转基因水稻中间试验要求
水稻转基因育种的研究进展与应用现状
水稻转基因育种的研究进展与应用现状刘志宏1 田 媛2 陈红娜1 周志豪1 郑 洁2 杨晓怀1（1深圳市农业科技促进中心，广东深圳518000；2暨南大学食品科学与工程系，广东广州510632）摘要：随着生物技术发展的不断深入，我国水稻种业的发展也面临着全新的机遇和挑战。
目前，改善水稻品种质量的主要方法有分子标记技术、基因编辑技术和转基因技术。
其中，转基因水稻是利用生物技术手段将外源基因转入到目标水稻的基因组中，通过外源基因的表达，获得具有抗病、抗虫、抗除草剂等优良性状的水稻品种。
近年来，国内外在采用转基因技术进行水稻育种，提升水稻产量、改善水稻品质方面具有较多的研究进展。
在阐述转基因技术工作原理的基础上，概述国内外利用转基因技术在优质水稻育种方面的研究进展，进一步探究转基因技术在我国水稻育种领域的发展前景。
关键词：转基因育种；水稻；病虫害；除草剂Research Progress and Application Status of Rice Transgenic Breeding LIU Zhihong1，TIAN Yuan2，CHEN Hongna1，ZHOU Zhihao1，ZHENG Jie2，YANG Xiaohuai1（1Shenzhen Agricultural Technology Promotion Center，Shenzhen 518000，Guangdong；2Department of Food Science and Engineering，Jinan University，Guangzhou 510632）水稻（Oryza sativa L.）作为世界上重要的粮食作物之一，为世界超过1/3的人口提供了主粮，全球种植面积约1.4亿hm2[1]。
“十二五”以来，我国水稻产量连续稳定在2亿t以上[2]。
水稻作为我国的主要粮食作物，在我国粮食生产领域占据着十分重要的地位，水稻品种改良仍是保障种业持续发展和国家粮食安全的重点。
申请转基因中间试验种植面积
申请转基因中间试验种植面积
1.提交申请：申请人应根据相关法律法规和管理规定，向负
责审核和审批的机构提交申请。
在申请中要详细描述转基因作
物的种类、目的、所需种植面积等相关信息，并附上相关的研
究方案和安全评价报告等文件。
2.审核和评估：提交申请后，相关机构会对申请材料进行审
核和评估。
评估的内容主要包括对转基因作物的遗传稳定性、
对环境和生态系统的影响、对人体健康的安全性等方面进行评估。
3.决策和审批：在审核和评估完成后，相关机构会根据评估
结果进行决策，并作出是否批准申请的决定。
如果申请被批准，申请人将获得种植转基因作物的许可证。
4.确定种植面积：根据批准的许可证，申请人可以开始进行
转基因中间试验种植。
种植面积的确定通常由申请人根据研究
需要和管理规定来确定。
在种植过程中，申请人需严格按照许
可证规定的种植面积进行操作，并遵守相关的管理要求和安全
措施。
需要注意的是，转基因作物的种植面积一般受到一定的限制
和监管，旨在保证转基因作物的安全性和环境保护。
种植面积
的具体要求和限制可能因国家和地区而异，所以在申请前需要
仔细了解和遵守相关的法律法规和管理规定。
此外，申请人还
应遵守相关的知识产权规定，确保转基因作物的研究和种植符合知识产权的要求。
中国水稻品种试验与审定
中国水稻品种试验与审定一、试验目的水稻品种试验与审定是指对新培育的水稻品种进行田间试验，评价其农艺性状和产量特性，为其审定推广提供科学依据。
试验的目的在于筛选高产、抗逆、优质、抗病虫害的优良水稻品种，促进水稻产业的发展。
二、试验流程1.申报品种水稻品种试验与审定需要申报品种，一般由科研单位、种子公司或农业专业合作社提出申报。
申报品种需提供相关材料和数据，并经过专家委员会的评审才可获得试验资格。
2.选地选时选择适宜的试验地点和择机进行试验是水稻品种试验成功的关键。
试验地应具备相对平整、排水良好、土壤肥沃等特点，同时也要考虑到当地气候条件和水稻种植习性。
3.布置试验试验需按照科学的设计原则进行布置，包括重复次数、对照品种、试验面积等。
合理设计试验可以排除多种杂变因素，准确评价品种的性状。
4.施肥管理良好的施肥管理是水稻品种试验成功的保障。
根据土壤养分状况和品种的养分需求，合理施用基础肥料和追肥，保障水稻生长发育所需养分。
5.田间管理水稻品种试验过程中需要加强田间管理，包括及时灌溉、除草、病虫害防治等，确保试验田的生长环境良好，减少外界干扰因素。
6.数据收集在试验生长期内，需定期对试验田进行观察和数据收集。
包括生育期、株型特征、抗逆性、成熟期产量等多个方面的数据。
7.数据分析通过对试验数据的分析，评价各品种的优劣势，并筛选出表现较好的品种进一步审定。
8.品种审定水稻品种审定需要经过多方评审才可获得审定资格。
一般包括经济评价、农艺性状、品质特性、抗逆性以及审定试验的产量成绩等多方面评价。
三、试验要点1.灌溉管理试验期内要保持适宜的土壤湿度，避免因干旱或过湿对试验结果的影响。
2.施肥科学依据不同试验区的土壤养分状况，科学施用农业肥料和农家肥，保障水稻生长所需养分。
