细胞常见污染情况分析
细胞常见污染情况分析报告
细胞培养常见污染的判别及应对措施2011-01-02 10:19:04| 分类：实验| 标签：污染无菌细胞培养基灭菌|字号大中小订阅一、避免细胞培养污染的措施：污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是可以避免的：1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再用酒精擦台面，紫外照20分！2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）。
5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。
6. 操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。
7. 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。
二、常见的细胞培养污染：下面是几种细胞培养过程中常见的污染：1. 支原体污染：传说中的黑焦虫，长得暴快。
24小时就满视野都是了。
污染源大多数情况下是培养用血清。
图1 支原体污染的光镜检测（圆圈所示，×10倍）图2 支原体污染的光镜检测（×20倍）图3 支原体污染的荧光检测图4 支原体污染的电镜检测（×30k，煎蛋状和其他形状）图5 支原体污染的电镜检测2. 念珠菌污染：似乎无处不在，而且顽固得很。
长得暴快（12h就能在细胞上面密布）。
培养液澄清。
低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。
图6 念珠菌污染的光镜检测（低倍镜）图7 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图8 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图9 念珠菌污染的检测（革兰氏染色阳性）这么大面积的污染，你可以看看是不是操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。
细胞培养中常见的污染及处理@麦粒
常见细胞污染及其处理方法麦~粒（2012级生物化学与分子生物学专业）摘要：细胞培养是生命科学实验及生物医药产业化中的一项关键技术，细胞污染问题一直是细胞培养中的大敌。
本文综述了细胞培养中污染的类型、处理方法和预防措施等，以期为实验室细胞培养中遇到的细胞污染的解决提供参考。
关键词：细胞培养，细胞污染，支原体污染细胞培养技术是现代生命科学研究中不可缺少的一项基本实验技术，同时也是细胞工程中的核心技术之一。
细胞培养的质量好坏直接关系到实验结果的可靠性与否以及产品质量的合格与否。
在细胞培养中，最基本的原则就是无菌操作，污染是细胞培养最致命的大敌，预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
特别是对于一些珍贵的细胞株，一旦污染对实验可能就是毁灭性的。
1 污染的类型细胞污染的类型可分为物理、化学、生物三类。
其中化学、生物因素最为常见，物理因素最易被忽视。
1.1物理污染物理性污染通过影响细胞培养体系中的组分，从而影响了细胞的代谢。
最为常见的是温度和辐射（紫外线照射）。
过冷或过热的温度对细胞可引起细胞生理状态的改变，如从冰箱中取出的培养液直接加至37℃培养的细胞中可能会造成细胞应激，影响某些实验现象的观察。
在生物安全柜紫外灭菌时，应当遮蔽对紫外线敏感的试剂，同时普通操作中也要注意对见光易分解的物质进行避光处理。
对于需要使用同位素标记的某些实验，应当注意细胞、试剂周围不能放同位素。
除此之外，有时操作过程中偶尔有异物落入，极易造成污染。
一些小的颗粒状异物作为是微生物污染的载体进入培养液中造成细胞污染。
另外，实验过程中酒精棉球的棉絮、移液器枪头上的某些塑料碎屑等都有可能增加染菌的概率。
1.2化学污染细胞培养中的化学污染大多是由于实验准备或实验过程中造作不当造成的。
在实验准备阶段，细胞培养室中的器皿应做到专用，避免与常用器皿混用。
此外，细胞用器皿洗刷过程中要注意洗刷彻底，不可有洗涤剂等残留。
高压灭菌时应灭菌彻底，并在灭菌后的生物安全柜中打开使用。
如何预防细胞培养污染问题
如何预防细胞培养污染问题细胞培养是生物学和医学研究中常用的一种技术方法，但细胞培养过程中常常会面临细胞污染问题。
细胞培养污染会严重影响实验结果的准确性，因此需要采取一系列措施来预防细胞培养污染。
本文将介绍几种常见的细胞培养污染问题以及预防措施。
1. 细菌污染细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。
来自操作人员、试剂、培养器具和工作环境等多方面的细菌污染都可能导致细胞培养中的细菌污染。
预防措施：•穿戴合适的实验服和手套，并进行消毒处理，减少操作人员带入的细菌污染。
•使用无菌、高质量的试剂，并在实验中进行常规无菌操作，保持培养器具的无菌状态。
•经常对实验室进行清洁和消毒，保持工作环境的无菌。
2. 真菌污染真菌污染是细胞培养中另一个常见的问题。
真菌往往来自环境中的空气、试剂、培养器具或操作人员。
真菌污染会导致细胞生长异常，细胞死亡或实验结果异常。
预防措施：•定期消毒工作环境，特别是操作台和培养箱，避免真菌的滋生。
•使用高质量的培养基和抗生素，抑制真菌的生长。
