细胞培养失败常见原因及对策

细胞不贴壁、生长缓慢的原因及需要采取的措施

细胞不贴壁、生长缓慢的原因及需要采取的措施
细胞不贴壁和生长缓慢可能有多种原因，以下是一些可能的原因和相应的解决措施：
1.细胞培养基成分不合适：细胞培养基中的营养物质、生长因子、激素等成分可能不适合细胞的生长。

解决措施是优化培养基配方，包括调整营养物质比例、添加适当的生长因子和激素，以促进细胞的贴壁和生长。

2.细胞培养条件不适合：细胞培养的温度、湿度、氧气水平等
条件可能影响细胞的生长和附着。

需根据细胞类型和培养要求，调整相应的环境条件，以提供适合细胞贴壁和生长的环境。

3.细胞质量或活力下降：细胞质量下降、活力降低会导致细胞
不易贴壁和生长。

解决措施包括使用新鲜的、符合要求的细胞，以及定期检测和评估细胞活力，及时替换或重新培养新的细胞。

4.细胞的黏附能力差：有些细胞本身的黏附能力较差，导致其
不易贴壁和生长。

解决措施可以通过前处理细胞培养器皿，例如先涂覆胶原或明胶等物质，增加细胞贴壁的能力。

5.细胞培养器皿不适合：不同类型的细胞对不同的培养器皿有
不同的黏附性和生长要求。

需根据细胞类型选择合适的培养器皿，例如使用涂有胶原或明胶的培养器皿，或使用低黏附性的培养器皿，以方便细胞的贴壁和生长。

总之，通过优化培养基配方、调整培养条件、保证细胞质量和
检测细胞活力，选择合适的培养器皿等措施，可以解决细胞不贴壁和生长缓慢的问题。

细胞培养常见问题的原因及对策

细胞培养常见问题的原因及对策细胞培养中的注意事项1 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37 C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。