3.防治病虫害试验期内应定期巡查试验田，严格防治水稻病虫害，保障试验稳定进行。
4.数据准确试验数据的准确性是品种审定的关键，需要科学的数据统计方法进行处理，确保结果的可信度。
无抗性选择标记转基因软米和糯稻新品系的选育及中间试验
无抗性选择标记转基因软米和糯稻新品系的选育及中间试验于恒秀;刘巧泉;徐丽;陆美芳;蔡秀玲;龚志云;裔传灯;王宗阳;顾铭洪【期刊名称】《作物学报》【年(卷),期】2009(35)6【摘要】直链淀粉含量是影响稻米品质的最主要因素之一.为培育直链淀粉含量较低的软米和糯稻新品系,在经共转化法获得的转反义Wx基因水稻自交后代中筛选获得了不含抗性选择标记基因的纯合体.对这些纯合转基因水稻的分析表明,其未成熟种子胚乳中Wx基因表达水平和成熟种子中Wx蛋白量较未转化对照有不同程度的降低.转基因水稻成熟种子中直链淀粉含量较未转化对照有不同程度的下降,2个转基因系降低至10%左右,相当于软米的直链淀粉含量,1个转基因系降到了2%以下,形成了糯稻新品系.转基因稻米中直链淀粉含量降低后,其胶稠度相应变软,而糊化温度未发生明显改变.田间试验结果表明,转基囚水稻的大部分农艺性状与受体品种武香粳9号无显著差异.因此,本研究成功培育了无抗性选择标记且淀粉品质改良的转反义Wx基囚水稻新品系.【总页数】7页(P967-973)【作者】于恒秀;刘巧泉;徐丽;陆美芳;蔡秀玲;龚志云;裔传灯;王宗阳;顾铭洪【作者单位】扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室/江苏省作物遗传生理重点实验室,江苏扬州,225009;扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室/江苏省作物遗传生理重点实验室,江苏扬州,225009;扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室/江苏省作物遗传生理重点实验室,江苏扬州,225009;上海上实现代农业开发有限公司,上海,202183;扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室/江苏省作物遗传生理重点实验室,江苏扬州,225009;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生念研究所,上海,200032;扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室/江苏省作物遗传生理重点实验室,江苏扬州,225009;扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室/江苏省作物遗传生理重点实验室,江苏扬州,225009;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生念研究所,上海,200032;扬州大学教育部植物功能基因组学重点实验室/江苏省作物遗传生理重点实验室,江苏扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】S5【相关文献】1.无抗性选择标记转基因软米和糯稻新品系的选育 [J],2.无抗性选择标记转AP1基因抗病水稻新品系的选育 [J], 于恒秀;刘巧泉;王玲;赵志鹏;徐丽;黄奔立;龚志云;汤述翥;顾铭洪3.分子标记辅助选育含有抗稻瘟病基因和软米基因两系不育系水稻新品系 [J], 赵国超; 王冬翼; 张珍; 王彤; 吴雪源; 曾文秀; 李建粤4.利用分子标记辅助选育优质长粒香型软米水稻新品系"上师大19号" [J], 胡兰;孙双燕;曹伟召;曾文秀;赵国超;李建粤5.抗褐飞虱和抗除草剂转基因粳稻新品系的选育及其中间试验 [J], 王玲;于恒秀;黄世文;赵志鹏;龚志云;汤述翥;顾铭洪;刘巧泉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水稻品种试验方案
水稻品种试验方案水稻是我国主要的粮食作物之一，种植面积广泛，对农民的生计和国家的粮食安全都具有重要意义。
为了提高水稻的产量和质量，科学家们一直在努力研究和开发新的水稻品种。
水稻品种试验方案是其中的一项重要工作，本文将介绍水稻品种试验的意义、方法和内容。
一、水稻品种试验的意义水稻品种试验是为了筛选出适应不同地区和条件的新品种，提高水稻的产量和抗病虫害能力。
随着气候变化和农业技术的不断发展，旧品种可能面临适应能力下降的问题，因此通过品种试验，可以及时调整和更新水稻品种，提高整个水稻生产系统的适应性和稳定性。
二、水稻品种试验的方法水稻品种试验一般分为田间试验和室内试验两种方法。
田间试验是在实际的农田环境中进行的，可以反映出品种在真实生长条件下的表现。
室内试验则是通过在温室或实验室中模拟各种环境条件，进行人工培养和观察。
田间试验通常需要选定不同的试验地点，考虑到不同的土壤类型、气候条件和管理措施。
试验地点的选择是十分关键的，需要考虑到这些因素对水稻生长的影响，并且确保试验结果的可靠性和可重复性。
