大肠杆菌的测定
大肠杆菌的检测及原理
大肠杆菌的检测及原理1.检测原理：大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
2.仪器设备与器具：2.1 恒温培养箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接种针。
2.4 显微镜。
2.5 超净工作台。
2.6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 灭菌釜。
2.9 培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。
2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片3.培养基及试剂：3.1 乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.2 伊红美兰琼脂平板：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.3 乳糖发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.4 革兰氏染色液。
3.4.1 结晶紫染色液：结晶紫1g95%乙醇20ml1%草酸铵水溶液80ml将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
3.4.2 革兰氏碘液：碘1g碘化钾2g蒸馏水300ml将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 ml。
3.4.3 沙黄复染液：沙黄0.25g95%乙醇10ml蒸馏水90ml将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
3.5 生理盐水。
4.检验程序：检样稀释↓乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr ↓不产气产气↓大肠菌群阴性伊红美兰琼脂平板，36±1℃，24±2hr报告↓ ↓革兰氏染色乳糖发酵管，36±1℃，24±2hr ↓ ↓ ↓G+ G-，无芽孢杆菌产气不产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性报告大肠菌群阳性报告5.测定方法：5.1 检样稀释：5.1.1 以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，经充分振摇成1：10均匀稀释液。
大肠杆菌检测实验报告
一、实验目的1. 掌握大肠杆菌检测的基本原理和方法；2. 学会使用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数；3. 提高微生物实验操作技能，为后续相关实验奠定基础。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性菌，广泛存在于人类和动物肠道中，属于条件致病菌。
本实验采用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数，主要利用大肠杆菌在LB培养基上生长繁殖的特性，通过计数菌落数来估算大肠杆菌的浓度。
三、实验器材1. 培养箱；2. 移液管（10只）；3. 锥形瓶（250ml，12只）；4. 大试管（5只）；5. 试管架；6. 平皿（45个）；7. 大烧杯（500ml，1个）；8. 电子天平；9. 纱布；10. 脱脂棉；11. 灭菌锅；12. pH计或pH试纸；13. 电炉；14. 石棉网；15. 铁架台；16. 量筒（100ml，1个）；17. 橡皮手套；18. 超净台。
四、实验药品1. 磷酸盐缓冲液；2. 蒸馏水；3. LB培养基；4. 琼脂；5. 5%NaOH；6. 5%HCl。
五、实验步骤1. 培养基制备（1）称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中；（2）用量筒量取125ml的蒸馏水加入锥形瓶中，制成培养基；（3）用棉花堵住锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢；（4）将培养基放入灭菌锅中，在121摄氏度下灭菌20min；（5）灭菌后放入超净台中备用。
2. 样本处理（1）取适量样本（如食品、水等）；（2）用无菌生理盐水进行梯度稀释；（3）取适量稀释液加入平皿中，制成平板；（4）将平板放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h。
3. 菌落计数（1）观察平板，找出菌落数在30-300之间的平板；（2）用移液管吸取适量菌液，加入锥形瓶中；（3）在锥形瓶中加入适量的5%NaOH溶液，充分振荡；（4）将锥形瓶放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h；（5）观察锥形瓶中的菌落生长情况，记录菌落数。
实验八 水中大肠杆菌的测定
（三）多管发酵法检测大肠菌群
