生化检测方法汇总
常见的生化检测方法
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------常见的生化检测方法Western-blot 法 Western Blot 印迹法是把通过电泳分离的蛋白质组分从凝胶转移至一种固相支持物,通过抗体与附着于固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生特异性反应进行检测。
Western Blot 既可以定性,又可以半定量,是初步鉴定靶蛋白表达的最方便也是最通用的方法。
1、试剂耗材的准备:⑴、转膜缓冲液(48 mM Tris-HCl, 39 mM 甘氨酸, 0. 037% SDS, 20%甲醇):⑵、 10丽春红染液:⑶、 TBS 缓冲液:⑷、 TBST 缓冲液(含 20%Tween20 的 TBS 缓冲液):⑸、封闭液(含 5%脱脂奶粉的 TBST 缓冲液):⑹、一抗、二抗及抗体稀释液:参照说明书,以封闭液或 TBST 进行稀释。
⑺、底物显色液 ECL,4℃ 避光保存,现用现配。
⑻、显影液和定影液。
用水稀释 10-20 倍于铝盒中,可多次使用。
室温避光存放。
2、实验步骤:⑴、蛋白样品制备:1 / 15用细胞裂解液抽提蛋白,并测蛋白浓度。
⑵、取 1mg 蛋白进行 SDS-PAGE。
⑶、转膜:(转膜缓冲液4℃预冷备用,冷却装置于-80℃冰箱冷冻备用)。
⑷、将 2 张海绵垫、 2 张滤纸、转膜夹子及玻棒浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。
⑸、戴上手套,剪一张与凝胶尺寸相近的 PVDF 膜(83 mm75 mm),左上角剪一缺口作为标记,浸泡在盛有 20mL 甲醇的平皿中约 15 sec,直到膜变半透明。
用纯水冲洗膜2 次。
浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。
⑹、 SDS-PAGE 结束后,小心地剥下两块凝胶,一块用于考马斯亮兰染色观察电泳情况,另一块浸泡在转膜缓冲液中预平衡。
如何进行生化检验
如何进行生化检验生化检验是一项重要的医学检验方法,主要用于检测人体内各种生物分子的含量和分布情况,以揭示疾病的发生和发展状况。
这项检验对于现代医学的诊断和治疗起着至关重要的作用。
以下将详细介绍如何进行生化检验。
一、选择适当的生物样本生化检验通常涉及到多种不同类型的生物样本,包括血液、尿液、唾液、毛发等。
这些样本中所含有不同种类的生物分子,如蛋白质、酶、代谢产物等,可以被生化方法分析出来。
在选择生物样本时需要根据具体疾病和检测目的选择适当的样本进行检测分析。
二、收集样本在进行生化检验之前,需要先收集所需的生物样本。
对于血液、尿液等样本,可以通过采血管和尿采集器等器具进行采集。
对于唾液和毛发等样本,则需要经过特别的处理方式,如使用唾液采集器或化学分解等方法来进行处理。
在收集样本时需要在保持样本稳定的情况下,最大限度的减少检验过程对样本的影响,以保证检验结果的准确性。
三、样本处理将采集到的生物样本加入样品杯中,对样本进行加热、冷却、离心、萃取、过滤等样本处理方法,以消除样品中的杂质,并得到足够的生化分析物质测定。
样本处理过程中需要控制样本的温度、时间、加盐量等因素,以保证样品的质量和稳定性。
四、分离和纯化这是生化检验的核心过程之一,该过程需要将样品中的目标生物分子从其他成分中分离出来,并纯化出所需的生物分子。
目前用来分离和纯化目标生物分子最多的方法包括色谱法、电泳法、南方杂交等方法。
在分离和纯化过程中需要严格控制实验室环境的卫生等条件,以免影响检验结果的准确性。
五、生化分析分离和纯化后得到的生物分子需要进行定量的生化分析。
这是生化检验过程中最关键的环节之一。
目前主要采用的生化分析方法有光学法、放射性同位素法、荧光法、化学发光法等方法。
在进行生化分析时,需要严格控制实验室环境的温度、湿度、反应时间等因素,同时要注意实验室设备的卫生和维护。
总之,生化检验是现代医学中不可缺少的检验方法之一。
在进行生化检验时需要掌握一定的专业知识和实验技术,并严格按照标准程序进行操作,以保证检验结果的准确性和可靠性。
生化检测方法汇总
一、血清谷丙转氨酶(SGPT)赖氏改良法器材:试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂:(1)0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液:①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液:称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶解于蒸馏水中,并稀释至1 000ml,4℃保存。
②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液:称KH2PO413.61g溶解dH2O中,稀释至1000ml,4℃保存。
③将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴,4℃保存。
(2)标准丙酮酸(含丙酮酸2.0μmol/mL):取标准丙酮酸钠10mg,用上述缓冲液准拟定容为50mL。
此液须当天用当天配。
(3)SGPT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) : 取α-酮戊二酸29.2mg,DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml,在稀释到刻度前,以1mol /L NaOH调pH 7.4(由于转氨酶在pH7.3以下或7.6以上的环境中酶活性下降),加数滴氯仿防腐。