•采取无菌技术操作，减少操作人员带入的真菌污染。
•定期更换培养器具，特别是培养瓶和培养皿，避免真菌滋生。
3. Mycoplasma 污染Mycoplasma 污染是细胞培养中常见但容易被忽视的问题。
Mycoplasma 是一类细小的细菌样微生物，常常会导致细胞株的污染。
Mycoplasma 污染会影响细胞生长、代谢以及实验结果的可靠性。
预防措施：•定期检测细胞株的 Mycoplasma 污染情况，可以使用 PCR 或流式细胞术等方法进行检测。
•新购买的细胞株进行隔离培养，并进行 Mycoplasma 检测，确保细胞株的无菌性。
•严格控制培养器具、培养基和操作人员的无菌操作，减少Mycoplasma 污染的可能性。
•定期更换培养基并添加抗生素，可以抑制 Mycoplasma 的生长。
4. 交叉污染交叉污染是指在细胞培养过程中，不同细胞株之间发生的细胞混合现象。
如何正确判别细胞培养中的细菌与真菌污染
如何正确判别细胞培养中的细菌与真菌污染在进行细胞培养实验的过程中，细菌与真菌污染是一个常见但也十分令人头疼的问题。
当我们在观察和分析细胞时，准确判断细胞培养中的细菌与真菌污染是至关重要的。
本文将从不同的角度探讨如何正确判断细胞培养中的细菌与真菌污染。
一、观察细胞形态观察细胞形态是判断细胞培养中是否存在细菌与真菌污染的一种重要方式。
细菌和真菌的形态和生长方式有很大的差异。
细菌在培养皿中呈现为小圆点状或线状的结构，而真菌则可能形成大而明显的菌落或菌丝。
此外，真菌会产生孢子，看起来像是一串串小颗粒。
通过观察细胞周围的结构，可以初步判断是否存在细菌与真菌污染。
二、检测培养基上的生长情况细胞培养中的细菌与真菌污染通常会导致培养基上的生长情况发生变化。
如果培养基上有细菌或真菌的存在，通常可以观察到菌落的形成。
在培养过程中，我们可以观察细胞生长的速度、密度和均匀性等指标，如果存在污染，这些指标可能会出现异常情况。
在评估培养基上的生长情况时，需要结合细胞培养的实际要求进行综合判断。
三、使用染色试剂染色试剂在细胞培养中的细菌与真菌污染判别中发挥着至关重要的作用。
常用的染色试剂有格拉姆染色和甲苯胺蓝染色等。
通过染色试剂的使用，细菌和真菌会呈现不同的颜色和形态。
细菌会呈现出紫色或蓝色，而真菌则通常呈现为绿色或红色。
通过对样品进行染色和观察，可以明确判断是否存在细菌与真菌污染。
四、利用PCR技术PCR技术是一种高灵敏度和高特异性的基因检测技术，可以用于检测和鉴定细菌和真菌。
通过PCR技术，可以对细胞培养样品中的DNA进行扩增和分析，从而确定是否存在细菌与真菌污染。
PCR技术可以选择合适的引物，针对不同的细菌和真菌进行特异性扩增，提高判断污染的准确性。
五、更加严格的无菌操作在细胞培养实验中，更加严格的无菌操作是避免细菌与真菌污染的关键。
在实验过程中，我们应该始终保持实验室台面、培养皿、试管等工作区域的清洁。
在进行细胞培养前，用酒精或其他消毒液对操作台面进行清洁和消毒，避免细菌的传播。
细胞培养中常见污染
最近看到不少问有关细胞培养污染的事，正好我看到了一个有关这方面的总结，很全很好很强大，跟大家分享下细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
干细胞细菌内毒素超标的可能原因
【干细胞细菌内毒素超标的可能原因】干细胞技术作为一项备受关注的生物医学领域，近年来取得了巨大的发展成就。
干细胞的应用范围越来越广泛，然而，在干细胞的应用过程中，细菌内毒素超标的情况时有发生，给干细胞研究和应用带来了很大的困扰。
那么，干细胞细菌内毒素超标的可能原因是什么呢？1. 操作不当导致的细菌污染在实验室中进行干细胞培养和扩增的过程中，如果操作不当，比如无菌操作规范不严、培养条件不合理等，就会导致细菌的污染，从而引发内毒素超标的问题。
实验室环境的卫生状况和操作人员的培训水平也会直接影响细菌污染的情况。
2. 原料污染在干细胞培养的原料中，比如培养基、添加剂等，如果存在细菌污染或本身就含有内毒素，就会成为细菌内毒素超标的潜在原因。
制备和储存这些原料的条件如果不合理也会导致原料污染，进而影响干细胞培养的质量。
3. 干细胞自身特性干细胞作为一种特殊的细胞类型，其生长特性和分化能力决定了在培养的过程中容易受到细菌内毒素的影响。
一些细胞培养过程中的压力条件、营养物质供应等因素也会影响干细胞对内毒素的敏感性，从而导致内毒素超标的情况。
4. 实验设备不合格实验室中的培养设备、检测设备如果不符合规范要求，就会影响到细菌内毒素的检测和控制。
不合格的设备可能会导致细菌内毒素超标的情况发生，带来一定的安全隐患。
总结回顾：在干细胞研究和应用过程中，细菌内毒素超标的问题一直是一个备受关注的难题。
要解决这一问题，就需要从操作规范、原料质量、细胞特性和设备条件等多个方面进行全面评估和控制。
只有加强对这些可能原因的监测和管理，才能更好地提高干细胞培养的质量和安全性。
个人观点：在解决干细胞细菌内毒素超标问题的过程中，需要加强实验室规范管理、培训操作人员、完善原料质量监控和优化培养条件等方面的工作。
加强相关法规的制定和执行力度，也是非常重要的。
这样才能更好地保障干细胞研究和应用的安全和可持续发展。
结语：干细胞细菌内毒素超标问题是一个复杂而严峻的挑战，需要科研人员共同努力，不断提高技术水平和安全意识，才能更好地推动干细胞研究和应用的进步。
听说你的细胞被污染了？
听说你的细胞被污染了？导语学会正确地进⾏细胞培养是细胞实验的基础，然⽽⼩⼼翼翼的你，怎奈何体外细胞的脆弱，百密终有⼀疏。