1.取5支装有3倍浓乳糖蛋白胨培养基的初发酵管，每支分别 加入水样10mL。另取5支装有乳糖蛋白胨培养基的初发酵 管，每支分别加入水样1mL。再取5支装有乳糖蛋白胨培养 基的初发酵管，每支分别加入按1：10稀释的水样1mL，均 贴好标签。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
三、实验材料和用具
1、培养基 复红亚硫酸钠培养基、乳 糖蛋白胨半固体培养基、乳糖蛋白胨 培养液、3倍浓乳糖蛋白胨培养液、伊 红美兰培养基。
2、仪器及用具 微孔滤膜（0.45um）、 滤器（500mL）、抽气设备、镊子、 发酵用试管、杜氏小管、培养皿、刻 度吸管或移液管、接种环、酒精灯。
四、操作步骤
（一）水样的采集
1.自来水 将自来水龙头用火焰灼烧3min灭菌， 在拧开水龙头流水5min，以排除管道内积存的死 水，随后用已灭菌的三角瓶接取水样。
2.池水、河水、或湖水 将无菌的带玻璃塞的小口 瓶侵入距水面10~15cm深的水层中，瓶口朝上， 除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取 出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超 过24h。
（二）滤膜法检测大肠菌群
1.无菌滤膜 无菌镊子 滤器膜承受器，过滤杯——滤膜承 受器，旋紧。真空泵——抽气口
2.水100mL滤杯，启动抽真空系统，使水从下端流出。 3.有细胞的滤膜 无菌镊子 平贴于复红亚硫酸钠固体培养
基上（紧贴，无气泡），37℃培养16~18h。挑选红色或紫 红色、带有或不带有金属光泽的菌落，或淡红色、中心颜 色较深的菌落进行涂片和革兰氏染色观察。 4.经染色证实为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，接种到乳糖蛋白 胨半固体培养基上， 37℃培养6~8h后观察，产气者为阳 性（观察要及时，以免气泡消失） 5.结果计算
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌(Escherichia coli)是一种革兰氏阴性的厌氧菌，常常被用作指示性微生物来评估食品和水源的卫生质量。
以下是常见的大肠杆菌检验方法：
1. 培养基方法：将样品接种在包含大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上，如大肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)和EC培养基等。
大肠杆菌能够利用琼脂中的乳糖发酵产生酸，导致培养基呈现红色或粉红色。
此外，EC 培养基还包含了可以检测大肠杆菌β-葡萄糖苷酶的亚甲基红试剂，如果大肠杆菌存在，则培养基呈现金属光泽。
2. 确认方法：对落有培养基上的鲜艳深色菌落进行进一步确认。
典型的确认方法包括革兰染色、目测观察形态特征、氧化发酵试验和测试产气杆菌酶试验。
3. PCR检测方法：利用聚合酶链反应(PCR)技术，从样品中扩增大肠杆菌特异性基因片段（如16S rRNA基因），然后通过凝胶电泳检测扩增产物。
4. 快速方法：如免疫层析试纸法和光学组织测定法。
免疫层析试纸法利用抗大肠杆菌抗体与大肠杆菌特异性抗原结合生成可视化结果。
光学组织测定法利用大肠杆菌的β-葡萄糖苷酶水解比色底物产生颜色变化。
这些方法都可用于检测大肠杆菌在食品和水源中的存在及其数量。
在进行检验时，应严格遵守相关的操作规程和实验室操作规范，以确保结果的准确性和可靠性。
大肠杆菌的测定(精)
水中总大肠杆菌的测定来源:加入时间:2010-3-30 12:15:511 原理总大肠杆菌群可用多管发酵法或滤膜法检测。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖,产酸产气以及具备革兰氏染色阴性,无芽孢,呈杆状等有关特性,通过三个步骤进行检验,求得水样中的总大肠菌群数,实验结果以最可能数(most probable number,简称 MPN 表示。
2仪器2.1 高压蒸汽灭菌器。
2.2 恒温培养箱,冰箱。
2.3 生物显微镜,载玻片。
2.4 酒精灯,镍铬丝接种棒。
2.5 培养皿 (直径 100mm ,试管(5×150mm,小倒管,吸管 (1, 5, 10ml ,烧杯 (200, 500, 2000ml , 锥形瓶 (500, 1000ml ,采样瓶。
3 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液:将 10g 蛋白胨、 3g 牛肉浸膏、 3g 乳糖和 5g 氯化钠加热溶于 1000mL 蒸馏水中,调节 pH 为 7.2-7.4, 再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL ,充分混匀,分装于试管(内有倒管中,于 121℃高压灭菌器中灭菌 15min ,贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩蛋白胨溶液:按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法制备。
除蒸馏水外,各组分用量增加至三倍。
