人和对CD4+T细胞快速而精确检测的需要使得流式细胞仪使用在临床实验室中日益广泛。
这一点很好地解释了为什么为这个单一应用发展了相关的试剂和仪器，和一些针对CD4+T细胞检测的标准化程序。
外周血淋巴细胞免疫分型被证明在诊断患有某些慢性淋巴细胞增生性疾病的患者中有重要作用；特别是B细胞性慢性淋巴细胞白血病，此类样本中可以通过B 细胞表面κ 和λ免疫球蛋白轻链的异常表达而识别出肿瘤细胞。
脐带血干细胞移植,完全没有排斥反应!
脐带血干细胞移植，完全没有排斥反应！
作者：陈金山生物医疗\生物评论
排斥反应又称，免疫排斥反应，就是当一种带有免疫功能的细胞或器官，被移植到另一种器官或人体内，会产生一种与被移植的器官与人体不融合的现象，会对此器官与人体进行破坏性的攻击。
但是如果所移植的细胞与器官与被移植的器官型号相同就不会有排斥反应，或者，所移植的细胞与器官内，不具有免疫功能，也不会产生排斥反应。
也就是说只要移植的细胞与器官没有免疫功能，就可以被移植到任何不同的个体内，都不会产生排斥反应。
目前临床为了避免排斥反应，在器官移植前，都要想办法先把T淋巴免疫细
胞剔除，避免或减少排斥反应的几率。
由于免疫抑制剂的广泛使用，目前对于急性排斥反应已经基本控制，大大提高了异体移植成功的概率。
脐带血中的免疫细胞较为幼稚，免疫功能不成熟，处于一种缄默状态，或者免疫功能还没有开始发育，免疫原性较骨髓来源的干细胞更低，作为一类免疫豁免细胞，不须经过严格配对使用，异体移植无免疫排斥反应，适宜于不同个体之间的移植，且不产生移植物抗宿主病，也就是不会产生任何毒副作用。
同时脐带血刚脱离母体，相对纯净，脐带血潜伏性病毒和病原微生物的感染及传播几率非常低，所以脐带血干细胞移植安全性较高。
而其他成体干细胞。
特别是乙肝患者的自体骨髓干细胞，其本身的增殖能力存在缺陷。
所以说脐带血干细胞的移植，不仅没有异体的排斥反应，更安全可靠。
成人和儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型比较分析
［ 参考文献］
［ ］Ｙｕｇ ， ｎｄｅ ＨｌｎＡ ｔ １ ｅａｏ ｅｉｅｓ ｅ １ ｏｎ Ｋ ｕｓ Ｎ， ｉ ，ｅ ａ ｄｔｎｉ ｔ ｔ ｉ ｃ ｎ ｔ ｏ ．Ｓ ｉ ｎ ｈ ｎ ｎｖ
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９ ８例 ， 童 （ 儿 ５个 月 ～ｌ ４岁 ） —Ｌ ４ ＢＡ Ｌ２０例 、 —Ｌ ＴＡ Ｌ
次， 加入 ０５ｌ 生理盐水 ， ． ｌ Ｉ ｌ 上流式细胞仪检测。采 用 Ｆ ＣＣｎ Ａ Ｓ ａ 型流 式 细胞 仪 （ 国 ＢＤ公 司） ４ ８ 美 — ，８ ｎ ｍ激发光源。测定前 以标准校正荧光微球校正仪
２ ｌ室 温闭光 反 应 ２ ３ ｉ， 加入 ２ｍ 红 细 ０ ， ０～ ０ｍｎ 再 ｌ 胞 溶解 液 ， 荡后置 室温 １ ｉ， 生理 盐水 洗 涤 ３ 震 ０ｍｎ 用
ＡＬ Ｌ 长期无病生存率 （ Ｅ ） Ｄ Ｆ 仍相 当低， 仅为 ３％ ～ ０ ４％…。广泛的临床和实验研究正致力于缩小这种 ０ 存在于儿童 和 成人 舭 治疗 结 果之 间 的差 距 ， 白血
器， 应用 Ｃ Ｌ —Ｕ Ｓ Ｅ ＬＱ Ｅ Ｔ软件 ， 每管获取并分析 １ ０ ０ ０ ０
了广 阔前 景 。
盐酸哌替啶是阿片受体激动剂 ， 镇痛剂量 时可选择 性地减轻或缓解疼痛 ， 呼吸有抑制作用。本研究 对
结果显示 ， 两组插镜后及检查结束时 ＳＯ 均下降但 ｐ 无统计学差异 ； 另通过实验还可看 出两组插镜后及
检查结束时 Ｈ 、 Ａ Ｒ Ｍ Ｐ均较检查前下降， 对照组较观 察组下降明显 ， 考虑观察组联合用药后减少了咪达 唑仑的用药量 ， 使生命体征稳定性增强。联合用药 同时使镜检时间延长 ， 有利于镜下仔 细观察并行使 定难 度 活检 ， 时 较 长 的镜 下 治 疗 具 有 可 行 、 需 安
骨髓免疫分型报告
骨髓免疫分型报告
尊敬的专家：
经过骨髓免疫分型检测，以下是我方的报告结果：
检测结果：
1. B细胞分型：CD19+/CD5-/CD23-，符合慢性淋巴细胞白血病（CLL）的免疫表型特征，同时也提示着潜在的前B淋巴母细胞
白血病（B-ALL）的可能性。
2. T细胞分型：CD3+/CD4+ 显著增高，CD3+/CD8+ 明显降低，提示T细胞淋巴瘤的免疫表型特征。
结论：
综合上述结果，该患者表现出了B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤
的混合型，属于一种罕见的免疫分型。
此次检测结果可以为临床
诊断和治疗方案提供指导。
建议：
1. 建议结合临床严密对该患者再次组织活检。
2. 根据检测结果制定个性化的治疗方案，在治疗过程中需要严密观察患者的病情变化。
3. 术后患者需要定期进行免疫分型检测，监测治疗效果并及时调整治疗方案。
以上为本次骨髓免疫分型检测的报告，如有疑问或需要进一步的讨论，请联系我们。
敬祈合作。
此致
敬礼
报告人：XXX
联系电话：XXX
日期：XXXX年XX月XX日。
【doc】人脐血及外周血CIK、NKT及NK细胞含量及意义