你偶然的⼀个喷嚏，不经意得捋捋你的头发丝，对于这些丢失体外抵抗能⼒的细胞都可能是毁灭性的灾害。
但是，并⾮所有的细胞污染都是致命的，若是及时发现，还是可以得到挽救的。
今天咱们的主题就是：教⼤家辨别各种细胞污染及如何应对。
如下图：实验室常见的细胞污染，你都知道属于哪种污染吗？细胞培养中的常见污染主要包括：细菌、霉菌、⽀原体、⿊胶⾍、病毒和交叉污染等，每⼀种污染都有各⾃的特点。
如细菌和霉菌增殖迅速，短时间就对细胞造成明显伤害；⽽⽀原体和病毒对细胞的影响则是⼀种缓慢长期的过程。
下⾯就具体看看每⼀种污染。
1. 细菌污染（较容易被发现）引起原因：操作不规范或⽆菌措施不到位等；细菌污染种类：⽩⾊葡萄球菌，⼤肠杆菌，假单孢菌、枯草杆菌等；细胞污染后的变化：①污染后由于有⼤量酸性物质产⽣，因此培养基会短时间内由红⾊变为黄⾊；②由于细菌⼤量增殖，培养基变浑浊，稍微振荡后可见培养基表⾯有漂浮物；③普通倒置显微镜⾼倍镜观察，胞浆内可见⼤量颗粒（如下图红⾊箭头）；④细胞⽣长缓慢，逐渐变圆脱落。
如下图所⽰：左：悬浮细胞污染后，可见悬浮细胞个体远⼤于杆状细菌，⽽细菌呈⿊⾊颗粒状并会有较快的运动速度；右：贴壁细胞，可看到球状细菌分布于细胞周围并做剧烈运动。
细菌污染的细胞（左悬浮细胞，右贴壁细胞）图⽚来源：UNC School of Medicine处理措施：在培养液中添加双抗（P/S）处理；可⽤抗⽣素的常⽤量的5~10倍作冲击疗法，⽤药24~48h后再换常规培养液；另外添加西司他丁钠和亚胺培南（泰能）处理细胞，适⽤于培养⽤具被打翻、使⽤了污染的培养液或要培养污染的组织或者冻存细胞的污染情况[1]。
裸⿏体内接种法是⽐较有效和彻底的除菌⽅法。
主要包括腹⽔接种和⽪下荷瘤分离细胞。
既能彻底清除污染细菌，⼜能保持肿瘤细胞的来源特征和恶性特性。
细胞培养中的常见问题及解决方法
细胞培养中的常见问题及解决方法细胞培养是现代生命科学研究中常用的实验技术之一，可以用于细胞增殖、分化、转染等研究。
然而，细胞培养过程中常常会出现一些问题，如细胞污染、细胞凋亡和细胞失活等。
本文将讨论细胞培养中的这些常见问题，并提出相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中的一大难题。
它可以由细菌、真菌或其他细胞类型的污染引起。
细胞污染会影响实验结果的准确性，并可能导致细胞系的丢失。
为了解决这个问题，我们可以采取以下措施：（1）经常检查细胞培养器具和培养基，确保其无菌；（2）使用抗生素或抗黴剂对培养基进行预处理，以减少污染的风险；（3）定期进行污染检测，例如细胞培养液和工作区的表面。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一部分，但在细胞培养中，过多的细胞凋亡会导致实验结果的误差。
为了减少细胞凋亡的发生，我们可以考虑以下措施：（1）优化培养条件，包括温度、CO2浓度和培养基配方等；（2）定期检查细胞形态和健康状况，及时处理出现凋亡现象的细胞；（3）使用细胞凋亡检测工具，如Annexin V-FITC/PI染色法，来评估细胞凋亡水平。
3. 细胞失活细胞失活现象在细胞培养中常常发生，可能是由于细胞老化、无营养补充或培养条件不佳等原因引起。
为了避免细胞失活的发生，我们可以尝试以下方法：（1）及时更换培养基，确保细胞获得充足的营养物质；（2）避免过度培养，及时传代细胞；（3）定期鉴定细胞的纯度和活力，并确保培养条件适当；（4）尝试使用细胞增殖激素或生长因子来促进细胞的增殖和存活。
细胞培养中的常见问题并不局限于上述三个，还有其他一些问题，例如细胞出现突变、细胞凝固等。
针对这些问题，我们可以进一步深入研究并寻找解决方法。
同时，注意维持实验室的清洁和规范操作也是解决这些问题的关键。
细胞培养在生命科学研究中发挥着重要作用。
了解并解决细胞培养中的常见问题，有助于提高实验结果的准确性和可重复性。
通过合理的实验设计、严谨的操作和科学的方法选择，我们可以克服这些问题，为细胞培养研究的进展做出贡献。
细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法
细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
流式细胞仪及细胞培养常见污染问题
流式细胞术计数法原理流式细胞术(fcm(Flow Cytometry Method))是对细胞和微粒进行快速、灵活、定量分析分类的高精技术，它融合了激光、电子计算机、单克隆抗体、荧光素化学、细胞化学染色等技术的优点。
其基本原理是以激光为光源，将被检细胞用荧光标记抗体结合后输入流式细胞仪，通过高速流动系统对细胞排列成行，一个一个的流经检测区，当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声振荡搅动液流，使液流断裂成一连串均匀的小滴，每滴内最多只含有一个细胞，细胞经荧光探针的光反应和标记物的光散射能力中获取信息，由光电倍增管接收并转化成脉冲信号，并进行增强，数据经电脑处理、分辨细胞的类型从而检测出各类淋巴细胞。
检测方法标本使用抗凝全血，在falcon流式进样管内加入20ul t淋巴细胞cd3cd4cd8抗体和反向加样50ul全血，轻轻充分混匀，置室温避光处放置15min，加入10倍稀释facs （ fluorescence-activated cell sorting）溶血素450ul，置室温避光处放置15min。