此液于冰箱保存可使用4天。
(4)GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L ,α-酮戊二酸 2mmol/L):称取α- 酮戊二酸29.2mg 和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中,加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH 至7.4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0.1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度。
放置冰箱内保存。
(5)2.4-二硝基苯肼溶液:取分析纯2,4-二硝基苯肼19.8mg,用1mol/L HCl溶于100ml,置棕色瓶中保存。
(6)0.4mol/L NaOH溶液:称取16g固体NaOH,用蒸馏水溶解,冷却至室温,定容至1000mL,备用。
操作环节:1、标准曲线绘制:取试管18支按下表操作。
生化项目测定方法整理
生化项目的基本分析方法1.终点法检测1.1定义完全被转化成产物,不再进行反应达到终点,取反应终点的吸光度来计算被测物质的浓度。
生化检验中除酶和BUN、CRE外几乎都用终点法来进行检测。
被测物质(反应底物)在化学反应过程中完全被消耗或转换,即反应达到平衡(终点),通过测定产物(反应生成物)的多少来定量测定被测底物的含量。
终点法一般用来检测代谢物的浓度,通过测定标准液(校准液)的反应吸光度,建立一条浓度与吸光度变化的标准曲线。
通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较,计算出该标本中待测物的浓度。
1.2检测流程一点终点法:取反应达终点时的一个点的吸光度来计算结果。
对于单一试剂,在加入标本后,反应即可进行,在反应达到终点后,读取反应点(吸光度),故一般选用一点终点法。
以试剂和样品混合之前的空气空白(GB)、水空白(WB)或试剂空白(RB)的吸光度值为测定计算基点,以反应终点的吸光度读数减去空白读数,得到反应吸光度。
通过与相同条件下校准液反应吸光度的比较,求得测定结果。
常与一点校准法配合使用,即采用一个校准浓度,校准曲线通过零点且成线性。
也应用多点校准。
•计算公式:C=(Am-Ab)*KAm----终点读数点的吸光度Ab----试剂空白吸光度K----校正系数二点终点法:加入第一试剂,主要起缓冲或者消除干扰等作用,此时可读取初始反应点,加入第二试剂后,在反应达到终点后,读取结束反应点。
取反应尚未开始时读取一个点的吸光度,待反应达终点时再取第二点的吸光度,用第二点吸光度减去第一点吸光度的差值来计算结果。
以试剂和样品混合之后的某一时间点作为始点,以反应终点的吸光度读数减去始点读数。
一定条件下可降低样品对反应或反应本身的特异性于扰(主要指色度干扰)。
常采用双试剂,多以加R2前某一点作测定始点;某些情况下,也可以加R2后一点作测定始点。
若使用单试剂,主反应启动太快或仪器起始读数点受限时难以运用。
主要用于扣除试剂和样品空白,保证结果的准确性,一般双试剂用。
常用生化检测项目分析方法及参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1.终点法检测常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、总胆汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法)、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、镁(二甲苯胺蓝法)等。
以上项目中,除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外,其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法,包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2.固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3.连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法,如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等,也可用连续监测法。
4.透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目,多数属免疫比浊法,载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子,以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等,其程序均已经固化在存储器里,用户不能修改。
各种测定项目的分析参数(analysis paramete)大部分也已设计好,存于磁盘中,供用户使用;目前大多数生化分析仪为开放式,用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道,由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍(一)必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件,没有这些参数无法进行检测。