3.3 品红亚硫酸钠培养基3.3.1 贮备培养基的制备于 2000mL 烧杯中,先将 20-30g 琼脂加到 900mL 蒸馏水中,加热溶解,然后加入3.5g 磷酸氢二钾及 10g 蛋白胨,混匀,使其溶解,再用蒸馏水补充到 1000mL 调节溶液pH 至 7.2-7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加 10g 乳糖,混匀,定量分装于 250或500mL 锥形瓶内,置于高压灭菌器中,在 121℃灭菌 15min , 贮存与冷暗处备用。
3.3.2 平皿培养基的制备将上法制备的贮备培养基加热融化。
根据锥形瓶内培养基的容量,用灭菌吸管按 1:50比例吸取 5%碱性品红乙醇溶液,置于灭菌空试管中;再按 1:200比例称取无水亚硫酸钠,置于另一灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解,再置于沸水浴中煮沸10min (灭菌。
干重法测定大肠杆菌计算题
干重法测定大肠杆菌计算题一、干重法测定大肠杆菌的原理干重法是一种常用的测定微生物细胞数量的方法。
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，其在微生物学研究和临床检测中具有重要价值。
干重法测定大肠杆菌的原理主要是通过测量微生物细胞的干重来反映其数量。
微生物细胞干重与细胞数量之间存在一定的线性关系，因此可以通过测定细胞干重来推算大肠杆菌的数量。
二、实验材料与方法1.实验材料：大肠杆菌菌株、营养琼脂培养基、无菌水、称量纸、分析天平等。
2.实验方法：（1）菌株接种：将大肠杆菌菌株接种到营养琼脂培养基上，37℃培养一定时间，待菌落形成后，挑选菌落进行后续实验。
（2）菌落计数：用无菌接种环取一定数量的菌落，放入无菌水中，振荡均匀，用滴定法测定菌落数量。
（3）干重测定：将适量菌液接种到称量纸上，37℃培养一定时间，待菌体固定后，用分析天平称量称量纸的质量。
根据称量纸的质量变化计算大肠杆菌的干重，进而推算细胞数量。
三、结果与分析1.结果：经过实验测定，大肠杆菌的干重与细胞数量呈正相关关系。
通过干重法测得的大肠杆菌细胞数量与滴定法测定结果基本一致，表明干重法测定结果可靠。
2.分析：干重法测定大肠杆菌具有操作简便、结果可靠等优点，适用于微生物实验室研究和临床检测。
然而，该方法也存在一定的局限性，如对菌体形态和生长状态有一定要求，不同菌株间的干重与细胞数量关系可能存在差异等。
四、讨论与结论1.讨论：干重法作为一种常用的微生物数量测定方法，在实际应用中具有较高的价值。
然而，在实验过程中应注意严格控制条件，避免实验误差。
此外，对于不同菌株和生长状态的大肠杆菌，干重法的测定结果可能存在差异，因此在应用时需结合其他方法进行综合评估。
2.结论：干重法是一种可靠的大肠杆菌数量测定方法。
在实验条件和操作方法得当的情况下，可以获得较为准确的结果。
大肠杆菌群检验的实验原理
大肠杆菌群检验的实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人类和动物的肠道中。
大肠杆菌群检验是一种用于研究肠道菌群组成和功能的实验方法。
本文将从实验原理、样本采集、实验步骤、结果解读和临床应用等方面进行详细介绍。
实验原理：大肠杆菌群检验主要通过对肠道中细菌的DNA进行测序和分析来研究菌群组成和功能。
尤其是通过对16S rRNA基因序列进行分析，可以确定细菌的分类学信息，从而了解菌群的组成。
在这个实验中，主要使用PCR扩增和高通量测序技术。
1. 样本采集：在进行大肠杆菌群检验之前，需要采集肠道样本。
常见的采集方法包括粪便、肠黏膜组织和大肠黏膜刷取等。
样本采集要注意无菌操作，避免外源性细菌的污染。
2. 实验步骤：（1）DNA提取：首先需要提取样本中的DNA，这可以通过商业DNA提取试剂盒来完成。
提取的DNA浓度和质量要满足后续PCR扩增和测序的要求。
（2）PCR扩增：通过设计引物，选择16S rRNA基因的特异性区域进行扩增。
PCR反应体系中加入模板DNA、引物、dNTPs和DNA聚合酶。
PCR反应的温度和循环次数通过程序设定。
（3）PCR产物纯化：将PCR扩增产物纯化，去除引物和杂质。
可以使用DNA 凝胶电泳和商业纯化试剂盒来进行纯化操作。
（4）高通量测序：纯化后的PCR产物进行高通量测序，可以采用Illumina MiSeq 或Ion Torrent等测序平台。
测序后得到的数据包括原始测序片段和测序质量值。
3. 结果解读：经过测序平台生成的数据可以通过特定的分析流程进行处理和解读。
首先将原始测序片段进行质控和过滤，去除接头序列和低质量序列。
然后对质控后的测序片段进行聚类和分类，可以使用聚类算法（如CD-HIT和UPARSE）和数据库（如Greengenes和SILVA）来进行分类鉴定。
最后，通过比较分析菌群间的差异，在样本之间实施群落结构和功能的比较。
4. 临床应用：大肠杆菌群检验可以用于研究肠道菌群与人类健康和疾病之间的关系。
大肠杆菌活菌数含量的测定操作规程
大肠杆菌活菌数含量的测定操作规程1. 引言大肠杆菌是一种常见的细菌，在食品、水源和环境中广泛存在。
测定大肠杆菌的活菌数含量对于食品安全、水质检测和环境卫生监测具有重要意义。
本文档旨在规范大肠杆菌活菌数含量的测定操作流程。
2. 设备和试剂准备- 培养基：LB培养基- 培养物：已经培养好的含有大肠杆菌的培养物- 烧杯、移液器、试管、平皿等常用实验室器材- 紫外灯或显微镜3. 测定操作步骤1. 准备样品：将待检样品按照指定方法进行采样，保持样品的完整性和代表性。