另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。

2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。

每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。

血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。

来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。

CS (calf serum) 则是指小牛血清。

HS (horseserum) 则是指马血清。

6 培养细胞时应使用5 %或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。

当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5% CO2培养细胞。

7 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

细胞培养中的细胞生长受阻原因分析

细胞培养中的细胞生长受阻原因分析细胞培养是一项重要的生物学实验技术，通过在体外模拟和控制细胞的生长环境，可以对细胞的生理和病理过程做出研究。

然而，经常会遇到细胞生长受阻的情况，这会给实验结果带来负面影响。

本文将对细胞培养中细胞生长受阻的原因进行分析。

1. 细胞因子不足细胞因子是细胞生长和分化所必需的信号分子，它们可以刺激细胞增殖、分化和迁移等生理过程。

当细胞培养中细胞因子的浓度不足时，就会导致细胞生长受阻。

细胞培养基中通常会添加生长因子和血清等成分来提供细胞所需的因子，如果这些成分的浓度不够，就会导致细胞无法正常生长。

此外，细胞因子的失活、降解和结合等因素也可能导致细胞因子不足，从而影响细胞的生长。

2. 细胞培养基成分不合适细胞培养基的成分对细胞的生长起着重要作用。

培养基中的营养物质、无机盐和氨基酸等对细胞提供生长所需的能量和原料。

如果细胞培养基中这些成分的浓度或比例不合适，就会影响细胞的生长。

例如，缺乏特定的氨基酸或无机盐，细胞无法正常合成蛋白质或维持正常的细胞电位，从而导致生长受阻。

3. 细胞环境不适宜细胞培养的环境包括温度、湿度、气体组成等因素，这些因素对细胞的生长有着重要影响。

细胞培养一般需要保持在37°C的温度下，过高或过低的温度都会对细胞生长产生不利影响。

湿度的控制也很重要，如果湿度不适宜，细胞会失去活力。

此外，气体组成也会影响细胞的生长，例如，细胞需要适当的氧气浓度来进行代谢，过高或过低的氧气浓度都会导致细胞生长受阻。

4. 细胞污染细胞培养过程中，可能会出现细菌、真菌和病毒等污染物的存在。

这些污染物会竞争细胞培养基中的营养物质和生长空间，导致细胞生长受阻。

此外，某些污染物也可能释放毒性物质，对细胞产生直接伤害。

因此，在细胞培养过程中，严格的无菌操作和培养基消毒是细胞生长顺利进行的关键。

5. 细胞凋亡和细胞周期调控失衡细胞生长受阻的另一个重要原因是细胞凋亡和细胞周期调控失衡。

细胞培养过程中常见的变异问题分析与解决方法

细胞培养过程中常见的变异问题分析与解决方法细胞培养作为生物学研究中重要的实验手段之一，被广泛应用于细胞生物学、生物医学研究和药物研发等领域。

然而，在细胞培养过程中，常常会遇到各种变异问题，如细胞形态改变、生长速度减慢以及细胞死亡等等。

本文旨在分析这些常见的变异问题，并提供相应的解决方法。

一、细胞形态改变细胞形态的改变是细胞培养过程中较为常见的变异问题之一。

通常，细胞形态的异常变化可能包括细胞变大或变小、细胞伸长或收缩等。

这些变异往往会导致细胞功能和代谢活性的改变，从而影响实验结果的准确性。

解决方法：1. 检查培养条件：首先，应对培养基质及培养液的pH值、温度、含氧量等因素进行仔细的调控与监测，以确保细胞处于适宜的生长状态。

2. 检测浓度：根据细胞系的特性，调整培养基中添加物的浓度，如血清、酶消化液等，以维持适当的细胞形态。

3. 鉴别混杂：定期进行细胞株的鉴别，避免因细胞混杂导致形态异常。

二、生长速度减慢细胞在培养过程中，如果出现生长速度减慢的情况，可能会严重影响实验进展与结果的获取。

细胞生长速度的减慢可能是由多种因素引起的，如细胞老化、细胞密度过高、培养液中营养物质不足等。

解决方法：1. 细胞分离：及时将细胞进行适当的分离，避免细胞在培养中过度堆积，从而影响生长速度。

2. 营养补充：调整培养基中的营养物质浓度，确保细胞处于良好的生长环境中，并加强对细胞的营养补充。

3. 细胞凋亡检测：定期检测和评估细胞凋亡的情况，如有需要，可采取相应的干预措施，以保证细胞群体的健康状态。

三、细胞死亡细胞死亡是细胞培养过程中常见的变异问题之一，其发生率可能由多种因素决定，如感染、细胞凋亡、培养条件不良等。

细胞死亡不仅会影响细胞培养的连续性，也会对实验结果的可重复性产生不良影响。

解决方法：1. 检测感染：对培养基进行微生物污染检测，避免细菌、真菌等微生物的感染，导致细胞死亡。

2. 调整培养条件：对培养条件进行优化，如温度、培养基组分等，保证细胞处于最适宜的生长状态。

细胞实验中常见问题

细胞实验中常见问题
一、细胞培养问题
1.1 细胞生长缓慢或停止生长：可能原因是营养物质不足、血清质量不佳、培养箱温度不稳定或CO2浓度不正确等。

1.2 细胞形态异常：可能是由于培养基问题、营养不足、感染或污染等原因。

1.3 细胞结块：可能是由于细胞密度过大或血清用量过多等原因。

二、细胞活性检测问题
2.1 实验结果不一致或不准确：可能是由于试剂问题、操作误差或实验条件不稳定等原因。

2.2 假阳性或假阴性结果：可能是由于抗体交叉反应、实验操作不当或细胞状态不佳等原因。

三、细胞转染问题
3.1 转染效率低：可能是由于转染方法不正确、转染试剂选择不当或细胞状态不佳等原因。

3.2 细胞毒性：可能是由于转染试剂用量过多或转染条件不适应等原因。

四、细胞计数与消化问题
4.1 细胞黏附性强，不易消化：可能是由于细胞类型或状态不适应于消化方法等原因
4.2 细胞碎片多，影响计数：可能是由于消化过度或消化不充分等原因。