同时，试验田的布局和设计也需要合理，以确保每个品种都有足够的生长空间，并且排除其它因素对试验结果的干扰。
室内试验则需要控制环境条件，包括温度、湿度、光照等，以模拟不同的生长阶段和环境条件。
室内试验通常采用小尺寸的试验盆或器皿，通过人工控制灌溉和施肥，观察品种的生长情况和表现。
三、水稻品种试验的内容水稻品种试验的内容包括不同品种的筛选、评价和比较。
通常需要更多的试验地点和时间来全面了解品种的性状和表现。
其中，重要的指标包括水稻的生长速度、株高、叶片形态、茎秆粗细、抗性状和产量等。
同时还需要评估品种对干旱、病虫害和逆境等的抗性，以及其它农艺性状例如结实性、品质特点等。
水稻品种试验的范围也可以根据实际需要进行不同的划分。
有些试验可以集中在某个地区或特定种植环境中进行，以满足该地区的特殊需求。
还有一些试验则可以针对某些特殊性状或功能进行，例如抗病虫害的品种筛选或特殊口感的品质评价等。
转基因水稻Bt汕优63外源插入结构验证和定量检测方法建立
转基因水稻Bt汕优63外源插入结构验证和定量检测方法建立一、背景介绍Bt汕优63是一种经过基因工程技术改造的转基因水稻品种，通过引入Bt基因，使其具备抗虫特性，有效减少农药使用，保障粮食安全。
为确保Bt汕优63中外源基因插入结构的稳定性和表达量，本研究旨在建立一套针对其外源插入结构的验证和定量检测方法。
二、外源插入结构验证方法1. DNA提取从Bt汕优63植株中提取基因组DNA，作为后续实验的模板。
2. PCR扩增设计特异性引物，针对Bt基因及其侧翼序列进行PCR扩增。
通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，验证Bt基因是否成功插入水稻基因组。
3. 序列分析将PCR扩增产物进行测序，与预期序列进行比对，确认插入位点和序列的正确性。
三、定量检测方法建立1. 实时荧光定量PCR（qPCR）以Bt基因为目标，设计特异性引物和探针，建立qPCR检测体系。
通过标准曲线法对Bt基因在水稻基因组中的表达量进行定量分析。
2. qPCR实验步骤（1）制备cDNA：以提取的RNA为模板，反转录合成cDNA。
（2）配制qPCR反应体系：包括cDNA模板、引物、探针、dNTPs、Taq酶等。
（3）设置qPCR反应程序：包括预变性、变性、退火、延伸等步骤。
（4）数据分析：采用软件分析Ct值，根据标准曲线计算Bt基因的相对表达量。
四、方法优化与验证1. 优化实验条件：对qPCR反应体系中的引物浓度、探针浓度、退火温度等进行优化，确保检测体系的灵敏度和特异性。
2. 重复性实验：进行多次独立实验，验证检测方法的重复性。
3. 线性范围验证：通过制备不同浓度的标准品，构建标准曲线，验证检测方法的线性范围。
本研究成功建立了Bt汕优63外源插入结构的验证和定量检测方法，为后续转基因水稻的监管、研究和应用提供了有力的技术支持。
通过这些方法，可以确保Bt汕优63中外源基因的稳定性和表达量，为我国转基因作物的发展和安全提供保障。
六、实验操作注意事项1. DNA提取过程中的注意事项确保实验过程中使用的器械和容器无菌，避免DNA污染。
转基因水稻
审定关口，否则仍不能进入生产应用。
• 从研发到获证，前后历时15年
• 在未完成商业化之前，发放安全证书的是两个品系而不是
品种，品系是未经审定通过的，是育种材料。两个品系的 研发工作始于1995年，1999年成果通过了农业部的鉴定。 成果完成仅用了4年。这仅仅是一小步。
• 经安委会安全评价和农业部批准，1999—2000年，专家组 就转基因水稻开展中间试验，2001—2002年开展环境释放，
其他生物，但是所有生物体的DNA都是由4种碱基组成，
源基因的含量结很小合，目，前尚大未发幅现有度消化提系统高中的农植物产品的产量和品质，才能满足我国社 会经济发展对农产品持续增长的需求。
发展历程
•
年，我国科学家拥有自主知识产权的转基因杂交水稻
品系“华恢1号”和“Bt汕优63”获得安全证书，进入处 于产业化应用的关键阶段。这是我国转基因作物技术研发 上极具现实意义的一个事件。根据有关法律法规规定，从 品种选育成功到示范推广，还要经历品种区域试验、品种
2003—2004年开展生产性试验，2004年申请转基因水稻生 产应用安全证书。包括安全性试验在内的各种试验用了11 年。
全球转基因水稻处于商业化推广初期， 对现有生产与贸易格局影响不大
水稻是最重要的粮食作物，也是世界上13亿人口 的主要口粮。转基因水稻研究一直受到国际重视， 在全球范围内仍未大面积推广，目前只有伊朗、 批准商业化种植转基因水稻，且推广面积非常小， 对全球现有常规水稻生产格局没有影响。 2005年，伊朗批准种植了大约4000公顷转Bt基因水 稻，抢先拉开了商业化种植转基因水稻的序幕。 已批准222项转基因水稻田间试验和3项转基因抗 除草剂水稻商业化应用。 2006年，我国“863”等多项科技计划投入数亿元 资金开展转基因水稻研究，有世界上规模最大的 转基因水稻计划，专一防治稻螟虫和水稻白叶枯 病的转基因水稻。
水稻转基因实验方法与步骤
