抗菌检测知识简介

日本国家标准

JIS Z 2801:2000抗菌制品抗菌性能的检测与评价

引言

本标准是为规范抗菌制品抗菌性能的评价方法制定的，并于1998年12月在“生活相关新型（抗菌）功能制品会议”的报告上公布的，（亦称“抗菌制品的指导方针”）。本标准规定了作为抗菌制品重要性能之一的抗菌性能的测试方法。抗菌制品的其他重要性能，包括安全性、性能持久性以及制品标识则请参考“抗菌制品的指导方针”。

1. 范围

本标准规定了抗菌制品（包括中间制品）表面抗细菌活性及效果的测试方法。

备注：本标准暂不包括抗菌制品的其他功能，如抗真菌性能和除臭性能。

2. 规范性引用标准

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

JIS K 0950 灭菌塑料培养皿

JIS K 0970 微量移液器

JIS K 3800 二级生物安全柜

JIS K 8101 乙醇（99.5）

JIS K 8150 氯化钠

JIS K 8180 盐酸

JIS K 8263 琼脂

JIS K 8576 氢氧化钠

JIS K 9007 磷酸二氢钾

JIS K 9017 磷酸氢二钾

JIS L 1902 纺织品抗菌性能的检测与评价

JIS R 3505 玻璃量具

3. 定义

本标准中用到的主要术语定义如下：

a）抗菌抑制制品表面细菌生长的状态。

b）抗菌整理为获得抗菌效果而进行的处理。

c）抗菌制品实施抗菌加工后的制品。

d）抗菌活性值抗菌制品和未处理制品在接种细菌培养后，得到活菌数目对数的差值。

参考资料：JIS L 1902的抑菌（静菌）活性和本标准中的抗菌活性概念相同。

e）抗菌效果根据抗菌活性值判定抗菌制品抗菌效果。

4.抗菌效果

按本标准的测试方法，抗菌制品的抗菌活性值应不小于2.0，超过2.0的数值若取得各相关单位同意也可采用。

5.试验方法

5.1 纺织制品测试方法抗菌纺织制品的检测方法根据JIS L 1902 : 8（定量法）测定

5.2 塑料等制品的测试方法适用于非纺织制品，如塑料制品、金属制品、陶瓷制品等。根据纤维制品的形状和用途也可采用5.1 的方法测试。

5.2.1 试验菌种

试验所采用的菌种见下，需采用下述细菌中的每一种：

a) 金黄色葡萄球菌

b) 大肠杆菌

试验所用菌株举例如表1所示。如从有别于表1的机构获取菌株，则该机构必须是国际菌种保藏中心（WFCC: World Federation of Culture Collection）的成员或日本菌种保藏协会（JSCC：Japan Society of Culture Collection）的成员，并且菌株必须和表1相同。

5.2.2 化学试剂、材料和器材

除非另有说明，本试验方法所用的化学试剂、材料和器材如下所示。

乙醇（C2H5OH）符合JIS K 8012规定的一级或更高

牛肉膏微生物试验用

蛋白胨微生物试验用

氯化钠符合JIS K 8150

纯化水符合日本药典第十三次修订版要求

琼脂符合JIS K 8263

酵母浸膏微生物试验用

胰蛋白胨微生物试验用

葡萄糖微生物试验用

酪蛋白胨微生物试验用

大豆蛋白胨微生物试验用

卵磷脂微生物试验用

非离子表面活性剂聚山梨醇脂（吐温80）

磷酸二氢钾符合JIS K 9007

磷酸氢二钾符合JIS K 9017

氢氧化钠符合JIS K 8576

盐酸符合JIS K 8180

棉塞等棉制，或硅胶、金属、莫顿塞等

白金接种环端部直径约为4mm环

干热灭菌器可在160-180℃工作

蒸气消毒锅可保持121℃并在103KMPa保压

安全柜符合JIS K 3800的规定

洁净台微生物试验用

移液管符合或等同于JIS K 0970 或达到JIS R 3505中规定的A级

培养箱温度控制精度±1℃

培养皿玻璃材质，内直径90mm或遵照JIS K 0950中90A或90B规定

洗脱袋微生物试验用

Stomacher 微生物试验用

薄膜不影响微生物生长并且不吸水的材料，厚度无明确规定，但要求

附着性好

5.2.3 灭菌方法

a) 干热灭菌放入干热灭菌器在160-180℃下灭菌30-60分钟

注意：灭菌后，如果棉塞或包装纸不小心被水弄湿，相关器皿请不要继续使用。b) 高压蒸汽灭菌在灭菌消毒锅中注入水，将待灭菌的物品装入筐中，并放于消毒锅架子上，盖紧，加热，在121℃或103Kpa下保持15-20分钟。停止加热，然后使其自然冷却到100℃以下，打开排气阀放出蒸汽，打开盖，取出灭菌物品。必要时放入洁净台或安全柜中冷却。为避免灭菌锅受培养物质或化学品污染，用中性洗涤剂洗涤灭菌锅，并用水冲洗干净。

c) 火焰灭菌将待灭菌的物品置于由燃气或酒精燃烧而产生的火焰上，如对于白金接种环应加至红热，对于试管则在火焰上烤2-3秒钟。

d) 器材准备用碱性或中性洗涤剂洗刷试管、烧瓶等器具，充分冲洗，干燥后干热灭菌或蒸汽灭菌后使用。

5.2.4 培养基等

使用下列培养基，如商品培养基和此处介绍的培养基组成相同，则也可使用商品培养基。a）营养肉汤将3.0g牛肉膏、10.0g蛋白胨、5.0g氯化钠溶于1000ml蒸馏水或去离子水中，放入锥瓶、混合、充分溶解后，用盐酸或氢氧化钠溶液调节其pH为7.0-7.2（25℃），使用前，将其分别注入试管，加上棉塞，然后进行高压灭菌。

若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。不要使用配制完存放一个月或以上的培养基。

b）营养琼脂将5.0g牛肉膏、10.0g蛋白胨、5.0g氯化钠和15.0g琼脂，加入1000ml蒸馏水或去离子水中，置入锥瓶、混合并放入沸水浴中充分溶解。用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节其pH为7.0-7.2（25℃），加上棉塞，然后进行高压灭菌。

若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。不要使用配制完存放一个月或以上的培养基。

c）平板计数琼脂将2.5g酵母粉、5.0g胰蛋白胨、1.0g葡萄糖和15g琼脂加入到1000ml 蒸馏水或去离子水中，置于锥瓶中混合并在沸水浴中充分溶解。然后用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH为7.0-7.2（25℃），加上棉塞，然后进行高压灭菌。

若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。不要使用配制完存放一个月或以上的培养基。

d）斜面培养基将6-10ml加热溶解的营养琼脂b)注入试管，塞上棉塞并用高压蒸汽法灭菌。

灭菌后的试管在洁净间中以和水平面成15°倾角放置来让其凝固。若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。如没有冷凝水出现，将其溶解，并凝固后使用。不要使用配制完存放一个月或以上的斜面培养基。

e）SCDLP肉汤将17.0g酪蛋白胨、3.0g大豆蛋白胨、5.0g氯化钠和2.5g磷酸氢二钠、2.5g 葡萄糖和1.0g卵磷脂加入到1000ml蒸馏水或去离子水中，置于烧瓶，加7.0g非离子表