五、细胞标记与染色问题
5.1 染色不均匀或不显色：可能是由于染色时间过短或过长、抗体浓度不当或细胞状态不佳等原因。

5.2 非特异性染色问题：可能是由于抗体交叉反应或抗体纯度不佳等原因。

六、细胞分型与鉴定问题
6.1 分型结果不准确：可能是由于抗体选择不当、操作误差或细胞状态不稳定等原因。

6.2 鉴别困难：可能是由于细胞分化程度高、抗原表达量低或鉴别方法不敏感等原因。

七、细胞感染与病毒问题
7.1 细菌污染：可能是由于培养基或细胞株本身带菌等原因。

7.2 支原体污染：可能是由于培养环境不洁净、操作过程中污染等原因。

细胞培养失败常见原因及对策

表：细胞培养失败常见原因及对策
出现问题可能原因解决办法
培养基中pH 错误的CO2浓度调节C02浓度
快速改变[NaHC02]2-3.7g/L,[C02]5-10%
培养瓶盖子过紧稍放松盖子
缓冲液量不足加HEPES至最终浓度为10-20mM
细菌、酵母和丢弃培养物、避免污染
真菌污染
细胞不贴壁过量的胰酶消化减少胰酶浓度或消化时间
培养基中无粘附因子加大血清浓度或增加粘附因子
细菌、霉菌、支原体污染检查并去除污染或丢弃
物理、化学污染去除相关污染
细胞生长速度降低改变培养基或血清比较培养基中成分,新旧血清比较
缺乏促进生长成分传代培养,加新鲜培养基和
如谷氨酰胺或生长因子生长促进成分
培养基储存不当保存在2-8℃，
血清培养基应尽量避光
初次细胞接种量少增加细胞接种数量
细胞衰老取得新细胞株
低度细菌和真菌污染无抗生素的培养基,如被污染，
则丢弃
支原体污染隔离培养,如污染,丢弃
细胞死亡无C02 检测C02
温度波动检验温度
抗生素浓度超量有毒性少量使用抗生素
细胞复苏受损重新复苏
渗透压错误检测培养基渗透压
产生毒性代谢物去除并更换培养基
细胞成团悬浮Ca，Mg离子存在用无Ca2+，Mg2离子的平衡
盐溶液清洗细胞
支原体污染隔离培养,检验支原体污染,
如已经污染,则丢弃
胰酶过量,细胞DNA释放用DNase处理细胞
细胞形态、生长
状况改变细胞间污染更换细胞。

组培中易出现的问题及解决措施

组培中易出现的问题及解决措施组织细胞培养是一项非常重要的生物技术，它可以用来从单个细胞中培养出成千上万个细胞。

组织细胞培养的应用非常广泛，从基础生物学到医学应用都有着重要的作用。

组织细胞培养的成功需要正确的实验计划、培养条件和技术操作等多个方面因素的支持。

尽管组织细胞培养已经有着相对成熟的技术和应用，但是在实验过程中还是经常会出现一些问题，这些问题可能会导致实验出现失败，影响实验的准确性和可靠性。

因此，在组织细胞培养中，我们需要特别注意常见问题，并尝试寻找解决方案。

一、细胞培养过程中细胞死亡在组织细胞培养过程中，细胞死亡是一个非常常见的问题。

细胞死亡可能是由于培养环境不适宜、细胞器受损等多种原因引起的。

首先，我们需要确认细胞死亡的原因。

若是由于细胞培养环境不适宜所引起的，则我们可以通过调整培养条件来解决问题。

例如，我们可以改变培养基配方、调整 pH 值或温度来提高培养环境的适宜性。

此外，如果细胞死亡是由于受到刺激性化合物的作用或者细胞器损伤所致，我们可以考虑加入一些细胞保护剂或体外作用因子，保护细胞的生命活力。

如果细胞死亡造成严重损失，我们需要重新设计和实施实验。

二、细胞表型不稳定在细胞培养中，细胞表型不稳定也是一个常见问题。

细胞表型不稳定有时候可能由于细胞培养环境的改变，例如培养温度或半衰期等变化，也可能由于细胞的遗传学变异。

为了解决这个问题，我们需要尽可能保持细胞培养环境的稳定性并且进行维护，避免温度、血清物质浓度和酸碱度等变化。

此外，通过使用抗生素、氢化叶酸和选择性试剂等方法可以限制细胞遗传学变异的发生。

三、细菌侵染在细胞培养中，细菌侵染也是一个常见的问题，尤其在长期培养和细胞密度过高的情况下。

细菌侵染可能会损害细胞生长、侵入细胞免疫系统，甚至造成病毒和真菌感染。

为了解决这个问题，我们需要加强无菌技术操作，避免细菌的外源性污染，并及时采取细胞毒性药物或细菌毒素的处理措施来杀灭细菌。

四、细胞品种污染细胞品种污染也是组织细胞培养中经常遇到的问题之一。

细胞培养中的常见问题及解决方法

细胞培养中的常见问题及解决方法细胞培养是现代生命科学研究中常用的实验技术之一，可以用于细胞增殖、分化、转染等研究。

然而，细胞培养过程中常常会出现一些问题，如细胞污染、细胞凋亡和细胞失活等。

本文将讨论细胞培养中的这些常见问题，并提出相应的解决方法。

1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中的一大难题。

它可以由细菌、真菌或其他细胞类型的污染引起。

细胞污染会影响实验结果的准确性，并可能导致细胞系的丢失。

为了解决这个问题，我们可以采取以下措施：（1）经常检查细胞培养器具和培养基，确保其无菌；（2）使用抗生素或抗黴剂对培养基进行预处理，以减少污染的风险；（3）定期进行污染检测，例如细胞培养液和工作区的表面。

2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一部分，但在细胞培养中，过多的细胞凋亡会导致实验结果的误差。