2. 样品处理：将样品转移到烧杯中，并进行适当的稀释，以保证菌落计数的准确性。
3. 制备培养基：按照LB培养基的配方准备培养基，在适当的温度下热化并均匀混合。
4. 接种培养基：将适量的样品接种到LB培养基中，通过摇床或培养箱进行培养，时间和培养条件根据需求确定。
5. 培养时间：根据实验需求，在适当的温度下，在摇床或培养箱中进行长时间培养。
6. 菌落计数：将培养的菌液制成适当的稀释液，然后取适量的菌液在平皿中均匀涂布，放置在恒温箱中进行菌落生长。
菌落生长后，使用显微镜或紫外灯统计菌落数量。
7. 结果记录：将统计得到的菌落数量记录下来，并计算大肠杆菌的活菌数含量。
4. 结果处理和数据分析1. 根据菌落计数的结果计算出大肠杆菌的活菌数含量。
2. 将结果与相应的标准进行对比，评估样品的卫生质量。
5. 结论本操作规程能够规范大肠杆菌活菌数含量的测定操作流程，为食品安全、水质检测和环境卫生监测提供准确可靠的数据依据。
6. 参考文献（列出参考文献，如有需要）。
大肠菌群测定步骤
食品大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测步骤一、培养基制备1、生理盐水氯化钠 8.5g蒸馏水 1000.0ml将氯化钠溶于蒸馏水中，搅拌均匀后用量筒量取225ml分装到各个广口瓶中，1210C高压灭菌15min，备用。
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤称取37克放入烧杯，将各成分溶解于1000ml蒸馏水中，放电炉子上加热并搅拌均匀，分装于装有倒立发酵管的试管中，每管10ml，装完盖帽，1210C高压灭菌15min，双料培养基除蒸馏水不变外，其余成分加倍。
3、样品制备（在无菌室中进行）（1）固体或半固体样品无菌操作称取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分振摇、混匀，制成1：10的样品稀释液备用。
（2）液体样品以无菌吸管吸取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分混匀，制成1：10的样品稀释液备用。
4、样品稀释用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀，制成1：100的样品匀液。
按照该操作程序，可制备1：1000，1：10000。
等10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。
根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
二、大肠菌群的测定（MPN法）1、选取适宜的三个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度均接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml。
360C+10C培养24h-48h后，观察倒管内是否有气泡产生，并记录24h和48h内产气的LST肉汤管数。
对未产气的试管，可以轻敲试管壁的方式观察是否有较细小的气泡从管底逸出，如果所有LST肉汤管均未产气，可按。
报告结果；如果LST管有产气，则按下面步骤作证实试验。
大肠杆菌检测实验报告
国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。
缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
11：将培养基在３6摄氏度条件下培养12小时。
12：取出培养皿，选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。
水质大肠杆菌检测方法
水质大肠杆菌检测方法水质大肠杆菌是一种常见的水污染指标微生物，其存在表明水体可能受到了粪便或污水的污染。
因此，对于饮用水、游泳水、工业用水等不同用途的水体，检测水质中大肠杆菌的含量具有重要意义。
本文将介绍几种常用的水质大肠杆菌检测方法，以供参考。
一、培养基法。
培养基法是一种常见的大肠杆菌检测方法，其基本原理是将水样在含有大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上培养，然后观察培养基上是否有大肠杆菌的生长。
这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，通常需要24-48小时才能得到结果。
此外，培养基法对于大肠杆菌的特异性较差，可能会同时检测出其他肠道菌群。
二、膜过滤法。
膜过滤法是一种常用的水质微生物检测方法，其原理是将水样通过微孔膜过滤，然后将膜放置在含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数膜上的大肠杆菌落，可以得到水样中大肠杆菌的数量。
这种方法操作简便，结果准确，而且可以检测到低浓度的大肠杆菌。
但是，膜过滤法需要一定的实验室设备和技术支持。
三、分子生物学方法。
随着分子生物学技术的发展，PCR（聚合酶链式反应）和实时荧光定量PCR等分子生物学方法也被应用于水质大肠杆菌检测中。