水稻转基因一、实验目的1.学习水稻组织培养的方法2.学习水稻转基因的方法二、实验原理目的基因克隆到双元载体中，双元载体转入农杆菌，然后携带双元载体的农杆菌侵染水稻愈伤组织，通过T-DNA插入，把我们的目的基因整合到水稻染色体上。
历史：农杆菌感染受伤的植物产生冠瘿瘤病，发现是由Ti质粒引起，同时做杂交，发现只有T-DNA（transferred DNA）这一部分被整合到植物染色体上了。
三、试验步骤：一、水稻愈伤组织的诱导（一）以水稻幼胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻未成熟种子（灌浆期），按以下步骤消毒：1）用自来水冲洗种子，去掉浮起的瘪谷；2）将种子放入250ml无菌烧杯中(种子数量约占1/3体积)，用200ml 70%酒精消毒2分钟；（在操净工作台上进行无菌操作）3）加入250ml 25%次氯酸钠（NaClO）溶液，同时加数滴吐温-20，浸泡90分钟；4）倒去NaClO溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍。
2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）用镊子夹住种子，在无菌滤纸上用钢钩挤出幼胚，置入诱导培养基中；2）操作完毕后封好培养皿(一般保鲜膜)，在暗处适温下（25-28℃）培养5天；3）继代培养。
用镊子剥下胚性愈伤组织（去掉芽及膜状物），置入继代培养基中（凸起面向上），暗处适温下（25-28℃）培养3天。
（二）以水稻成熟胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻成熟种子，人工或者机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子，按以下步骤消毒：1）将种子放入100ml无菌烧杯中，倒入70%酒精消毒2分钟；2）倒去酒精，加入100ml 20%次氯酸钠（NaClO）溶液，浸泡30分钟；3) 倒去次氯酸钠溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍，最后一遍浸泡30分钟。
2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）种子放在无菌滤纸上吸干，置入成就胚诱导培养基中，每皿12－14颗；2）操作完毕用封口膜（Micropore TM Surgical Tape）封好培养皿，在28℃光照培养箱，培养3周；3）在超净工作台上打开培养皿，用镊子挑取自然分裂的胚性愈伤组织（淡黄色，致密呈球状），置入继代培养基中，在28℃光照培养箱，继代培养1周。
转基因植物安全评价指南
附件1转基因植物安全评价指南（试行）农业部农业转基因生物安全管理办公室2007年9月目录前言................................................................................. 错误！未定义书签。
一、总体要求................................................................ 错误！未定义书签。
（一）分子特征...................................................... 错误！未定义书签。
1. 表达载体相关资料 ....................................... 错误！未定义书签。
2. 目的基因在植物基因组中的整合情况........... 错误！未定义书签。
3. 外源插入片段的表达情况............................. 错误！未定义书签。
（二）遗传稳定性 .................................................. 错误！未定义书签。
1. 目的基因整合的稳定性 ................................ 错误！未定义书签。
2. 目的基因表达的稳定性 ................................ 错误！未定义书签。
3. 目标性状表现的稳定性 ................................ 错误！未定义书签。
（三）环境安全...................................................... 错误！未定义书签。
1. 生存竞争能力 .............................................. 错误！未定义书签。
转基因水稻品种
转基因水稻品种一、转基因水稻的概念转基因水稻是指通过基因工程技术将外源基因导入水稻基因组中，从而使水稻获得新的性状或特性的水稻品种。
例如，可能导入抗虫基因使水稻能够抵抗特定害虫的侵害，或者导入抗除草剂基因方便田间杂草管理等。
1. 抗虫转基因水稻- Bt转基因水稻- 原理：将苏云金芽孢杆菌（Bt）中的杀虫蛋白基因导入水稻。
Bt蛋白能够特异性地毒杀鳞翅目害虫，如螟虫等。
