血红蛋白电泳及临床意义

血红蛋白电泳及临床意义

发表时间：2013-11-18T09:02:46.450Z 来源：《医药前沿》2013年第30期供稿作者：昝昕[导读] 电泳槽中的阳极注入 pH9.1的Tris缓冲溶液，阴极注入 pH8.6的巴比妥缓冲溶液，要求两极液面尽量成同一水平。昝昕（黑龙江省鹤岗市人民医院154101）

【关键词】血红蛋白电泳临床意义

【中图分类号】R443+.8 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）30-0164-01 血红蛋白电泳可以将血红蛋白中各正常成分或异常成分分离，以便进一步鉴定或定量测定。用等电聚焦毛细管电泳(CIEF)和区带电泳(CZE)可分离出十几种Hb变异链，有作者采用CZE法对正常人和地中海贫血患者血液样品在pH 11.8碱性磷酸盐缓冲液(PBs)中进行分离，分离的速度很快(<8分钟)，两者的电泳图谱明显不同[1]。对胎儿红细胞处理后，分离其血红蛋白，可分离出α、β和γ几种球蛋白链，如采用低pH 3.2的缓冲液，虽然分析时间延长，但变异体的分辨效果更佳。显然CE技术对鉴别诊断血红蛋白病起重要作用。

1 材料与方法

1.1 检测对象收集2011年1月～2012年12月受检300例均为门诊进行婚前检查或前前检查人员。其中男60例，女240例，年龄22～35岁，平均为29岁。

1.2 方法电泳槽中的阳极注入 pH9.1的Tris缓冲溶液，阴极注入 pH8.6的巴比妥缓冲溶液，要求两极液面尽量成同一水平。把醋酸纤维素薄膜裁成4cm×12cm大小，浸入薄膜浸泡液中10min左右，取出，用滤纸吸去多余浸泡液，把薄膜粗面朝上，贴在电泳槽支架上，用两层纱布搭桥，不接通电源，自由平衡5min。用血红蛋白吸管吸取2～3μ浓度为1 80～100g/L的血红蛋白溶液，放在盖玻片边缘(盖玻片长约1cm)，把血红蛋白液用盖玻片印在醋酸纤维素薄膜靠阴极一端约1.5cm处(薄膜下衬一片干燥滤纸，吸去多余的血红蛋白液)，同时用正常人血红蛋白液作对照。接通电源，平衡5min，电压调至150V，电流量约为0.2mA/cm簿膜宽，电泳15～20min。电泳完毕后，取下薄膜条，置于氨基黑10B染色液里染色10min，取出，用漂洗液漂洗，换液数次，直至薄膜条洁白为止。

2 结果

在pH 8.6或pH 8.8电泳时，正常人的血红蛋白A及血红蛋白A2都向正极方向泳动，血红蛋白A在前，血红蛋白A2在后。但血红蛋白F与血红蛋白A的位置很靠近，难以准确地分离和定量，可作1min碱变性试验，来测定血红蛋白F。300例血红蛋白电泳结果中检验异常96例，HbA2的平均值为2.3%；范围在1.1%～3.2%之间。HbA2增高是β-轻型地中海贫血的一个重要特征。缺铁性贫血及其他血红蛋白合成障碍性疾病。

3 讨论

异常血红蛋白分子的结构改变使其等电点发生变化，在电泳时其泳动速度与正常血红蛋白不同。一般用以检出各种异常血红蛋白的主要电泳方法是在pH 8.6或pH 8.8条件下进行，有时需要用pH 7.0、6.8、6.5或6.25的条件作进一步的鉴别。作为电泳支持物可采用层析滤纸、醋酸纤维素薄膜、淀粉胶、淀粉板或琼脂胶，不同支持物的电泳各有其特点，可根据需要选择。

在pH 8.6或pH 8.8碱性缓冲液中电泳时，各种血红蛋白都向阳极泳动，按其泳速可大致分为6组。血红蛋白E：血红蛋白E泳速与血红蛋白A2相等。在患者的血红蛋白中血红蛋白E的含量超过20％。虽然血红蛋白C的泳速与血红蛋白A2很接近，在此电泳中不能分离，但可进一步作pH 6.25琼脂电泳加以区别，这时血红蛋白E与血红蛋白A2电泳位置相同，而与血红蛋白C分离。血红蛋白S在碱性条件下，电泳速度与异常血红蛋白S相同或接近的异常血红蛋白有血红蛋白D、血红蛋白G以及某些不稳定血红蛋白(如Zürich等)，但它们的镰变试验阴性及还原血红蛋白溶解度正常，而血红蛋白S的镰变试验阳性及还原血红蛋白溶解度降低，可加以区别[2]。血红蛋白G的泳速较血红蛋白D 快。不稳定血红蛋白可进行热不稳定试验加以确诊。测定血红蛋白F是诊断重型和中间型地中海贫血的重要依据。淀粉板电泳可以分清血红蛋白F与血红蛋白A两条区带，定量测定结果与抗碱血红蛋白测定结果相似。血红蛋白H：进行电泳时，可以出现一条快速的异常血红蛋白区带，在pH 6.5淀粉胶电泳中该区带仍向阳极移动，结合H包涵体阳性，可以确诊为血红蛋白H病。血红蛋白H的等电点是pH 5.6。在pH 6.5或 pH 6.8的条件下，血红蛋白H向正极泳动，而其他血红蛋白则向负极泳动，这对进一步鉴定血红蛋白H有特定意义。血红蛋白M经转变为氰化高铁血红蛋白M后，在pH6.8条件下可与血红蛋白A分开。利用pH 6.8电泳，还可以分离血红蛋白E与血红蛋白A2及过筛不稳定血红蛋白。在pH 8.6条件下，有几种异常血红蛋白的泳速相同或接近[3]。在pH 6.25时，可进一步区分。例如，将血红蛋白S与血红蛋白D及血红蛋白G分开；将血红蛋白C与血红蛋白O、血红蛋白E及血红蛋白A2分开；又可将血红蛋白O与血红蛋白C、血红蛋白E及血红蛋白A2分开。

参考文献

[1]秦文斌.红细胞外血红蛋白A与血红蛋白A2之间的相互作用[J].生物化学杂志，1991,7(5):583

[2]叶应妩.全国临床检验操作规程[M].第2版.南京:东南大学出版社,1997，5-83.