人脐血及外周血CIK、NKT及NK细胞含量及意义第26卷第3S期2005年6月中山大学(医学科学版1JOURNALOFSUNY A T—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) V o1.26No3SJun.2005人脐血及外周血CIK,NKT及NK细胞含量及意义黎阳,方建培,黄绍良,陈纯,包蓉,魏菁s,吴燕峰(中山大学附属第二医院1.儿科,2.干细胞研究中心,3.医学研究中心,广东广州510120)摘要:【目的】了解人脐血(cB)及不同来源外周血(PB)CIK细胞,NKT 细胞和NK细胞的分布规律.【方法】通过流式细胞术检测不同来源标本中CD3+CD56+CIK细胞,Vct24+CD161+NKT细胞和CD3一CD56+NK细胞的比例.比较上述细胞分布的差异性.【结果】cB中CIK细胞,NK细胞的比例分别为1.37%+0.51%,7.07%+3.63%.均显着低于正常学龄前儿童外周血(CPB)及成人外周血(APB)(P<O.O1);而NKT细胞在CB,CPB和APB中比例均低,且三组间无显着性差异.【结论】cB中的抗肿瘤免疫效应细胞CIK细胞,NKT细胞及NK细胞含量均低,其中CIK细胞,NK细胞比例显着低于PB.关键词:CIK细胞;NK细胞;NKT细胞;脐血;流式细胞术中图分类号:R329.1文献标识码:A文章编号:1672—3554(2005)3S一0016—02脐~(cordblood,CB)因其富含CD34+细胞,移植存活率高,移植抗宿主(graftversushostdisease,GVHD)反应轻及采集相对便利等特点,已逐渐成为人类(尤其是儿科患儿)造血干细胞移植(hemopoieticstemcelltransplantation,HSCT)的重要来源,并应用于部份恶性血液病的根治性治疗移植.恶性血液病患者脐血移植(cordbloodtransplantation,CBT)后的细胞过继免疫治疗是近年的研究热点,对提高CBT后肿瘤患儿的长期生存率有重要意义;近年两种新型的抗肿瘤免疫效应细胞如细胞因子诱导杀伤(cytokineinducedkiller,CIK)细胞,自然杀伤样T (naturalkiller—likeT,NKT)细胞在肿瘤防治中的作用日益引起学者的关注,但上述细胞群(尤其后者)在不同来源移植物,如CB,外周血(peripheralblood,PB)中的分布情况目前尚不清楚:了解其分布规律对HSCT后通过扩增上述免疫效应细胞行过继免疫治疗帮助极大.在本研究中,我们通过流式细胞术检测了CB和不同年龄组PB中CD3+CD56+CIK细胞,V a24+CD161+NKT细胞以及CD3一CD56+自然杀伤(naturalkiller,NK)细胞的分布规律,现报道如下:1材料与方法1.1主要实验试剂抗人V et24一PE,CD161一FITC,CD3一PerCP,CD56-PE流式细胞荧光标记抗体,对照为小鼠抗人IgG1一PE,IgG1一FITC及IgG1一PerCP流式细胞荧光标记抗体(美国BD, PeprotechEC公司)1.2实验分组及标本采集本研究中人不同来源(脐血及外周血)的标本共分A,B及c三组,A组为脐血(cB),B组为正常学龄前儿童外周(childperipheralblood,CPB),C组为正常成人外周血(adultperipheralblood,APB).各组标本均以含肝素抗凝剂的无菌干燥管收集,采血量为2-3mL.CB来自本院健康足月妊娠产妇经产道或剖宫产分娩之胎儿脐静脉血:CPB和APB岁分别来自我院儿科门诊及卫防科进行体检的正常学龄前儿童(3.1-7岁,平均年龄5.2岁,男8例,女7例)及成人(20～40.5岁,平均年龄33.8 岁,男7例,女8例).每组各采集15份标本,3h内送流式细胞术检测.1.3流式细胞术检测实验各组(A,B,C组)取细胞浓度为每管2x106/mL的细胞悬液50L,分别加入上述单抗,混匀,置4℃冰箱避光孵育30min后PBS洗涤2次.用流式细胞仪检测CD3+CD56+CIK细胞,V et24+CD161+NKT细胞和CD3一CD56+NK细胞比例.1.4统计学分析标本阳性细胞百分率比较通过SPSS10.0软件行多组间t检验,数据用互+j表示.2结果各组不同来源标本中CD3+CD56+CIK细胞,V et24+CD161+NKT,CD3一CD56+NK细胞,细胞比例详见表1.CB中的CIK,NK细胞比例显着低于CPB及APB(P<0.01),上述细胞比例在CPB及APB无显着性差异(P>0.05),而NKT细胞比例在3组标本中均低,且无显着性差表1人脐血和外周血中CIK,NKT及NK细胞比例(%)1)与B,C组比较.P<O.O1收稿日期:2005—03—25基金项目:卫生部临床重点基金资助项目(2004468);广东省自然科学基金资助项目(031707);中山大学附属第二医院青年人才基金资助项目(Fo02o03o09)作者简介:黎阳(1971一),男,广东东莞人,医学博士,副主任医师;黄绍良,通讯作者,博士导师,教授.E-mail:***************.ell第3S期中山大学(医学科学版)17异(P>0.05).3讨论目前多认为CIK,NKT和NK细胞均通过非MHC限制性依赖穿孔素的细胞毒机制杀伤靶细胞.可以补充杀灭已经逃避CTL杀伤的不表达或低表达宿主MHC的肿瘤细胞.活化的CIK,NKT及NK细胞输注可以介导CVL效应并避免GVHD的发生:而且NK细胞的发育不依赖于胸腺,可以避免类似CTL经过宿主胸腺”再教育”后失去识别宿主肿瘤抗原能力的现象发生.由于白血病相关抗原的免疫原性很弱,抗原提呈困难.肿瘤特异性CTL的数量低,需要较长时间进行克隆扩增才可发生GVL效应.制备肿瘤特异性CTL的方法复杂,效率低,工作量大,有相当多的病例不能产生CTL克隆:且在CBT后T细胞数量和功能恢复均是延迟的,在儿童需1-2年,在成人需3-4年【1.21;而研究显示不论在CBT还是外周血干细胞移植(peripheralblood stemcelltransplantation.PBSCT)后NK细胞数量的恢复都是迅速的[1.31.因此在HSCT后早期担负着抗肿瘤免疫监视作用的可能主要为这些非MHC限制性的免疫杀伤细胞.通过流式细胞术对人CB细胞组份分析显示:CB单位体积淋巴细胞绝对数明显高于APB.但较成熟的CD3一CD56+NK细胞比例不高,几乎不含有CD3+CD56+CIK细胞和V a24+CDI61+NKT细胞M,Sl:显示CB中的具有抗肿瘤活性的成熟免疫细胞数量不足.我们的研究显示CB中已有一定比例的NK细胞(7.o7%±3.63%),而CIK(1.37%±0.51%)和NKT细胞的比例均低,后者几乎为0,与文献【6] 报道基本一致.