用multiset 自动软件获取15000个淋巴细胞，自动分析t淋巴细胞免疫亚型，报告cd4+,cd8+t淋巴细胞百分率cd4+,cd8+t淋巴细胞绝对计数及cd4+/cd8+比值。
实验数据用spss 13.0软件包处理，数据采用均数±标准差（x±s）表示。
细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
细胞培养常见细菌污染原因
细胞培养常见细菌污染原因细胞培养是生物学研究中常用的实验技术，用于研究细胞的生理、生化和分子生物学特性。
然而，细胞培养过程中常常会受到细菌污染的影响。
细菌污染会对细胞培养的可靠性和准确性产生不良影响，因此控制细菌污染是细胞培养实验中至关重要的一步。
细胞培养常见的细菌污染原因主要有以下几个方面：1. 操作不当：细胞培养的整个过程都需要严格的无菌操作，而操作不当是导致细菌污染的主要原因之一。
无菌操作包括更换培养基、移液操作、接种细胞等，如果在操作过程中没有严格遵守消毒和无菌操作规范，就会导致细菌的进入和繁殖。
2. 试剂和培养物污染：试剂和培养物是细胞培养中常用的重要物质，如果试剂和培养物本身存在细菌污染，那么在培养过程中就会引入细菌。
试剂如培养基、酶、胎牛血清等的批次变化或不良质量，都可能导致细菌污染。
此外，非无菌的操作也会导致试剂和培养物的污染。
3. 实验室环境污染：实验室环境中存在微生物的存在，如桌面、空气、实验器皿等都可能存在细菌。
如果实验室的环境清洁度不够高，容易造成细菌污染。
此外，实验器皿如培养皿、离心管等的洗涤和保存也需要保证无菌操作。
4. 人员因素：人员的操作能力和操作习惯也会影响到细菌污染的发生。
操作人员应该保持良好的个人卫生习惯，定期对手套、实验服等进行更换和清洗。
如果操作人员不注意操作细节，如不合理的移液操作、使用不干净的仪器等，都可能导致细菌的污染。
5. 培养器具污染：培养器具如试管、离心管、细胞培养板等在使用之前需要经过高温和化学消毒处理，以杀灭其中潜在存在的细菌。
然而，如果器具处理不彻底或者保存环境不好，就容易导致细菌的残留或再次感染。
细胞培养中细菌污染的危害是非常严重的。
首先，细菌污染会干扰细胞培养体系的稳定，导致无法准确观察和研究细胞的生理和生化特性。
其次，细菌代谢产物和细胞培养物中含有的抗生素等成分会干扰细胞培养的正常生长和发育，降低实验结果的可靠性和准确性。
此外，由于细菌的存在，还容易导致细胞死亡和污染的蔓延，对细胞培养的连续性和稳定性造成不可逆的伤害。
细胞培养常见污染
整理总结：细胞培养中的第一大害——————————污染★★★lwf991229(金币+3,VIP+0):不错,很详细,不过有的图片打不开~~污染是细胞培养第一大害！预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
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细胞污染的类型一、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染。
一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。
即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。
最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变而呈现黄色。
也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。
所以，每天应仔细观察。
污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
一般细菌污染进程很快，大约污染一两天后肉眼就能显著观察到。
二、真菌污染真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。
最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。
念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间（发生卵圆形物体污染的几率很大）。
个体细小，有增多趋势。
镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
三、支原体污染支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。
常用的细胞培养方法、污染及污染处理
常用的细胞培养方法、污染及污染处理一、本文概述细胞培养是生物学和医学领域中一种重要的实验技术，广泛应用于基础研究和实际应用。
通过模拟细胞在体内生长的环境，细胞在体外得以繁殖、分化并维持其特定功能。
本文旨在概述常用的细胞培养方法，包括培养基的选择、细胞传代、细胞冻存与复苏等，同时探讨细胞培养过程中可能出现的污染问题，包括细菌、真菌和支原体等微生物污染，以及污染的检测和处理方法。
通过本文的阐述，读者可以对细胞培养的基本流程和污染防控有更为全面的了解，为实验操作提供指导和参考。
二、常用的细胞培养方法细胞培养是生物学和医学研究中的核心技术，用于模拟体内环境，研究细胞生长、分化和功能。
以下是几种常用的细胞培养方法：贴壁培养法：这是最常见的细胞培养方法。