这些方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测出水样中的大肠杆菌。
此外，分子生物学方法还可以对大肠杆菌进行分子鉴定和基因分析，为进一步研究提供了有力的支持。
然而，分子生物学方法需要相对复杂的实验操作和昂贵的设备，对操作人员的技术要求也较高。
综上所述，针对水质大肠杆菌的检测，可以根据实际情况选择合适的方法。
培养基法操作简单，成本低，适合于一般的水质监测；膜过滤法准确性高，可以检测低浓度的大肠杆菌；而分子生物学方法则具有高度的特异性和灵敏度，适合于对水质中微生物的深入研究。
在实际应用中，可以根据需求和条件选择合适的检测方法，以保障水质安全和生态环境的健康。
MPN法测定大肠杆菌
2、初发酵试验
每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液 （液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3 管 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL （如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤）, 36℃±1℃ 培养24h±2h ，观察倒管内是否有气泡 产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。
（2） 液体样品
以无菌吸管吸取25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生 理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠） 中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀液。
（3） 样品匀液的pH 值应在6.5-7.5 之间，必要时 分别用1mol/L 氢氧化钠（NaOH ）或1 mol/L 盐酸（ HCI ）调节。
记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。未 产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵 试验。
3、复发酵试验
用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管 中分别取培养物l环，移种于煌绿乳糖胆盐( BGLB ）肉汤管中，36℃±1℃ 培养48h±2h ，观察产气 情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。
4、大肠菌群最可能数（MPN ）的报告
根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见附录B ) ，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的MPN 值。
注意：当检样的量与表中的量有增加或减少时，表内的 数也应相应减少或增加。
试验流程
1、样品的稀释
（1） 固体和半固体样品
称取25g 样品，放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐 水的无菌均质杯内，8 000r/min-10000r/min 均质1 min-2 min ，或放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐 水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。
大肠杆菌的测定方法
大肠杆菌的测定方法
致病性大肠杆菌是病原体，它的筛选、鉴定以及测定是病原微生物的重要步骤。
本文将介绍大肠杆菌测定的一般方法，其中包括细菌的培养、鉴定与测定流程。
一、细菌培养
大肠杆菌的培养，首先要选择利于细菌生长的培养基，培养基需要含有必须的养分和活性，具有适宜的pH值，用于维持细菌的生长。
常用的培养基包括牛油硫磺琼脂（MacConkey）、牛油硫磺琼脂（SS agar）、牛油硫磺琼脂棕榈酸（MSA）、牛油硫磺琼脂乳酸（MSL）以及甲氧苄啶琼脂（MMB）等。
培养的大肠杆菌会产生具有细胞膜抗原特性的抗原。
细胞膜抗原可以形成抗原抗体复合物，从而产生免疫反应。
将样本装置在具有合理浓度的抗原抗体复合液中，将有助于调节抗体与抗原的反应，使抗体与抗原之间形成稳定的结合，增强抗体的特异性，同时也可以提高测定的准确性，提高测试的灵敏度。
二、细菌鉴定
通过培养可以初步判断大肠杆菌的类型，但要确定其种类，可以采用血凝试验（血清凝集），该试验可用于识别各种凝集素。
另外，培养过程中产生的生化特性也可以帮助在识别大肠杆菌中发挥作用。
大肠杆菌的检测及原理
大肠杆菌的检测及原理大肠杆菌是一种常见的肠道菌群中的细菌，通常是无害的，但某些毒株可以引起食物中毒和其他健康问题。
因此，检测大肠杆菌在食品和水源中的存在非常重要，以确保公众的健康和安全。
大肠杆菌检测通常通过检测这种细菌的DNA或蛋白质来完成。
这些检测方法可以分为质量检测和定量检测两种方法。