健康学龄前儿童PB中的抗肿瘤免疫细胞组成目前尚未见有相关报道,我们初步的研究显示平均年龄5.2岁的健康学龄前儿童PB中的CIK,NKT和NK细胞比例与APB相比并无显着差异(P>0.05);其中CIK和NK 细胞的比例较CB显着升高(P<0.01),前者均数水平接近成人,而后者甚至略高于成人(但和APB比无显着差异).目前多数研究显示HSCT后NK细胞计数在6个月内即可恢复正常.故本研究中的学龄前CPB和APB的NK细胞比例接近;而CIK细胞的变动规律目前尚不清楚,本研究中APB的CIK细胞比例最高可以接近10%,而学龄前CPB中最高仅约6%,似乎提示CIK细胞比例随年龄的增长而增加.但其详细的变化趋势尚有待进一步研究.本研究发现NKT细胞不论在CB,CPB和APB中含量均极低(均数均未超过0.2%),与neiIgaard—Monch等旧及国内郑滨等报道的APB中NKT细胞的水平(0.77%±0.42%)接近,显示NKT细胞几乎不分布在CB和PB中;目前有关人类NKT细胞体内分布的研究尚无一致的结论.可能类似于小鼠旧,主要位于肝脏,胸腺和骨髓.由于CIK细胞,NKT细胞在CB和PB中的含量低.故上述来源HSCT 后的细胞过继免疫治疗应建立在诱导,扩增相关抗肿瘤免疫效应细胞的基础上.参考文献:【11GiraudP,ThuretI,RevironD,et.Inllnultercconstitution andoutcomeafterunrelatedcordbloodtransplantation:a singlepIl~iatricinstitutionexperience【J】.BoneMarrow Transplant,2000,25(1):53-7.[21KleinAK,PatelDD,GoodingME,et.T—Cell~coveryin adultsandchildrenfollowingumbilicalcordblood transplantation【J1.BiolBloodMarrowTransplant,2001,7(8): 454-66.【3】KoehneG,ZellerW,StockschlaederM,etPhenotypeof lymphocytesubsetsafterautologousperipheralbloodstemcell transplantation[J].BoneMarrowTransplant,1997,19(2):149- 56.[4】DArenaG,MustoP,CascavillaN,et.Flowcytometric characterizationofhumanumbilicalcordbloodlymphocytes: immunophenotypicfeatures【J1.Haematologica,1998,83(3) l97—2o3.【5】LeePT,BenlaghaK,TeytonL,et.DistinctfunctionallineagesofhumanV(alpha)24naturalkillerTcells[J].JExp Med.2002.195(5):637-41.[61Theilgaard-MonchK,Raaschou-JensenKPalmH.eto1.Flow cytometricassessmentoflymphocytesubsets,lymphoid progenitors,andhematopeieticstemcellsinallogeneicstem cells~fts[J].BoneMarrowTransplant,2001,28(11):1073-82.r7】郑滨,范华骅,陆华中,等.人外周血NKT细胞体外扩增的初步研究【J1.中国免疫学杂志,2003,19(1):19-20. 【8】ApostolouI,CumanoA,GachelinG,eto1.Evidencefortwo subgroupsofCIM-CD8-NKTcellstlldistinctTCRalpha betarepertoiresanddifferentialdistributioninlymphoid tissues[J].JImmunol,2O0o.165(5):2481—90.[91AgratiC,NisiiC,OlivaA,et.Lymphocytedistributionand intrahepaticcompartmentalizationduringHCVinfection:a mainroleforMHC-unrestrictedTcells【J1.ArchImmunol TherE印,2002,50(5):307-16.(编辑张恩健)。
(参考资料)干细胞100问
10. 骨髓、脐带血干细胞分离制备后的检测 （1、骨髓、脐血干/祖细胞数量检测：一是血细胞计数板计数，二是血常规计数仪计数
单个核细胞总数； （2、细胞存活率检测 ,使用苔盼蓝染色法计数活细胞数目。 （3、使用流式细胞计数仪计数 CD105+干细胞、CD34+干细胞、CD133 等干细胞数量。
12. 脐带血干细胞制剂体外分离纯化的标准化作业程序( SOP)是什么？
包括从临床干细胞治疗体外分离的申请到干细胞移植后不良反应回报的整个治疗过 程。制定了质量手册，程序文件，管理文件以及各种记录表格。科室设置了百级层流实验 室，配置了低温低速离心机等细胞分离设备，建立了细胞分离实验室。当临床科室有需要 细胞治疗的病例时，在完成医院伦理委员会初步审核后，填写《干细胞 /祖细胞体外分离申 请单》 和《干细胞治疗知情同意书》后，即可按 SOP 进行干细胞制剂的制备。患者同时做 术前准备，干细胞制剂准备完成后立即局部移植给患者以达到细胞治疗的目的。
最好的免疫治疗和基因治疗载体。
8. 干细胞移植相对禁忌证 ①高度过敏体质或者有严重过敏史者。 ②合并恶性肿瘤。 ③全身感染或局部严重感染。 ④并发心、肺、肝、肾等重要脏器的功能障碍。 ⑤凝血功能障碍，如血友病。 ⑥血清学检查阳性者，如艾滋病、乙肝、梅毒等。
