武汉大学动物实验中心
氟西汀抑制慢性应激诱导的小鼠海马胃泌素释放肽受体表达增高
氟西汀抑制慢性应激诱导的小鼠海马胃泌素释放肽受体表达增高陈建新;陈悦;姚丽华;王高华;王晓萍;刘忠纯【摘要】目的研究氟西汀对慢性应激小鼠海马胃泌素释放肽受体(GRPR)表达的影响,探讨氟西汀抗抑郁作用可能的分子机制.方法♂ C57BL/6小鼠30只,随机分为对照组、慢性不可预见性应激(CUS)模型组和氟西汀处理组.小鼠经CUS应激处理后,给予氟西汀或生理盐水,进行糖水偏好和旷场行为学测试;蛋白印迹分析和荧光定量PCR法分别检测小鼠海马GRPR蛋白和mRNA的表达水平.结果行为学测试结果显示,CUS模型组小鼠糖水偏好、总行程、平均移动速度及直立次数均低于对照组(P<0.01);氟西汀组行为学指标均高于CUS模型组(P<0.01).蛋白印迹与荧光定量PCR结果显示,与对照组比较,CUS组小鼠海马GRPRmRNA及蛋白表达升高(P<0.01);经氟西汀处理后,GRPRmRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01).结论慢性应激后,小鼠海马GRPR表达水平升高,而氟西汀处理可以逆转GRPR表达水平的升高,抑制GRPR可能是氟西汀抗抑郁作用的分子机制之一.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2018(034)011【总页数】5页(P1566-1570)【关键词】慢性不可预见性应激;胃泌素释放肽受体;氟西汀;海马;蛋白印迹分析;荧光定量PCR;抑郁【作者】陈建新;陈悦;姚丽华;王高华;王晓萍;刘忠纯【作者单位】湖北大学教育学院心理学系,湖北武汉430062;武汉大学人民医院精神卫生中心,湖北武汉430060;湖北大学教育学院心理学系,湖北武汉430062;武汉大学人民医院精神卫生中心,湖北武汉430060;武汉大学人民医院精神卫生中心,湖北武汉430060;武汉大学人民医院精神卫生中心,湖北武汉430060;武汉大学人民医院精神卫生中心,湖北武汉430060【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.81;R349.32;R392.11;R749.42;R971.43近来,许多研究表明胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide, GRP)/胃泌素释放肽受体(gastrin-releasing peptide receptor, GRPR)通路在中枢神经系统疾病发病中起着重要的作用[1]。
缺血再灌注心肌中补体C3的表达与补体C1抑制剂的心肌保护作用
缺血再灌注心肌中补体C3的表达与补体C1抑制剂的心肌保护作用付金容;林国生;武智晓【摘要】Objective To explore the expression of C3 in ischemic reperfused myocardium and the protective effect of Cl inhibitor (C1INH) on ischemic myocardium. Methods Rat heart ischemia/reperfusion injury was induced by occluding the left anterior descending coronary artery for 30 min and reperfusion for 3 h or 72 h. Cl inhibitor or NaCl was administrated intravenously 5 min before surgery. The rats were divided into three groups, the false surgery group, the NaCl group and the C1INH group, each with 5 cases. The effect of C1INH on cardiac function and infarct size was measured, and the expression of C3 in ischemic myocardium was detected by immunohistochemistry and western blot. Results 3 h and 72 h after reperfusion, the NaCl group and the C1INH group had worsened cardiac function and increased infarct size, as well as increased expression of C3, compared with the false surgery group. 72 h after reperfusion, the C1INH group had significantly improved cardiac function and significantly reduced infarct size [(36.28±0.99)% vs (50.58±0.24)%], compared with the NaCl group (P<0.05), as well as suppressed expression of C3. Conclusion C1INH protects against I/R-induced myocardial injury via inhibition of C3 protein expression in ischemic myocardium.%目的研究缺血再灌注心肌中补体C3的表达以及补体1抑制剂(C1INH,C1 inhibitor)对缺血心肌的保护作用.方法结扎大鼠的冠状动脉左前降支30 min,再灌注3h、72 h造成缺血再灌损伤模型.实验分为假手术组、NaC1组和C1INH组(每组5只大鼠,n=5),观察C1INH对大鼠心功能、心肌梗死面积的影响,同时采用免疫组化和Western blot法检测缺血心肌补体C3的表达.结果与假手术组比较,再灌注3h及72 h后,NaC1组和C1INH组鼠心功能下降,心肌的梗死面积增加,缺血心肌补体C3的表达增加.与NaCI组比较,再灌注72 h后,C1INH组心功能改善,心肌的梗死面积减少[(36.28±-0.99)%vs(50.58±0.24)%],差异具有统计学意义(P<0.05).同时,C1INH组缺血心肌补体C3的表达减少.结论 C1INH通过抑制缺血心肌补体C3的表达而减少缺血再灌所致的心肌损伤,改善心功能.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2013(024)001【总页数】3页(P6-8)【关键词】补体1抑制剂;缺血再灌注;补体C3【作者】付金容;林国生;武智晓【作者单位】武汉大学人民医院心内三科,武汉湖北430060;武汉大学人民医院心内三科,武汉湖北430060;武汉大学人民医院心内三科,武汉湖北430060【正文语种】中文【中图分类】R-332恢复缺血心肌的灌注是挽救心肌的一项必要措施,越来越多的证据表明再灌注本身会导致心肌的额外损伤[1]。
颈动脉内膜损伤模型的改良与评价
DOI:10.3969/j.issn.l007-5062.2021.04.016•基础研究•颈动脉内膜损伤模型的改良与评价敖锋陈光斌张自力宋健[摘要]目的:探讨改良自制锡头导丝抽拉SD大鼠颈总动脉建立颈动脉内膜损伤动物模型的可行性,从而为颈动脉粥样硬化病理机制的实验研究提供可靠的实验动物模型。
方法:将SD大鼠56只,随机分为假手术组(n=28)和模型组(n=28),模型组利用锡头导丝抽拉损伤SD大鼠颈总动脉内膜;假手术组除不施行颈总动脉内膜损伤外,其余处理与模型组一致。
术后7、14、28d取两组大鼠颈总动脉,行HE染色观察血管组织形态学变化,测量新生内膜厚度,计算新生内膜/中膜厚度比、新生内膜/中膜面积比,并采用SM-MHC免疫组织化学染色评价改良颈动脉内膜损伤模型的效果。
结果:模型组术后第7天可见新生内膜,第14天、28天可见内膜快速增生致管腔狭窄。
模型各组与假手术组相比以及模型组内相比在新生内膜厚度、新生内膜/中膜厚度比、新生内膜/中膜面积比等,均差异有统计学意义;SM-MHC-FITC标记免疫荧光染色提示新生内膜主要为平滑肌细胞。
结论:改良锡头导丝建立颈动脉内膜损伤模型高效可靠,可以满足动脉粥样硬化机制研究的需要。
[关键词]颈动脉;内膜损伤;动脉粥样硬化;模型[中图分类号]R54[文献标志码]A[文章编号]1007-5062(2021)04-385-05Improvement and evaluation of carotid intimal injury model AO Feng,CHEN Guangbin,ZHANG Zili,SONG Jian Institute of Radiology,Shiyan Renmin Hospital,Shiyan442000,China[Abstract]Objective:To explore the feasibility of establishing an animal model of carotid intimainjury by drawing the common carotid artery of SD rats with improved tin head guide wire,so as to provide a reliable experimental animal model for the experimental study of the pathological mechanism of carotid atherosclerosis.Methods:56SD rats were randomly divided into sham operation group( n=28)and model group(n=28).In model group,the intima of common carotid artery of SD rats was damaged by drawing tin head