当害虫取食转基因水稻后，Bt蛋白在害虫肠道内被激活，与肠道上皮细胞表面的特异性受体结合，造成肠道穿孔，最终导致害虫死亡。
- 优势：显著减少化学杀虫剂的使用量。
传统防治螟虫等害虫需要多次喷洒农药，这不仅成本高，而且农药残留会对环境和人类健康造成潜在威胁。
抗虫转基因水稻能在很大程度上解决这些问题，提高水稻产量的稳定性。
- CpTI转基因水稻- 原理：豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）基因被导入水稻。
CpTI能够抑制害虫体内的胰蛋白酶活性，从而影响害虫的消化过程，达到抗虫的目的。
- 优势：具有较广的抗虫谱，对多种害虫都有一定的抑制作用。
同时，由于其作用机制与Bt蛋白不同，两者结合使用可以延缓害虫对单一抗虫基因产生抗性。
2. 抗除草剂转基因水稻- 例如，导入抗草甘膦基因的水稻。
- 原理：草甘膦是一种广谱性的除草剂，它通过抑制植物体内的5 - 烯醇丙酮莽草酸 - 3 - 磷酸合成酶（EPSPS）的活性来杀死植物。
抗草甘膦转基因水稻中导入了经过修饰的EPSPS基因，这种基因编码的酶对草甘膦不敏感，从而使水稻在使用草甘膦除草剂时能够正常生长，而杂草被有效清除。
- 优势：方便田间杂草管理。
在传统水稻种植中，人工除草劳动强度大，化学除草容易对水稻产生药害。
抗除草剂转基因水稻可以在水稻生长期间精准地使用草甘膦进行除草，提高田间管理效率，减少杂草与水稻争肥、争光等情况，有助于提高水稻产量。
三、转基因水稻的安全性争议1. 环境安全方面- 基因漂移问题- 争议点：转基因水稻中的外源基因可能通过花粉传播等方式漂移到野生稻或其他近缘植物中，从而可能改变野生植物的基因组成和生态特性。
转基因水稻培育实验报告
一、实验目的本实验旨在通过基因工程技术，将具有特定功能的基因导入水稻中，培育出具有抗病、抗虫、抗逆等优良性状的转基因水稻，为我国水稻育种提供新的途径。
二、实验原理转基因技术是指将外源基因导入目标生物体基因组中，使目标生物体获得新的性状或功能。
本实验采用农杆菌介导法将目的基因导入水稻中，通过基因重组，使水稻获得抗病、抗虫、抗逆等优良性状。
三、实验材料1. 水稻品种：Oryza sativa L.（籼稻）2. 抗病基因：Xa213. 抗虫基因：Bt蛋白基因4. 抗逆基因：海藻糖合成酶基因5. 农杆菌：Agrobacterium tumefaciens EHA1056. 实验试剂：限制酶、DNA连接酶、质粒、抗生素等四、实验方法1. 目的基因的克隆与构建（1）从基因库中获取抗病基因Xa21、抗虫基因Bt蛋白基因和抗逆基因海藻糖合成酶基因的DNA序列。
（2）利用PCR技术扩增目的基因。
（3）将扩增的目的基因与载体质粒连接，构建重组质粒。
2. 农杆菌转化（1）将重组质粒转化农杆菌EHA105。
（2）将转化后的农杆菌接种于含有抗生素的培养基中，筛选阳性克隆。
3. 转化水稻（1）将阳性农杆菌接种于含有抗生素的培养基中，培养至对数生长期。
（2）将农杆菌与水稻叶片接触，进行转化。
4. 筛选转基因植株（1）将转化后的水稻苗移栽至田间，进行抗性鉴定。
（2）根据抗性表现，筛选出转基因植株。
5. 分子鉴定（1）提取转基因植株的DNA。
（2）利用PCR技术检测目的基因是否整合到水稻基因组中。
五、实验结果1. 成功构建了含有抗病基因Xa21、抗虫基因Bt蛋白基因和抗逆基因海藻糖合成酶基因的重组质粒。
2. 转化后的农杆菌能够将目的基因导入水稻中。
3. 通过抗性鉴定，筛选出具有抗病、抗虫、抗逆等优良性状的转基因水稻。
4. 分子鉴定结果显示，目的基因已整合到水稻基因组中。
六、实验结论本实验成功培育出具有抗病、抗虫、抗逆等优良性状的转基因水稻，为我国水稻育种提供了新的途径。
转基因植物田间试验监管手册
转基因植物田间试验监管手册农业部农业转基因生物安全管理办公室2011年4月说明为了切实做好农业转基因生物安全管理，按照属地化管理原则，从源头控制转基因育种材料非法流失，按照《农业转基因生物安全管理条例》及配套的规章，以及《转基因农作物田间试验安全检查指南》等要求，我办对赋予省区市农业行政主管部门的监管职能、对转基因生物实验室和转基因植物田间试验监管要求进行了梳理，汇编成《地方农业行政主管部门监管手册》、《转基因生物实验室监管手册》、《转基因植物田间试验监管手册》，供各单位自查和上级主管部门检查使用。
编者一、总体要求1、成立由单位法人代表负责的农业转基因生物安全小组，负责本单位农业转基因生物安全管理及安全评价申报的审查工作。
2、应当有专门的机构和专职技术人员，具备与试验相适应的仪器设备和设施条件。
3、应具备与安全等级相适应的安全设施和措施，确保农业转基因生物研究的安全。
4、要建立安全管理责任制度，分工明确，责任到人。
5、要对试验人员开展定期培训和考核，使其了解生物安全管理的职责、措施和要求。
6、要制定检查计划，定期开展监督检查，对违规行为及时予以纠正，情节严重的予以处罚。
7、从事农业转基因生物所有安全等级的试验的单位和个人，应当向农业部报告或者提出申请，申请批准后，才能从事相应的研究工作。