1. 质量检测质量检测是检测大肠杆菌是否存在的一种简单方法。
常用的方法有：(1) 培养法培养法是一种直接检测大肠杆菌存在的方法。
在这个方法中，食品或水样本直接加入含有特定营养成分和染色剂的富营养基质中进行培养。
如果存在大肠杆菌，则可以观察到菌落，并且这些菌落通常呈现出淡粉红色或金属绿色。
(2) 葡萄糖发酵试验这是一种利用大肠杆菌对糖的发酵反应来检测其存在的方法。
在这种测试中，食品或水样本被添加到含有葡萄糖和试剂的培养基中，并在一段时间后观察产生的气体或酸度的变化。
大肠杆菌通常能够迅速发酵葡萄糖，所以如果存在大肠杆菌，则会导致培养基的酸度降低和气泡的产生。
(3) 快速测试条这是一种利用特殊的测试条来检测大肠杆菌存在的方法。
在这种测试中，食品或水样本被加入到测试条上，并观察测试条变色。
这种测试条通常采用专有的化学反应，可以针对大肠杆菌的生长特性进行设计。
(1)酶联免疫吸附测定法(ELISA)ELISA是一种高灵敏度、高特异性的定量检测方法。
这种方法是利用特异性抗体与大肠杆菌中的特定蛋白质结合，再结合酶进行检测，检测结果会显示大肠杆菌的数量。
(2)PCR检测法PCR检测法是一种用来扩增DNA段的方法，可以检测大肠杆菌的存在。
PCR检测法利用针对大肠杆菌特定的DNA序列的反应，通过扩增这些特定的DNA段，来检测大肠杆菌在食品和水源样本中的存在。
总的来说，检测大肠杆菌的存在非常重要，因为它可以导致许多健康问题。
以上列举的方法都有自己的优缺点，需要根据实际情况选择合适的方法进行检测。
大肠杆菌的测定
1、培养基制备：改良EC新生霉素增菌肉汤（mEC）：EC肉汤灭菌后添加20mg/mL过滤除菌的新生霉素，使终浓度为20μg/mL。
改良山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC）：山梨醇麦康凯琼脂加入过滤除菌的1%亚碲酸钾溶液，使终浓度2.5mg/L，头孢克污，使终浓度为0.05mg/L。
MUG-LST肉汤：LST肉汤中添加4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG），使终浓度为0.1g/L。
2、增菌培养秤取25克样品放入225mL mEC中，均质。
于41±1℃培养18-24小时。
3、分离将mEC肉汤培养物10倍递增稀释。
从10-4，10-5，10-6稀释度，各取0.1mL 涂布于TC-SMAC平板。
于36±1℃培养18~24小时。
可疑 EHEC O157:H7菌落扁平，透明或半透明，边缘光滑，呈淡褐色中心，直径约2mm。
附：在梅里埃公司改良山梨醇麦康凯琼脂上的菌落。
4、鉴定挑取TC-SMAC上的可疑菌落，接种MUG-LST，于36±1℃培养18~24小时，出现产气，且无荧光者，分离到普通营养琼脂。
对纯菌落用EHEC O157:H7标准血清或胶乳凝集试剂作凝集试验，必要时进行生化试验。
在检测过程中，也可以在选择性增菌后，取出5mL增菌液，经100℃水浴15分钟灭活后，供自动酶联荧光免疫测试（VIDAS），迅速获得初步结果，阳性反应者需作进一步证实。
EHEC O157:H7检验程序图解检样25g↓mEC225mL → VIDAS快速筛选↓41±1℃，18-24h10-4，10-5，10-6稀释度涂布TC-SMAC↓36±1℃，18-24h挑取5-10个可疑菌落接种MUG-LST↓36±1℃，18-24hMUG阴性培养物转种普通营养琼脂↓↓生化反应鉴定血清凝集鉴定或胶乳凝集试验用上述方法在样品中分离获得的纯菌落，经抗E.coli O157:H7标准血清或EHEC O157:H7胶乳凝集测试为阳性者，报告检出肠出血性大肠杆菌O157:H7。
大肠杆菌的检测方法国标
大肠杆菌的检测方法国标
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，可用于评价食品和水的卫生质量。
因此，大肠杆菌的检测方法在食品、水处理等领域被广泛采用。
本文将介绍国际上常见的大肠杆菌检测方法国标。
一、 ISO 9308-1：水质–检测和计数大肠杆菌–第1部分：膜过滤法
该标准适用于检测与供水、游泳池、浴缸等有关的水样中的大肠杆菌。
该标准使用膜过滤技术，将水样过滤通过0.45微米的滤膜上的杆菌层，然后将滤膜培养在培养基上，检测和计数大肠杆菌的数量。
该标准具有简便、快捷、准确等特点。
二、ISO 21150：食品和饲料–检测和计数大肠杆菌和厌氧菌–气相培养法
该标准适用于肉、肠衣、豆腐等食品样品，通过瓶内培养的方法检测大肠杆菌的数量。
该标准使用培养基使大肠杆菌产生二氧化碳，然后采用气相色谱技术检测二氧化碳的量，以计算大肠杆菌的数量。
该标准的优点是能在单一瓶中同时检测大肠杆菌和厌氧菌的数量。
三、ISO 9308-2：水质–检测和计数大肠杆菌和沙门氏菌–第2部分：多管发酵管技术
该标准适用于检测污染水样和废水样品中的大肠杆菌和沙门氏菌。
该标准使用多管发酵管技术，将水样转移到多个管子中，这些管子中的培养基不断地搅拌，检测管子中产生的气体，以检测大肠杆菌和沙门氏菌的数量。
该标准较为耗时，但能同时检测两种菌群。
以上三种标准是国际上常见的用于大肠杆菌检测的方法。
在具体应用中可以选择适宜的方法，选择合适的培养基，并按照标准操作规范执行测试，以得到准确可靠的检测结果。
干重法测定大肠杆菌计算题