guidewire;the other treatments of sham operation group were the same as those of model group except that commoncarotid artery intima was not injured.On the7th,14th and28th days after operation,the carotid arteries of thetwo groups were taken for HE staining to observe the morphological changes of the vessels at different timepoints after injury.The thickness of neointima was measured,the ratio of neointima/media thickness and theratio of neointima/media area were calculated.Results:In the model group,neointima could be seen on the7th day after operation,and the lumen stenosis was caused by rapid hyperplasia of intima on the14th and28thdays.There were significant differences in the thickness of neointima,the ratio of neointima/media thicknessand the ratio of neointima/media area between the model group and the sham operation group.Sm-mhc-fitc immunofluorescence staining showed that the neointima was mainly smooth muscle cells.Conclusions:It is effective and reliable to establish carotid intimal injury model with improved tin head guide wire,which can meet theneeds of atherosclerosis mechanism research.[Keywords]Carotid artery;Intimal injury;Atherosclerosis;Model基金项目:国家自然科学基金面上项目(81170134);湖北省教育厅2019年青年人才项目(Q20192101);湖北省教育厅2017年科研计划项目(B2017114)作者单位:442000十堰市人民医院放射影像中心(敖锋陈光斌张自力);武汉大学医学部(敖锋宋健)通信作者:张自力,主任医师,研究方向:颈部血管影像诊断。
武汉大学动物实验中心
武汉大学动物实验中心实验动物使用计划(Animal Using Protocol, AUP)(201811版)一、基本信息(在合适的选择项前打“ ”)1. 项目信息项目类型请填写:国家重大专项、支撑计划、国家/省/市/校级自然科学基金或其它类型基金2.实验人员信息所列人员必须经过培训或在经培训的工作人员陪同下开展工作*职责包括:实验设计、实验管理、主操作、操作助手、麻醉、动物管理等二、使用动物的目的和意义:以一般非生物医学背景人员为对象,用通俗的语言描述研究目的,对人类、动物的健康或科学的贡献。
(避免使用简写和缩写)三、动物使用的理由和替代方法的检索(在所有适合的项目前打 )1. 通过何种方法得出实验所需的动物数量。
□统计分析显示,实验计划的(动物)数量是最少的,符合统计学上对实验假设进行有效检验的要求。
□实验将进行多个独立因素结果的对比,因此要求多组。
□结果的检测或者被检测的现象是可变的,大样本量对于统计上有效的取样是必需的。
□来自于对照组的差异预计是很小的。
对于可靠地区分组间差异,大样本量是必需的。
□实验具有技术上的困难,需要多次尝试以便从每一次实验中获得令人满意的数据。
□其他(请解释):2. 在本实验中使用活体动物的理由是什么?□本研究要求对活体动物进行行为测量。
□本研究要求对活体动物进行生物学检测或活体动物的组织样本取材。
□在本实验中,计算机或者其他模型不能代替动物。
□本研究不能做离体实验。
□其他(请解释):3. 解释为什么你的研究中将要使用的动物种类是合理的。
□本实验是以前使用该品种动物实验工作的直接延续。
□本研究致力于扩展以前的从其它品种到这个品种的实验结果。
□对于该品种动物很重要的生理/行为学现象,现在缺乏了解。
□对于这个品种动物很重要的生理/行为学现象的相关内容比其他品种了解得更多。
□这个品种的选择体现出了在能够使用的最低级的生物体和与人类的生理/行为最相近的模型系统中间最好的折衷方案。
穿心莲内酯调节cGAS-STING信号通路对银屑病小鼠的治疗作用
实验研究穿心莲内酯调节cGAS-STING信号通路对银屑病小鼠的治疗作用何亚男,蔡翔△,邱百怡,孙邦梅,李伶华摘要:目的 探究穿心莲内酯(Andro)调节GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激物(cGAS-STING)信号通路对银屑病小鼠的治疗作用及机制。
方法 90只BALB/c小鼠分为对照组(Control组),模型组(Model组),穿心莲内酯低、中、高剂量组(Andro-L、M、H组,10、30、50 mg•kg-1•d-1 Andro)和穿心莲内酯高剂量+STING激活剂DMXAA组(Andro-H+ DMXAA组,50 mg•kg-1•d-1 Andro+5 mg•kg-1•d-1 DMXAA)。
除Control组外,其余组小鼠背部施用咪喹莫特(IMQ)建立银屑病小鼠模型。
观察小鼠银屑病面积并进行严重程度指数(PASI)评分,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β、IL-23、IL-17A、干扰素(IFN)-γ和IFN-β水平,苏木素-伊红(HE)染色和甲苯胺蓝染色测定表皮厚度和肥大细胞数,免疫荧光染色检测Ki-67、CD4阳性细胞表达率,RT-qPCR检测cGAS和STING mRNA表达水平,免疫印迹实验检测cGAS、STING、干扰素调节因子3(IRF3)、p-IRF3蛋白水平。
结果 与Control组相比,Model组小鼠背部皮肤出现严重的红斑、鳞屑,有大量的炎性细胞浸润;抓挠次数、PASI评分、表皮厚度、肥大细胞数量、IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-23、IL-17A、IFN-γ和IFN-β水平、Ki-67和CD4阳性表达率、cGAS 和STING mRNA和蛋白表达水平及IRF3磷酸化水平升高(P<0.05)。
与Model组相比,Andro-L组、Andro-M组和Andro-H组小鼠皮肤红斑、鳞屑、炎性细胞浸润现象减轻;抓挠次数、PASI评分、表皮厚度、肥大细胞数量、IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-23、IL-17A、IFN-γ和IFN-β水平、Ki-67和CD4阳性表达率、cGAS和STING mRNA和蛋白表达水平及IRF3磷酸化水平呈剂量依赖性降低(P<0.05);STING激活剂DMXAA逆转了穿心莲内酯对银屑病小鼠的保护作用(P<0.05)。
我国实验动物设施现状与思考
2
5 上海 复旦大学实验动物部、上海第二医科大学、上海医药工业研究院、
6
第二军医大学、中科院上海实验动物中心、上海中医药大学
6 广东 中山大学医学部、原第一军医大学实验动物中心、广州中医药大学、
4
广州医学院
7 江苏 南京中医药大学、南京国家模式动物中心、南京军区总医院
3
8 浙江 浙江大学医学院、浙江中医学院
③有害气体去除要求严格。
对于实验动物屏障设施内的有害气体去除 控制是必需的,要求是比较高的。除了控制病 原生物对洁净区内的污染外,洁净区内动物的 代谢产物以及所产生的病原生物二次转化造成 的NH3、H2S等气体,也是屏障设施内控制污 染的重要问题。
④气流组织有特殊要求。
由于实验动物的屏障设施内动物笼架具是 以叠放的形式摆放,动物单位体重的表面积 大。要求气流组织合适,使室内的速度场均 匀,而气流速度在0.1~0.2m/s。为防止最上 层的动物笼器具风速过大,回风口速度尽量 降低。所调查的单位采用混合流方式而较少 使用单向气流形式。另外,还应控制室内气 流出现涡流和滞流、短(捷)路的死角等。
1.1.2.目前屏障动物设施空气杀菌、灭 菌及净化采用的方法
(1)物理方法
①空气过滤除菌法的洁净技术:绝大多数调查单位屏障设施均采用初、中、 高效过滤器进行空气过滤除菌。其原理是:网截阻留、筛孔阻留、以及惯性 碰撞和布朗运动阻留。初效过滤材料:过滤粒径≥5μm、中效过滤材料:过 滤粒径1-10μm、高效过滤材料:可阻留粒径≥0.5μm)、超高效过滤材料: 可阻留粒径≥0.3μm。但主要以工业净化标准的洁净度来衡量实验动物屏障 设施内空气洁净度,容易达到国家标准。
门禁系统、动力系统、智能化平台、送风 系统、压差系统、温、湿度系统、照明系统、 摄像系统、仪器设备系统、网络系统等。
通过中国GLP认证单位汇总20140224.
是
上海中医药大学(药物安全性评价研究中心) 否
上海市食品药品检验所(药物安全评价中中 心)
否
上海市计划生育科学研究所(中国生育调节药 否 物毒理检测中心)
山东欣博药物研究有限公司(山东欣博药物安 否 全评价研究中心)
山东省医药工业研究院(药物安全性评价中 心)
否
山东省食品药品检验所(药物安全评价中心) 否
上海润诺生物 科技有限公司
否
Shenyang Research Institute of Chemical Industry, Safety Evaluation Center
沈阳化工研究 院安全评价中 是 心
Suzhou Xishan Zhongke Laboratory Animal Co., Ltd.