为了减少细胞凋亡的发生，我们可以考虑以下措施：（1）优化培养条件，包括温度、CO2浓度和培养基配方等；（2）定期检查细胞形态和健康状况，及时处理出现凋亡现象的细胞；（3）使用细胞凋亡检测工具，如Annexin V-FITC/PI染色法，来评估细胞凋亡水平。

3. 细胞失活细胞失活现象在细胞培养中常常发生，可能是由于细胞老化、无营养补充或培养条件不佳等原因引起。

为了避免细胞失活的发生，我们可以尝试以下方法：（1）及时更换培养基，确保细胞获得充足的营养物质；（2）避免过度培养，及时传代细胞；（3）定期鉴定细胞的纯度和活力，并确保培养条件适当；（4）尝试使用细胞增殖激素或生长因子来促进细胞的增殖和存活。

细胞培养中的常见问题并不局限于上述三个，还有其他一些问题，例如细胞出现突变、细胞凝固等。

针对这些问题，我们可以进一步深入研究并寻找解决方法。

同时，注意维持实验室的清洁和规范操作也是解决这些问题的关键。

细胞培养在生命科学研究中发挥着重要作用。

了解并解决细胞培养中的常见问题，有助于提高实验结果的准确性和可重复性。

通过合理的实验设计、严谨的操作和科学的方法选择，我们可以克服这些问题，为细胞培养研究的进展做出贡献。

恶性胸水培养肿瘤细胞失败原因分析

昆明医学院学报
２１，（：７９０１５）４４
ＣＮ３—１４／Ｒ５０９
ＪｕｎｌｏｎｉｇＭｅｉａｉｅｓｔｏｒａｆＫｕｍｎｄｃｌＵｎｖｒｉｙ
恶性胸水培养肿瘤细胞失败原因分析
周开华 ” ，陈晓丹，宋鑫ｚ（）昆明市第一人民医呼吸二科，云南昆明６０１；２）昆明医学院第三附属医院生物免疫治疗中１５０１
ｍａｉｎａｔｈｄｏｈｒｘＣｅｌｃｌｕｒｏｎｔｍｅ．ｔａｐｒｔｏｔｃｌｒｓｒａｉｎ，ａｄｆｏｌｓｓｃｅｒｎｅｌｇｎｙｒｔｏａ．ｌｕｔｅｎｔｉｉｒｎｓｏｔｗｉｈｕｏｄｐｅｅｖｔｏｎｉｂａｔｌａａｃｂｒｎｔｎｔｍｅａｅａｓｍｐｒａｔａｅｆｆｉｕｅｉｕｒｃｌｓｃｔｅｆｏｍａｉｎｎｙｒｔｒｘｏｉｒｌｏｉｏｎｕｓｓｏｌｒｎｔｍｏｅｌｕｌｒｍｌｇａｔｄｏｈｏａ．ｉｔｃａｕｒｈ
心，云南昆明６０１）５０１
［摘要］目的目前在肿瘤化疗体外药敏及生物免疫治疗中很重要的一个步骤是获取原代肿瘤细胞，通过
对培养失败的原因分析，揭示肺部肿瘤细胞原代培养中应注意的问题，以便今后选择正确的培养方法，避免再走弯路．方法无菌条件下取恶性胸水沉渣接种于ＲＭＩｄｕ６０Ｐｉｍ１４，观察细胞生长情况．结果Ｍｅ１５例标本

细胞培养失败常见原因及对策

表：细胞培养失败常见原因及对策
出现问题可能原因解决办法
培养基中pH 错误的CO2浓度调节C02浓度
快速改变[NaHC02]2-3.7g/L,[C02]5-10%
培养瓶盖子过紧稍放松盖子
缓冲液量不足加HEPES至最终浓度为10-20mM
细菌、酵母和丢弃培养物、避免污染
真菌污染
细胞不贴壁过量的胰酶消化减少胰酶浓度或消化时间
培养基中无粘附因子加大血清浓度或增加粘附因子
细菌、霉菌、支原体污染检查并去除污染或丢弃
物理、化学污染去除相关污染
细胞生长速度降低改变培养基或血清比较培养基中成分,新旧血清比较
缺乏促进生长成分传代培养,加新鲜培养基和
如谷氨酰胺或生长因子生长促进成分
培养基储存不当保存在2-8℃，
血清培养基应尽量避光
初次细胞接种量少增加细胞接种数量
细胞衰老取得新细胞株
低度细菌和真菌污染无抗生素的培养基,如被污染，
则丢弃
支原体污染隔离培养,如污染,丢弃
细胞死亡无C02 检测C02
温度波动检验温度
抗生素浓度超量有毒性少量使用抗生素
细胞复苏受损重新复苏
渗透压错误检测培养基渗透压
产生毒性代谢物去除并更换培养基
细胞成团悬浮Ca，Mg离子存在用无Ca2+，Mg2离子的平衡
盐溶液清洗细胞
支原体污染隔离培养,检验支原体污
染,
如已经污染,则丢弃
胰酶过量,细胞DNA释放用DNase处理细胞
细胞形态、生长
状况改变细胞间污染更换细胞。