8、应当确定安全控制措施和预防事故的紧急措施，做好安全监督记录。
对材料进出的时间、数量、流向、经手人详细记录，并建立档案备查。
9、应当配备对繁殖材料的灭活设备如焚烧炉等，防止材料无意识流失。
10、农业转基因生物在贮存、转移、运输和销毁、灭活时，应当采取相应的安全管理和防范措施，具备特定的设备或场所，制定专人管理并记录。
11、安全等级Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的转基因生物，在废弃物处理和排放之前应当采取可靠措施将其销毁、灭活，以防止扩散和污染环境。
发现转基因生物扩散、残留或者造成危害的，必须立即采取有效措施加以控制、消除，并向当地农业行政主管部门报告。
水稻遗传转化实验报告
一、实验目的本实验旨在探究农杆菌介导法在水稻遗传转化中的应用效果，通过构建基因表达载体，将目的基因导入水稻细胞中，从而实现基因功能的验证和水稻性状的改良。
二、实验材料1. 实验材料：水稻品种为南桂占，农杆菌菌株为Agrobacterium tumefaciens EHA105，目的基因（GFP基因）载体为pBI121。
2. 试剂：农杆菌转化培养基、抗生素、潮霉素、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒等。
3. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、显微镜等。
三、实验方法1. 目的基因的克隆：将GFP基因从质粒载体pBI121中切出，插入到农杆菌载体pBin19中，构建重组载体pBin19-GFP。
2. 农杆菌的活化：将农杆菌菌株EHA105接种于YEB培养基中，在28℃条件下培养过夜。
3. 农杆菌转化：将活化后的农杆菌与重组载体pBin19-GFP混合，用涂布法将混合液涂布于农杆菌转化培养基上，28℃条件下培养2-3天。
4. 水稻叶片的消毒：将水稻叶片用70%酒精浸泡30秒，再用无菌水冲洗3次，然后用无菌滤纸吸干水分。
5. 农杆菌侵染：将农杆菌转化菌液滴加到水稻叶片上，用无菌滤纸轻轻擦拭叶片，使农杆菌均匀分布在叶片表面。
6. 愈伤组织诱导：将侵染后的水稻叶片放入农杆菌转化培养基中，28℃条件下培养5-7天，诱导愈伤组织形成。
7. 抗性筛选：将愈伤组织转入含有潮霉素的筛选培养基中，28℃条件下培养3-4周，筛选出转化成功的愈伤组织。
8. 转化植株再生：将筛选出的转化愈伤组织转入再生培养基中，28℃条件下培养2-3周，诱导再生植株。
9. 抗性鉴定：将再生植株种植于田间，对植株进行潮霉素筛选，筛选出抗潮霉素植株。
10. PCR检测：对筛选出的抗潮霉素植株进行PCR检测，验证GFP基因是否成功导入水稻基因组。
四、实验结果1. 目的基因的克隆：成功构建了重组载体pBin19-GFP。
2. 农杆菌转化：农杆菌转化效率较高，大部分叶片出现愈伤组织。
农业部农业转基因生物安全管理办公室关于印发《转基因作物田间试验安全检查指南》的通知
农业部农业转基因生物安全管理办公室关于印发《转基因作物田间试验安全检查指南》的通知文章属性•【制定机关】农业部(已撤销)•【公布日期】2006.05.12•【文号】农科[基安]函[2006]55号•【施行日期】2006.05.12•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】农业管理综合规定正文农业部农业转基因生物安全管理办公室关于印发《转基因作物田间试验安全检查指南》的通知（农科（基安）函[2006]55号）各省、自治区、直辖市农业厅（局、委、办），新疆生产建设兵团农业局，有关科研教学单位：根据《农业转基因生物安全管理条例》实施监督检查的规定，为保障转基因作物田间试验安全，指导研发单位及县级以上地方各级人民政府农业行政主管部门有效开展转基因作物田间试验安全监管，部农业转基因生物安全管理办公室组织专家和部分省区的管理人员，研究制定了《转基因作物田间试验安全检查指南》，现印发你们。
请研发单位严格按照法规及指南的要求，配合管理部门进行自查，各级农业行政主管部门认真进行监督检查，确保田间试验的安全。
附件：《转基因作物田间试验安全检查指南》二〇〇六年五月十二日附件转基因作物田间试验安全检查指南《农业转基因生物安全管理条例》实施以来，转基因作物田间试验数量逐年增加，田间试验安全检查任务日益增大。
为指导研发单位及县级以上地方各级人民政府农业行政主管部门有效地开展转基因作物田间试验安全监管，规范检查方法和检查内容，特制定本指南。
本指南包括适用范围、检查依据、检查前的准备、检查方法和内容四部分，以及《转基因作物田间试验安全自查表》、《转基因植物田间试验安全检查工作表》和《转基因植物田间试验检查报告表》三个附表。
一、适用范围本指南适用于对农业部批准实施的转基因作物中间试验、环境释放、生产性试验的监督检查。
其他转基因植物的田间检查可参照本指南。
二、检查依据根据《农业转基因生物安全管理条例》第六章有关对转基因作物试验进行监督检查的规定，农业部批准申请人开展转基因作物中间试验、环境释放、生产性试验的审批书。