Chengdu, Sichuan, P.R. China
Beijing, P.R. China Jiulong Town, Luogang District, Guangzhou, P.R. China Guangzhou Science City,Guangdong, P.R. China Nanning, Guangxi, P.R. China Nanning, P.R. China
南京大学模式 动物研究所
否
GenScript Corporation,
南京金斯瑞生 物科技有限公 否
Beijing, P.R. China
Beijing, P.R. China
Beijing, P.R. China
Pudong, Shanghai, P.R. China
Kunming, Yunnan, P.R. China Pudong New Area, Shanghai, P.R. China Dongguan, Guangdong, P.R. China Nanjing, Jiangsu, P.R. China
实验动物每只成本核算
武汉大学动物实验中心实验动物价目表
动物名称规格校内校外
KM小鼠5日龄以内4元/只5元/只小于15克6元/只8元/只15-25克8元/只10元/只大于25克10元/只12元/只
BALB/c小鼠5日龄以内5元/只6元/只小于3周10元/只15元/只3-5周15元/只20元/只6-8周20元/只25元/只
C57BL/6小鼠5日龄以内5元/只6元/只小于3周10元/只15元/只3-5周15元/只20元/只6-8周20元/只25元/只
SD大鼠10日龄以内10元/只10元/只小于50克20元/只20元/只50-150克30元/只30元/只151-200克35元/只35元/只大于200克40元/只40元/只
BALB/c-scid小鼠10日龄以上80元/只100元/只10日龄以内40元/只40元/只妊娠360元/只360元/只
BALB/c-nu裸小鼠10日龄以上80元/只100元/只10日龄以内40元/只40元/只妊娠360元/只360元/只
新西兰兔
普通级100元/只120元/只
20-50日龄50元/只50元/只
20日龄以内10元/只10元/只
武汉大学动物实验中心
2012年12月25日。
实验动物学教学改革方法的探讨
的有知觉的材料 ;在保证获取 一定数量与精确度 的数据信息 的前提下 ,减少动物 的使用数量 ;以及在必须使用动物时, 制 ,医 学研 究 是 不 能 也 不 允许 在 人 身 上 直 接做 实验 的 ,但 要 要尽量减少非人 道程序 的影响范 围和程度。这方面 的灌输不 深入探讨其疾病的发生、发展及 防治 ,只能合理 的利用实验 仅对 于学生培养科学严谨 的作风有益,而且对于 目前全球所 动物这个人类的替难者 。 倡导的动物人道主义有现 实意义 。
一
的仪器和设备对研 究对象进行积极干预,人为的变革、控制 或模拟研究对 象,在最有利 的条件下进行观察 ,从而获得经 验事实。实验 教学中需要学生 自己去主动探索 ,学生需充分 与教师和学习伙伴进行交流 、探讨,主动接受教师的指导和 伙伴的协 作学 习。教师在此过设计 来实现 的。因而教师 在此过程 中应特别重视度 的把握 。 另外 ,在保证课堂教 学中学生接受知识质量的前提下 , 还要注 重细节 中对学生潜移默化影响的因素 。目前,对于动 物实验 ,有关学者提 出了 “ R 3 理论 ”,3 为替代 ( e l c— R R p a e
2 实 验动 物 学 教 学 内容 的改 革 对于实验 动物学 教学 内容 的改革 ,首 先应 明确 其教学 的 目标 ,教学对象 的专业背景与层次不同,应根据情况制定 4 综 合 措 施提 高动 物 的 利 用 率 实验动物学的教学首先必然会给动物带来莫大的痛苦 ,
侧重点不同的教学大纲 。对于大众教学 ,应着重使其 了解与 掌握实验动物科学 的基本知识与基本技能 ,拓宽知识面 ;而 对于研究生,重点应突 出实验动物 的选择、人类疾病动物模 型、免疫缺 陷动物 、胚胎工程动物 、转基因动物等 内容 ,力 求充分反映学科前沿 。就是同一层 次的学员 ,专业不同, 授 课 的侧 重 点 也 不 同 。 如对 于 管 理 类 的 学 生 ,我 们 着 重 使 其 熟悉与实验动物使用及 管理相关 的各项法律法规 ,而对于药 学专 业 的 学 生 ,重 点 则 是 使 其熟 练 掌 握 各种 动 物 实 验 技术 。 虽然 教学 应 以教 材 为 纲 ,但 是 教 材 内 容总 是 落 后 于 学科 发展 的现 状 。 在 明确 教 学 内容 时 ,教师 需经 常 上 网 查 新 ,适 时将该学科涌现 的最新信息 、新技术 以及新动 向以讲座 、介 绍 的方式融入 到授课 内容 中。这样做 并非要求学生掌握这些 知 识,而主要是培养他们探究的兴趣。 3 实 验 动 物 学教 学 方 法 和 手段 的应 用 实验动物学一门以实验为基础的学科 ,因而具体 的实验 操 作 对 于培 养 学 生 的 实 际应 用 能 力和 动 手 能 力 至 关重 要 。在 实验教学中,力求在教师的指导下 ,学生通过实验方法进行 学 习 ,在 这 个 过 程 中 可 以根 据 研 究 课 题 规 定 任 务 ,利 用 专 门
实验动物房实验动物使用计划方案
实验动物房实验动物使用计划方案(用于实验动物科研和教案)二、项目来源:(在“□”中打钩用“ ”表示)项目类型请填写:国家重大专项、计划、计划、国家自然科学基金或其它类型基金三、动物实验操作人员经历和培训:所列人员必须经中南民族大学动物实验中心培训或在经培训的工作人员陪同下开展工作,请四、研究目的和意义:以一般非生物医学背景人员为对象,用通俗的语言描述研究目的(做什么?),对人类、动物的健康或科学的贡献(原因?)。
五、实验设计和动物实验操作步骤(本部分也可以实验方案作为附件提交)根据实验内容填写以下实验信息:●实验分组:描述实验组及对照组,动物数●动物标记:描述耳朵标记、纹身、项圈等的详细情况●繁殖:描述繁殖的需要和方法●注射或接种:描述注射的物质、容量、剂量、注射部位、针头的大小和注射时间表●采集血液:描述采血容积、频率、部位、针的大小和方法●外科手术:详细描述操作过程●保定方法:短期保定和长期保定(保定椅、项圈,背心,锁链)●疼痛和麻醉:动物有何种疼痛,用何种麻醉或镇痛剂●动物的紧张:预期对动物不利的影响,电击,水淹,噪音,强光等●在本中心外的动物操作:在如何在另外一个机构所开展的与动物有关的工作●动物模型的建立方法:如何诱导动物致病或疾病模型建立的方法●饮食要求:特殊的饮食和或食物或水的限制●危险物质:会用到何种危险物质,有何种危害性和防护措施●动物安乐死:明确决定实施安乐死的标准和方法,例如:动物体重下降超过原体重的,无法进食,严重感染,肿瘤,肿瘤体积过大,治疗无效,器官脏器失能等。
六、实验动物信息针对使用的每一种动物的品系填写每一栏。
如果使用了种以上或个品系以上的动物,参考美国农业部分类标准十、安乐死:(在“□”中打钩用“ ”表示)十一、本实验是否使用了中国国家食品药品监督管理局管制的麻醉剂和精神类药品剧毒物)实验?(在“□”中打钩用“ ”表示)十四、项目负责人的申明:·我保证在此提请的陈述是完整的且准确的,本方案中的动物使用没有单纯重复以前的实验。
医学生实验动物福利与伦理实践教学的思考
医学生实验动物福利与伦理实践教学的思考高建峰;汤宏斌;杨四军;周立;郭铭;滕利【摘要】医学生是我国医疗卫生事业的生力军,是构建\"健康中国\"的骨干力量.动物实验是医学生教育教学过程的重要组成部分,但教学动物实验对实验动物造成的伤害与医学理念不符.加强医学生实验动物福利与伦理实践教育,不仅是培养医学生良好伦理素养的重要途径,而且有助于培养医学生较好的科研素质,更好地了解和尊重生命,促进医学研究与生命伦理观的良性互动,最终达到医学研究可持续性发展之目的.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2018(028)011【总页数】4页(P115-118)【关键词】医学生;动物实验;实验动物福利与伦理【作者】高建峰;汤宏斌;杨四军;周立;郭铭;滕利【作者单位】武汉大学动物实验中心,武汉 430071;武汉大学动物实验中心,武汉430071;武汉大学动物实验中心,武汉 430071;武汉大学动物实验中心,武汉430071;武汉大学动物实验中心,武汉 430071;武汉市妇女儿童医疗保健中心病理科,武汉 430016【正文语种】中文【中图分类】R-33动物实验是医学生教育教学过程的重要组成部分[1],但教学动物实验对实验动物造成的伤害与医学理念不符。
随着我国医药卫生事业广泛深入的发展以及与国外教学科研机构交流的不断增加,我国实验动物在福利和伦理方面的状况愈加引起国外同行的关注[2]。
医学生的实践教学与实验动物息息相关,从最基础的解剖学与组织胚胎学、生理学、病理学和药理学到后期综合性在体实验,在很大程度上都依赖于动物实验[3]。
因此,加强医学生实验动物福利与伦理实践教育,不仅是培养医学生良好伦理素养的重要途径,而且有助于培养医学生较好的人文素养和科研素质,更好地了解和尊重生命,促进医学研究与生命伦理观的良性互动,最终达到医学研究可持续性发展之目的。
1 医学生实验动物福利与伦理实践教学现状与存在的问题1.1 实验动物福利与伦理的含义实验动物福利与伦理(laboratory animal welfare and ethics)这一表述最早是国外学者提出。
HR-MAS NMR研究大鼠颞叶、海马和内嗅皮质的生理代谢表征