干重法测定大肠杆菌计算题摘要：1.引言2.干重法的原理和方法3.大肠杆菌的测定方法4.计算题的解析5.总结正文：1.引言在生物学研究中，大肠杆菌（Escherichia coli，简称E.coli）是一种重要的实验模式生物，广泛应用于分子生物学、遗传学等领域。
对大肠杆菌的数量进行准确测定，对于实验结果的可靠性和科学性至关重要。
本文将介绍一种常用的测定方法——干重法，并解析一道相关的计算题。
2.干重法的原理和方法干重法是一种常用的微生物数量测定方法，其基本原理是利用微生物的生物量与干重之间的比例关系，通过测量微生物的干重来推算其数量。
具体操作方法如下：（1）将待测大肠杆菌悬浮在适当的培养基中，进行适当的培养时间，使其达到稳定生长期。
（2）将培养液离心，去除上清液，取沉淀进行干燥。
（3）将干燥后的沉淀物称重，得到微生物的干重。
（4）根据大肠杆菌的湿重与干重之间的比例关系，计算出大肠杆菌的数量。
3.大肠杆菌的测定方法除了干重法，还有其他多种方法可用于大肠杆菌的测定，如比浊法、光电比色法等。
这些方法各有优缺点，选择时应根据实验条件和需求进行综合考虑。
4.计算题的解析假设某实验中得到的大肠杆菌干重为10mg，湿重与干重比例为1:1.6，求大肠杆菌的数量。
根据湿重与干重比例关系，可得湿重为10mg * 1.6 = 16mg。
大肠杆菌的相对分子质量约为44,000，假设每个大肠杆菌的平均质量为500ng。
则大肠杆菌的数量= 湿重（16mg）/ 每个大肠杆菌的质量（500ng）= 16mg / 500ng = 32。
因此，该实验中大肠杆菌的数量为32 个。
5.总结干重法是一种常用的微生物数量测定方法，适用于大肠杆菌等微生物的测定。
通过测量微生物的干重，并根据湿重与干重之间的比例关系，可以计算出微生物的数量。
花生中大肠杆菌的测定
花生中大肠杆菌的测定引言花生是一种常见的坚果，被广泛用于食品加工和食用。
然而，由于花生生长环境和采摘、储存等过程中的不洁净因素，花生中可能存在一些微生物污染。
其中，大肠杆菌是一种常见的致病菌，其存在会对人体健康造成潜在威胁。
对花生中大肠杆菌进行测定具有重要意义。
本文将介绍一种常用的方法来测定花生中大肠杆菌的数量，并提供详细步骤和实验注意事项。
材料与方法实验材料•花生样品•无菌蒸馏水•无菌培养基（例如萨尔莫内拉培养基）•大肠杆菌阳性对照菌株•灭菌培养皿、试管、移液管等实验器具实验步骤1.准备样品：将花生样品取出适量放入无菌试管中。
2.制备稀释液：取一定体积的无菌蒸馏水加入到试管中，使样品适当稀释。
3.摇匀：轻轻摇动试管使样品与稀释液充分混合。
4.进行系列稀释：取出一定体积的稀释液转移到下一个试管中，进行连续的系列稀释，以获得不同浓度的样品溶液。
5.制备培养基平板：将无菌培养基熔化后倒入灭菌培养皿中，待其凝固形成培养基平板。
6.接种：取出一定体积的每个样品溶液分别均匀涂布在培养基平板上。
7.培养：将接种后的培养基平板倒置放置在恒温培养箱中，在合适的温度下孵育一段时间（通常为24-48小时）。
8.计数：观察培养基平板上形成的菌落，并使用计数器或放大镜等工具计数大肠杆菌菌落的数量。
实验注意事项1.实验前要保持实验器具和实验环境的无菌状态，以避免外源性污染对实验结果的影响。
2.在制备稀释液和进行系列稀释时，要注意使用无菌蒸馏水和无菌试管，以确保样品的纯净度。
3.在接种时要均匀涂布样品溶液，避免过度接种或重叠接种导致结果不准确。
4.培养过程中要控制好温度和孵育时间，以保证大肠杆菌能够适当生长。
5.在计数菌落数量时要仔细观察，并避免重复计数或漏计。
结果与讨论通过上述方法，我们可以得到花生样品中大肠杆菌的数量。
根据实验结果，我们可以评估花生样品是否存在大肠杆菌污染，并采取相应的措施来保证食品安全。
该实验方法也可以用于其他食品或环境样品中大肠杆菌的测定。
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水中总大肠杆菌的测定
来源：加入时间：2010-3-30 12:15:51
1 原理
总大肠杆菌群可用多管发酵法或滤膜法检测。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖，产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，求得水样中的总大肠菌群数，实验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。
2仪器
2.1 高压蒸汽灭菌器。
2.2 恒温培养箱，冰箱。
2.3 生物显微镜，载玻片。
2.4 酒精灯，镍铬丝接种棒。
2.5 培养皿(直径100mm)，试管(5×150mm)，小倒管，吸管(1，5，10ml)，烧杯(200，500，2000ml)，锥形瓶(500，1000ml)，采样瓶。
3 培养基及染色剂的制备
3.1 乳糖蛋白胨培养液：
将10g蛋白胨、3g牛肉浸膏、3g乳糖和5g氯化钠加热溶于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2－7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管（内有倒管）中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩蛋白胨溶液：
