组织培养实验室仪器及操作技术
植物组织培养实验室的组成仪器设备及基本操作
植物组织培养实验室的组成仪器设备及基本操作1. 引言植物组织培养实验室是进行植物细胞培养、植物组织培养和植物遗传转化等研究工作的重要场所。
该实验室的组成仪器设备和基本操作对于顺利进行植物组织培养实验至关重要。
本文将详细介绍一个典型的植物组织培养实验室的组成仪器设备及其基本操作。
2. 仪器设备2.1. 无菌操作台无菌操作台是植物组织培养实验室中最关键的设备之一，用于保持操作区域的无菌条件。
它通常由一个工作台和一个无菌工作区组成。
无菌操作台配备了紫外线灯和高效过滤器，可以杀灭空气中的微生物，并防止外界空气中的微生物进入无菌工作区。
2.2. 培养箱培养箱是用于培养和生长植物组织的设备。
它可以提供恒温、恒湿和光照条件，从而满足不同植物组织培养实验的要求。
培养箱通常配备了温度控制器和湿度控制器，可以精确地控制环境参数。
2.3. 培养基配制设备在植物组织培养实验中，需要制备不同种类的培养基用于培养和生长植物组织。
培养基配制设备包括天平、培养基配制器和pH计。
天平用于精确称量各种培养基成分的质量，培养基配制器用于自动配制培养基，pH计用于测量培养基的酸碱度。
2.4. 高压灭菌器高压灭菌器用于对实验室的培养器具、培养基和试剂进行高温高压的灭菌处理。
灭菌是植物组织培养实验的基本操作之一，可以有效杀灭培养器具和培养基中的微生物，保证实验的无菌性。
2.5. 显微镜显微镜是用于观察和分析植物组织培养过程中的细胞和组织结构的设备。
它可以放大样本，使研究人员能够观察细胞中的微小结构。
显微镜通常配备了不同倍数的物镜和目镜，以满足不同观察需求。
2.6. 高速离心机高速离心机用于分离植物组织培养中的混合物。
在植物组织培养实验中，常常需要将悬浮细胞和培养基分离以获得纯净的细胞。
高速离心机通过离心力将混合物中的悬浮细胞沉降到管底，从而实现分离的目的。
3. 基本操作3.1. 灭菌操作在进行植物组织培养实验之前，必须对实验室的培养器具、培养基和试剂进行灭菌处理，以确保实验的无菌性。
植物组织培养实验室组成仪器设备及基本操作
显微镜的使用方法包括样品 制备、观察和拍照等。
显微镜的维护和保养包括清 洁、校准和更换灯泡等。
摇床
作用：用于培 养植物组织， 促进细胞分裂
和生长
结构：主要由 底座、摇杆、 摇板、夹具等
组成
操作方法：将 植物组织放入 摇板，调整摇 杆高度，设定 转速和时间，
开始摇动
注意事项：摇 动过程中避免 剧烈震动，以 免影响植物组
结构：主要由箱体、加热器、制冷器、加湿器、光照系统等组成
操作：设置温度、湿度、光照等参数，将植物组织培养材料放入培养箱，定期观察并记录生 长情况
注意事项：保持培养箱清洁，定期更换培养基，避免污染和交叉污染。
灭菌锅
作用：对培养基、 器皿等进行灭菌 处理
原理：利用高温 蒸汽对培养基、 器皿等进行灭菌 处理
细胞培养与观察
培养基的制备：选择合适的培养基，按照配方进行配制
细胞接种：将细胞接种到培养基中，进行培养
细胞观察：使用显微镜观察细胞生长情况，记录细胞形态和生长速度
细胞分离与纯化：使用细胞分离技术，如差速离心法、流式细胞术等， 将细胞进行分离和纯化
细胞培养条件的优化：调整培养条件，如温度、pH值、气体环境等， 以获得最佳的细胞生长效果
恒温水浴锅：用于加热 和冷却培养基
03
基本操作流程实验准备准备培养基： 选择合适的培 养基，如MS培 养基、B5培养
基等
准备培养皿： 选择合适的培 养皿，如玻璃 培养皿、塑料
培养皿等
准备无菌操作 台：确保操作 台无菌，避免
污染
准备培养室： 确保培养室温 度、湿度、光 照等条件适宜，
避免污染
组织取材与消毒
止污染和感染
试剂：如激素、抗生素 等，用于调节植物组织
植物组织培养的基本条件—组培常用的仪器设备及使用
目录
基本仪器与设备 无菌操作设备 培养器皿及实验工具
灭菌设备 材料培养设备
一、基本仪器与设备
1、天平
天平存放的环境要求： 干燥、无震动、无腐蚀性药品的地方，避免移动，天平匣内应放硅胶或其他 中性干燥剂以保持干燥（如万分之一天平）。 A.电子天平 精度高、称量快。
恒温水浴锅
恒温箱
4、培养箱
生化培养箱 光照培养箱
生化培养箱Βιβλιοθήκη 光照培养箱5、解剖镜
用于剥离茎尖。 多采用双筒实体解剖镜，在分离茎尖等较小组织时，便于观察、操作，通常 放大5-80倍。
6、显微镜
双目体视显微镜用的较多，多用于剥离茎尖以及隔瓶观察内部植物组织生长 情况。
双目体视显微镜
生物显微镜，用以观察花粉发育时期以及培养过程中细胞核的变化 生物显微镜
A. 烘箱类 有些材料需要烘干，或器皿需要干燥，实验室需要配备烘干设备。烘箱和干 燥箱差别不大，主要在烘干时间上以及强度上有差异。 迅速干燥，在烘箱内烘干，80-100℃为宜。 干热灭菌，温度升至150-180℃，持续1-3h。 培养物分析，在80℃条件下烘干。
B. 恒温箱类 恒温箱用于原生质体和酶制剂保温，也用于暗培养。 恒温箱内装上日光灯可进行温度及光照小型实验。 恒温水浴锅可用于超低温保存的材料的解冻实验。
B.分析天平
精度为0.0001g，用来称取微量元素和植物生长调节物质及微量附加物。 选择平稳，干燥，没有腐蚀性药品和水气的地方放置。
2、冰箱和冰柜
A.普通冰箱 很多材料需要提前配制（如母液），于冰箱内保存。 B.低温冰箱 某些试剂、药品和母液需要低温保存，有些材料需低温处理。
3、烘箱、干燥箱、恒温箱和恒温水浴锅
全面组织培养实验室及操作技术
饱和蒸汽压力与其对应的温度
饱和蒸汽压力
温度（℃）
饱和蒸汽压力
温度（℃）
kg/cm2
1b/m2
kg/cm2
1b/m2
0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984
0 2 4 6 8 10 12 14
100 103.6 106.9 109.8 112.6 115.2 117.6 119.9
1.0
MnSO4·4H2O
10
盐酸吡哆醇
1.0
ZnSO4·7H2O
2.0
激动素
0.1
Na2MoO4·2H2O
0.25
2,4－D
0.1－1.0
CoCl2·6H2O
0.025
盐酸硫铵
10
Na2-EDTA
37.3
B5培养基的组成和配方