9. 脐血干细胞供体（母体）要注意哪几项？ 1)母体产前用 ELISA 方法常规进行检测主要是法定四项传染病,包括艾滋病（H I VAb
（2）脐带血细胞免疫性不成熟，其中的 T 淋巴细胞表型及功能均为不成熟表现,，人 类白细胞抗原Ⅱ(HLA2Ⅱ) 类抗原表达率低，几乎没有抗体,移植过程中不需要严格配型， 移植后排异反应弱或不出现， GVHD 出现少、且轻;
脐血技术基础和临床应用研究现状
１脐 血 细 胞 的 特 点 ： 儿 造 血 器 官 历 经 卵 黄 囊 、 、 到 ． 胎 肝 脾 骨 髓 ， ４月 末 开 全 血 第 肝 脾
细 胞 的 功 能 基 本 丧 失 ， 髓 代 之 成 为 主 要 的 造 血 器 官 ， 脐 骨 故 血 是 骨 髓 造 血 早 期 的 血 液 。 脐 血 含 有 丰 富 的 造 血 祖 细 胞 （ ｅ ａｏ ｏ ｔ ｒｇ ｎ ｏ ｅ ｓ ｈ ｍ ｔ ｉ ｉ ｐｏ ｅ ｉ ｒｃ ｌ ，ＨＰ ） 其 数 量 相 当 甚 至 超 过 骨 ｐ ｅｃ ｔ ｌ Ｃ ，
例 的 未 成 熟 祖 细 胞 。 三 色 分 析 （ｈ ｅ— ｏ ｒａ ａ ｓ ） 结 果 证 ｔ ｅｃｌ ｎｌ ｉ 的 ｒ ｏ ｙｓ 实 ， 多 数 分 化 簇 （ ｌｓ ｒｄ ｅｅ ｔ ｔ ｎ ｃ ） Ａ Ｄ 细 胞 大 ｃｕｔ ｉ ｒｎｉ ｉ ， Ｄ ＨＬ — Ｒ ｅ ｆ ａｏ
列 ， 细 胞 分 裂 期 间 端 粒 重 复 序 列 的 丢 失 被 认 为 可 能 是 细 胞 在 衰 老 的 机 制 。 应 用 Ｄ Ａ 印 迹 法 （ ｏ ｔｅ ｌ ） 荧 光 原 位 杂 Ｎ Ｓ ｕｈ ｒ ｂｏ 、 ｎ ｔ 交 方 法 （ Ｉ Ｈ） 究 发 现 脐 血 干 细 胞 的 端 粒 平 均 长 度 明 显 较 ＦＳ 研
ｕ ｉ －ｒｔｒ ｄ Ｆ ． ） 骨 髓 的 ３倍 。 另 外 ， 血 样 本 形 成 ｎｔ ｅｙ ｏ ，Ｂ Ｕ Ｅ 是 ｓ ｈ ｉ 脐
于 干 细 胞 移 植 对 许 多 疾 病 治 疗 的 特 殊 意 义 ， 细 胞 研 究 和 应 干 用 已 成 为 目前 医 学 界 最 为 热 门 的 课 题 。 在 干 细 胞 技 术 的 研 究应 用 中 ， 血干 细胞 移 植 的临 床应 用较 早 ， 于 ２ 造 始 ０世 纪 ５ ０ 年 代 后 期 ，０年 代 初 有 较 大 突 破 。 由 于 脐 血 富 含 造 血 干 细 ８ 胞 ， 源 广 泛 ， 研 究 人 员 所 关 注 。 １８ 来 为 ９ ８年 法 国 科 学 家 为 一
造血干细胞移植的免疫学研究进展
造血干细胞移植的免疫学研究进展孙湘兰综述(江苏大学杂志社,江苏镇江212013)[ 关键词] 造血干细胞;免疫;进展[ 中图分类号] R329. 1 ;R392 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1671 - 7783 (2003) 01 - 0075 - 04造血干细胞(hemotopoietic stem cell , HSC) 又称多能造血干细胞,它是从卵黄囊全能间叶细胞分化而来的最原始的造血细胞,具有高度自我更新或自我复制并进一步分化为各系祖细胞的能力。
造血干细胞经有丝分裂后,正常稳定状态下约半数子细胞仍保持干细胞的全部特性,称自我更新,这样就能使干细胞池的大小维持不变。
另有半数的干细胞有丝分裂过程中特征发生改变走向逐渐分化的途径,离开干细胞池进入增殖分化池。
从而维持了机体的正常造血,保证了机体在生命过程中对各类细胞的需要,如果二者失去平衡则会导致病理性造血。
临床利用造血干细胞的自我更新和分化这两个重要的基本特性应用造血干细胞移植技术治疗各种疾病,并使造血功能得以重建[ 1 ] 。
造血干细胞移植包括骨髓细胞移植和从外周血、脐带血中分离的造血干细胞,经体外培养扩增后移植给患者,用于重建或恢复受者的造血功能和免疫功能。
随着分子生物学、免疫学及细胞培养技术的完善,对造血干细胞生物学特性、免疫表型的研究日益深入。
本文对造血干细胞移植的免疫学研究进展作一综述。
1 造血干细胞移植类别造血干细胞移植已成为治疗恶性血液病和某些对免疫疗法有耐药性的难治性自身免疫病、实体瘤等的有效手段。
目前,造血干细胞的移植包括自体移植和同种异体移植。
自体移植又分为自体骨髓细胞移植、自体外周血干细胞移植; 异体移植有异体骨髓细胞移植、脐带血造血干细胞移植。
它们因各自的特点都得到了临床医生的高度重视。
自体骨髓干细胞移植减少了排斥反应的发生,但临床移植也不易成功,其主要原因是回输了肿瘤细胞致肿瘤复发。
近年来研究发现外周血和骨髓干细胞对血液系统的恢复效果是相同的,但二者比较,自体外周血干细胞移植则表现出更大的优势:取材方便,不需多次多部位骨髓穿刺,对病人基本无创伤;可从周身各处造血组织采集细胞,对骨髓有浸润或是接受放射线照射不能采集骨髓的病人可施行; 移植物所含肿瘤细胞和T 细胞数量少,降低了复发和同种异基因移植后移植物抗宿主病( GVHD) 的发生;动物实验证明造血和免疫重建早,辐射敏感性低和植入率高而备受青睐[ 2～5 ] ; 脐带血中不仅含有丰富的、有旺盛增殖能力的、未分化的造血干细胞,而且还有较高活性的造血调控因子和一定量的造血支持细胞。
简述淋巴细胞的临床意义
简述淋巴细胞的临床意义
淋巴细胞是免疫系统中的重要组成部分，具有重要的临床意义。
主要的临床意义如下：
1.免疫功能：淋巴细胞在免疫应答中起到关键作用。
它们可以识别和攻击外
来的致病微生物，保护机体免受感染。
淋巴细胞的数量和功能异常可能导致免疫系统失调，易感染各种疾病。
2.诊断疾病：淋巴细胞计数和分类可用于诊断某些疾病。
例如，淋巴细胞数
量明显增加可能与感染、炎症、恶性肿瘤等疾病有关；而淋巴细胞数量减少可能与免疫缺陷病、放射线损伤、某些药物治疗等有关。
3.癌症治疗监测：淋巴细胞计数和分析可用于监测癌症治疗的效果。
化疗和
放疗等治疗方法可能导致淋巴细胞减少，因此监测淋巴细胞数量可以评估治疗的效果和患者的免疫状态。