细胞在培养瓶或培养板的表面上贴壁生长，形成单层细胞。
这种方法适用于大多数哺乳动物细胞系。
悬浮培养法：某些细胞，如血液细胞、肿瘤细胞和某些干细胞，可以在液体培养基中悬浮生长。
这种方法不需要细胞贴壁，可以方便地扩大细胞数量。
微载体培养法：微载体是一种微小的、可以悬浮在培养基中的颗粒，通常用于大规模细胞培养。
细胞可以在微载体的表面上贴壁生长，从而增加细胞与培养基的接触面积，提高细胞生长效率。
三维培养法：这种方法模拟体内组织的三维结构，使用支架或凝胶等基质支持细胞生长。
它有助于研究细胞间的相互作用和组织的形成。
共培养法：将不同类型的细胞放在同一个培养环境中进行培养，以模拟体内细胞间的相互作用。
例如，将内皮细胞和肿瘤细胞共培养，可以研究肿瘤血管生成的过程。
在进行细胞培养时，需要选择适合细胞类型和实验目的的培养方法，同时严格控制培养条件，包括温度、湿度、pH值、营养成分等，以确保细胞的正常生长和繁殖。
三、细胞培养污染及其影响在细胞培养过程中，污染是一个常见且严重的问题，可能对细胞生长、实验结果和细胞治疗产生负面影响。
污染主要来源于微生物，包括细菌、真菌、支原体和病毒等。
原代细胞培养污染、生长问题分析及解决方案
原代细胞培养污染、生长及解决方法原细胞生长的污染来源：组织、环境、人员、物料、设备环境、人员造成的污染解决方法一般是：验证、培训物料造成的污染（针对）：物料的来源是否可靠、质量是否合格、运输储存是否合理有效并且符合规定。
QC部门应对物料进行合理有效严格的检测、分析，QA部门及使用部门应对物料进入车间使用的全过程进行监控并做验证（适当选择的条件）。
如：清洁消毒方法的有效性、运输过程的密闭性等。
培养用具（物料）：确保其清洁效果的有效性、灭菌效果的有效性，并尽可能的在干燥的环境下进行储存。
设备：在验证的有效期内并且验证应真实有效。
组织污染：用含高浓度的平衡盐溶液反复冲洗后在进行消化培养工序。
细胞生长（不生长或者不贴壁）影响因素：消化过量、原始细胞量过多、支原体污染、PH（NAHCO3分解）过碱、消化液、培养液配制错误（或过期、储存不当）、培养液与培养温度温差太大解决方法：消化过量：降低胰蛋白酶的浓度或消化时间原始细胞量过多：调节细胞量支原体污染：检测支原体PH过碱：从新配制培养液并做适当的检测消化液、培养液配制错误：QA部门全程监控培养液与培养温度温差太大：建议进行0.5-1H的37°温浴。
（培养液宜在30°使用）细胞生长缓慢影响因素：培养液中有少量细菌或真菌存在、培养液中的细胞必须成分（谷氨酰胺、生长因子耗尽）、细胞接种浓度太低、细胞老化、或支原体污染解决方法：比较新培养基于旧培养基的成分，比较新血清旧血清的生长试验，增加或补充谷氨酰胺或新鲜的培养基、增加细胞接种浓度、检测支原体注明：如果遇到细胞大量死亡现象则应该考虑培养基的渗透压、温度波动和培养液毒性问题。
培养细胞出现很多小黑点是怎么回事？怎么处理？
霉菌、细菌、酵母菌、杂菌......这些菌菌过来串门的时候，是不是感到瑟瑟发抖......养细胞就是一件耗时耗力的事情。
最常见的，就是一不小心，会慢慢发现细胞出现了一些不知何物的小黑点，各位师弟，且听师姐来分析分析：这些讨厌的小黑点到底是什么呢?有可能是：1.细胞碎片细胞生长状态不好，吹打过多或者多次吹打导致碎片，加大血清浓度，降低离心速度养两代试试。
碎片一般会离心出去。
这就是细胞碎片2.黑胶虫黑胶虫污染，黑胶虫一般小而且密。
“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡。
3.支原体污染支原体污染不易发现，很多细胞即使支原体污染，在没有出现猛烈爆发时细胞形态也不会有明显的变化，因此支原体污染经常被人们所忽视。
但是支原体污染对细胞的伤害比人们想象的要大得多，会直接对您的实验结果产生影响，包括以下几个方面：①严重降低细胞的基因转导效率：无论是病毒载体还是脂质体介导的基因转导，细胞都会因为支原体的污染而导致效率低下。
②严重影响细胞的功能表型：支原体严重影响细胞的分化方向，扰乱细胞的增殖、活力与代谢水平，造成实验中极其不稳定的细胞表型结果。
那么出现这些情况之后细胞怎么“挽救”呢?好物推荐——Procell 支原体清除培养基支原体清除培养基是Procell在市面上已有的支原体清除培养基基础上开发的新一代产品，含有清除“支原体”的特殊成分(一种混合制剂，可通过抑制DNA 和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清除效果，最大程度上挽救珍贵的细胞，减少因支原体污染带来的损失)。
本产品经过了数十种细胞的测试和长期的实验验证，对细胞无害，对清除“支原体”污染效果显著，能够很好的抑制和杀灭“支原体”。
细胞培养技术中的常见问题与解决方法参考
细胞培养技术中的常见问题与解决方法参考细胞培养是生物学和医学研究中非常重要的一项技术。
然而，在进行细胞培养过程中，我们常常会遇到一些问题。
本文将介绍几个细胞培养中常见的问题，并提供相应的解决方法参考。
1. 细胞污染问题细胞污染是细胞培养中最常见的问题之一。
它可能来源于细胞培养器皿、培养基、试剂、液体气氛等多个方面。
常见的细胞污染类型包括细菌、真菌、酵母菌、支原体、霉菌等。
遇到细胞污染问题时，可以采取以下解决方法参考：- 严格的无菌操作：所有实验应该在无菌条件下进行，使用经过验收的培养器皿和无菌试剂。
- 经常检查和更换培养器皿、培养基：经常检查培养器皿和培养基是否有异常情况，如有污染应及时更换。