1.试验名称试验名称(test code)是指测定项目的标示符,常以项目的英文缩写来表示。
2.方法类型(也称反应模式)方法类型(assay)有终点法、两点法、连续监测法等,根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
各种生化指标测定方法
2.3 各项指标的测定方法2.3.1 生物学指标的测定于芥蓝菜薹采收期,每处理随机抽取6株,测定芥蓝生物学性状指标,包括株高,薹粗,节数,单株产量和叶面积。
2.3.1.1 株高测定菜薹长度为第一片真叶基部至生长点的距离,取平均值。
2.3.1.2 薹粗测定用游标卡尺测量第5与第6片叶之间的粗度,取平均值。
2.3.1.3节数和节间长度测定节数为第一片真叶基部起至生长点的节数,节间长度=株高/节数2.3.1.4 单株产量测定取第4节位以上植株进行测定,求单株鲜重。
2.3.1.5 蜡粉含量的测定参照Kumar.S方法测定(Kumar S,1987)。
将芥蓝叶片剪成条状,称取1.0g,放于培养皿中,用10ml氯仿浸泡30秒,取出叶片立即烘干。
将培养皿在室温下蒸发干燥,蜡粉含量为培养皿增重(mg/g)。
重复三次。
2.3.2 光和系统指标的测定2.3.2.1 叶面积的测定取第5片及以上共6片叶进行测定,求单株总叶面积。
采用Li-COR 公司生产的Li-3000A 型叶面积仪测量叶面积。
用直尺测量芥蓝叶片的长度(L,叶柄基部到叶尖的距离)和宽度(W,与主脉垂直的最大宽度),用Li- COR公司的Li- 3000A型叶面积仪测量实际叶面积(LA)。
用回归的方法建立实际叶面积与芥蓝叶片长乘以宽面积之间的回归方程,找出最佳回归系数。
2.3.2.2 比叶重测定于各处理中随机取10片叶子,用0.8mm打孔器,在叶片最宽处离主脉两侧的中心位置打孔,将10个小圆片放在烘样盒后在105℃杀青10min,再80℃烘至恒重。
比叶重=总叶干重/总叶面积(g/m2)2.3.2.3 叶绿素含量测定采用95%乙醇浸泡法(李合生,2000),称取剪碎的新鲜样品0.1g放入试管,用95%的乙醇15ml,在黑暗条件下浸泡24h,至叶片表皮变白,取上清夜在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度。
计算公式:叶绿素a(mg/L)=13.95A665-6.88A649 (1)叶绿素b(mg/L)=24.96 A649-7.32A665 (2)类胡萝卜素(mg/L)=(1000A470-2.05C a-114.8C b)/245(1)、(2)相加即得叶绿素总浓度,在按照下式计算叶绿素和类胡萝卜素的含量。
生化检测技术(
2021-02-10—2021-02-12学习总结:一、经常使用的生化检测方式1.终点法通过检测终点吸光度转变的大小来求出被测物的含量。
选择终点法的重要因素,终点时刻的确信a)依照时刻—吸光度曲线来确信:选取吸光度趋于稳固后的时刻b)依照被测物反映终点,结合干扰物的反映情形来确信如:溴甲酚绿法测血清白蛋白溴甲酚绿(BCG)是一种pH指示剂,变色域(黄色)(蓝绿色)溴甲酚绿不但与清蛋白呈色,而且与血清中多种蛋白质成份呈色,其中以a1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著,其反映速度较清蛋白稍慢。
由于在30s内呈色对清蛋白特异,因此溴甲酚绿与血清混合后,在30s内读数可明显减少非特异性呈色反映。
1.1一点终点法反映达到终点,即在时刻—吸光度曲线上,当吸光度再也不改变时,选择一个终点吸光度值。
待测物浓度=(待测吸光度AU-空白AB)*K(校准系数)1.2两点终点法在被测物反映尚未开始时,选择第一个吸光度,在反映达到终点或平稳时,选择第二个吸光度,用两次吸光度之差计算结果。
优势:有效地排除溶血、黄疸和脂浊本身光吸收造成的干扰,适应于反映初期吸光度无明显转变的被测物。
1.3固按时刻法在时刻—吸光度曲线上选择两个测光点,既非反映物初始也非终点,差值用于计算结果例:苦味酸法测定肌酐,反映初30s,血清中快反映干扰物(微生物、丙酮酸、乙酰乙酸等)与碱性苦味酸反映;第二个30s要紧与肌酐反映,而且吸光度线性良好;80-120s以后,苦味酸能够与蛋白质和其他慢反映干扰物反映。
因此用第二个30s为测按时刻,有利于提高实验特异性和准确性。
1.4持续监测法也称速度法,测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,持续选择时刻—吸光度曲线中线性期的吸光度值,并以此线性期的单位吸光度转变值△A/min计算结果二、了解免疫学查验经常使用的技术1.免疫比浊技术原理:免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合,产生必然大小的复合物,形成光的折射或吸收,测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。
常用生化检测项目分析方法与参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1.终点法检测常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、总胆汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法)、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、镁(二甲苯胺蓝法)等。