按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法制备。
除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。
3.3 品红亚硫酸钠培养基
3.3.1 贮备培养基的制备
于2000mL烧杯中，先将20-30g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入3.5g磷酸氢二钾及10g蛋白胨，混匀，使其溶解，再用蒸馏水补充到1000mL调节溶液pH至7.2-7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加10g乳糖，混匀，定量分装于250或500mL锥形瓶内，置于高压灭菌器中，在121℃灭菌15min，贮存与冷暗处备用。
3.3.2 平皿培养基的制备
将上法制备的贮备培养基加热融化。
根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按1：50比例吸取5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中；再按1：200比例称取无水亚硫酸钠，置于另一灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（灭菌）。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色再褪至淡红色为止（不宜加多）。
将此混合液全部加入已融化的贮备培
养基内，并充分混匀（防止产生气泡）。
立即将此培养基适量（约15mL）倾入已灭菌的平皿内，再冷却凝固后置于冰箱内备用，但保存时间不宜超过2周。
如培养基由淡红色变成深红色则不能再用。
3.4 伊红美蓝培养基制备
于2000mL烧杯中，先将20g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，再加入2g磷酸二氢钾及10g蛋白胨，混合使之溶解，用蒸馏水补充至1000mL，调节溶液pH值至7.2-7.4，趁热用脱脂棉或绒布过滤，加入2%伊红水溶液（0.4g伊红溶于20mL水中）20ml和0.5%美蓝水溶液（0.065g美蓝溶于13mL水中）13ml，再加入10g乳糖，混匀后定量分装于250或500mL锥形瓶内，于121℃高压灭菌15min，放冷至45℃左右，无菌操作下将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用。
3.5 革兰氏染色剂
3.5.1 结晶紫染色液：
将20mL结晶紫乙醇饱和溶液（称取4-8g结晶紫溶于100mL95%乙醇中）和80mL1%草酸铵溶液混合并过滤。
该溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。
3.5.2 助染剂：
将1g碘与2g碘化钾混合后，加入少许蒸馏水，充分振荡，待完全溶解后，用蒸馏水补充至300mL。
此溶液2周内有效。
当溶液由棕黄色变为淡黄色时应弃去。
为易于贮备，可将上述碘与碘化钾溶于30mL蒸馏水中，临用前再加水稀释。
3.5.3 脱色剂：95%乙醇。
3.5.4 复染剂：将0.25g沙黄加到10mL95%乙醇中待完全溶解后，加90mL蒸馏水。
4测定步骤
4.1 生活饮用水
4.1.1 初发酵实验：在两个装有已灭菌的50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中（内有
倒管），以无菌操作加入充分混匀的水样10mL，混匀后置于37℃恒温箱内培养24h。
4.1.2 平板分离：上述各发酵管经培养24h后，将产酸，产气及只产酸的发酵管分别接种于伊红美蓝
培养基或品红亚硫酸钠培养基上，置于37℃培养箱内培养24h，挑选符合下列特征的菌落。
a.伊红美蓝培养基上：深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落：淡紫
红色，中心色较深的菌落。
b.品红亚硫酸钠培养基上：紫红色，具有金属光泽的菌落；深红色，不带或略带金属光泽的菌落；淡
红色，中心颜色较深的菌落。
4.1.3 取有上述特特征的群落进行革兰氏染色
a、用已培养18－24h的培养物涂片，涂层要薄。
b、将涂片在火焰上加温固定，待冷却后滴加结晶紫溶液，1min后用水洗去。
c、滴加助染剂，1min后用水洗去。
d、滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止（约20－30s），用水洗去。
e、滴加复染剂，1min后用水洗去，晾干、镜检，呈紫色者为革兰氏阳性菌，呈红色者为阴性菌。
4、复发酵实验：上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另一部分接种
于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），每管可接种分离自同一初发酵管（瓶）的最典型菌落1－3个，然后置于37℃恒温箱中培养24h，有产酸、产气者（不论倒管内气体多少皆作为产气论），即证实有大肠菌群存在。
根据证实有大肠菌群存在的阳性管（瓶）数查表2-5“大肠菌群检数表”，报告每升水样中的大肠菌群数。