- 预防细胞污染：定期进行表面消毒、培养器具灭菌和试剂消毒以预防其他污染来源。
2. 细胞生长问题细胞生长问题是细胞培养过程中常见的一个问题。
主要表现为细胞无法黏附、生长缓慢或停止生长。
解决细胞生长问题的方法参考如下：- 增加培养物中的营养物：根据细胞类型和需求，调整培养基中的蛋白质、维生素和氨基酸等营养物的浓度。
- 提供适宜的培养条件：调整温度、湿度、CO2浓度等环境参数，以提供适宜的生长条件。
- 检查细胞的健康状态：定期检查细胞的形态和健康状况，如发现异常应及时采取措施。
3. 细胞凋亡问题细胞凋亡在细胞培养中可能出现，特别是在长期培养过程中。
细胞凋亡表现为细胞收缩、核染色质浓缩、DNA断裂等特点。
以下是解决细胞凋亡问题的方法参考：- 优化培养条件：提供适宜的培养基、温度、CO2浓度、液面高度等环境因素。
- 增加细胞存活因子：添加适量的生长因子、细胞因子或激素等，以提高细胞存活率。
- 检查细胞状态和健康：及时观察细胞的形态和生长状态，发现异常情况及时处理。
4. 细胞分化问题在一些特定细胞系中，细胞分化可能成为一个问题。
细胞分化表现为细胞形态、生长速率、分泌物或细胞功能的改变。
以下是解决细胞分化问题的方法参考：- 控制培养时间：在合适的时间段内收获细胞，以避免细胞进一步分化。
生物实验中常见的培育技术问题及解决方法
生物实验中常见的培育技术问题及解决方法生物实验中常见的培养技术问题及解决方法在生物实验中，培养技术是不可或缺的一环。
针对不同生物组织和细胞的培养，常常会遇到一些问题。
本文将就常见的培养技术问题及解决方法进行探讨，以帮助实验者们更好地解决实验过程中的困惑。
一、细胞污染细胞污染是培养过程中最常见的问题之一。
细胞污染来源多样，可包括细菌、真菌或其他细胞。
细胞污染会导致实验结果不可靠，甚至使整个实验无法进行。
针对不同的细胞污染问题，可以尝试以下解决方法：1. 培养器具消毒：使用无菌培养器具，并在使用前彻底消毒。
2. 预处理培养基：预将培养基加入抗生素或抗真菌药物，以减少污染的机会。
3. 早期发现和处理：定期检查细胞的形态和生长状态，一旦发现任何异常情况，立即进行处理，如更换培养基或添加适量的抗生素。
二、细胞附着问题有些细胞在培养器壁上附着能力较弱，导致细胞无法正常生长和扩增。
解决这一问题可以尝试以下方法：1. 培养器壁预涂层：可以在培养器壁上加一层预涂层，如胶原蛋白或聚乳酸-共-羟基丁酸酯（PLGA），以增强细胞的附着能力。
2. 细胞外基质（ECM）特征仿真：利用基质接合蛋白或其他生物分子，为细胞提供类似于体内环境的支撑，以增强细胞附着和生长。
三、细胞凋亡细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，但在细胞培养过程中，过多的细胞凋亡会影响实验结果的可靠性。
解决细胞凋亡问题可以尝试以下方法：1. 培养基中添加抗凋亡因子：如细胞存活因子和抗坏死蛋白等，以减少细胞的凋亡。
2. 细胞寿命控制：合理控制细胞的分代时间和传代次数，及时进行细胞的传代，以避免细胞老化和凋亡。
3. 细胞存活检测：定期采用荧光染料等方法检测细胞存活率，及时发现并处理凋亡问题。
四、细胞分化问题在一些特定的细胞培养中，细胞会发生分化，失去原有的细胞型态和功能。
解决细胞分化问题可以尝试以下方法：1. 优化培养条件：调整培养基的成分和浓度，以提供适宜的生长环境来避免细胞分化。
细胞培养中“黑胶虫”污染的检测及防治
6、建立有效的监控机制：对细胞培养过程进行实时监控，特别是在培养液 更换、细胞传代等关键环节上要格外留意。通过定期检查和记录细胞生长情况、 生化指标等数据，及时发现并处理潜在的黑胶虫污染问题。
7、采用新技术手段：随着科技的发展，一些新的技术手段如基因测序、生 物信息学分析等也可用于检测和防治黑胶虫污染。通过这些技术手段的应用，可 以更早地发现污染源、追踪污染途径并制定有效的防控措施。
4、建立应急预案：实验室应建立针对黑胶虫污染的应急预案，以便在发生 污染时能够迅速采取有效的措施进行处理，最大程度地减少损失。
5、加强学术交流与培训：通过参加学术会议、研讨会等活动，了解和学习 最新的研究成果和方法，提高对黑胶虫污染的认识和应对能力。同时，对实验室 工作人员进行定期的培训和教育，提高他们的专业素养和操作技能。
5、使用适当的消毒剂：在细胞培养过程中，可以使用适当的消毒剂对实验 器材和环境进行消毒处理。常用的消毒剂有75%酒精、紫外线、甲醛等。在使用 消毒剂时，要严格按照使用说明进行操作，避免对细胞造成不良影响。
参考内容三
引言
随着人类文明的不断发展，塑料制品的使用日益普遍，由此引发的白色污染 问题也越来越严重。本次演示将探讨白色污染的污染现状及防治对策，旨在引起 人们对白色污染问题的，共同呵护环境。
参考内容
一、常用的细胞培养方法
细胞培养是一种广泛应用于生物学、医学和生物技术领域的技术。细胞培养 是指将活细胞种植在适宜的基质中，通过提供适宜的营养和环境条件，使细胞在 体外繁殖和生长。常用的细胞培养方法包括悬浮培养和贴壁培养。
1、悬浮培养：悬浮培养是将细胞悬浮在培养液中，通过搅拌或振荡使细胞 均匀分布，并保持悬浮状态。这种方法适用于大多数类型的细胞，包括一些难以 贴壁的细胞。
