动物细胞工程常用的技术手段(u用)
选修3-2.2动物细胞工程
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 植物组织培养 细胞全能性 固体培养基 蔗糖 植物激素
已分化的组织→愈 伤组织→胚状体、 丛芽→完整植株
动物细胞培养 细胞增殖 液体培养基 葡萄糖 动物血清
动物组织→单个细 胞→细胞悬液→原 代培养→传代培养
原理
培养基状态 培养基特有成分 培养过程 生长特点 接种前处理 培养目的
动物细胞培养过程中需注意的问题 2、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外， 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损 伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
二、动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境
添加一定量的抗生素，定期更换培养液
2、营养
可以补充培养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等 基中缺乏的物 质如生长因子， 通常需加入动物血清等一些天然成分 保证细胞顺利 的生长增殖
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、 习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克 隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可 能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供 体动物100%的复制。
一、动物细胞核移植技术和克隆动物
3、体细胞核移植技术的应用前景
受精卵发育成新个体的生殖方式。
无性生殖：不经过两性生殖细胞结合，直接由母体
的一部分发育成新个体的生殖方式。如细胞有丝分裂、 植物组织培养、动物体细胞核移植等。
克隆：群细胞或者生物个体。现在指个体水平的 核移植技术、细胞水平的动物细胞培养、基因水平的 DNA复制等。
⑷为什么用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以 内的细胞？ 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，
(完整word版)高中生物选修3细胞工程知识点
细胞工程考点一植物细胞工程1.细胞工程(1)操作水平：细胞水平或细胞器水平。
(2)目的：按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品。
2.植物细胞的全能性(1)概念：具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能。
(2)原理：细胞内含有本物种的全部遗传信息。
(3)全能性表达条件：具有完整的细胞结构，处于离体状态，提供一定的营养、激素和其他适宜外界条件。
3.植物组织培养技术(1)原理：植物细胞具有全能性。
(2)过程：4.植物体细胞杂交技术(1)概念：将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。
(2)原理：体细胞杂交利用了细胞膜的流动性，杂种细胞培育成杂种植株利用了植物细胞的全能性。
(3)过程(4)意义：克服不同种生物远缘杂交的不亲和性。
5.植物细胞工程的实际应用(1)植物繁殖的新途径①微型繁殖：用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术。
②作物脱毒技术：选取作物无毒组织(如茎尖)进行组织培养，获得脱毒苗的技术。
③人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。
(2)作物新品种的培育①单倍体育种a.实质：花药离体培养过程就是植物组织培养过程。
b.流程：花药单倍体幼苗――――――――→秋水仙素诱导染色体数目加倍纯合子。
c.优点：后代不发生性状分离，都是纯合子，能够稳定遗传，明显缩短了育种年限。
②突变体的利用：筛选出对人们有用的突变体，进而培育成新品种。
(3)细胞产物的工厂化生产1.植物组织培养的关键(1)条件：离体，一定营养物质，激素(生长素、细胞分裂素)等。
(2)培养基状态：固体培养基(需再分化生根培养基及生芽培养基) (3)体内细胞未表现全能性的原因：基因的表达具有选择性。
(4)光照的应用脱分化阶段不需要给予光照，再分化阶段需要给予光照，以利于叶绿素的形成。
2.杂种植物遗传物质的变化(1)遗传特性：杂种植株中含有两种植物的遗传物质，故杂种植株具备两种植物的遗传特性。
高三生物动物细胞工程练习题及答案
动物细胞工程一、单选题：1．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是A．培养中的人效应T细胞能产生单克隆抗体B．培养中的人B细胞能够无限地增殖C．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞2．单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。
下列关于单克隆抗体的叙述，错误．．的是A．特异性强、灵敏度高B．与抗癌药物结合可制成“生物导弹”C．体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体D．由效应B细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌3．关于单克隆抗体，下列叙述不．正确的是A．可以制成诊断盒．用于疾病的珍断B．可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C．可以利用基因工程技术生产D．可以在生物体内生产，不能体外生产4．下列关于细胞工程的叙述中，错误．．的是A．植物细胞融合必须先制备原生质体B．试管婴儿技术包括人工受精和胚胎移植两方面C．经细胞核移植培育出新个体只具有一个亲本的遗传性状D．用于培养的植物器官或属于外植体5．用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误．．的是A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C．用聚乙二醇（PEG）作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D．筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体6．人类寄希望于利用干细胞（人体中具有分裂、分化能力的细胞）的分离和体外培养，在体外培育出组织器官，并最终通过组织或器官移植实现对临床疾病的治疗。