HR-MAS NMR研究大鼠颞叶、海马和内嗅皮质的生理代谢表征刘慧浪;朱航;夏圣安;刘买利【摘要】颞叶结构参与了多种中枢退行性疾病的发牛和发展.了解生理状念下大鼠的这些脑区的代谢特征可以为动物模型的病理研究提供基础数据和参考.本文采用高分辨魔角旋转核磁共振(HR-MAS NMR)波谱技术和主成分分析(PCA)方法对S.D.大鼠双侧颞叶、海马和内嗅皮质的代谢物进行了分析,结果发现这3个脑区的代谢表征存在显著差异.颞叶区的N-乙酰天门冬氨酸和牛磺酸的浓度最高,肌醇和肌酸的浓度最低;海马区的甘氨酸和胆碱的浓度最高;而在内嗅皮质区则是谷氨酰氨的浓度最高.另外,还证实了HR-MAS NMR-PCA技术是研究生理和病理状态下脑组织各亚结构代谢表征的一种有效的手段.【期刊名称】《波谱学杂志》【年(卷),期】2008(025)004【总页数】8页(P478-485)【关键词】HR-MAS NMR;生理代谢表征;主成分分析;S.D.大鼠;颢叶结构【作者】刘慧浪;朱航;夏圣安;刘买利【作者单位】波谱与原子分子物理国家重点实验室,(中国科学院武汉物理与数学研究所),湖北,武汉,430071;中国科学院研究生院,北京,100049;波谱与原子分子物理国家重点实验室,(中国科学院武汉物理与数学研究所),湖北,武汉,430071;中国科学院研究生院,北京,100049;波谱与原子分子物理国家重点实验室,(中国科学院武汉物理与数学研究所),湖北,武汉,430071;中国科学院研究生院,北京,100049;波谱与原子分子物理国家重点实验室,(中国科学院武汉物理与数学研究所),湖北,武汉,430071【正文语种】中文【中图分类】Q591.1引言高分辨魔角旋转核磁共振技术(high-resolution magic-angle-spinning nuclear magnetic resonance, HR-MAS NMR)是借用固体核磁共振中的魔角旋转技术,让生物组织绕与静磁场成(54.7°)角的方向快速旋转(2.0~5.0 kHz),从而有效地平均掉由于生物组织内各种相互作用和磁化率不均匀引起的谱线增宽,提高了图谱的分辨率[1,2]. HR-MAS NMR技术的优点很多:对组织的破坏性小,一次性检测到的代谢物种类多,需要的样品量少,高通量的结构/动力学信息等等[3,4]. 这些优点使得HR-MAS NMR技术广泛应用于生理和病理状态下生物组织的代谢表征的研究,为疾病的诊断和治疗提供了有用的生化信息[5,6]. 由于所需要的样品量少(10~20 mg), HR-MAS NMR技术对于分化不均一的组织(脑、肾脏等)中各亚区的代谢物研究有着其独特的优势[7, 8].颞叶结构,包括海马(hippocampus, HPC)、内嗅皮质(entrohinal cortex, EC)和颞叶(temporal lobe, TL),在阅读、认知和记忆等高级功能的处理过程中有着重要的作用[9]. EC被认为是HPC和TL之间信息双向传输的闸门,在神经活动中发挥着重要的调控作用[10]. 颞叶结构的损伤可以引起记忆力下降、智力下降和认知功能障碍等,导致多种神经退行性疾病的发生,如痴呆、癫痫、帕金森病等等[7,11,12]. 疾病的发生机制、病理演化以及治疗、预后等方面的研究离不开动物模型,大鼠是最常用的造模动物之一. 因此,了解生理状态下大鼠颞叶结构中各脑区的代谢表征可以为疾病的病理研究提供对照和基础数据,也可以避免由于脑区的组织发生和功能上的差异引起的分析时的误导.生物组织的成分复杂,只凭视觉分析很难获得NMR谱中全部的有用信息. 因此,运用主成分分析(principal component analysis, PCA)提取HR-MAS NMR中的信息可以更全面地探讨不同的病理生理变化中组织代谢改变的特征[13,14]. 本实验采用HR-MAS NMR和PCA方法分析了正常大鼠HPC、EC和TL脑区的代谢物,鉴别不同脑区之间生理代谢表征的差异.1 实验材料和方法1.1 实验动物雄性S.D.大鼠6只(150~180 g)购自武汉大学动物实验中心. 动物自由摄食饮水,饲养室光照12 h,黑暗12 h,室温20~22 ℃,相对湿度40%~75%.1.2 HR-MAS NMR实验适应环境一周后,大鼠用10%乌拉坦(1 g/kg,腹腔注射(i.p.))麻醉,迅速断头取脑,分离出双侧HPC、 EC和TL(约15~25 mg),图1为各脑区的取材部位示意图. 于液氮冻存后转至-75 ℃低温冰箱保存直至进行NMR实验. 整个操作过程在2~3 min内完成.图1 海马、内嗅皮质和颞叶的取材部位示意图Fig.1 Sketch of the hippocampus, entorhinal cortex and temporal lobe dissected out in the experiment所有的NMR实验在Varian Unity INOVA 600 NMR谱仪(Palo Alto, CA, USA)上完成,探头为Varian Nano Probe. 脑组织放入4 mm的陶瓷转子,加入少量D2O以提供锁场信号. 实验中转子转速为2 kHz,实验温度为25 ℃. 用预饱和方法压制水信号(1.5 s). 一维1H CPMG NMR谱(Carr-Purcell-Meiboom-Gill, RD-π/2-(-τ-π-τ-)n-Acq)可以过滤大分子的宽峰,保留小分子代谢物的信息[21]. 实验脉冲前等待时间(RD)2 s,自旋回波时间(2nτ)为100 ms,谱宽8 kHz,采样点数32 k,信号累加128次. 为了改善NMR谱的信噪比,所有的一维1H NMR 谱在傅立叶变换前加指数函数(0.5 Hz)对时域信号做权重处理,同时数据填零至64 k,以提高NMR谱的数字分辨率. 为减少组织降解,从样品取出、放入转子到NMR实验结束,整个过程不超过30 min.图2 一只正常S.D.大鼠右侧内嗅皮质(EC)、海马(HPC)和颞叶(TL)的1H NMR谱图中Lac: 乳酸; Ala:丙氨酸; NAA: N-乙酰天门冬氨酸;GABA: γ-氨基丁酸; Gln:谷氨酰胺; Glu:谷氨酸; Asp:天冬氨酸; PCho:磷酸胆碱;Cho:胆碱; Tau:牛磺酸; Cr:肌酸; PCr:磷酸肌酸; Gly:甘氨酸;mIns:肌醇; Urethane:乌拉坦.Fig.2 Typical HR-MAS 1H NMR spectra from the right entorhinal cortex (EC), hippocampus (HPC), and temporal lobe (TL) of an Sprague-Dawley ratAbbreviations: Lac: lactate; Ala: alanine; NAA: N-acetylaspartate; GABA: γ-aminobutyrate acid; Gln: glutamine; Glu: glutamate; Asp: aspartate; PCho: phosphocholine; Cho: choline; Tau: taurine; Cr: creatine; PCr: phosphocreatine; Gly: glycine; mIns: myo-inositol.1.3 数据处理及PCA分析将采集的CPMG 1H NMR谱用本实验室自编程序进行分段积分. 由于低场部分的信号较弱,信噪比较差,且对结果分析影响不大,因此这里只取δ 4.49~δ 0.69的区间进行分段积分,积分区间为δ 0.02,得到191个数据点. 去掉包含乌拉坦信号的两个区间(δ 1.19~1.29, δ 4.07~4.15),每组数据都以总和为1进行归一化处理,最后得到的数据矩阵包含182个积分区间和34个样本(182×34矩阵). 将此数据矩阵导入SIMCA-P+ 10.0软件包(Umetrics, Sweden),在进行PCA分析前,所有的数据按照Ctr方式进行scaling并中心化,使新坐标系的原点与群点的中心重合,在保持原有数据间关系的同时减小数据的动态范围. PCA的结果分别表示在scores和loading图中.1.4 统计学分析将脑组织中的主要代谢物的特征共振峰归一化后的积分值除以该信号所含的质子数,所得的数值作为该代谢物的相对浓度. 用one-way ANOVA检验这些代谢物的相对浓度在3个脑区间的差异是否具有显著性(p<0.05). 所有数值均用平均值±标准偏差(mean ± SD)的形式表示.2 实验结果图2显示的是典型的S.D.大鼠右侧EC、 HPC和TL 的1H CPMG NMR谱. 根据参考文献[15, 16],我们对脑组织1H CPMG NMR谱中的代谢物进行了归属并标注于图中.将归一化后的NMR数据用PCA方法进行分析,结果见图3. 其中左边一栏是scores图,右边则为相对应的柱状loading图. 根据多元T检验统计分析方法,用Multivariate分析计算每个scores图中两组数据点的PC坐标值之间的统计学关系,证明不同来源的样品空间位置之间存在显著性差异(表1,其中, HPC/EC 之间p=0.001;其它两组之间p<0.0001),因此可以认为PCA方法能够将不同脑区的数据点分开. HPC、 EC和TL的整体代谢表征是有差异的,结合原始的NMR谱图、 NMR信号归属结果和PCA分析的loading图,可以判断是何种代谢物对样品的分类或聚集做出的贡献最大. 从柱状loading图上可以看出: TL和EC比较, NAA和牛磺酸的浓度在TL区较高,肌醇和磷酸胆碱的浓度在EC区较高; TL和HPC比较,肌醇、肌酸和胆碱的浓度在HPC区较高, NAA的浓度在TL区较高; HPC和EC比较, NAA、胆碱和牛磺酸的浓度在HPC区较高,谷氨酰氨和磷酸胆碱的浓度在EC区较高.对代谢物的相对浓度在3个脑区间的差异进行统计学分析发现(图4): TL区的NAA和牛磺酸的浓度最高,肌醇和肌酸的浓度最低; HPC区的甘氨酸和胆碱的浓度最高;而在EC区则是谷氨酰氨的浓度最高; HPC区丙氨酸的浓度显著高于TL区.表1 图3中每个scores图的两组数据点的PC坐标之间的统计学关系Table 1 The p values of the two PCs values used in the score plots fromFig.3*p<0.01,**p<0.0001TLHPCECTLPC1⁃PC2∗∗PC1⁃PC2∗∗HPCPC1⁃PC2∗∗PC2⁃PC3∗ECP C1⁃PC2∗∗PC2⁃PC3∗图3 任意两组脑区的代谢表征的PCA分析的scores 图(左边)和柱状 loading 图(右边). 脑区及代谢物缩写同图2Fig.3 Scores plot (left) and column loading plot (right) of PCA of every two regions. The groups and the metabolites contributing to these classifications are labeled. The abbreviations see Fig.2图4 不同代谢物的相对浓度在颞叶、海马和内嗅皮质脑区间的差异. 代谢物缩写同图2, *p<0.05, **p<0.01Fig.4 Significant changes in relative metabolite contents among the temporal lobe, hippocampus and entorhinal cortex. The abbreviations of metabolites see Fig.2, *p<0.05, **p<0.01另外,我们也比较了两侧大脑半球的同源性脑区的1H NMR谱有无差异, PCA 分析的scores图上两组数据点重叠在一起(p>0.05,图未给出),说明同源性脑区间的代谢表征差异不明显,不足以被NMR检测到.3 讨论本工作所涉及的3个脑区是颞叶结构的重要组成部分. 从组织发生上看, HPC属于原皮质(archicortex), EC属于旧皮质(paleocortex),而TL属于新皮质(neocortex). 