尼古丁测定

实验仪器和材料

LC-20A型高效液相色谱仪，快速混匀器，超声波清洗器，TTL-DCⅡ型氮吹仪，玻璃纤维滤膜(d=42mm)，被动式采样壳体(由中疾控提供)，10μl和50μl微型注射器，1.5ml样品瓶。实验试剂

尼古丁(标准品)，磷酸二氢钾(分析纯)，磷酸(分析纯)，盐酸(分析纯)，乙腈(色谱纯)，庚烷磺酸钠(色谱纯)，正庚烷(色谱纯)，甘油(分析纯)，氢氧化钠(分析纯)。

尼古丁吸收液的配置

准确称量20.0gNaH-SO4和25.0g甘油，用纯水定容于500ml，配制成4%NaHSO4-5%甘油的尼古丁吸收液。

滤膜制备选择合格滤膜，对光检查无针孔或折缝；将玻璃纤维滤膜在马弗炉中450℃烘烤2h，放入干燥器中冷却至室温；从干燥器中取出玻璃纤维滤膜，用尼古丁吸收液浸渍0.5h 后，取出置于干燥器中晾干备用。

采样器安装被动式采样器由壳体、挡风层和吸收层组成。壳体包括前盖、压环、托板和底座，挡风层为核孔滤膜和涤纶纱网，吸收层为浸渍尼古丁吸收液的玻璃纤维滤膜。安装好采样器后，放入铝箔袋中，封口。

实验分析步骤

流动相的制备准确称取 1.09g 磷酸二氢钾，用超纯水溶解至接近于1L，用磷酸调节pH 值为3，定容至1L，准确加入0.0082g 庚烷磺酸钠，混匀，通过0.45μm 过滤膜过滤，制得的磷酸二氢钾溶液与乙腈比例为9∶1 混匀。

色谱条件色谱柱为Vp -C18 柱(150×4.6mm)，柱温为25℃，SPD 检测器，检测波长为260nm，流动相流速为1ml/min。

标准溶液制备准确称取10.1mg(99%的尼古丁)于10ml 容量瓶中，加入流动相定容，超声3min，配成1.0μg/μl 的尼古丁(Ⅰ)液，取(Ⅰ)液1ml 于10ml容量瓶中，用流动相定容，得0.1μg/μl 的尼古丁(Ⅱ)液。

尼古丁标准曲线的制备分别移取尼古丁(Ⅱ) 液5μl、10μl 准确加入1ml 流动相，混匀，得0.5μg/ml、1μg/ml。又分别移取尼古丁(Ⅰ) 液2μl、4μl、8μl、16μl 准确加入1ml 流动相，混匀，得2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml 标准系列，得到尼古丁的标准系列分别进样5μl 进行分析，各点进样3次，各点对应峰面积取平均值，以标准系列质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标, 绘制峰面积和浓度的标准曲线。

尼古丁工作曲线的制备分别移取尼古丁(Ⅱ)液5μl、10μl，移取尼古丁(Ⅰ)液2μl、4μl、8μl、16μl置于制备好的玻璃纤维滤膜上，分别放于10ml比色管中，各加入5.0ml1.5mol/L的NaOH和准确加入2.0ml 正庚烷充分混匀后在恒温65℃超声30min，取出于漩涡混匀器上，混匀3min，取正庚烷层(1.8ml)，加10μl 盐酸，65℃超声混匀3min，漩涡2min，氮吹近干，用1ml 流动相定容，65℃水浴超声3min 漩涡2min 彻底解析出尼古丁。分别进样5μl进行分析，各点进样3 次，各点对应峰面积取平均值，以标准系列质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制峰面积和浓度的工作曲线。

样品处理将样品取回后，取出内装的玻璃纤维滤膜，置于10.0ml 比色管中，各加入5.0ml1.5mol/LNaOH 和准确加入2.0ml 正庚烷充分混匀后在恒温65℃超声30min，取出于漩涡混匀器上，混匀3min，取正庚烷层(1.8ml)，加10μl 盐酸65℃超声混匀3min，漩涡2min，氮吹近干，用1ml 流动相定容，65℃水浴超声3min 漩涡2min 彻底解析出尼古丁。进样5μl 测定，根据尼古丁工作曲线的回归方程计算膜上的尼古丁含量。采样放置某办公室4d，取回采样器测定样品结果。