细胞培养常见问题的原因及对策

细胞培养常见问题的原因及对策细胞培养中的注意事项1 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37 C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。

另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。

2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。

每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。

血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。

来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。

CS (calf serum) 则是指小牛血清。

HS (horseserum) 则是指马血清。

6 培养细胞时应使用5 %或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。

当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5% CO2培养细胞。

7 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

总结植物细胞有丝分裂实验的失败分析及改进

植物细胞有丝分裂实验的失败分析及改进方案植物细胞有丝分裂观察实验是高中生物学的重点和难点实验之一其中涉及的原理技术对其后的学习具有重要意义。

然而根据目前教科书中观察植物细胞有丝分裂的方法来做实验由于材料的选择和处理中诸多不确定因素，往往出现效果不理想或者实验时间需要协调等问题，师生对此实验感受到比较棘手，不少师生对生物学实验只重视结果不重视结果分析，只满足于实验的成功而不愿意对失败原因进行阐述.一、实验存在的问题1、取材不易，培养较难镜查时找不到分裂相细胞与材料的选择和培养有关。

腐烂的洋葱长出的根数量少或不长根，培养时间长了会发臭，若把部分腐烂的洋葱和健壮的洋葱一起培养，则会使健壮洋葱长霉腐烂；同一批购买的洋葱在相同的条件下培养，有的长根有的不长根，这与洋葱的休眠有关，长霉而没有腐烂的洋葱培养出的根尖少，易腐烂散发出的气味浓，把洋葱鳞片的基部切除，因只有变态叶缺少变态茎，所以不会长根。

因此，在选择洋葱时，应选新鲜营养丰富、不长霉、不腐烂的健壮品，取材确为不易；培养时瓶内装满清水，让洋葱的底部接触到瓶内的水面，并把这个装置放在温暖的地方，注意经常换水，使洋葱的底部总是接触到水，以防止根的腐烂，这样培养对于一线的教师来说确实是一件较为繁琐的事。

2、取材时间的选定较难有丝分裂活动的高峰时间不一定恰好是实验时间。

为了能找到有丝分裂各期的典型细胞，在多数教材中，实验材料的选取多在有丝分裂活动的高峰期进行，并把剪下的根尖立即投入盐酸、酒精中固定解离（解离液是质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液按1：1的比例混合而成），但是选用不同的材料时，有丝分裂活动的高峰期不同。

例如：大蒜在13-13.5时，洋葱在11时左右和15-16时，小麦在11-13时；并且可能因品种、室温等条件不同，在各地的具体时间有所差别。

由于多数材料有丝分裂活动的高峰期并不在实验课时间，这就使实验过程中找到正处于有丝分裂时期的细胞的可能性大大降低，甚至根本找不到有丝分裂时期的细胞。

细胞培养失败常见原因及对策

表：细胞培养失败常见原因及对策
出现问题可能原因解决办法
培养基中pH 错误的CO
2浓度调节C0
2
浓度
快速改变 [NaHC0
2]2-3.7g/L,[C0
2
]5-10%
培养瓶盖子过紧稍放松盖子
缓冲液量不足加HEPES至最终浓度为10-20mM
细菌、酵母和丢弃培养物、避免污染
真菌污染
细胞不贴壁过量的胰酶消化减少胰酶浓度或消化时间
培养基中无粘附因子加大血清浓度或增加粘附因子
细菌、霉菌、支原体污染检查并去除污染或丢弃
物理、化学污染去除相关污染
细胞生长速度降低改变培养基或血清比较培养基中成分,新旧血清比较
缺乏促进生长成分传代培养,加新鲜培养基和
如谷氨酰胺或生长因子生长促进成分
培养基储存不当保存在2-8℃，
血清培养基应尽量避光
初次细胞接种量少增加细胞接种数量
细胞衰老取得新细胞株
低度细菌和真菌污染无抗生素的培养基,如被污染，
则丢弃
支原体污染隔离培养,如污染,丢弃
细胞死亡无C02 检测C02
温度波动检验温度
抗生素浓度超量有毒性少量使用抗生素
细胞复苏受损重新复苏
渗透压错误检测培养基渗透压
产生毒性代谢物去除并更换培养基
细胞成团悬浮 Ca，Mg离子存在用无Ca2+，Mg2离子的平衡盐溶
液清洗细胞
支原体污染隔离培养,检验支原体污
染,
如已经污染,则丢弃
胰酶过量,细胞DNA释放用DNase处理细胞
细胞形态、生长
状况改变细胞间污染更换细胞。