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细胞培养常见污染的判别及应对措施2011-01-02 10:19:04| 分类：实验| 标签：污染无菌细胞培养基灭菌|字号大中小订阅一、避免细胞培养污染的措施：污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是可以避免的：1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再用酒精擦台面，紫外照20分！2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）。
5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。
6. 操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。
7. 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。
二、常见的细胞培养污染：下面是几种细胞培养过程中常见的污染：1. 支原体污染：传说中的黑焦虫，长得暴快。
24小时就满视野都是了。
污染源大多数情况下是培养用血清。
图1 支原体污染的光镜检测（圆圈所示，×10倍）图2 支原体污染的光镜检测（×20倍）图3 支原体污染的荧光检测图4 支原体污染的电镜检测（×30k，煎蛋状和其他形状）图5 支原体污染的电镜检测2. 念珠菌污染：似乎无处不在，而且顽固得很。
长得暴快（12h就能在细胞上面密布）。
培养液澄清。
低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。
图6 念珠菌污染的光镜检测（低倍镜）图7 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图8 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图9 念珠菌污染的检测（革兰氏染色阳性）这么大面积的污染，你可以看看是不是操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。
既然已经污染了，就全部更换你的器皿。
培养箱的水没有必要用无菌水，但最起码要是蒸馏水。
3.霉菌污染比较常见的一种污染，常常来源于污染的空气、水和器械。
图10 霉菌污染的光镜检测（低倍）图11 霉菌污染的光镜检测（典型的霉菌污染，肉眼看到白色的团块或白点，镜下呈丝状。
400倍）图12 霉菌污染的光镜检测（树枝状，高倍）图13 霉菌污染的倒置显微镜检测（树枝状）4. 杆菌污染：培养基中加入抗生素可以减少此种污染，但也不是绝对的。
图14 杆菌污染的光镜检测（瑞氏染色，高倍）图15 杆菌污染的光镜检测（瑞氏染色，低倍）细胞中的颗粒到底是怎么回事？我的细胞总有颗粒，开始是细胞中有，后来细胞之间也好像有许多颗粒。
好像是细胞碎片一样。
是什么东西啊？是支原体污染吗？这可是我刚买回来的细胞啊!我们实验室也有这种情况，是不是黑的小碎片，有人说是细胞代谢产物，后来拿到高倍镜下看还会动，就怀疑是污染了，也想问问大家到底是什么是黑色的小碎片。
我没注意到它会动，只是觉得不像是活的微生物。
我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差，裂解出的东西。
但是，是什么东西不清楚。
的确很常见在以前帖子见到说是“黑焦虫”。
长时间培养的很容易出现，我根据自己的经验估计是一种污染，因为随着黑点增多，本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。
而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现，我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。
不过增加换液次数的情况下，好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。
以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题，可以有条件换进口血清试试，或者离心一下也可能能解决问题。
那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊？有谁知道？我培养的细胞也出现过此中问题，放到高倍镜下看时有东西在动，但培养液不混浊，估计不是细菌污染，可能是血清问题，是支原体污染。
我培养的细胞也出现过这样的问题，我个人认为是一种支原体污染。
国产血清是罪魁祸首，因为只要将细胞饥饿一下，不超过24小时，这种东西就会疯长我培养的细胞也有出现这中情况。
但是并不影响细胞生长。
应该不是支原体污染最近，我复苏细胞细胞的时候也发现过这样的东西，尽管我用的是GIBCO的FBS，后来，每天换液之前洗几遍后，就慢慢变少，现在没了细胞培养的细菌污染我们新建的细胞室。
每周都会做清洁，用0。
2%新洁尔灭消毒，照紫外。
实验前也会照至少30分钟。
培养基中加青霉素，链霉素。
可是培养细胞时还是常有细菌污染，有时甚至分析不出原因。
用培养瓶还好一点，用多孔板或平皿就更凄惨。
我养的是哺乳动物细胞，不知各位有什么好的方法避免污染！谢谢！很可能是超净台无效了，，或者培养基？其实严格操作箱污染都难我们是新的超净台，不可能失效。
而且用同一瓶培养基，一瓶传两瓶，原始的一瓶污染，新传的很好。