从功能上看, TL与语言、记忆、认知和情绪等行为活动有关;海马主要参与学习和记忆的过程; EC位于HPC和TL之间,可以看作是HPC和TL之间信息双向传输的闸门[10]. 此外, EC还是嗅觉传导通路的重要组成部分. NAA已经被广泛认为是神经元的标记物,而肌醇则是胶质细胞的标记物[17]. TL 区的NAA含量最高而肌醇的含量最低,说明TL区相对于HPC和EC而言,神经元的数目多而胶质细胞的数目少. 由于取材时TL区主要选取的是其灰质部分,即神经元胞体密集存在的区域,可以与上述结果相互验证. 此外,牛磺酸在大脑中与多种功能相关,例如,调节神经元的兴奋性、调节钙离子通量、保持细胞膜的稳定性、分化神经干细胞、维护感光细胞、抗氧化、细胞增殖、调节渗透压和免疫系统等等[18, 19]. 胆碱及其相关分子被认为与神经元的髓鞘和细胞膜的稳定性有关[20]. 甘氨酸是脑内重要的抑制性神经递质;谷氨酰氨可以和谷氨酸、GABA相互转换,维持脑内的兴奋(谷氨酸能为主)/抑制系统(GABA能为主)的平衡[21, 22]. 上述物质在TL、 HPC和EC的含量不同可能与各脑区的细胞组成和功能不同有关.以上的研究结果表明本实验所研究的3个脑区在功能上各有侧重,而用HR-MAS NMR波谱技术测得的各脑区代谢物的浓度也不尽相同(图3、图4). 其中, TL相对于其他组织而言NAA和牛磺酸的浓度最高,肌酸和肌醇的浓度最低; HPC区的甘氨酸和胆碱的浓度最高, EC区则是谷氨酰氨的浓度高. 各个脑区的代谢表征的差异可能是它们执行不同功能的生化基础. 同时, HR-MAS NMR-PCA技术可以鉴别不同功能和起源的神经核团的代谢差异,说明它是研究生理和病理状态下脑组织各亚结构代谢表征的一种有效的手段. 并且,随着活体磁共振波谱技术的不断改进, HR-MAS 1H NMR研究结果对以后的活体磁共振波谱研究有一定的指导意义.参考文献:【相关文献】[1] Andrew E R, Bradbury A, Geads R. Nuclear magnetic resonance spectra from a crystal rotated at high speed [J]. Nature, 1959, 182: 1 659-1 661.[2] Lowe I J. Free induction decays of rotating solids [J]. Phys Rev Lett, 1959, 2: 285-289.[3] Duarte I F, Stanley E G, Holmes E, et al. Metabolic assessment of human liver transplants from biopsy samples at the donor and recipient stages using high-resolution magic angle spinning 1H NMR spectroscopy [J]. Anal Chem, 2005, 77(17): 5 570-5 578. [4] Lucas L H, Wilson S F, Lunte C E, et al. Concentration profiling in rat tissue by high-resolution magic-angle spinning NMR spectroscopy: investigation of a model drug [J]. Anal Chem, 2005, 77(9): 2 978-2 984.[5] Swanson M G, Zektzer A S, Tabatabai Z L, et al. Quantitative analysis of prostate metabolites using 1H HR-MAS spectroscopy [J]. Magn Reson Med, 2006, 55(6): 1 257-1 264.[6] Wang Y, Cloarec O, Tang H, et al. Magic angle spinning NMR and 1H-31P heteronuclear statistical total correlation spectroscopy of intact human gut biopsies [J]. Anal Chem, 2008, 80(4): 1 058-1 066.[7] Cheng L L, Newell K, Mallory A E, et al. Quantification of neurons in Alzheimer and control brains with ex vivo high resolution magic angle spinning proton magnetic resonance spectroscopy and stereology [J]. Magn Reson Imaging, 2002, 20(7): 527-533.[8] Li Zhao (李钊), Zhu Hang (朱航), Cheng Peng (程鹏), et al. HR-MAS 1H NMR spectra of rat kidney tissue analyzed by statistical total correlation spectroscopy (STOCSY) (基于核磁共振的统计全相关谱在大鼠肾脏组织中的应用) [J]. Chinese J Magn Reson (波谱学杂志), 2007, 24 (4): 510-518.[9] Elger C E, Helmstaedter C, Kurthen M. Chronic epilepsy and cognition [J]. Lancet Neurol, 2004, 3(11): 663-672.[10] de Curtis M, Pare D. The rhinal cortices: a wall of inhibition between the neocortex and the hippocampus [J]. Prog Neurobiol, 2004, 74(2): 101-110.[11] Jellinger K A. Neuropathological aspects of Alzheimer disease, Parkinson disease and frontotemporal dementia [J]. Neurodegener Dis, 2008, 5(3-4): 118-121.[12] Liu H L, Fang F, Zhu H, et al. Metabolic changes in temporal lobe structures measured by HR-MAS NMR at early stage of electrogenic rat epilepsy [J]. Exp Neurol, 2008, 212(2): 377-385.[13] Qiu Yu-jie (邱玉洁), Xia Sheng-an (夏圣安), Ye Chao-hui (叶朝辉), et al. Patternrecognition methods in biomedical magnetic resonance (生物医学核磁共振中的模式识别方法) [J]. Chinese J Magn Reson (波谱学杂志), 2005, 22(1): 99-111.[14] Griffin J L, Blenkiron C, Valonen P K, et al. High-resolution magic angle spinning 1H NMR spectroscopy and reverse transcription-PCR analysis of apoptosis in a rat glioma[J]. Anal Chem, 2006, 78(5): 1 546-1 552.[15] Martinez-Bisbal M C, Marti-Bonmati L, Piquer J, et al. 1H and 13C HR-MAS spectroscopy of intact biopsy samples ex vivo and in vivo 1H MRS study of human high grade gliomas [J]. NMR Biomed, 2004, 17(4): 191-205.[16] Tsang T M, Griffin J L, Haselden J, et al. Metabolic characterization of distinct neuroanatomical regions in rats by magic angle spinning 1H nuclear magnetic resonance spectroscopy[J]. Magn Reson Med, 2005, 53(5): 1 018-1 024.[17] Brand A, Richter-Landsberg C, Leibfritz D. Multinuclear NMR studies on the energy metabolism of glial and neuronal cells[J]. Dev Neurosci, 1993, 15(3-5): 289-298.[18] Kim H W, Yoon S H, Park T, et al. Gene expressions of taurine transporter and taurine biosynthetic enzyme during mouse and chicken embryonic development[J]. Adv Exp Med Biol, 2006, 583: 69-77.[19] Manjunatha B, Devaraj M, Gupta P, et al. Effect of taurine and melatonin in the culture medium on buffalo in vitro embryo development[J]. Reprod Domest Anim, 2008.[20] Scarabino T, Popolizio T, Bertolino A, et al. Proton magnetic resonance spectroscopy of the brain in pediatric patients[J]. Eur J Radiol, 1999, 30(2): 142-153.[21] Benitez-Diaz P, Miranda-Contreras L, Mendoza-Briceno R V, et al. Prenatal and postnatal contents of amino acid neurotransmitters in mouse parietal cortex [J]. Dev Neurosci, 2003, 25(5): 366-374.[22] Benitez-Diaz P, Miranda-Contreras L, Pena-Contreras Z, et al. Histotypic mouse parietal cortex cultures: excitation/inhibition ratio and ultrastructural analysis[J]. J Neurosci Meth, 2006, 156(1-2): 64-70.。