细胞培养常见细菌污染原因

细胞培养常见细菌污染原因细胞培养是生物学研究中常用的实验技术，用于研究细胞的生理、生化和分子生物学特性。

然而，细胞培养过程中常常会受到细菌污染的影响。

细菌污染会对细胞培养的可靠性和准确性产生不良影响，因此控制细菌污染是细胞培养实验中至关重要的一步。

细胞培养常见的细菌污染原因主要有以下几个方面：1. 操作不当：细胞培养的整个过程都需要严格的无菌操作，而操作不当是导致细菌污染的主要原因之一。

无菌操作包括更换培养基、移液操作、接种细胞等，如果在操作过程中没有严格遵守消毒和无菌操作规范，就会导致细菌的进入和繁殖。

2. 试剂和培养物污染：试剂和培养物是细胞培养中常用的重要物质，如果试剂和培养物本身存在细菌污染，那么在培养过程中就会引入细菌。

试剂如培养基、酶、胎牛血清等的批次变化或不良质量，都可能导致细菌污染。

此外，非无菌的操作也会导致试剂和培养物的污染。

3. 实验室环境污染：实验室环境中存在微生物的存在，如桌面、空气、实验器皿等都可能存在细菌。

如果实验室的环境清洁度不够高，容易造成细菌污染。

此外，实验器皿如培养皿、离心管等的洗涤和保存也需要保证无菌操作。

4. 人员因素：人员的操作能力和操作习惯也会影响到细菌污染的发生。

操作人员应该保持良好的个人卫生习惯，定期对手套、实验服等进行更换和清洗。

如果操作人员不注意操作细节，如不合理的移液操作、使用不干净的仪器等，都可能导致细菌的污染。

5. 培养器具污染：培养器具如试管、离心管、细胞培养板等在使用之前需要经过高温和化学消毒处理，以杀灭其中潜在存在的细菌。

然而，如果器具处理不彻底或者保存环境不好，就容易导致细菌的残留或再次感染。

细胞培养中细菌污染的危害是非常严重的。

首先，细菌污染会干扰细胞培养体系的稳定，导致无法准确观察和研究细胞的生理和生化特性。

其次，细菌代谢产物和细胞培养物中含有的抗生素等成分会干扰细胞培养的正常生长和发育，降低实验结果的可靠性和准确性。

此外，由于细菌的存在，还容易导致细胞死亡和污染的蔓延，对细胞培养的连续性和稳定性造成不可逆的伤害。

植物组织培养常见失败原因

植物组织培养常见失败原因植物组织培养是一种将植物细胞或组织培养于无菌条件下，通过调节培养基中营养物质和激素的浓度，促使细胞或组织快速增殖和分化的技术。

然而，在实践中，植物组织培养常常会面临许多失败的挑战。

下面将介绍植物组织培养中常见的失败原因。

第一，原料选取不当。

植物组织培养需要使用健康且无病原体的组织或种子作为起始材料。

如果选取的组织或种子存在病原菌、真菌污染或已经失活，那么培养过程中很可能会导致失败。

因此，在进行组织培养前，必须对起始材料进行消毒处理，以确保无菌。

第二，环境因素不适宜。

组织培养需要在特定的环境条件下进行，包括温度、光照、湿度和气体浓度等。

如果环境温度过高或过低、光照不足或过强、湿度不够或过高，或者气体浓度不合适，都会对组织培养的成功率产生影响。

因此，在进行组织培养时，要选择适宜的实验室条件，并严格控制环境参数。

第三，培养基成分不合理。

培养基是植物组织培养中非常重要的因素之一，它提供了必需的营养物质和激素来支持细胞或组织的生长和分化。

如果培养基中营养物质过少或过多，或者激素浓度不合适，都会对组织培养的成功产生影响。

因此，在制备培养基时，要准确地配制营养物质和激素，并进行适当的调整。

第四，污染现象的发生。

由于植物组织培养需要在无菌条件下进行，因此，污染成为影响成功率的一个主要因素。

污染可以来自起始材料、培养器皿、培养基或操作者等多个方面。

常见的污染源包括细菌、真菌、酵母菌等微生物，以及灰尘、皮屑等异物。

为了避免污染，必须进行严格的无菌操作，并确保材料和设备的无菌。

第五，植物基因型和酶活性的影响。

不同植物的基因型和酶活性可能存在差异，这会影响组织培养的成功率。

有些植物品种对组织培养非常敏感，容易出现培养失败的情况。

此外，在进行组织切割和悬浮培养时，细胞酶的活性可能会导致组织断裂或无法分化。

因此，在进行植物组织培养前，要充分了解植物的基因型和酶活性，并选择合适的操作方法和培养条件。

第六，愈伤组织的选择和建立。

整理了cho工艺培养中的常见问题

整理了CHO工艺培养中的常见问题一、介绍C H O细胞是重要的哺乳动物细胞表达系统之一，广泛应用于生物制药领域。

在CH O工艺的培养过程中，常常会遇到一些问题，本文将整理常见的问题，并提供解决方案，帮助研究人员更好地进行CH O工艺培养。