水稻转基因技术的研究与应用
水稻转基因技术的研究与应用水稻是我国的主要粮食作物之一，也是全球最重要的粮食作物之一。
随着社会和经济的不断发展，人们对水稻品质和产量的要求也不断提高。
而转基因技术作为一种创新性技术，为水稻的改良提供了新的途径。
本篇文章将探讨水稻转基因技术的研究与应用。
一、水稻转基因技术的研究1.背景水稻转基因技术是将外源基因导入水稻细胞中，使水稻获得某些特定基因的性状。
这样可以通过调整水稻的生长和发育，使其在抗病、耐旱、提高产量等方面得到改善。
2.研究方法水稻转基因技术主要包括以下三种方法：(1) 农杆菌介导转化：将所需基因导入农杆菌载体，经过处理后将其导入水稻细胞中，使细胞产生抗病、提高产量等性状。
(2) 基因枪法转化：将所需基因载入金属小粒子上，压缩空气将粒子“射”入水稻细胞中。
(3) 电穿孔法转化：利用电场作用使水稻细胞短暂性开放，使基因能够有效导入细胞中。
3.研究进展目前，水稻转基因技术已取得了一些重要的进展，主要体现在以下几个方面：(1) 抗虫基因的成功导入：2007年，我国科学家成功将抗虫基因导入水稻，并以此培育了多个抗虫水稻品种。
(2) 抗病基因的成功导入：我国科学家通过细胞融合技术，将米瘟抗病基因导入一种水稻品种中，并获得了抵御米瘟病的水稻品种。
(3) 抗旱基因的成功导入：我国科学家成功将抗旱基因导入水稻，良种生长在干旱条件下的产量大大提高。
二、水稻转基因技术的应用1. 抗虫作物的生产目前，我国已经培育了多个抗虫作物品种。
这些品种通过导入相关基因并与优良品种杂交，产生出的基因工程作物比传统种植方法的作物更加耐虫。
2. 抗病作物的生产目前，我国已经获得了多个抗病作物品种。
这些品种通过导入相关基因并与优良品种杂交，产生出的基因工程作物比传统种植方法的作物更加耐病。
3. 提高产量基因工程水稻的生产方式与传统水稻生产方式相比，具有很大的优势。
通过导入相关基因，可以提高水稻的产量，并缩短生长周期。
4. 改善品质基因工程水稻的应用还可以改善水稻品质，如改良失酬水稻的品质和味道等。
水稻原生质体制备及转化实验方法
单子植物叶片原生质体分离与转化水稻原生质体分离及转化1.需要准备的器材名称名称名称剃须刀片40um尼龙膜0.45um滤膜玻璃皿血球计数板真空泵及适配器70mm培养皿或100ml锥形瓶离心机（水平转子）滤布圆周摇床2ml圆底管10/50ml注射器50ml圆底离心管六孔板2.材料准备水稻种子，先用75%乙醇漂洗1分钟，再用30%次氯酸钠处理20分钟，无菌水洗涤5次以上。
放在1/2 MS培养基上培养2周左右，26℃，12h光照（150 umol m-2s-1）。
使用大玻璃培养杯培养，每瓶可放15粒种子。
40~60株幼苗可以做一次实验，分离出的原生质体量可以转化大约6个质粒。
3.原生质体分离（1）选取幼苗茎干和叶鞘部分分离原生质体，去除水稻顶部的叶子和茎干小的叶鞘，用锋利的刀片切成大约0.5mm宽的条块，可以20~30个放在一起切开；比例大约15ml酶解液/1g材料；（2）切开后立刻转移到0.6M Mannitol溶液中，避光放置10分钟；（3）过滤掉Mannitol溶液，将其转移到配好的酶解液中，避光，真空泵-15~-20 (inHg)抽真空30分钟；（3）再避光酶解5-6小时，同时缓慢摇动（圆周摇床，速度40）；（5）酶解结束后，加入等体积的W5溶液，稍有力地用手水平摇动10秒钟，释放原生质体；（6）使用40um尼龙膜过滤原生质体到50ml的圆底离心管中，再加W5溶液冲洗条块；（7）250 g水平离心3分钟沉淀原生质体，用5 ml移液器吸出上清；（注：离心机需采用水平转子，且升降速不可超过3，否则细胞可能破碎，以下所有离心步骤均需采用此设置。
）（8）加10ml W5重悬原生质体，250g离心3分钟，弃上清；（9）加适量MMG溶液重悬，原生质体浓度为2*106/ml，血球计数器计数。
（注：1、吸取原生质体所用枪头均需剪去枪头尖以防其对细胞造成伤害；2、以上所有步骤在室温进行。
）4.原生质体转化（1）加入10~20ug质粒到2ml离心管中，加入200ul原生质体（大约4*105细胞），再加入220ul新配的PEG溶液，混匀，室温避光放置10~20分钟诱导转化；（2）诱导转化结束后缓慢加880ul W5溶液，轻轻颠倒混匀，250g水平离心3分钟，弃上清；（3）加1ml WI溶液重悬，转移到六孔板中（已预先加入1ml WI溶液）室温（或28℃）暗处培养6~16小时，若用于提取原生质体基因组DNA，需培养48小时。
水稻变异株遗传变异类型的鉴定实验报告
水稻变异株遗传变异类型的鉴定实验报告水稻是我国主要的粮食作物之一，其产量和品质对于保障人民的饮食安全至关重要。
然而，水稻遗传变异的存在为育种工作提供了很好的资源。
通过对水稻变异株的鉴定实验，我们可以深入了解水稻的遗传变异类型，为育种工作提供重要的依据。
本实验旨在探究水稻遗传变异的类型，并通过实验鉴定来验证。
实验材料：1.水稻变异株：本实验选取了10个具有不同变异特征的水稻株，分别标记为M1至M10。
2.相关实验设备和试剂。
实验步骤：步骤一：水稻变异株的观察首先，对每个水稻变异株进行外部形态特征的观察和记录。