回肠转位术对2型糖尿病大鼠血糖及肠道屏障的影响及机制研究
回肠转位术对2型糖尿病大鼠血糖及肠道屏障的影响及机制研究蔡逊;王世杰;马丹丹;傅涛;刘勇;孙康【摘要】目的观察回肠转位术(ileal transposition,IT)对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)、胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)、D乳酸及二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)的影响,探讨IT对T2DM大鼠血糖和肠黏膜屏障的影响及相关机制.方法随机数字表法将60只T2DM大鼠分为IT组和假手术组(Sham组),每组30只.观察并测定两组大鼠术前及术后3d、1周(w)、2w、4w、6w、8w FBG、GLP-1、GLP-2、D乳酸、DAO水平的变化.结果与术前比较,IT组T2DM大鼠术后3d FBG、GLP-1及GLP-2差异无统计学意义(P>0.05),术后1w、2w、4w、6w、8wFBG明显下降(t1w=6.148,P1w <0.001;t2w=8.650,P2w<0.001;t4w=9.569,P4w<0.001;t6w=11.201,P6w <0.001;t8w=12.424,P8w<0.001),GLP-1及GLP-2均显著升高[(GLP-1:t1w=-12.794,P1w<0.001;t2w=-18.477,P2w<0.001;t4w=-24.252,P4w<0.001;t6w=-27.378,P6w<0.001;t8w=-40.056,P8w <0.001)、(GLP-2:t1w=-12.305,P1w<0.001;t2w=-14.708,P2w<0.001;t4w=-28.142,P4w<0.001;t6w=-27.378,P6w<0.001;t8w=-40.056,P8w<0.001)].与术前相比,IT组术后3 d DAO及D乳酸均较术前明显升高(DAO:t3d=-46.223,P3d <0.001;D-乳酸:t3d=-6.439,P3d<0.001),但术后1w、2w、4w、6w、8w DAO及D-乳酸与术前比较,差异无统计学意义(P>0.05).相同条件下,Sham组上述指标均未见明显变化(P>0.05).结论 IT通过刺激GLP-1和GLP-2分泌增加来发挥降低血糖和保护肠道屏障功能的作用.%Objective To observethe effect of ileal transposition(IT) surgery on fasting bloodglucose(FBG),glucagon-like peptide-1 (GLP-1),glucagon-like peptide-2(GLP-2),D lactate and diamine oxidase(DAO) expression,and intestinal barrier in type 2 diabetes mellitus(T2DM) rats and the possible mechanisms.Methods T2DM rats were randomly divided into IT surgery group(n =30) and sham operation group(n =30).The FBG,GLP-1,GLP-2,D lactate and DAO levels in the two groups were determined before and 3 days,1 week,2 weeks,4 weeks,6 weeks,8 weeks after operation.Results There was no significant difference in FBG,GLP-1 and GLP-2 before and at 3rd day after operation in IT group(P>0.05).FBG levels were significantly decreased (t1w =6.148,P1w <0.001;t2w =8.650,P2w<0.001;t4w=9.569,P4w<0.001;t6w =11.201,P6w<0.001;t8w =12.424,P8w<0.001),and GLP-1 and GLP-2 levels were significantly increased at 1w,2w,4w,6w,8w in IT group[(GLP-1:t1w =-12.794,P1w<0.001;t2w =-18.477,P2w<0.001;t4w =-24.252,P4w<0.001;t6w =-27.378,P6w<0.001;t8w =-40.056,P8w<0.001) and (GLP-2:t1w =-12.305,P1w<0.001;t2w =-14.708,P2w<0.001;t4w =-28.142,P4w<0.001;t6w=-27.378,P6w <0.001;t8w =-40.056,Psw <0.001)].As compared with preoperation,D lactate and DAO levels were significantly increased at 3rd day after operation in IT group[(DAO:t3d =-46.223,P3d <0.001);(D lactate:t3d =-6.439,P3d<0.001)].There was no significant difference in D lactate and DAO levels before and at1w,2w,4w,6w,8w after operation in IT group(P>0.05).Under the same conditions,there were no obvious changes in the above indexes in sham group(P>0.05).Conclusions IT surgery has a significant hypoglycemiceffect and can protect intestinal barrier function by stimulating the secretion of GLP-1 and GLP-2.【期刊名称】《腹部外科》【年(卷),期】2017(030)006【总页数】4页(P488-491)【关键词】回肠转位术;2型糖尿病;大鼠;胰高血糖素样肽;肠道屏障【作者】蔡逊;王世杰;马丹丹;傅涛;刘勇;孙康【作者单位】430070武汉,中国人民解放军武汉总医院普通外科;南方医科大学中国人民解放军总医院;430070武汉,中国人民解放军武汉总医院普通外科;430070武汉,中国人民解放军武汉总医院普通外科;430070武汉,中国人民解放军武汉总医院普通外科;430070武汉,中国人民解放军武汉总医院普通外科【正文语种】中文【中图分类】R657.7;R587.1胃肠道除消化、吸收、分泌功能及免疫调节外,还具有重要的屏障功能[1]。
建立生物安全实验室废弃物处置培训体系的探索
I S S N1002-4956 C N11-2034/T实验技术与管理E x p e rim e n ta l T e c h n o lo g y a n d M a n a g e m e n t第38卷第4期2021年4月Vol.38 N o.4A p r. 2021D O l:10.16791/ki.sjg.2021.04.065建立生物安全实验室废弃物处置培训体系的探索张晶,代明,余倩,饶艳(武汉大学动物实验中心动物三级生物安全实验室,湖北武汉430071)摘要:生物安全培训是提升丁.作人员生物安全意识和技术能力的_$要手段_.随着生物安全管理体系的不断发展.亟需对安全培训体系进行改进,以满足生物安全领域钐业人I培养的需求:该文通过分析目前国内培训制度 中存在的问题,借鉴美国和欧洲对实验室生物安全专业能力要求的技术指导文件.以废弃物安全处置内容为例,从规范培训内容、调整培训模式、增加考核评价指标等方面进行优化,以期为我国_十.物安全实验室的废弃物处置 培训丁.作提供一定的参考:关键词:生物安全实验室;废弃物处置;培训体系中图分类号:X921;G474文献标识码:A文章编号:丨002-4956(2021)04-0316-04Exploration on establishment of training system of wastedisposal in biosafety laboratoryZ H A N G J i n g,D A I M i n g,Y U Q i a n,R A O Y a n(A n i m a l Biosafety Level III Laboratory, C e n t e r for A n i m a l E x periment, W u h a n University, W u h a n, H u b e i 430071, C h i n a)A b s t r a c t:B i o s a f e t y training is a n i m p o r t a n t m e a n s to e n h a n c e staffs biosafety a w a r e n e s s a n d technical ability. Bios a f e t y training is a n i m p o r t a n t m e a n s to i m p r o v e the staffs biosafety a w a r e n e s s a n d technological capability. W i t h the c o n t i n u o u s d e v e l o p m e n t o f