以上项目中,除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外,其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法,包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2.固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3.连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法,如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等,也可用连续监测法。
4.透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目,多数属免疫比浊法,载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子,以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等,其程序均已经固化在存储器里,用户不能修改。
各种测定项目的分析参数(analysisparamete)大部分也已设计好,存于磁盘中,供用户使用;目前大多数生化分析仪为开放式,用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道,由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍(一)必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件,没有这些参数无法进行检测。
1.试验名称试验名称(testcode)是指测定项目的标示符,常以项目的英文缩写来表示。
2.方法类型(也称反应模式)方法类型(assay)有终点法、两点法、连续监测法等,根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
血生化中尿素的检测方法
血生化中尿素的检测方法
血生化中尿素的常见检测方法包括以下几种:
1. 尿素测定法:通过测定血液中尿素的浓度来评估肾脏功能。
这种方法常用于一般血液检查中,可以使用尿素酶法、尿素硝酸脱氮法等不同的技术。
2. 血尿素氮(BUN)测定法:通过测定尿液中尿素的氮含量来评估肾脏功能。
这种方法常用于评估肾脏疾病和蛋白质代谢紊乱。
3. 尿液尿素测定法:通过测定尿液中尿素的浓度来评估肾脏功能和蛋白质代谢。
这种方法常用于尿液分析中。
4. 血液尿素酸盐(或尿素氮)分析:通过测定血液中尿素酸盐或尿素氮的含量来评估蛋白质代谢和肾脏功能。
这些方法都是常规的临床检测方法,可以由医院的化验室或临床检验中心进行检测。
具体的检测方法选择会根据具体情况和需要来确定。
生化,分子,细胞试验汇总
⽣化,分⼦,细胞试验汇总主要培养基的配制LB液体培养基胰蛋⽩胨10 g,酵母浸出物 5 g,氯化钠10 g,蒸馏⽔1000 ml,⽤ 1 mol/L HCl 调节pH ⾄7.4,121℃⾼压灭菌20 min。
如果需要加抗⽣素,则待灭过菌的培养基温度降到55℃以下后加⼊适量的抗⽣素储存液。
LB 固体培养基在LB液体培养基中加⼊2%琼脂。
DMEM细胞培养基DMEM溶液90%(v/v),FBS 10%(v/v),青霉素100U/ml,链霉素100 µg/mlMcCoy’s 5A细胞培养基McCoy’s 5A溶液90%(v/v),FBS 10%(v/v),青霉素100 U/ml,链霉素100 µg/ml实验试剂及药品的配制1 mol/L Tris-HCl (pH8.0)在800 ml的双蒸⽔中溶解Tris(三羟甲基氨基甲烷)121.1 g,⽤浓盐酸调pH ⾄8.0,⽤双蒸⽔定容⾄1000 ml。
121℃⾼压灭菌15 min,备⽤。
TE 缓冲液(pH8.0)1 mol/L Tris-HCl(pH8.0)10 ml和500 mmol/L EDTA(pH8.0)溶液2 ml,⽤双蒸⽔定容⾄1000 ml。
121℃⾼压灭菌15 min,备⽤。
500 mmol/L ⼄⼆铵四⼄酸⼆钠(EDTA)溶液(pH8.0)在800 mL 的双蒸⽔中加⼊18.6 g ⼄⼆铵四⼄酸⼆钠,充分溶解后,⽤10 mol/L NaOH 溶液调pH ⾄8.0,⽤双蒸⽔定容到1000 ml。
121℃⾼压灭菌15 min,备⽤。
溴化⼄锭(EB)1 g EB,加⼊100 ml 灭菌双蒸⽔中,磁⼒搅拌数h以确保其完全溶解,然后转⼊棕⾊瓶中,4℃保存。
TAE 电泳缓冲液(50×)242 g Tris碱,57 ml冰⼄酸,100 ml 0.5M EDTA,加灭菌去离⼦⽔定容⾄1000 ml,使⽤时稀释50倍。
10% SDS将10 g⾼纯度的SDS置于烧杯中,加⼊约80 ml的ddH2O,68℃加热溶解,滴加盐酸调节pH值⾄7.2,定容⾄100 ml后,室温保存。
检验科生化学常见检测与分析方法
检验科生化学常见检测与分析方法生化学是一门研究生物体内化学变化及相互关系的科学。
在检验科中,生化学是一项重要的技术领域,用于检测和分析样本中的化学成分和反应。
本文将介绍一些生化学常见的检测与分析方法。
一、色谱法色谱法是一种常见的分离和检测技术,广泛应用于生化学领域。
其中,气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)是两种常见的色谱方法。