4.移植排斥反应：在器官移植术后，淋巴细胞的免疫应答可能导致移植器官
的排斥反应。
监测淋巴细胞数量和功能，可以及时发现排斥反应，并采取相应措施。
淋巴细胞在临床中具有重要的意义，可以用于评估免疫功能、诊断疾病、监测治疗效果和预防移植排斥反应。
对淋巴细胞的临床监测和分析有助于指导疾病的诊断和治疗。
人外周血与脐血内皮祖细胞生物学特性的比较
人外周血与脐血内皮祖细胞生物学特性的比较吴鸿涛;马艳;毕晓娟;江明;杨凯;王宁【摘要】BACKGROUND:Endothelial progenitor cells from the peripheral blood and umbilical cord blood are an essential source to repair vascular endothelial cells damaged by various diseases. <br> OBJECTIVE:To compare the biological characteristics of endothelial progenitor cells from peripheral blood and umbilical cord blood in vitro. <br> METHODS:Mononuclear cells were isolated from the umbilical cord blood and peripheral blood with density gradient centrifugation method and 6%hydroxyethyl starch precipitation combined with density gradient centrifugation method, respectively. Mononuclear cells were counted. Then the cells were implanted on the culture plate pre-paved with rat tail col agen at the concentration of 1×106/cm2, and cultured in an endothelial cellculture medium for 7 days. <br> RESULTS AND CONCLUSION:Isolated and cultured endothelial progenitor cells from the peripheral blood and umbilical cord blood had similar morphological characteristics in vitro. Under the optical microscope, withthe increase of culturing days, most adherent cells were changed from round to spindle-shaped. Peripheral blood endothelial progenitor cells had cellcolony formation, and spindle cells from the umbilical cord blood arranged typical y in a line structure. After trypan blue staining and drawing of cellgrowth curves, the number of mononuclear cells and endothelial progenitor cells, survival rate and proliferative ability ofendothelial progenitor cells from the peripheral blood were al lower than those from the umbilical cord blood (P<0.05). At day 3 after incubation, the proliferation of endothelial progenitor cells from the peripheral blood and umbilical cord blood reached the peak, and then showed a decreased tendency. Flow cytometry and Immunofluorescence staining showed that endothelial progenitor cells from the peripheral blood and umbilical cord blood could express CD34, CD133, and vascular endothelial cellfactor receptor 2. The endothelial progenitor cells from the peripheral blood and umbilical cord blood could swal ow acetylated low density lipoprotein and be combined with ulex europaeus agglutinin Ⅰ. The results confirmed that the endothelial progenitor cells from the peripheral blood and cord blood have similar biologicla characteristics, but the proliferation ability of endothelial progenitor cells from the cord blood is higher.%背景：内皮祖细胞可从外周血与脐血中获取，是修复各种疾病所致损伤的血管内皮细胞不可或缺的细胞来源。