biosafety m a n a g e m e n t s y s t e m, there is a n u r gent n e e d to i m p r o v e the current training s y s t e m to m e e t the n e e d s o f professional talent training in this field. B a s e d o n the analysis o f the p r o b l e m s a n d deficiencies in the current d o m e s t i c training s y s t e m, this p a p e r use s the technical g u i d a n c e d o c u m e n t s o f the U n i t e d States a n d E u r o p e for reference, takes the con t e n t o f w a s t e safety disposal as a n e x a m p l e,a n d o p t i m i z e s f r o m the aspects o f standardizing the training content, adjusting the training m o d e a n d increasing the a s s e s s m e n t a n d evaluation indicators, so as to p r o v i d e reference for the w a s t e disposal training o f biosafety laboratories inC h i n a.K e y w o r d s:biosafety laboratory; w a s t e disposal; training s y s t e m随着生物安全实验室建设的不断发展,确保实验 室安全运行已成为保障公共卫生安全的一个重要环节,同时也是国家和社会关注的焦点之一。
HIV-1感染人源化小鼠模型的建立与鉴定
实验研究HIV-1感染人源化小鼠模型的建立与鉴定夏巍武汉大学基础医学院(湖北,武汉,430071)周艳龚睿湖北国际旅行卫生保健中心(湖北,武汉,430071)谢芳武汉工程大学校医院(湖北,武汉,430071)郭晓萍湖北国际旅行卫生保健中心(湖北,武汉,430071)周立武汉大学动物实验中心/动物生物安全三级实验室(湖北,武汉,430071)冯勇武汉大学基础医学院微生物教研室(湖北,武汉,430071)摘要目的通过经尾静脉或腹腔两种方式给N OD/SCID小鼠注射正常人外周血单核细胞(P BM-Cs)的方式,来探究对于建立H uPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型两种移植方式建模效果的比较,随后对该模型进行H IV病毒感染的鉴定。
方法将9只雌性N OD/SCID小鼠给予亚致死剂量全身照射后,分为3组,实验Ⅰ组:3只雌性N OD/SCID小鼠,腹腔注射0.5mLPBMC细胞悬液;实验I I组:3只雌性N OD/SCID小鼠,尾静脉注射0.2mLPBMC细胞悬液;实验I II组:3只雌性N OD/SCID小鼠,注射0.2mLRPMI1640细胞培养液,作为I组及I I组的实验对照。
通过观察移植细胞后小鼠的存活时间与生活状态,并施以流式细胞技术鉴定小鼠眼眶外周血中C D45+、C D4+、C D8+等人源化细胞的比例。
另取4只N OD/SCID小鼠进行腹腔移植3天后,腹腔注射H IV感染的P BMCs细胞并以未移植的N OD/SCID小鼠作为对照,在感染后第5wk采集小鼠眼眶血,流式细胞技术及免疫荧光定量P CR方法分别检测其C D45+、C D4+、C D8+等人源化细胞的比例及病毒滴度。
结果两种方式注射正常人P BMC细胞至小鼠内2~10周后,实验组小鼠体内均检测到人源化免疫细胞的浸润,各细胞比例随小鼠移植时间而增加;但相比尾静脉注射,腹腔注射鼠内人源性免疫细胞比例明显较高;此外二种移植方式小鼠存活时间均达10w k,即成功建立H uPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型。
2022年01月武汉大学2022年公开招聘动物实验中心A3实验室主任笔试参考题库含答案解析
2022年01月武汉大学2022年公开招聘动物实验中心A3实验室主任笔试参考题库含答案解析(图片可自由调整大小)全文为Word可编辑,若为PDF皆为盗版,请谨慎购买!卷I一.高等教育法规(共15题)1.我国的学位管理工作主要由()负责。
A.国务院学位委员会B.教育部学位委员会C.高等学校学位委员会D.科研机构学位委员会答案:A本题解析:国务院学位委员会是负责领导和管理全国学位授予工作的机构。
2.按照我国教育行政复议的程序规定,下列()不是我国教育行政复议程序的环节。
A.申请B.反馈C.审理D.决定答案:B本题解析:教育行政复议程序基本上分为申请、受理、审理、决定和执行几个步骤。
3.当今世界各国公认的国际交往的基本准则是()。
A.独立自主、平等互利、相互尊重B.遵守国家法律C.维护国家主权和安全D.维护社会公共利益答案:A本题解析:暂无解析4.十九大首次提出了(),与五位一体总体布局形成相互响应的五大文明体系。
A.物质文明B.政治文明C.社会文明D.生态文明答案:C本题解析:暂无解析5.因品行不良、侮辱学生,影响恶劣的,被撤销教师资格的,自撤销之日起多少年内不得重新申请认定教师资格()A.3B.4C.5D.6答案:C本题解析:暂无解析6.根据我国《民办教育促进法》的规定,民办学校的法律地位是()。
A.与公办学校具有同等的法律地位B.与公办学校相比属于从属地位C.目前尚不能确定D.高于公办学校答案:A本题解析:《民办教育促进法》第5条规定:“民办学校与公办学校具有同等的法律地位,国家保障民办学校的办学自主权。
”7.教育法律关系产生、变更和消灭的根据是()。
A.教育法律规范B.教育法律权利C.教育法律义务D.教育法律事实答案:D本题解析:教育法律关系的产生、变更和消灭,是需要一定条件或根据的。
这里所说的条件或根据,就是通常所说的教育法律事实。
8.我国相关高等教育法律制度规定,高等学校开除学生学籍应当由()决定。
双侧后肢压迫大鼠严重挤压伤动物模型
双侧后肢压迫大鼠严重挤压伤动物模型作者:宋小兵赵剡沈俊王翔潘正启杨奇盛来源:《中华急诊医学杂志》2014年第03期【摘要】目的探索可重复的严重大鼠挤压综合征模型。
方法武汉大学中南医院动物实验中心,清洁级雄性SD大鼠50只,随机(随机数字法)分为5组,麻醉后用3.5 kg的重物按双侧后肢特殊槽式(SP组)、双侧后肢常规压迫(NM组)及单纯对照不压迫(SHAM组)6 h,再灌注3 h(每组10只大鼠)。
所有大鼠在压迫开始前和再灌注3 h后测量动脉压、血乳酸、K+,CK,BUN,CRN及MB,相应的局部肌肉及肾脏进行病理切片检查。
另外,进行相同的试验方法,监测观察双侧后肢常规压迫(D组)、双侧后肢特殊槽式(E组)生存率72 h。
采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析,重复测量数据的方差分析分析多组之间差异,Kaplan-Meier 方法分析生存率。
结果双侧后肢槽式组压迫较常规压迫组和单纯对照组增高了血乳酸(F=39.626,P【关键词】挤压伤;动物模型;大鼠;压迫;再灌注;后肢;肌肉;肾脏The experimental model of severe crush injury in rats by two hindlimbs compression Song Xiaobing,Zhao Yan,Shen Jun,Wang Xiang, Pan Zhengqi ,Yang Qisheng. Department of Emergency, Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan 430071,ChinaCorresponding author:Song Xiaobing,Email:songxb75@【Abstract】Objective To investigate a reproducible model of severe crush injury (CI) in rats.Methods A total of 50 clean grade male SD rats were randomly (random number) divided into 5 groups. Both hindlimbs of anesthetized rats were compressed by blocks weighing 3.5 kg,for 6 hours and followed by 3 hours of reperfusion on a specially notched device (group SP, n=10),ordinary compression (group NM, n=10) and simple control(group SHAM, n=10). Arterial tension, serum lactate, and potassium (K+), serum myoglobin (MB), aspartate transferase (AST) and alanine transferase (ALT), BUN and Cr were measured at 10 minutes after cannulaton, and 3 hours after release from compression. Muscles and kidneys were evaluated morphologically. Group D and E were treated in the same way and were observed for 72 h to get the survival rate of the NM group and the specially notched compression group. The SPSS 17.0 statistical software was used for statistical analysis, repeated-measures ANOVA analysis for the differences between groups, Kaplan Meier-estimator for survival analysis. Results The Specially notched compression produced a greater increase in serum lactate (F=39.626,P【Key words】Crush injury; Animal model; Rats; Compression; Reperfusion; Hind limb; Muscle; Kidney挤压伤和其导致全身表现——挤压综合征,在灾难性事件(地震,车祸、煤矿坍塌或战争)中,一直保持着较高发病率和病死率[1-4]。