能否用肌细胞代替干细胞A．不能，因为肌细胞与干细胞所含有的遗传物质不同B．不能，因为肌细胞是高度分化的细胞，没有分裂能力C．能，因为肌细胞虽然是分化的细胞，但在一定条件下也可脱分化，实现细胞全能性D．能，因为肌细胞与干细胞具有完全相同的遗传物质7．下列属于组织培养但不是克隆的是（）A．将花粉离体培养成单倍体植株B．芽发育成枝条C．根尖分生区发育成成熟区D．上皮细胞无性繁殖产生的细胞群8．动物细胞培养液和植物组织培养液的共有成分是（）A．葡萄糖B．蔗糖C．动物血清D．维生素9．动物细胞培养的细胞来自于（）A．任何个体的细胞B．只能取自动物胚胎细胞C．只能取自幼龄动物的组织细胞D．胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞10．动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是（）A.动物细胞培养B．动物细胞融合C．单克隆杭体D．胚胎、核移植11.“生物导弹”是指（）A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞D.在单抗上连接抗癌药物12．.如用动物的细胞进行克隆实验应该选择的细胞核不能是（）A、乳腺细胞的B、卵细胞的C、胃腺细胞的D、囊胚时期的胚胎细胞的13．单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基（HAT）中无法生长；而小鼠脾细胞是正常细胞，在HAT培养基上可正常存活。
2023届浙江省强基联盟高三上学期10月统测-生物
2022学年第一学期浙江强基联盟10月统测高三年级生物试题第I卷（选择题共50分）一、选择题：本题共25小题，每小题2分，共50分。
在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1.磷脂是组成细胞结构的重要成分。
下列关于磷脂的叙述，错误的是A.磷脂的元素组成至少包含C、H、O、PD.细胞内膜面积越大，细胞的磷脂含量越丰富“气味”进行“交流”，这些“气味”来自它们的排泄物，它们将排泄物涂在树干上，以此吸引异性、建立领地、稳定社群等。
该过程中传递的信息属于3.煤、石油、天然气等化石燃料的大量燃烧引起了许多生态环境问题。
下列相关叙述正确的是A.化石燃料的大量燃烧导致全球变暖、臭氧减少等C.化石燃料可由动植物残体形成，是一种可更新资源D.开发无污染新能源可以减少煤、石油的消耗量4.运动员在户外进行训练时机体会发生一系列生理变化。
下列叙述正确的是B.运动时大量消耗能量，血浆中胰岛素含量增加D.过度运动会出现脱水现象，需及时补充盐水5.转基因技术是把双刃剑，下列不属于转基因作物引发的安全性问题的是B.抗除草剂油菜成为人侵物种，降低当地生物多样性β-胡萝卜素的黄金米可以补充人体缺乏的维生素A6.下图表示4种物质跨膜运输的方式。
下列叙述错误的是A.B、C、D3种方式运输过程中，膜蛋白均发生形变C.方式B本质是一种扩散作用，但加快了扩散速率根据以下材料回答第7～8题。
某种生物体细胞中用以编码甘氨酸的遗传密码子有GGU、GGC、GGA、GGG。
已知密码子与反密码子的碱基配对是不完全严格的，其规则如表（I为次黄嘌呤，是一种特殊的碱基）。
反密码子碱基密码子碱基G UorCC GA UU AorCI A，U，orC7.推测该生物体细胞的细胞质中最少需有几种携带甘氨酸的tRNA即可符合其蛋白质翻译的需求？8.已知该生物体细胞中有足够种类的tRNA，将该生物经人工射线处理后，发现其翻译出的肽链M中第4个氨基酸由甘氨酸替换为另一种氨基酸，且其他氨基酸序列无异常。
2021-2022学年江苏省苏州市实验中学高二生物测试题含解析
2021-2022学年江苏省苏州市实验中学高二生物测试题含解析一、选择题（本题共40小题，每小题1.5分。
在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
）1. 某蛋白质含a个氨基酸，由b条肽链组成，该蛋白质至少含有氧原子数为（）A. a－bB. a＋2bC. a＋bD. a－2b参考答案：C根据氨基酸的结构通式可知，每个氨基酸至少含一个羧基（—COOH），所以a个氨基酸至少含2a个氧原子；b条肽链、a个氨基酸组成的蛋白质，在脱水缩合过程中脱去的水分子数＝氨基酸数目－肽链数＝(a－b)个，每个水分子含1个O原子，因此共脱去(a－b)个O 原子；不考虑R基，该蛋白质至少含氧原子个数＝各氨基酸中氧原子总数－脱去水分子数＝2a－（a－b）＝(a＋b)个。
因此，C项正确，A、B、D项错误。
【点睛】本题考查氨基酸的结构通式和蛋白质合成过程——氨基酸脱水缩合。
首先要求考生识记氨基酸的结构通式，掌握氨基酸的结构特点；其次识记脱水缩合的概念，掌握脱水缩合过程中的相关计算，能运用相关公式计算蛋白质至少含有氧原子的个数。
2. 动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是（）A.动物细胞培养B．动物细胞融合 C．单克隆杭体 D．胚胎、核移植参考答案：A3. 有一个老鼠的种群，最初都生活在一个地域，后来一条新建的高速公路将该种群分成A 和B两个种群。
如果A种群生活的地区发生了一系列的环境变化，而B种群的地区没有变化，则种群A进化的速率很可能是A. 比B慢B. 比B快C. 与B相同D. 开始比B慢，后来比B快参考答案：B【分析】A种群生活的地区发生了环境变化，可以加剧对A种群的选择，引起基因频率的改变，因此A种群的进化速率比生活环境无变化的B种群快。
【详解】A种群的生活环境发生变化，生物与环境相适应，因此A种群的生物经过新环境的选择，适应新环境者生存，不适应新环境者被淘汰，故A种群的生物进化的快，而B种群的生活环境保持原状，生物与环境相适应，生物没有经过环境变化的选择，因此B种群的生物进化的慢，故B正确。
动物细胞培养方法
动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。
以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。
细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。
2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。