1. 气相色谱法气相色谱法是将气体或者挥发性液体样品通过色谱柱进行分离和检测的方法。
该方法适用于分离和检测样品中的挥发性有机化合物和气体。
它的原理是通过样品在高温下蒸发,然后被带动进入色谱柱中。
在色谱柱中,不同物质由于相互作用力的差异而分离,最终通过检测器检测。
气相色谱法常用于环境监测、食品安全等领域。
2. 液相色谱法液相色谱法是将溶解在溶剂中的样品通过色谱柱进行分离和检测的方法。
该方法适用于分离和检测样品中的非挥发性有机化合物和离子。
它的原理是将样品溶解在流动相中,通过色谱柱的分离作用,不同物质在色谱柱中的停留时间不同,从而实现分离和检测。
液相色谱法常用于药物分析、食品成分分析等领域。
二、光谱法光谱法是一种通过物质对光的吸收、散射或者发射来进行分析的方法。
常见的光谱方法包括紫外可见光谱法(UV-Vis)、红外光谱法(IR)和质谱法(MS)。
1. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是一种用于测定物质在紫外和可见光波段吸收特性的方法。
该方法适用于分析样品中的有机物、无机物和生物分子等。
紫外可见光谱法的原理是通过物质对紫外或者可见光的吸收来得到样品的吸收光谱,进而推断出样品中的成分和浓度。
紫外可见光谱法在药物分析、环境监测等领域得到广泛应用。
2. 红外光谱法红外光谱法是一种用于测定物质在红外光波段吸收特性的方法。
该方法适用于分析样品中的有机物和无机物等。
红外光谱法的原理是通过物质对红外光的吸收来得到样品的红外光谱,进而推断出样品中的分子结构和化学键的类型。
红外光谱法在药物研发、聚合物材料分析等领域具有重要应用价值。
临床常用的生化检查
(四)脂蛋白(a)测定
• (四)脂蛋白(a)测定 脂蛋白(a)[LP(a)]的结构与LDL相似,其核心为TG 和胆固醇,其表面被CHO及磷脂包裹,上嵌载Apo(a)和 ApoB。LP(a)有促进动脉粥样硬化和血栓形成的作用,故 它是冠心病的重要独立危险因子之一。
• 【参 考 值】 <300mg/L。 • 【临床意义】 现将高LP(a)作为动脉粥样硬化(冠心病、
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第三节 血清电解质检测
• (一)血钾测定 人体钾盐90%从食物摄入,被肠道吸收入 血液,吸收入血的钾90%从肾排出体外。
• 【参 考 值】 3.5~5.1mmol/L。 低于3.5mmol/L为低血钾症, 高于5.5mmol/L为高血钾症。
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• 【临床意义】 • 1.低钾血症 见于: • (1)摄取不足:营养不良、胃肠功能紊乱、长期无
脑卒中等)的独立危险因素。。在动脉粥样硬化性疾病中, LP(a)与ApoB起协同作用。
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三、血清载脂蛋白检测
• (一)载脂蛋白A1测定 载脂蛋白A1(Apo-A1)由肝脏和小肠合成,是 HDL的主要载脂蛋白成分(占90%),它可催化 卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(LACT),将组织细 胞内多余的胆固醇酯运至肝脏处理,因此Apo-A1 有清除组织内脂质和抗动脉粥样硬化作用,对防 止动脉粥样硬化的发生发展极为重要。
贫血等 • ③甲亢或营养不良。
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(二)甘油三酯测定
• (二)甘油三酯测定
• 甘油三酯(triglyceride,TG)由肝、脂肪组织及小肠合成。它 是动脉粥样硬化的重要因素之一。
• 【参考值】
• 0.56~1.7mmol/L;
• ≤1.70mmol/L为适合水平; >1.70mmol/L为升高。
生化检验项目
生化检验项目生化检验项目是一种常见的医学检验方法,用于评估人体内各种生化指标的水平,以帮助医生诊断疾病、监测疾病的进展和评估治疗效果。
生化检验项目通常包括血液、尿液和其他体液的检测。
以下是一些常见的生化检验项目及其相关内容:1. 血常规检验:血常规检验是评估全血细胞成分和形态学的常用方法。
它包括血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数、血小板计数等指标。
这些指标可以帮助医生了解患者的贫血、感染和出血风险等情况。
2. 肝功能检验:肝功能检验是评估肝脏功能和疾病的重要方法。
它包括血清谷丙转氨酶(ALT)、血清谷草转氨酶(AST)、总胆红素、直接胆红素等指标。
这些指标可以帮助医生判断肝脏是否受损,是否存在肝炎、肝硬化等疾病。
3. 肾功能检验:肾功能检验是评估肾脏功能和疾病的重要方法。
它包括血清肌酐、血尿素氮、尿酸等指标。
这些指标可以帮助医生了解患者的肾功能是否正常,是否存在肾炎、肾结石等疾病。
4. 血脂检验:血脂检验是评估血液中脂质代谢情况的常用方法。
它包括总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等指标。
这些指标可以帮助医生了解患者是否存在血脂异常、动脉粥样硬化等情况。
5. 血糖检验:血糖检验是评估血液中葡萄糖水平的常用方法。
它包括空腹血糖、餐后血糖、糖化血红蛋白等指标。
这些指标可以帮助医生判断患者是否患有糖尿病、监测糖尿病患者的血糖控制情况。
6. 电解质检验:电解质检验是评估体内电解质平衡的常用方法。
它包括血钠、血钾、血钙、血镁等指标。