淋巴细胞分型意义
2. CD8淋巴细胞增多：见于自身免疫性疾病，如SLE、艾滋病初期、慢性活动性肝炎、肿瘤与病毒感染等。
3. CD4/CD8＞2.5表明细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应，见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。CD4／CD8＜1．4称为“免疫抑制”状态，常见于（1）免疫缺陷病，如艾滋病时的比值常显著小于0.5；（2）恶性肿瘤；（3）再生障碍性贫血、白血病；（4）某些病毒感染；CD4/CD8降到1.0以下为“倒置”,是较为明显的异常。若移植后CD4/CD8较移植前明显增加，则可能发生排斥反应。
淋巴细胞亚群分析临床意义项目Leabharlann 称项目说明临床意义
参考值范围
CD3+
T淋巴细胞总数
淋巴细胞亚群分析是检测细胞免疫和体液免疫功能的重要指标，它总体反映机体当前的免疫功能、状态和平衡水平，并可以辅助诊断某些疾病（如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等），分析发病机制，观察疗效与检测预后有重要意义：
4.NK细胞（CD3—CD16+和/或CD56+）能够介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用。
65%~80%
（71.5±6.2）%
CD3+/CD4+
T辅助/诱导淋巴细胞
（45.7±5.3）%
CD3+/CD8+
T抑制/杀伤淋巴细胞
（27.9±5.0）%
CD4+/CD8+比值
T辅助、诱导/T抑制、杀伤
1.66±0.33
CD3－/CD19+
B淋巴细胞总数
16%~28%
CD3－/CD16+56+
人脐带和骨髓源间充质干细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响
Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ Ｃ ｌ ｉ ｎ ， Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０ １ ４ ， Ｖｏ １ ． １ １ ， Ｎｏ ． ４
・
论 著 ・
人 脐 带 和 骨髓 源 间充 质 干 细 胞 对 脐 血 单个 核 细胞
【 关键词】 脐 带； 骨髓 ； 间充质干细胞 ； 体外； 脐 血 单 个 核 细胞 ； 细 胞 增 殖 Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２ － ９ ４ ５ ５ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ４ ． ０ ０ １ 文 献 标 志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ — ９ ４ ５ ５ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ４ — ０ ４ ３ ３ — ０ ３
养 获 得 ＵＣ ＭＳ Ｃ ｓ 和Ｂ ＭＭＳ Ｃ ｓ ， 鉴定结果符合预期 ； 与 非 共 培 养 组 细胞 相 比 ， ＵＣ ＭＳ Ｃ ｓ和 Ｂ ＭＭＳ Ｃ ｓ 共 培 养 均 能 促 进
脐 血 单 个核 细胞 进入 增 殖 周 期 ， 并增 加 其 形 成 Ｃ Ｆ Ｕ — Ｍｉ ｘ的 能 力 （ Ｐ ｄ０ ． ０ ５ ） ， 但 ｕｃ ＭＳ Ｃ ｓ 和Ｂ ＭＭＳ Ｏ ｓ 共培养组之 间
增 殖 能 力 的影 响
张玉琳 ， 王静 文 ， 于纪棉 （ 宁波卫 生职 业技 术 学院人体 形 态 学教研 室 ， 浙 江 宁波 ３ １ ５ １ ０ ４ ）
【 摘 要】 目的 探 讨人 脐 带 间 充 质 干 细 胞 （ ｕｃ ＭＳ ｃ ｓ ） 与骨髓间充质干细胞（ Ｂ ＭＭｓ ｃ ｓ ） 在体外对造 血干细胞 的
Ｅｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｍｅ ｓ ｅ ｎｃ ｈ ｙ ｍ ａｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｄｅ ｒ ｉ ｖ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｂ ｏ ｎｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ａ ｎｄ ｕ ｍ ｂｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｏ ｒ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐｒ ｏｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｕ ｍｂ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｌ
脐血和成人外周血细胞免疫活性的区别
列抗 人 淋 巴 细 胞 单 克 隆 抗 体 与 I TI ℃ 标记 的羊抗 鼠 I多 卫 生 部 武 汉 生 物 制 品 研 究 所产 品
口 口口
。 ,
的重 建 造 血 系 统 的 干 细 胞 来 源 病或 实 体瘤 成 功 的 报 道
` 汇
19 8 9
年
以 来 国 内外 相 继 有 脐血 移 植治 疗某 些 血 液
]
,
。
植物 血 凝 素 ( P H A ) 广 州 医 工 所产
采 用 微量 全 血
但 因胎 儿 出生
,
时 淋 巴细 胞 已 具 有 一 定 的 免 疫 功 能
因此
。
3
淋 巴 细 胞 转 化 试验
。
.