石菖蒲不同极性部位对抑郁模型小鼠抗抑郁效应及其机制
石菖蒲不同极性部位对抑郁模型小鼠抗抑郁效应及其机制∗周天;李辉;凃中一;周威【摘要】目的:研究石菖蒲不同极性部位对模型小鼠抗抑郁效应,并探讨其可能的机制。
方法采用系统溶剂法制备石菖蒲不同极性部位。
选取«中华人民共和国药典»(简称«药典»)成人用推荐剂量10 g•d-1折算成对应的小鼠用量进行灌胃给药。
将80只雄性SD小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、石菖蒲不同极性部位组,采用慢性轻度不可预见刺激( CUMS)结合孤养建立小鼠抑郁模型,观察造模后小鼠的外在表现。
饲养21 d后眼眶采血,采用ELISA法测定血中三碘甲状腺原氨酸( T3)、四碘甲状腺原氨酸( T4)、促甲状腺激素( TSH)、促肾上腺皮质激素( ACTH)的含量;5-羟色胺及ACTH在脑组织中的含量。
结果模型对照组小鼠血浆中T3、T4、ACTH[(1.203±0.042),(44.80±2.21),(11.27±0.50) ng•mL-1]含量较正常对照组小鼠[(0.794±0.028),(24.87±1.25),(7.04±0.24) ng•mL-1]显著升高(P<0.05);脑组织中5-HT含量(146.87±10.96) ng•L-1较正常对照组(237.11±21.87) ng•L-1显著降低,ACTH浓度(58.94±4.46) ng•L-1较正常对照组(38.89±2.26) ng•L-1显著升高(P<0.05)。
在«药典»推荐剂量下,石菖蒲乙醇组、环己烷组、三氯甲烷组血浆中T3[(0.824±0.067),(0.812±0.051),(0.943±0.049) ng•mL-1]、T4[(25.97±1.96),(27.53±1.88),(31.26±1.97) ng•mL-1]、ACTH[(7.21±0.40),(7.58±0.39),(8.69±0.42) ng•mL-1]较模型对照组含量明显降低;脑组织中5-HT[(219.59±10.48),(202.19±11.95),(186.96±10.29) ng•L-1]较模型对照组含量显著升高,ACTH含量[(41.65±2.65),(44.87±2.95),(47.75±3.06) ng•L-1]较模型对照组含量显著降低(P<0.05)。
磁共振评价聚氨酯类涂层电极植入脑组织后的生物兼容性
磁共振评价聚氨酯类涂层电极植入脑组织后的生物兼容性杜玉涛;李成晏;段晏文;李涛【摘要】目的利用磁共振(MRI)评价聚氨酯类涂层电极与脑组织的生物兼容性.方法 5只Wistar大鼠右大脑半球植入PU-PVA涂层电极,左大脑半球植入硅胶电极,植入后1、2、3、4周,分别进行磁共振检查,比较两种电极周围组织的形态学变化和T2值,并与正常脑组织T2值比较.结果在相同测量时间点,MRI未见到两组电极明显的形态学差异,两组电极周围脑组织的T2值也无明显差异;电极植入后前三周,两组电极周围脑组织的T2值都显著高于正常脑组织,但到第四周与正常脑组织的T2值无明显差异;所有植入电极周围脑组织T2值在植入后第二周明显高于其它时间点.结论 MRI没有发现电极周围有明显的炎症反应,提示硅胶和PU-PVA涂层硅胶电极的生物兼容性均较好,但植入三周内的T2值明显高于正常脑组织.【期刊名称】《现代实用医学》【年(卷),期】2012(024)009【总页数】2页(P1033-1034)【关键词】生物兼容性;磁共振;T2值;聚氨酯类;炎症【作者】杜玉涛;李成晏;段晏文;李涛【作者单位】315010宁波,宁波市海曙区鼓楼街道卫生服务中心;武汉大学;武汉大学;武汉大学【正文语种】中文【中图分类】R741大脑植入电极可用来研究神经网络、记忆及认知活动,并可获得脑电信号做为神经假体的信号来源[1],同时刺激神经组织可以治疗某些难治疾病,如深部脑刺激治疗帕金森病[2]、皮层刺激治疗偏瘫及丘脑刺激治疗植物人等[3]。
一般来讲短期内电极的性能好,但长期使用性能会降低,甚至失去作用,这就是电极组织界面的生物兼容性问题,解决好电极组织界面的生物兼容性是目前电极发展的关键。
本研究旨在评价PU-PVA新材料的生物兼容性,以发展更好的电极材料和提高电极的生物兼容性。
1 资料与方法1.1 一般资料健康雄性 Wistar大鼠5只,SPF级,体质量270~310 g,购自武汉大学动物实验中心。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
武汉大学动物实验中心
实验动物使用计划(Animal Using Protocol, AUP)
(201710版)
一、项目信息(在合适的选择项前打“ ”)
二、项目来源:
项目类型请填写:国家重大专项、973计划、863计划、国家/省/市/校级自然科学基金或其它类型基金三、动物实验操作人员经历和培训:
四、使用动物的目的和意义:
以一般非生物医学背景人员为对象,用通俗的语言描述研究目的,对人类、动物的健康
五、危险性物质的使用(在合适的选择项前打“ ”)
六、非药品级物质在动物体内的使用(在合适的选择项前打“ ”表示)
1. 使用情况(非药品级物质,指除未获得国家食药监局或兽药批文的药品或保健品或医疗器械)
七、实验动物信息(在所有适合的项目前打 )
针对使用的每一种动物的品系填写每一栏。
如果使用了3种以上或3个品系以上的动物,
八、动物使用的理由和替代方法的检索(在所有适合的项目前打 )
1. 通过何种方法得出实验所需的动物数量。
□统计分析显示,实验计划的(动物)数量是最少的,符合统计学上对实验假设进行有效检验的要求。
□实验将进行多个独立因素结果的对比,因此要求多组。
□结果的检测或者被检测的现象是可变的,大样本量对于统计上有效的取样是必需的。
□来自于对照组的差异预计是很小的。
对于可靠地区分组间差异,大样本量是必需的。
□实验具有技术上的困难,需要多次尝试以便从每一次实验中获得令人满意的数据。
□其他(请解释):
2. 在本实验中使用活体动物的理由是什么?
□本研究要求对活体动物进行行为测量。
□本研究要求对活体动物进行生物学检测或活体动物的组织样本取材。
□在本实验中,计算机或者其他模型不能代替动物。
□本研究不能做离体实验。
□其他(请解释):
3. 解释为什么你的研究中将要使用的动物种类是合理的。
□本实验是以前使用该品种动物实验工作的直接延续。
□本研究致力于扩展以前的从其它品种到这个品种的实验结果。
□对于该品种动物很重要的生理/行为学现象,现在缺乏了解。
□对于这个品种动物很重要的生理/行为学现象的相关内容比其他品种了解得更多。
□这个品种的选择体现出了在能够使用的最低级的生物体和与人类的生理/行为最相近的模型系统中间最好的折衷方案。
□对于计划开展的研究这个品种是最经济的。
□其他(请解释):
九、本实验可能造成的紧张和疼痛的处理(在合适的选择项前打“ ”)
1.请描述本实验可能对动物造成哪些不良后果和护理措施
2.参考美国农业部USDA分类标准,请选择疼痛级别:
□C类:最小的,短暂的,一过性的或无疼痛或紧张
□D类:有疼痛和紧张,通过麻醉、镇痛、镇静等适当的方式缓解疼痛和紧张
□E类:有疼痛和紧张,但没有采取缓解的疼痛和紧张的措施
*表示属于管制类药品
注:本中心不推荐使用的麻醉剂:水合氯醛。
3.描述对动物造成疼痛,但没有使用麻醉剂和镇痛剂的科学理由
十、需要说明的特殊情况(在合适的选择项前打“ ”)
1. 是否在本中心外的设施中开展部分动物实验
2. 是否存在单笼饲养
3.是否存在禁食禁水(手术前除外)
□是□否,如果是,请在下面描述禁食禁水的科学理由、时间和如何保证动物不
会出现危险状况
4. 自带饲料或使用特殊饲料
□是□否,如果是,请在下面描述饲料的厂家或来源、灭菌方法、是否可以提供灭
5.是否自带仪器设备进入动物房
□是□否,如果是,请在下面描述设备的名称、体积、电源要求、使用时间、消毒措
6.是否存在长时间保定
□是□否,如果是,请在下面描述长时间保定的科学理由、方法、保定时间,如何保
十一、实验设计和动物实验操作(在合适的选择项前打“ ”)
根据实验内容填写以下实验信息:
1. 是否需要繁殖动物:
□是□否,如果是,请描述繁殖动物的目的、数量和方法
4. 动物标记方法(禁止使用苦味酸!!!)
□耳孔/耳标□剪脚趾(10天内的鼠适用)□按笼盒区分
□动物专用标记笔□项圈(大动物,非铁丝)□纹身(大动物)5. 是否对动物给药和接种
# 为中国标准,G为国际标准
6.是否对活体动物采集血液
7. 是否存在对活体动物其它类型样本的采集
8. 是否存在外科手术
□是□否,如果是,请填下面手术属性和详细内容:(1)是否属于恢复性手术(恢复性:术后需要存活的)
□是□否
(2)是否需要对同一动物进行多次重大重复手术?
□是□否:
如果是,请说明充分的科学理由:()
(4)描述手术的详细方案和步骤
十、实验过程中动物安乐死标准和结束后动物的处置(在合适的选择项前打“ ”)
不推荐直接颈椎脱臼法,推荐CO2或异氟烷等麻醉后颈椎脱臼,如不先麻醉就行颈椎脱臼,
十五. 项目负责人的承诺:
1.我保证在此提请的陈述是完整的且准确的,本方案中的动物使用没有单纯重复以前的实
验。
2.如果方案被批准,我同意以书面形式告知动物管理与使用委员会(IACUC)任何的紧急
情况,且同意在问题解决之前将不会继续实验。
3.没有提交实验方案的书面修改稿给IACUC,且经IACUC审查、批准之前,我将不会对
涉及动物的程序做出较大的改动。
4.没有IACUC和武汉大学动物实验中心主任批准之前,我不会带参观者进入动物设施,
不允许他们对动物进行拍照或者摄影。
5.保证每个从事与动物有关的工作人员接受合适的培训是我的职责。
6.在收到IACUC的批准通知之前,我不会开始本方案中所描述的实验操作。
7.我保证此计划中如果使用到管制药品或危险物质,均符合国家的相关法规,以及学校的
相关规定。
8.我保证此计划中如果使用到生物材料(包括来自于人和动物),均经过检验,不含对人
或动物有害的病原微生物。
9.我将保留一个本实验方案的副本及随后所有的通信资料。
10.我将允许IACUC和主治兽医(A V)有权利查看该项目动物实验记录。
在需要时,随时
提供实验记录供管理部门审查。
项目负责人(签名):
日期:年月日。