二、常见问题与解决方案2.1细胞生长问题2.1.1细胞生长速度过慢细胞生长速度过慢可能是由于以下原因导致的：1.营养物质不足：检查培养基成分，确保细胞所需的营养物质充足；2.麻烦问题：问题描述3.麻烦问题：问题描述4.麻烦问题：问题描述解决方案：1.检查培养基成分，确保细胞所需的营养物质充足；2.麻烦问题：解决方案3.麻烦问题：解决方案4.麻烦问题：解决方案2.1.2细胞过度生长细胞过度生长可能会导致浓度过高和滞后期延长。

为解决这一问题，可以考虑以下措施：1.改变培养基配方，减少细胞生长因子的浓度；2.麻烦问题：问题描述3.麻烦问题：问题描述4.麻烦问题：问题描述解决方案：1.改变培养基配方，减少细胞生长因子的浓度；2.麻烦问题：解决方案3.麻烦问题：解决方案4.麻烦问题：解决方案2.2细胞代谢问题2.2.1酸碱平衡问题细胞培养过程中，酸碱平衡是一个重要的参数。

酸碱平衡问题可能会导致细胞代谢异常，影响细胞生长。

以下是常见的酸碱平衡问题及解决方案：1.培养基p H过高或过低：调整培养基pH，使用缓冲液进行调节；2.麻烦问题：问题描述3.麻烦问题：问题描述4.麻烦问题：问题描述解决方案：1.调整培养基p H，使用缓冲液进行调节；2.麻烦问题：解决方案3.麻烦问题：解决方案4.麻烦问题：解决方案2.2.2能量代谢问题细胞能量代谢异常会影响细胞生长和产物表达。

以下是常见的能量代谢问题及解决方案：1.缺乏能量源：确保培养基中含有合适的能量源，如葡萄糖；2.麻烦问题：问题描述3.麻烦问题：问题描述4.麻烦问题：问题描述解决方案：1.确保培养基中含有合适的能量源，如葡萄糖；2.麻烦问题：解决方案3.麻烦问题：解决方案4.麻烦问题：解决方案三、结论通过对C HO工艺培养的常见问题的整理，可以帮助研究人员更好地解决培养过程中遇到的困难。

细胞培养过程中可能出现的问题及其解决方法

细胞培养过程中的常见问题及其解决方法一、培养液pH 值变化太快可能原因：1、CO2 张力不对；2、培养瓶盖拧得太紧；3、NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足；4、培养液中盐浓度不正确；5、细菌、酵母或真菌污染。

解决方法：1、（1）按培养液中NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度，2.0g/L 到3.7g/L 浓度NaHCO3 对应CO2 浓度为5％到10％。

（2）改用不依赖CO2 培养液。

2、松开瓶盖1/4 圈。

3、加HEPES 缓冲液至10 到25mM 终浓度。

4、在CO2 培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks 盐配制的培养液。

5、丢弃培养物或用抗生素除菌。

二、培养液出现沉淀，但pH值不变解决方法：1、用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来。

冰冻保存培养液。

2、用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌。

3、将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。

三、培养液出现沉淀，同时pH 发生变化原因：细菌或真菌污染解决方法：丢弃培养物。

或用抗生素除菌。

四、培养细胞不贴壁原因：1、胰蛋白酶消化过度；2、支原体污染；3、培养液中无贴壁因子。

解决方法：1、缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。

2、分离培养物，检测支原体。

清洁支架和培养箱。

如发现支原体污染，丢弃培物。

五、悬浮细胞成簇原因：1、培养液中含钙、镁离子；2、支原体污染；3、蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA。

解决方法：1、用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。

2、分离培养物，检测支原体。

如发现支原体污染，丢弃培养物。

3、用DNase I 处理细胞。

六、培养细胞死亡原因：1、培养箱内无CO2；2、培养箱内温度波动太大；3、细胞冻存或复苏过程中损伤；4、培养液渗透压不正确；5、培养液种有毒代谢产物堆积。

解决方法：1、检测培养箱内CO2；2、检查培养箱内温度；3、取新的保存细胞种；4、检测培养液渗透压，注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260 – 350 mOsm/kg；5、加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压；6、换入新鲜培养液。