脐血 移植 仍 可 发 生 不
同程 度 的 C V H D
,
为
形态 学 计 数 法
0 5血
,
以 无 菌操作法取抗凝血
P HA
Z o
7 ℃ 温箱 中培养 7 2 鸿 在 3 h
, ,
待终止
,
培 养 后 用 毛 细 吸 管 吸 弃大部 分 上 清 然 后 剩 余 部分 用 毛 细 吸 管 吹 打均 匀 取 细 胞 悬
, ,
材 料和 方 法
1
液
l
滴 置 于 洁净玻 片一 端 推 片 用 瑞 氏染
, ,
标本采 集
。
取 正 常分娩足 月 胎儿 脐
n
c
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细 胞 百分 率
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较成 人 外 周 血 ( ) 0 1
20131129脐带血干细胞
国内外研究动态——临床应用研究
大脑瘫痪 糖尿病 系统性红斑狼疮 肝功能衰竭 心肌损害 帕金森病 角膜损伤 神经损伤 。。。
4. 脐血治疗疾病的显著优点
• (1) 来源丰富,易于获得；
•
• •
(2) 取血时对于母体和婴儿均无痛苦；
(3) 脐血可以长期储存 ； (4) 发生移植物抗宿主病的发生率低 ； HLA-DR、CD80、CD86 阴性表达；其 中，HLA-DR位点是异基因移植时免疫排异反应发生的主要位点；CD80 和 CD86 是移植物抗宿主病(GVHD) 发生的最重要共刺激通路B7/ CD28 的信号分 子。 (5) 脐血中含各种原始细胞如造血干细胞、间充质干细胞,具有较强的增殖分化 的能力； (6) 脐血中各种病毒感染的几率相对较少。
来源：采集的脐带血产妇必须是35岁以下,
身体健康, 无各种急、 慢性疾病及传染病、家族遗传性疾病, 妊娠期内无严重合并症, 分娩 过程顺利; 既往有输血史、多胎妊娠、孕期少于37周或多于42周者均 不能作为脐血采集对象。胎儿则要求无任何畸形、体质量超过2 500 g。 此外, 胎盘剥离距分娩时间超过12 h, 胎膜早破超过24 h, 羊水内有 胎粪, 胎儿呼吸窘迫者脐血亦不能采用。
1. 脐带血干细胞简介及来源 简介：脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液，
通常是废弃不用的。近十几年的研究发现，脐带血中含有可以重建人体造血和 免疫系统的造血干/祖细胞，可用于造血干细胞移植，治疗多种疾病。因此，脐 带血已成为造血干细胞的重要来源，并是一种非常重要的人类生物资源。
2. 脐带血干细胞特点
1 脐血造血细胞的生物学特性：
人的造血干细胞主要存在于CD 34 + 细胞群中。在体外长期培养时収现脐 血具有以下特征: （1）脐血中CD 34 + CD 38 - 细胞形成集落的频率及其所含细胞数均比骨髓高， 形成集落的时间较快，对集落生长刺激因子具有更高的敏感性。 （2）脐血中CD 38 - 细胞亚群产生早期丌同细胞集落形成单位的能力较骨髓强。 （3）在生长基质上迚行体外长期培养时収现脐血单个细胞维持造血的时间更 长。 （4）在长期培养体系中，脐血中的CFU-载体
骨髓免疫分型报告解读
骨髓免疫分型报告解读
骨髓免疫分型报告解读
一、总论
骨髓免疫分型是反映人体免疫系统细胞构成与功能的一种研究
方法，可以帮助医生更好地诊断、治疗和预防疾病。
它是通过研究骨髓样本中各种细胞的细胞因子和抗原而获得的，以检测不同人群的抗原和细胞因子，以及它们的变化情况。
二、具体内容
1、骨髓免疫分型报告的内容
骨髓免疫分型报告包括以下内容：细胞因子测定，细胞变化，抗原分型，细胞抗原，抗原表达，细胞抗体，细胞抗体分型，HLA家系分型等。
2、骨髓免疫分型报告的重要意义
细胞因子测定：可以及时检测细胞因子，可以更好地诊断、治疗和预防疾病。
抗原分型：可以检测人体对不同的非特异性抗原的反应，从而预防和治疗疾病。
细胞抗体分型：可以及时检测细胞抗体，可以预防和治疗疾病。
HLA家系分型：可以及时识别人群中不同的HLA基因，以确定患者的免疫健康状况，从而帮助患者更好地预防和治疗疾病。
三、结论
骨髓免疫分型报告是一种反映人体免疫系统细胞构成与功能的
重要研究方法，其内容包括细胞因子测定，抗原分型，细胞抗体分型，HLA家系分型等，可以帮助医生更好地诊断、治疗和预防疾病。
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人脐血及骨髓淋巴细胞免疫表型的比较及其意义郭 荣,邹 萍,邹典斌1(华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所,武汉430022;1郑州大学医学院第一附属医院血液科,郑州450052)摘要 为比较脐血和骨髓淋巴细胞及祖细胞分化抗原,通过流式细胞术(FCM)双标法对38份脐血及10份骨髓免疫细胞表型进行了分析研究。
研究发现:①脐血及骨髓淋巴细胞中均测到幼稚淋巴细胞(CD3-CD4+),且前者中含量较多,但脐血细胞毒T细胞含量(CTL,CD3+CD16+56+)低于骨髓;②脐血中N K细胞(CD3-CD16+56+)比例高于骨髓;③脐血有核细胞中CD34+细胞的比值接近于骨髓,但脐血CD34+细胞中髓系祖细胞(CD34+ CD13+,CD34+HLA2DR+)及淋巴系祖细胞(CD34+CD19+)含量均低于骨髓。
结论:①脐血免疫细胞具有不成熟性,这估计是脐血移植后GVHD程度轻的主要原因;②脐血淋巴细胞中N K细胞含量较高,推测脐血移植后移植物抗白血病效应(GVL)并不会降低;③脐血CD34+细胞中髓系祖细胞及淋巴系祖细胞比例均低于骨髓,可能是脐血移植后造血及免疫重建速度较慢的原因之一。
关键词 脐血;骨髓;淋巴细胞;免疫表型中图分类号 R33111;R331.2A Comparison bet w een Immunophenotypes of Lymphoid Cells from H uman Umbilical Cord Blood and Bone Marrow and Its Signif icanceGUO Rong,ZOU Ping,ZOU Dian2Bin1(Instit ute of Hematology,The A f f iliated U nion Hospital,Tongji Medical College,Huaz hong Science and Technology U niversity, W uhan430022,Chi na;1Depart ment of Hematology,The Fi rst A f f iliated Hospital of Medical College of Zhenz hou U niversity, Zhenz hou450052,Chi na)Abstract To compare the expression of CD antigens on immune cells from umbilical cord blood(UCB)and bone marrow(BM)and analyze its clinical significance,the phenotypes of lymphoid cells and nucleated cells from38UCB and 10BM samples were investigated by flow cytometry with double labeling