所以我分析不出原因呀那么假如把原始的那瓶换新瓶养可以么？都污染了，我仍还来不及，那还敢换新瓶染菌有很多原因，因为整个细胞操作过程均要求无菌，所以看看操作是否规范，例如戴手套等。
多半是环境因素，做点平板，操作时放在几个地方，培养后看看长菌情况。
消毒用新洁尔灭好象不是太有用。
人是最大的污染源，不知你做好手部的消毒工作以及戴口罩没有，其实，只要你操作的好，严格在靠近火的附近操作，污染的几率是很小的。
从你的描述中可以看出培养基应该没有问题，新的一瓶很好，老的一瓶污染，只有操作不当引起的，还需要加强练手。
求助！关于细胞培养中的真菌污染！感激！先谢谢大家的帮助！现在细胞培养基里出现了很多白色和黑色的小点，有好长的时间了！细胞的形态看起来不太好，但是有些细胞也长的很好，如成纤维细胞，但是内皮细胞就差很多！加大量的抗生素没有效果！不知道是不是真菌污染，怎么鉴别！因为培养了很长时间都没有出现真菌的菌丝，所以不能肯定是真菌！那些白色的小圆点有点象白色链球菌或链珠菌，但是不能确定！怎么样才能判断确定，改用什么办法解决！谢谢大家的帮助！杀灭真菌听说用两性霉素，但从没试过。
真菌污染是件很麻烦的事，可能重新复苏细胞是最好的办法。
同时该注意如何防止污染。
我觉得如果是真菌污染，培养基会浑浊，是肉眼可见的浑浊。
在这种情况下最好赶紧将该瓶细胞扔掉，免得引起培养箱中的大规摸污染。
在显微镜下，真菌是成念珠状的，这时细胞界限不清。
这可能是不规范操作引起的，安全起见还是将细胞室全面打扫一下，用新洁尔灭擦，紫外照！谢谢大家的帮助，因为实验室以前从来就没有这样的污染，所以大家也没有经验！现在就是不能确定是不是污染。
我不可能把实验室所有的细胞都扔掉，因为有好多人都在一起养不同类型的细胞！现在确实是问题，培养基也没有浑浊，操作的时候已经十二分的小心了！我想问一下，你看到的那些白色或黑色的圆点是在低倍还是高倍显微镜下？若培养基不混浊，可能真的是细胞状态太差，没有贴壁还缩成球状。
难道你们实验室所有细胞都用一瓶培养基？只要将污染的扔掉就行，没必要都扔掉！两性霉素！sigma在华美有分装！但是浓度很小，关键还是环境问题！黑白圆点在100倍显微镜下有多大，是不是酵母菌小黑点和小白点是在200倍的显微镜下观察所见，大小可能是细胞核的1/5到1/4左右！细胞状态不好是因为跟以前培养的细胞来比较所得，细胞能贴壁，能生长，但是没有以前的那么快，而且形态看的也不好！另外问一下sleevexz，酵母菌是什么样的，怎么鉴别！还有一个问题就是，实验室用的双抗是从Gibco公司买过来的直接使用的液体，具体规格是100ml一瓶，Pelicillin-Streptomycin 一起，50倍的，要求储存在－20 C，但是有效期只到2002年9月，现在都已经差不多过期半年了，但是实验室的老师都说没有问题，可以用，现在大家就都是一直用这样的抗生素在！你们说会不会是抗生素的问题的！养细胞经常无缘无辜的染菌？烦烦烦！！！！我是一个新手，但已养细胞近半年，最近一段时间经常染菌，有时是培养基，有时连原因都找不到，在实验中我也非常小心，但结果总让我伤心。
现在都有点神经质了，请各位指点你这个问题说大不大，说小也不小。
说不大呢，七个字就可以回答你：严格按照无菌要求。
说不小呢，这无菌要求的话匣子一打开太大。
还是简要吧：1.将试验用品放入超净工作台用紫外线照射30分钟；2. 照射30分钟后，进入缓冲间，换灭菌的无菌衣，换专用拖鞋；3.手部用5％的洁尔灭浸泡2分钟，进入洁净区后，用75％的酒精棉球再次擦拭裸露的手部。
4.最好戴口罩；5.操作时尽量靠近火焰；6.装培养基的瓶子等不要直接口向上，用一个架子斜放，瓶口朝向火焰；7.标准操作，不要让无菌吸管到处碰来碰去；8.中途出入无菌室，再次操作时，一定要再次用75％的酒精棉球消毒。
一下也想不了那么多，具体的你再问吧。
最好把你怎么操作的过程描述一遍，我们就好针对性的指出错误了。
建议你把细胞室，好好清理一下，污染是这样的，出现一次就比较麻烦，千万别急。
还有，你们的紫外灯没有问题吧？非常感谢楼上的回信，在操作中我也严格按照无菌要求去做，因为操作台是公用的，而其它同学很少染菌，我想主要问题应在我身上，但是又找不到主要原因。
我一般是这样操作的：紫外照后，用酒精棉檫拭手部开始操作，基本步骤是吸培养液到方瓶，再在方瓶中吹打混合，按比例传代，有时吸管头部碰在培养瓶口，有时吸管口棉花塞的太紧或太松不好用，有时原因都找不到，请各位指点。
戴手套试试巴最好是涂片看看是什么菌？注意操作，吸管碰别处立即更换。
污染是常有的事，也不必太给自己压力，熟能生巧。
你的滴管吸管进培养液瓶和细胞培养瓶前要在酒精灯上仔细烤一下，滴管不要反复用。
其实无菌操作第一重要的就是你的超净台是不是还能用，滤网要及时清洗的。
其次就是瓶口、滴管、移液器操作是过火的是否正确。
还有一点很重要，手一定不能在任何瓶口上方经过！从你操作的步骤来看，你的细胞应该是很好操作的。
没看到你要用消化液，这就减少了污染的机会。
你用的吸管是自己做的吗？经常练练，熟能生巧，时间长了，你就知道如何控制所塞的棉花量了。
（用牙签或12号针头等工具来塞比较方便，塞完后用火将露出的部分烧掉再灭菌，这样就不会在上吸耳球的过程中，出现将棉花弄掉的情况），另外，你要勤剪指甲，不要戴首饰，吸管一周灭一次菌，不要没用完老用。
操作是导致污染的最主要原因根据本人的经验，操作是导致细菌污染的最主要原因。
本人以前曾经在一个相当严格的实验室工作过，那里的细胞室的要求是按照外科手术室要求的，更衣，换鞋，洗手，酒精擦手，戴口罩、帽子，所有培养液中加双抗，所有细胞操作器械专用；每天紫外灯照射40分钟后才允许进入。