培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。
不同的细胞系需要不同的培养基。
3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。
解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。
4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。
传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。
5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。
通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。
6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。
7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。
使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。
8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。
冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。
9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。
在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。
043动物细胞工程-第四章第三节 细胞的基本培养技术
4．重新加入TdR培养基(浓度同上)进行第2次阻断，作用16 h。
5．再弃掉TdR培养基，Hanks液洗2—3次后换上普通培养基。第2次 TdR释放0 h时取样则细胞处于G1/S期交界处；如2-7 h取样则为不同 阶段的S期细胞。 注意：具体TdR作用和释放的时间应参考每一种待 同步化细胞的细胞周期各时相测定的参考值，也可根据经验确定。
有的只有永生性和无异体接种致癌性，有些则相反（恶性）。
第四节 细胞系和细胞株的建立 一、细胞系和细胞株的种类 1．初代培养 初代培养又称原代培养，即直接从体内 取出的细胞、组织和器官进行的第一次的 培养物。
2．细胞系 初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞 系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系(finite cell line)；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞 系或无限细胞系(infinite cell line)。
位是否准确、组织是否保持活性、材料处理是否恰当，直接
1.鸡胚组织的取材：用于病毒与疫苗的研究
受精鲜蛋--孵化箱37℃孵育9-12d--从气室处
破壳--挑取鸡胚--按需取材。
2.鼠胚组织的取材：常用材料，易于培养。
杀死小鼠---75%酒精溶液整体消毒2--3s---固
定---剪开皮肤解剖取材。
2.取鼠胚：常用 材料，易于培养。
一次进行传代之前的时期，一个特征性的必然 的生长阶段。
完成了从体内环境到体外环境的过渡和适
应过程，恢复了分裂增殖与生长发育 的能力
取材——分离细胞——接种
一、原代培养
优点：组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生很 大变化，仍具有二倍体遗传特性，最接近和反映体内生 长特性，很适合作药物测试、细胞分化等实验研究。 （一）．组织取材 决定实验的成败。 取材是原代培养的最初环节，取材的部
《动物细胞工程》优秀教案
动物细胞工程
1、动物细胞工程常用的技术手段有：
①（基础）、②、
③动物细胞、④生产等。
2、动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的中，让这些细胞生长和增殖。
（1）动物细胞的培养过程：
①将组织分散成许多单个细胞。
方法是从动物体内取出组织块，剪碎，用
或处理一段时间，这样组织就会分散成单个细胞。
②用培养液将分散的细胞稀释制成，动物细胞培养时制备的细胞悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁，称为，要求培养瓶或培养皿的内表面、、易于。
当贴壁细胞分裂生长到时，细胞就会停止分裂增殖称为细胞的。
人们通常将动物组织消化后的初次培养称为。
③贴满瓶壁的细胞需要重新用等处理，然后分瓶培养，让细胞继续增殖，这样的培养通常称为。
④传代培养的细胞一般传至10代以后就不易下去了。
细胞在传至10~50代左右时，增殖会缓慢或停止。
少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限获得，正在朝着等同于的方向发展。
目前使用的或保存的正常细胞通常为以内，以保持细胞正常的核型。
（2）动物细胞培养的条件：
①的环境；对培养液和所有培养用具进行处理，还要添加一定量的，还应定期更换。
②营养与体内基本相同；需要有、、、、
等，还要加入、等天然成分。
③适宜的；
④（主要是氧气和二氧化碳，二氧化碳是，通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于的混合气体的培养箱中进行培养）。
（3）动物细胞培养技术的应用：①生产生物制品
②用于检测有毒物质，判断物质的毒性
③用于生理、病理、药理等方面的研究。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
提 问
1.其由何种细胞产生？
？
2.主要分布在哪里？
3.如何得到抗体？
思考
人们获得抗体的传统方法是?
将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体
这种方法的缺点是什么?
效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过 敏反应。
运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？ 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的 抗体呢？
5.动物细胞培养技术的应用:
1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2.应用于基因工程
主要用于作为受体细胞
3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.用于细胞的生理、药理、病理研究
为治疗和预防疾病提供理论依据 如用于筛选抗癌药物
动物细胞特点？ 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐 渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而 言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物 种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分 化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具 有全能性
细胞增殖。 问题8、动物细胞培养的原理：
问题9、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代 以内，为什么？
10代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。
问题10、为什么对动物细胞进行培养时通常要添加 血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等， 其中蛋白质为白蛋白和球蛋白；氨基酸有多种，是 细胞合成蛋白质的基本成分，有些氨基酸动物细胞 不能合成，必须由培养液提供；血清激素有胰岛素、 生长激素等及多种生长因子；还含有许多未知的促 进细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质。因 此，细胞培养要保证细胞能顺利生长和繁殖，一般 要添加10%----20%的血清。
3、单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，可大量制备。 4、单克隆抗体的应用
作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定
（CO2维持培养液的PH。）
动物细胞培养液的主要特点：
动物体细胞大都生 活在液体的环境
（1）液体培养基
与植物培养基相比其特点是： （2）含有动物血清
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
原理
培养基性质 培养基特有成分
细胞的全能性 固体培养基 蔗糖、植物激素
细胞增殖 液体培养基 葡萄糖、动物 血清
7.体细胞核移植技术存在的问题
看书P49-50页
胚胎移植－动物幼体产出 克隆动物存在着健康问题
概率＜10％
克隆动物的食品安全性问题存在争议
一、动物细胞融合 细胞杂交
1、定义：指用两个或多个动物细胞 融合成一个细胞的过程。
◆杂交细胞：融合后形成的具
有原来两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞成为杂交细 胞。 2、原理、方法：
保留融合活性 （诱导细胞融合） 细胞融合、形成杂种细胞
思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的 病毒需要灭活？不灭活行吗？
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。
4、动物细胞融合技术的应用
细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂 交成为可能。 发展起来的杂交瘤技术，制备单克隆抗体新途径。
细胞发生 突变（不 死性）
无限传代
动物细胞培养过程中几个重要的概念
■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称 为细胞贴壁。
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。
接触抑制
■当贴壁细胞分裂生 长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增 殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。
动物细胞培养特点：贴壁生长、接触抑制：
胚胎或幼龄动物器官组织
增殖能力强，分裂旺盛，分化 程度低，容易培养 剪碎
取出组织
原 代 培 养
胰蛋白酶处理
单个细胞
去掉组织间 蛋白
加培养液
细胞悬液
转入培养瓶内培养
过程：
健康动物的组织
剪碎 胰蛋白酶
单个细胞
加培养液
细胞悬浮液装瓶培养
贴壁生长、 接触抑制
部分细胞细 胞核型变化
分瓶
原代培养
10代细胞 传代培 50代细胞
培养结果
培养目的
植物体
快速繁殖、培育 无病毒植株等
细胞群
获得细胞或细 胞产物
问题1：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细 胞培养材料？
因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。
问题2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。
问题3：为什么用胰蛋白酶处理？
总结：动物细胞培 养过程
为什么用胰蛋白酶处理？
动物胚胎或幼龄动物 的组织、器官 单个细胞
剪碎用胰蛋白酶处理 加培养液稀释
培养特点：细胞贴壁、接触 配置细胞悬液 抑制 转入培养瓶
传代10代以内，遗传物质不改变， 分瓶 保持正常二倍体核型。
原 代 培 养
传 代 培 养
传代10-50代左右，增长缓慢以 至于完全停止，部分细胞核型可 能发生变化（遗传物质可能改变） 40-50代细胞 继续传代培养少部分细胞获得不 死性，细胞突变，遗传物质已经 改变，等同于癌细胞。
10代细胞
无限传代
离体培养的细胞对 4、动物细胞培养条件 微生物和有毒物质 没有防御能力 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 保证细胞顺利 2、营养 的生长增殖 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血 清、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 能否用胃蛋白酶 4、气体环境 代替胰蛋白酶？ O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