包括株高、叶形、茎色、叶色等特征。
通过这些观察可以初步了解水稻变异株的差异和特征。
步骤二：基因型分析对于已知的突变水稻株，我们可以利用相应的分子生物学方法进行基因型分析。
例如，利用PCR方法扩增目标基因区域，并通过测序来确认其基因型。
步骤三：遗传变异类型的鉴定根据步骤一和步骤二的结果，我们可以初步判断水稻变异株的遗传变异类型。
根据遗传变异类型的不同，可将其分为以下几类：1.突变体：指具有单个基因突变导致的变异。
突变体在形态特征上与野生型有较大的差异，通常表现为株高、叶色、叶形等方面的突变。
例如，突变体M1呈现出丰满的穗型和无颖粒的特征。
2.染色体缺失体：染色体缺失体是由于染色体结构发生异常导致的遗传变异。
通过核型分析和染色体组型研究，可以确定染色体缺失体的存在。
例如，染色体缺失体M2呈现出染色体数目减少和核型异常的特征。
3.染色体易位体：染色体易位体是指染色体片段在同一染色体上的重新排列。
通过核型分析和染色体组型研究，可以确定染色体易位体的存在。
例如，染色体易位体M3呈现出染色体同源片段的重组特征。
4.多倍体：多倍体是指具有多套染色体的遗传变异体。
多倍体的存在可以通过核型分析和染色体数目研究得到证实。
例如，多倍体M4呈现出核型含有多套染色体的特征。
步骤四：统计和分析根据步骤三的鉴定结果，我们可以对不同遗传变异类型的水稻变异株进行统计和分析。
水稻转基因实验操作[2]
![水稻转基因实验操作[2]](https://img.taocdn.com/s3/m/ee8ee83143323968011c927c.png)
水稻转基因实验操作（谢越、赵建宁、艾鹏慧、孙淑斌整理）（2006.7）一、水稻（日本晴）愈伤组织的诱导（以水稻成熟胚为试材诱导愈伤组织）1．消毒：取水稻成熟种子，人工或者机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子，按以下步骤消毒：1）将种子放入100ml无菌烧杯中，倒入70%酒精消毒1分钟；2）倒去酒精，加入100ml 30%次氯酸钠（NaClO）溶液（5.2%次氯酸钠），浸泡30分钟；3) 倒去次氯酸钠溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍，最后一遍浸泡30分钟。
2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）种子放在无菌滤纸上吸干，置成熟胚于诱导培养基中，每皿12－14颗；2）操作完毕用封口膜（Micropore TM Surgical Tape）封好培养皿，在30℃光照培养箱，培养4周；3）在超净工作台上打开培养皿，用镊子挑取自然散落的胚性愈伤组织（淡黄色，致密呈球状），在30℃光照培养箱，继代培养1-2周。
(没有脱落的可在原培养基上继续培养7天，次数多了效果会减弱)二、农杆菌（工程菌）培养挑取农杆菌单克隆或吸取所保藏的农杆菌（EHA105）菌液100µl于4ml YEP（含50mg/LSpec和50mg/L Str）培养液中，28℃，250rpm振荡培养20-36h至菌液OD600为0.8-1.0。
三、感菌与共培养1）取培养好的工程菌液1ml于1.5ml离心管中，4℃，5000rmp，离心1min，去上清。
用含200µmol/LAs的30ml AAM感菌液制成悬浮液。
2）将长到一定大小的水稻愈伤组织挑出，放入农杆菌悬浮液侵染5分钟（愈伤量没过50ml离心管锥形部位即可）。
3）将愈伤组织取出，置于无菌的滤纸上沥干30-40分钟；4）将愈伤组织置于共培养基上(共培养基上面垫上一层9cm无菌滤纸)。
28℃（组培室）暗培养2.5天。
四、愈伤组织的抗生素筛选将愈伤组织取出，用无菌水清洗6次，其间需不停的振荡（组培室震荡机最大速率）。
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转基因水稻中间试验要求
1.实验目的和设计：中间试验应明确实验目的，并且在试验设
计中包括转基因水稻的基因转导方法、检测方法、结果分析等。
2.样本获取和处理：中间试验应使用符合转基因水稻要求的样本，包括转基因水稻种子、培养细胞等。
在样本处理过程中，应按照转基因水稻的特点，采取适当的处理方法。
3.环境监测和管理：在中间试验过程中，应监测和管理试验环境，包括温度、湿度、光照等条件的控制，以及病虫害防治等。
4.基因检测和分析：中间试验应使用准确的基因检测方法，确
认转基因水稻中是否成功转导了目标基因。
此外，还需要对转基因水稻的性状、产量、抗病虫性等进行分析。
5.安全评估和风险评估：中间试验还需要对转基因水稻的安全
性和风险进行评估，包括对人类、动物和环境等方面的影响评估。
6.试验记录和数据分析：中间试验应详细记录试验过程中的各
项数据，并进行统计和分析，以验证试验结果的有效性和可靠性。
7.伦理审查和法律合规：中间试验应符合伦理审查和法律法规
的要求，确保试验过程符合科学伦理和法律要求。
以上是转基因水稻中间试验的一些基本要求，具体要求还可以根据实验具体情况和法律法规的要求进行确定。