这些指标可以帮助医生了解患者是否存在电解质紊乱、肾功能异常等情况。
7. 甲状腺功能检验:甲状腺功能检验是评估甲状腺功能的常用方法。
它包括甲状腺素(T3、T4)、促甲状腺激素(TSH)等指标。
这些指标可以帮助医生判断患者是否存在甲状腺功能亢进或功能减退等情况。
以上是一些常见的生化检验项目及其相关内容,这些项目可以帮助医生了解患者的健康状况,指导诊断和治疗。
常用生化检测项目分析方法举例及参数设置
常用生化检测项目分析方法举例及参数设置常用生化检测项目分析方法举例及参数设置常用生化检测项目有哪些你知道吗?你对常用生化检测项目了解吗?下面是yjbys店铺为大家带来的关于常用生化检测项目分析方法举例及参数设置的知识,欢迎阅读。
一、常用生化检测项目1.终点法检测常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、总胆汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法)、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、镁(二甲苯胺蓝法)等。
以上项目中,除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外,其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法,包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2.固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3.连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法,如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等,也可用连续监测法。
4.透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目,多数属免疫比浊法,载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子,以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等,其程序均已经固化在存储器里,用户不能修改。
各种测定项目的分析参数(analysis paramete)大部分也已设计好,存于磁盘中,供用户使用;目前大多数生化分析仪为开放式,用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道,由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍(一)必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件,没有这些参数无法进行检测。
生化分析仪常用分析方法共有三大类,分别为终点法、固定时间法和动力学法
生化分析仪常用分析方法共有三大类,分别为终点法、固定时间法和动力学法生化分析仪常用分析方法共有三大类,分别为终点法、固定时间法和动力学法。
终点法:指经过一段时间的反应,反应达到平衡,由于反应的平衡常数很大,可认为全部底物(被测物)转变成产物,反应液的吸光度不再变化,只与被测物的浓度有关。
这类方法通常称为“终点”法,更确切地说应称“平衡”法。
单试剂单波长终点法:t1时刻加入试剂(体积为V),t2刻加入样本(体积为S),然后搅拌并反应,之后开始测量反应液的吸光度,在t3时刻反应达到终点,t3-t2为测定时间。
反应度R=At3-At2-1×V/(V+S),或R=At3-ARBLK。
其中:Ati为i时刻的吸光度,ARBLK为试剂空白吸光度。
单试剂双波长终点法:基本上同“单试剂单波长终点法”,只是对于每一个测定周期,其实际吸光度等于Aλ1-Aλ2。
双试剂单波长终点法:t1时刻加入第一试剂(体积为V1),t2时刻加入样本(体积为S)之后立即搅拌,t3时刻加入第二试剂(体积为V2) 并立即搅拌,t4时刻反应达到终点。
t3-t2为孵育时间,t4-t3为测定时间。
在项目参数中,如果反应起始时间设为0,则反应度R=A时刻吸光度-双试剂空白吸光度。
如果反应起始时间小于0,则反应度R=At4 -双试剂空白吸光度-t3到t2间设定点的吸光度×(V1+S)/(V1+S+V2)。
双试剂双波长终点法:基本上同“双试剂单波长终点法”,只是对于每一个测定周期,其实际吸光度等于Aλ1-Aλ2。
固定时间法:又称为一级动力学法、二点动力学法等,指在一定的反应时间内,反应速度与底物浓度的一次方成正比,即v=k[S]。
由于底物在不断的消耗,因此整个反应速度在不断的减小,表现为吸光度的变化越来越小。
这类反应达到平衡的时间很长,理论上可以在任意时间段进行监测,但由于血清成份复杂,反应刚启动时反应较复杂,杂反应较多,必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期。
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一、血清谷丙转氨酶(SGPT)赖氏改良法器材:试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂:(1)O.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液:①O.1mol/L 磷酸氢二钠溶液:称取Na2HPO414.22或Na2HPO4 2H2O17.8g溶解于蒸馏水中,并稀释至1 000ml,4 C保存。