回顾：
植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养 植物体细胞杂交
动物细胞工程常用的技术手段：
1.动物细胞培养 3.单克隆抗体 5.核移植 2.动物细胞融合 4.胚胎移植
专题2 细胞工程
2.2 动物细胞工程
大面积烧伤怎么办？
专题2 细胞工程
2.2 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
1、概念：化学性质单一、特异性强的抗体。
设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体
小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
抗原 ？
2.制备过程：
效应 ？ B细胞
诱导其融合的 方法有哪些？
经免疫的小鼠
提取
B淋巴细胞
小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒等手段
杂交 细胞
用特定的选 择性培养基
第一次筛选
杂交瘤细胞 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件 下能无限增殖的杂交瘤细胞
B淋巴细胞在体外不能无限增殖。
单克隆抗体的制备—极富创造性的方案
将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能 力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交 瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一 的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原 决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝 尔奖。
克隆动物：通过核移植实现
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
细胞核移植技术 1、定义： 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞 核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其 重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发 育为动物个体. 2、原理： 动物细胞核具有全能性 3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。
问题强化：
1）本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质， 不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的 本领，因而可以获得大量单克隆抗体 3）为何要进行两次筛选？
第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得 到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。
类似植物细胞工程
细胞融合是正常的生命活动
受精作用
两个细胞正在融合
动物 细胞 融合
3、诱导融合的方法
病毒颗粒黏 附细胞表面 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合.
物理法：电激融合
生物法：灭活的病毒诱导融 细胞膜被 病毒颗粒穿通
合.(利用灭活仙台病毒是动物细
胞融合所特有的）
仙台病毒
（细胞膜具有一定的流动性） 细胞膜连接 丧失感染性 （不感染细胞）
问题5：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？
控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。
问题6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物 组培培养基有何独特之处？ 主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维 生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、 成分中有动物血清等 问题7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最 终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发 育成新的动物个体
动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰 蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和 细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。
问题4：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？
动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适 宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为 7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。
归纳:
1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.取卵母细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作； 含有激发细胞核全能性的物质 3.严格来说新个体有卵母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状
6.体细胞核移植技术的应用前景
看书P49-50页
1）加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 2）保护濒危物种，增加存活数量 3）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4）可以作为异种移植的供体，可以用于组织 器官的移植