monoclonal antibodies.The results showed that the immature lymphocytes(CD3-CD4+)were detedcted in UCB and higher than those in BM;cytotoxic T lymphocytes (CD3+CD16+CD56+)in UCB were significantly lower than those in BM.N K cells(CD3-CD16+CD56+)in UCB were higher than those in BM.The ratio of CD34+cells in nucleated cells of UCB was similar to that of BM,however,both the contents of myeloid(CD34+CD13+and CD34+HLA2DR+)and lymphoid(CD34+CD19+)progenitor cells in UCB were lower than those in BM.It is concluded that the immune cells in UCBpossess immaturity,which might lead to mild GVHD after UCB trans plantation.It is infered from the higher ratio of N K cells in UCB,GVL will not decrease after UCB transplantation.The lower contents of myeloid and lymphoid progenitor cells in UCB probably accounted for the slow hematopoiesis and immune reconstitution following UCB transplantation.K ey w ords umbilical cord blood;bone marrow;lymphoid cell;immunophenotype 脐血具有经济、来源广、采集方便、无采集并发症,移植后移植物抗宿主病(graft versus host dis2 ease,GV HD)程度轻,移植物抗白血病(graft versus leukemia,GVL)效应不降低等优点。
但是脐血也存在造血重建速度慢,易合并感染的问题。
本研究应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)对脐血和骨髓免疫细胞分化抗原进行检测,比较二者在淋系祖细胞、髓系祖细胞、幼稚淋巴细胞及N K细胞含量方面有无差别,旨在分析二者免疫表型差异,探讨其在扩大脐血应用范围中的作用和意义。
材料与方法标本采集无菌条件下采集正常足月分娩新生儿脐血38份。
母亲年龄24-35岁,平均(29.3±3.3)岁。
新生儿娩出后,立即(不超过30秒)用止血钳在距脐轮2-3cm处夹住脐带,在两钳间剪断脐带,用含少许肝素的注射器抽取脐血,加入离心管中混匀。
骨髓 通讯作者:郭荣 电话:(027)85730575.E2mail:gh7311@yahoo. ・915・中国实验血液学杂志 Journal of Ex perimental Hem atology2002;10(6):519-522取自10名健康志愿献髓者(男6例,女4例),年龄20-45岁,平均(32.7±9.1)岁。
采集用肝素抗凝的髂骨骨髓2-3ml,注入试管中混匀。
脐血有核细胞计数常规计数2次,取其平均值。
脐血及骨髓细胞单克隆抗体标记取新鲜抗凝的脐血及骨髓50μl。
在4只离心管均先加入CD342FITC单抗,再分别加入CD382 PE,HLA2DR2PE,CD192PE或CD132PE鼠抗人单抗各20μl;另取2只离心管先加入CD32PE,再分别加入CD42CY或CD16+562CY鼠抗人单抗各20μl。
室温避光孵育30分钟后加入1ml红细胞裂解液(01155mol/L N H4Cl,0101mol/L KHCO3,0101 mmol/L ED TA,Becton Dickinson,USA),混匀后孵育9分钟,PBS21%BSA洗2次,最后加入0.5ml 0.1%多聚甲醛固定液混匀。
阴性对照管加入20μl PBS,同型对照管加入鼠抗Ig G12FITC/Ig G22PE各20μl,操作同上。
所用荧光标记单抗均由美国PharMingen公司提供。
FACScan Cell Q uest测定及Stas数据分析以FCM测定CD34+细胞及其亚群中各表面抗原表达率。
流式细胞仪为FACScan型(Becton Dickinson,USA)。
具体操作参照文献[1]。
采用对数获取,每个样品测定200000个细胞。
第1荧光探测器(FL1),第2荧光探测器(FL2)及第3荧光探测器(FL3),分别反映FITC,PE及CY的荧光强度。
测前以Autocomp软件结合Calibrite Beads调正校对器,计算其变异系数(CV),使其稳定在2%以内,再以过滤的无颗粒PBS高速运行2分钟,以去除Flow中可能存在的气泡。
统计学处理采用t检验,应用SPSS8.0数据统计软件分析实验结果。
结 果脐血及骨髓有核细胞中CD34+细胞及其各亚群的含量38份脐血平均容积为(115.7±22.4)ml。
有核细胞计数为(10.4±2.9)×109/L,平均每份脐血有核细胞含量为1.2×109,CD34+细胞含量为4.7×106。
脐血有核细胞中CD34+细胞的比值接近于骨髓,但脐血CD34+细胞中髓系祖细胞(CD34+ CD13+和CD34+HLA2DR+)含量及淋巴系祖细胞(CD34+CD19+)含量均低于骨髓(见附表及附图)。
脐血及骨髓淋巴细胞中各亚群含量脐血中细胞毒T细胞含量(CTL,CD3+CD16+ 56+)低于骨髓,但其中N K细胞(CD3-CD16+56+)比例高于骨髓,P值均小于0.01(附表及附图)。
T able Comparison of subsets of CD34+cells and lymphocytes in cord blood and bone marrow( x±s)Subset of CD34+celland lymphoid cellCord blood(%)(n=38)Bone marrow(%)(n=10)CD34+ 0.39±0.173 0.35±0.19CD34+CD38+82.76±9.51388.54±5.79CD34+CD13+58.66±4.823373.98±5.92CD34+CD19+ 1.49±0.503319.89±3.65CD34+HLA2DR+66.27±9.563382.41±8.47CD3-CD16+CD56+18.10±4.163310.44±3.14CD3+CD16+CD56+0.83±0.4533 2.09±0.46CD3+CD4+11.05±3.45311.45±1.69CD3-CD4+9.18±3.0733 2.98±2.61 3P>0.05and33P<0.01,compared with that of bone marrow讨 论本研究检测了脐血免疫细胞表面标志的表达情况,并将其与骨髓中细胞的相应标志进行比较,以探讨脐血与骨髓移植相比有那些优势及不足之处,为脐血移植的临床应用提供理论依据。