②O.1mol/L磷酸二氢钾溶液:称KH2PO413.61g§解dH2O中,稀释至1000ml,4 C保存。
③将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。
加氯仿数滴,4C保存。
(2)标准丙酮酸(含丙酮酸2.0卩mol/mL):取标准丙酮酸钠10mg用上述缓冲液准确定容为50mL此液须当日用当日配。
(3)SGPT底物液(含a -酮戊二酸2卩mol/ml及DL-丙氨酸200卩mol/ml): 取a -酮戊二酸29.2mg, DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml,在稀释到刻度前,以1mol /L NaOH调pH 7.4 (因为转氨酶在pH7.3以下或7.6以上的环境中酶活性下降),加数滴氯仿防腐。
此液于冰箱保存可使用4天。
(4)GOT底物液(DL -天冬氨酸200mmol/L , a -酮戊二酸2mmol/L):称取a -酮戊二酸29.2mg 和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中,加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH 至7.4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0.1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度。
放置冰箱内保存。
(5) 2.4-二硝基苯肼溶液:取分析纯2,4-二硝基苯肼19.8mg,用1mol/L HCl溶于100ml,置棕色瓶中保存。
(6)0.4mol/L NaOH 溶液:称取16g固体NaOH用蒸馏水溶解,冷却至室温,定容至1000mL备用。
操作步骤:0.1M磷酸盐缓冲液PH7.4( ).10.10.10.10.10.1相当于谷丙转氨酶单位028*********0相当于谷草转氨酶单位02461114U190——每个样做3个平行,置37水浴30分钟,各管加2, 4-二硝基苯肼液0.5mL,混匀,再在37C 水浴中放置20mL各管加0.4mol/L氢氧化钠溶液5mL混匀,10分钟后,从水浴箱中取出,以蒸馏水调“零”点,用520nm波长比色,读取各管之吸光值,各管之吸光值均减去空白的吸光值,然后以吸光值为纵坐标,各管相应的转氨酶单位为横坐标。
绘制成标准曲线。
为了方便,可列出各光度相当于转氨酶单位表。
2、酶活性测定:取试管两支,注明测定管及对照管。
试剂样品测定(每个样今3个平行)|对照(每个样3个平行)血清(mL0.10.1SGPT或SGOT底物(mL0.5——1置37r水浴30分钟(SGO■为37C, 60分钟后再加枸橼酸苯胺1滴)2.4-二硝基苯肼(mL0.50.5置37 r水浴20分钟SGPT或SGOT底物(mL——0.5 NaOH溶液(mL 5.0 5.0对照及样品各做3个平行,充分摇匀,静置10分钟后,用520nm波长比色,以蒸馏水调节零点,读取吸光值,用样品减去对照吸光值,求得样品的谷丙转氨酶活力15鴉实菠墩熠利.密-一------- 验现雾、丐■■;和-1 •耳EJ.膜舍(K)<U)1O Slj, S1J '52^ S2T S3, S3J r 4, s-i*Ft Ul^ u 空0* 1O. 1o s &■A■濾哎1卷日、u 宜旳P殖誕*浴4>亠灌雜H早■且北聲464诚工*O. 1 6 1 d 3◎・10. 1⑷葆海离舖SK51O O_ OE5o B io d 15O, 20门F;c「4r* d S込4二硝基苹册gj. j0, 5 6 & 6 5O* 5CU 5Q, 0 6 bi 宜3TP小苛吉中{呆;蛊zo戦丄"1 (7>O. -1 * &IN iar>H (ml) | S. O 6.0 j e. O 1 B- n | fi. O 仇 Q 1 B. O*混巳3告世・干皿m 后』出尬5 IM决Mi型分光汽;陡讦上匕色* 波卜 Sms・空匸』亘叩年点- | <> ^iH^TT! S麓曙讦雷•斗=31 — Si・=Sj —Sa、=3t>—邑「=S4~ 刍•=如=-■'VTL —Ann ~名借平均碾兀廉cz>.)Ao —Al-Ai*血]i A< —A B-———Arn O Au-一Aju—1忻门氐甲吃、O285*7£T7150计砂呂古果一Um阳细甲u谷丙转氨酶活性单位:37 C, pH7.4,每小时每毫升血清催化生成1卩mol丙酮酸为1个单位。
例:0.1ml 血清每小时催化生成0.1卩mol丙酮酸,即相当于GPT 100U / 100ml血清。
注意:1. 在测定SGPT寸,应事先将底物、血清在37C水浴中保温,然后在血清管中加入底物,准确记时。
2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的,超过500U时,需将样品稀释。
3. 转氨酶只能作用于a- L-氨基酸,对》氨基酸无作用。
实验室多用a—DL—氨基酸(较L —氨基酸价廉),若用L —氨基酸,则用量减半。
4. 溶血标本不宜使用,因血细胞中转氨酶活力较高,会影响测定效果。
5. 血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。
6. 丙酮酸标准液的浓度要求十分精确。
由于丙酮酸开封后易变质为多聚丙酮酸,而影响丙酮酸标准液的有效浓度而不易察觉。
建议使用质量可靠的市售丙酮酸标准液。