方法二、

色谱柱: Lichrosorb C8柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相:甲醇:磷酸缓冲液(0.0022 mol·L-1

磷酸二氢钾—0.016 mol·L-1磷酸氢二钠溶液,称取KH2PO40.2994 g, Na2HPO45.7302 g,加水溶解至1 000 mL。) (52∶48),流速: 1 mL·min-1,检测波长: 268 nm,灵敏度: 0.02 AUFS,进样量:20μL。

线性关系精密称取对照品尼古丁350.0mg,可乐定 5.6 mg,置于50 mL容量瓶中,用0.05mol·L-1硫酸溶解并稀释至刻度,摇匀。按不同的比例稀释,得系列混合对照品溶液。精密移取各对照品溶液2.90 mL,各加1 mg·mL-1盐酸纳洛酮内标溶液(用0.05 mol·L-1硫酸配制) 0.10 mL,摇匀,在本文的色谱条件下进样测定。尼古丁和可乐定的浓度Y(mg·mL-1)分别和相应峰面积与内标。

方法四

色谱条件为:固定相Shim-pack CLC-C8(5μ,6.0×150),流动相0.1mol/L H3PO4-KH2PO4缓冲液(流速1.5ml/min,pH1.95),检测波长262nm,进样5μL),柱温40℃。

配置0.002g/L的尼古丁标准溶液,在UV2100紫外分光光度计上测量其紫外吸收曲线,发现尼古丁最大吸收波长为262nm,故选择262nm作为检测波长。尼古丁是一种弱的有机碱,有较强迫极性,宜采用反相HPLC法。实验表明,C8和ODS均可有效地将尼古丁和其它组分分离,但在相同条件下,C8柱分离效果比ODS更好,故选择Shim-pack CLC-C8作为固定相。尼古丁的酸性条件下以双质子化存在,易溶于水;而碱性条件下在水中的溶解性很差,且容易氧化和挥发。实验表明,不含有机溶剂的0.1mol/L H3PO4-KH2PO4(pH1.95)流动相可以有效地分离尼古丁。而文献介绍的以4.0×10-8mol/L NH4CI84%甲醇溶液[4]虽然也能使尼古丁得到分离,但尼古丁不是主峰,分离效果不理想,故选择0.1mol/LH3PO4-KH2PO4溶液作为流动相。

固定相:Shim-pack CLC-C8(5μ,6.0×150);流动相:0.1mol/L H3PO4-KH2PO4缓冲液(pH1.95);流速1.5ml/min;检测波长262nm;柱温40℃;进样体积5μl。在此条件下,得到烟气总粒相物和烟碱盐中尼古丁的色谱图如图1、图2。其中尼古丁的保留时间2.9min,分析时间15min。

标准溶淮的配制、标准方程和线性范围

准确称取一定量的烟碱标准品,加入不同量的0.025mol/L H2SO4溶液,配成每50mlH2SO4溶液中分别含有1、2、4、8、16、32、64、80、100mg的烟碱系列标准溶液。按照色谱条件测出其峰面积,采用最小二乘法算出其含量Y(mg)和面积X的回归方程:Y=0.0001836X-0.0528,相关系数为0.9997,变异系数不大于2%。线性范围为1-80mg/50ml。由于实验过程中烟气烟碱量为10-30mg/50ml,因此在线性范围之内。

方法5

色谱条件

Atlantis(dC18(5μm, 250mm×4.6mm i.d. )色谱柱;流动相: 10mmol/LKH2PO4-甲醇-三乙胺(体积比90∶10∶0.1),以H3PO4调pH 2.5;流速: 0.6mL/min;检测波长: 254 nm;柱温:室温(25℃);进样量: 4μL。

尼古丁标准储备液与标准溶液的配制

1 g/L尼古丁标准储备液:准确称取100.0 mg尼古丁用甲醇定容至100 mL容量瓶, -4℃保存待用。

标准溶液:分别从上述1 g/L尼古丁标准储备液中移取0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、25.0 mL,用二次水定容至50 mL,配成1、2、5、10、20、40、100、200、500 mg/L的标准溶液; 0.1、0.05、0.01 mg/L的标准溶液由二次水稀释10 mg/L标准溶液配制所得。