杂交瘤细胞培养过程的问题、原因及解决方法

杂交瘤细胞培养过程中遇到的问题、产生的原因及解决办法1.杂交瘤细胞初次培养及复苏效果不佳，如何解决此问题？解析：杂交瘤细胞系种类繁多，并不是所有的细胞系都能直接适应无血清培养基，如无法适应请先按照购买公司驯化适应程序进行细胞驯化，驯化后的细胞即可完全适应本公司的无血培养基。

复苏问题：如冻存的杂交瘤细胞活率较低，复苏时可加5%胎牛血清于无血清培养基中，可修复受损细胞的状态，细胞复苏时接种密度要求大于1x105cells/mL，可保证更好的复苏率。

2.杂交瘤细胞传代最低接种密度是多少？最佳的接种密度是多少？解析：经过我们反复测试，最低接种密度极限值,1x104cells/mL，此密度仍可正常培养杂交瘤细胞，但细胞生长周期较长，6-7天达到峰值。

最佳接种密度为1-2x105cells/mL，3-4天可达到峰值，细胞生长周期短，适合工业客户。

3.无血清培养杂交瘤细胞最大生长支持密度多少？怎么我养的几种杂交瘤细胞差距很大？解析：由于杂交瘤细胞系种类繁多，不同的细胞系最大生长密度也不一致，目前我们测试的细胞株最高的密度可到3x106cells/mL，最低的密度在1.6x106cells/mL。

这取决于所培养的细胞株本身的特性。

4.我培养的杂交瘤细胞抗体表达量总是很低，有办法进一步提高抗体表达量吗？解析：北京友康公司在杂交瘤细胞培养方面，引入了全新的培养袋法，IgG 表达量可从300~400mg/L提高到480~520mg/L，我们可提供相关技术支持。

5.贵公司无血清培养杂交瘤细胞抗体表达一般在什么水平？目前我公司测试的两株细胞系，IgG抗体最高表达量在480~520mg/L，国外培养基IgG抗体最高表达水平在400~500mg/L，我公司的产品在抗体表达量上有明显的优势。

友康恒业生物科技（北京）有限公司渠道部。

植物组培培养物的不良表现及措施

植物组培培养物的不良表现及措施一：培养物的不良及改进1.培养物水浸状、变色、坏死、茎断面附近干枯可能原因：表面杀菌剂过量，消毒时间过长，外植体选用不当（部位或时期）。

改进措施：调换其他杀菌剂或降低浓度，缩短消毒时间，试用其他部位，生长初期取材。

2.培养物长期培养几乎无反应可能原因：基本培养基不适宜，生长素不当或用量不足，温度不适宜。

改进措施：更换基本培养基或调整培养基成分，尤其是调整盐离子浓度，增加生长素用量，试用2,4-D，调整培养温度。

3.愈伤组织生长过旺、疏松，后期水浸状可能原因：激素过量，温度偏高，无机盐含量不当。

改进措施：减少激素用量，适当降低培养温度，调整无机盐（尤其是铵盐）含量，适当提高琼脂用量增加培养基硬度。

4.愈伤组织太紧密、平滑或突起，粗厚，生长缓慢可能原因：细胞分裂素用量过多，糖浓度过高，生长素过量。

改进措施：减少细胞分裂素用量，调整细胞分裂素与生长素比例，降低糖浓度。

5.侧芽不萌发,皮层过于膨大,皮孔长出愈伤组织可能原因:枝条过嫩,生长素、细胞分裂素用量过多。

改进措施：减少激素用量，采用较老化枝条。

二：培养物的不良表现及改进措施(继代培养阶段）1.苗分化数量少、速度慢、分枝少、个别苗生长细高可能原因：细胞分裂素用量不足，温度偏高，光照不足。

改进措施：增加细胞分裂素用量，适当降低温度，改善光照，改单芽继代为团块（丛芽）继代。

2.苗分化过多，生长慢，有畸形苗，节间极短，苗丛密集，微型化可能原因：细胞分裂素用量过多，温度不适宜。

改进措施：减少或停用细胞分裂素一段时间，调节温度。

3.分化率低,畸形,培养时间长时苗再次愈伤组织化可能原因:生长素用量偏高,温度偏高。

改进措施：减少生长素用量，适当降温。

4.叶粗厚变脆可能原因：生长素用量偏高，或兼有细胞分裂素用量偏高。

改进措施：适当减少激素用量，避免叶片接触培养基。

5.再生苗的叶缘、叶面等外偶有不定芽分化出来可能原因：细胞分裂素用量偏高，或表明该种植物适于该种再生方式。