7. 每批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A,若有超出,应仔细检查试剂与仪器方面的问题。
8. 严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮症酸中毒病人血清标本可增加测定的吸光度,测定这类标本应做血清标本对照管优点:尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果,但因其量不多,加之对505nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强,尤其用标准曲线作测定时,所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正,摈弃了赖氏法一些固有弊端,结果比其他比色法准确.故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法.1981年全国常规生化检验方法学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理,缺点:由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足,反应速度只能达到最大速度的65%;显色剂2,4- 二硝基苯肼的用量只及反应液中酮酸浓度的一半;保温30min的酶促反应后,新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控制的竞争显色的几率问题,如此等等,使赖氏法的重现性较差,在测量精度上仍与连续监测法相差甚大.* 1个卡门氏单位的定义是:在温度25C,pH7.4,波长340nm光径1cm 的条件下,1ml血清使NADH勺吸光度下降0.001的转氨酶活性。
*国际单位:在最适温度(25C)下,1分钟产生1卩mol丙酮酸的酶量为1 个活性单位,即1IU=1umol/min。
King法单位定义是:每1ml血清在37 C条件下与底物作用60 min,生成1卩mol丙酮酸称为一个单位。
Mohun法单位定义是:每毫升血清在pH=7.4, 37C条件下与底物作用30 min,每生成2.5微克丙酮酸为1单位。
尿素氮(BUN )(二乙酰一肟法尿素测定)(一)仪器设备:水浴锅、紫外分光光度计、10mL试管(二)试剂:1、尿素氮试剂:蒸馏水100mL,浓硫酸44mL85%磷酸66mL,冷却至室温后,加氨基硫脲50mg硫酸镉(3CdSO4・ 8H2O)2g,溶解后稀释至1000mL。
2、20g/L二乙酰一肟试剂:称取二乙酰一肟20g,加入蒸馏水溶解,定容至1000mL。
3、尿素氮标准贮存液(357mmol/L):称取尿素1.072g溶解于蒸馏水中定容至1000mL,至于棕色瓶中贮存。
4、尿素氮标准应用液(17.85mmol/L):取贮存液5mL,加蒸馏水定容至100mL。
(三)操作步骤按下面表格的试剂配比操作:按上述表的配方每个样做3个平行样,混匀,置沸水浴中加热15min,立即用自来水冷却5分钟。
分光光度计选用540nm波长,以空白管调零点,读取各管吸光度。
尿素(mg%)=测定管吸光度/标准管吸光度x 17.85(mg/ml)尿素氮mg% =测定管/标准管0.002 100/0.1 5测定管/标准管X 10【参考范围】5-20 mg/dl血清尿素«(BUX)»定[检测方迭]二乙醸-時显色法;ttft—波氏比色法;碍躅联速率法"□E常蕃考恒]2. B6 —8. 2EHO1/L(以尿素计)=[崎床査文]展索杲蛋弓质代谢的主褰藝末产物,主赛在肝紙合戍,由肾蛀拝泄.因此.测定可了解肾小球的滤过功能.BUN升高见于:①生理性升高,如高蛋白改宦=②病理性升高:肾首性,如天商积疑伤、剧烈咽吐r幽门梗現、肠擾殂r长昭復泻、上消化道出血等;肾性.如急性肾小球皆炎、背菇晚期、肾功能衰喝、慢性肾盂皆炎及中毒性肯炎等:皆后性. 抽前列變种大、尿路结石、尿路挟窄、藕號肿曆等=BUK澤低见于:①主理性歸低,址妊娠妇女尋:②病瑾性隠低・如危性肝坏死、肝硬化、中毒性肝炎等.三、肌酐(Cr)四、血糖(Glu)(邻甲苯胺法)血糖是指血液中的葡萄糖,葡萄糖与冰醋酸、邻甲苯胺共热时,葡萄糖先脱水转化为羟甲基糠醛,再与邻甲苯胺缩合为蓝绿色的薛夫碱,其颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。
可用比色法进行定量测定。
1、仪器:紫外分光光度计、水浴锅2、试剂:(1)葡萄糖标准母液(10mg/ml,用饱和苯甲酸溶液配制)(2)邻甲苯胺溶液:2.5g硫脲溶于冰醋酸,加入邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml,用冰醋酸定容至1升。
3、操作步骤:(1)配置不同浓度葡萄糖标准溶液:取5支10ml容量瓶,标号,依次加入葡萄糖母液0.25, 0.5,1.0,2.0,3.0ml,用饱和苯甲酸稀释至10ml,混匀(则上述溶液100ml葡萄糖含量为25,50,100,200,300mg);(2)分别精密吸取不同浓度葡萄糖标准溶液于试管中,设平行管,空白管加0.1mL蒸馏水,各管加入邻甲苯胺试剂5.0mL,混匀后,置沸水中15分钟,立即移入冷水浴中冷却;(3)以空白号管调零,于紫外分光光度计波长630nm处测吸光值,以各管的吸光度为纵坐标,相应管中葡萄糖含量(mg)为横坐标,绘制标准曲线,得出线性方程。
(4)测试样品:取全血0.1mL,设平行样,按上述方法测出其A630nm吸光值, 通过线性方程求出其血糖含量。
注意事项:1. 本法不需要除去蛋白质,邻甲苯胺试剂只与醛糖显色,血液中其他还原性物质基本上无影响。