4、N6培养基 ◆1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计 ◆ KNO3和（NH4）SO4含量高，不含钼
05
壹
贰
8、琼脂
是使用最普遍的凝固剂 用量一般在6—10g/L之间 颜色以浅、透明度高好，洁净为上品 除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结冷胶等。
生长素类 促进细胞伸长和分裂 促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实 诱导愈伤组织形成 溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，后者的溶解效果更好 常用的生长素： IAA(吲哆乙酸) NAA (奈乙酸 ) 2,4-D(二氯苯氧乙酸) IBA(吲哆丁酸) 促进细胞分裂分化
温度 光照 湿度 气体 培养基的渗透压 pH值
植物材料一般最适温度在25±2℃之间
2第一章--组织培养实验室及操作技术(参考模板)
第一章组织培养实验室及操作技术第一节实验室设置及基本技术组织培养实验室必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基配制、洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。
一．实验室组成1、准备室准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。
要求宽敞明亮，通风条件好。
2、缓冲室缓冲室的功能主要是工作人员进行工作服装、口罩拖鞋等的更换，也是其他实验室电力控制器的安装场所，需安装紫外灯进行灭菌。
3、无菌操作室接种室的功能是进行无菌操作。
要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。
房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。
接种室除了出入口和通气口外，应行密闭。
4、培养室培养室的功能是对离体材料进行控制培养。
其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。
主要设备应有培养架子、灯光、通风设施、边台等。
另还应具有空调机、除湿机、温度湿度计、换气扇等。
5、驯化室通常在温室的基础上营建，要求清洁无菌，配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪等。
6、温室内配置有温度控制装置、通风装置、光照调节装置、杀菌杀虫工具等。
7、细胞学实验室其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。
要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。
8、生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。
组织培养实验室布局的总体要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。
二．基本设备配制基本设备：冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、搅拌器。
灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
无菌操作设备：净化工作台、接种箱。
光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。
细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床等。
细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。
三．培养器皿及实验用具玻璃器皿新型材料器皿金属材质用具四．洗涤技术玻璃器皿洗涤：新购置的玻璃器皿，常有游离碱性物质，使用前，先用1%稀盐酸浸泡过夜（12h），然后用洗衣粉洗涤，清水冲洗，晾干备用。
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训植物组织培养是一种重要的生物技术，它可以用来繁殖纯种植物、快速繁殖难以繁育的植物、生产无性系等。
在进行植物组织培养实验时，需要一些基本的设备和无菌操作培训，以确保实验的准确性和成功率。
首先，进行植物组织培养实验需要准备一个无菌工作台。
无菌工作台是用于提供无菌工作环境的设备，它可以有效地防止外界微生物的污染。
在工作台上进行操作时，可以通过UV灯消毒空气和工作台表面，以确保实验材料的无菌状态。
其次，植物组织培养实验需要使用无菌培养箱。
无菌培养箱是专门用来培养植物组织的设备，它可以提供恒温、恒湿和无菌的环境，保证植物组织的生长和繁殖。
在培养箱中进行实验时，需要定期清洁、消毒和更换无菌培养基，以保证培养环境的无菌性。
此外，进行植物组织培养实验还需要使用一些基本的无菌操作器具，如无菌吸管、无菌移液器、无菌培养瓶等。
这些器具可以帮助实验人员在无菌条件下进行操作，避免外界微生物的污染。
对于实验人员来说，他们需要接受一定的无菌操作培训，以掌握正确的无菌操作技能。
在无菌操作过程中，实验人员需要穿戴无菌手套、口罩和无菌服装，严格按照无菌操作规程和流程进行操作，避免外界微生物的污染。
总的来说，植物组织培养的基本设备和无菌操作培训是非常重要的，它们可以帮助实验人员在无菌条件下进行植物组织培养实验，保证实验的准确性和成功率。
只有做好无菌操作，才能获得高质量的植物组织培养材料，为后续的应用研究和生产提供可靠的支持。
植物组织培养是一项重要的生物技术，在农业、园艺和植物育种等领域具有广泛的应用。
通过植物组织培养，可以获得大量无病害的植物材料，实现植物繁殖、植物株型改良、基因转化等目的。
然而，植物组织培养实验过程中，需要一定的无菌操作技能和必要的设备，才能保证培养物的无菌状态，从而确保实验的准确性和成功率。
在进行植物组织培养实验时，无菌工作台是必不可少的设备之一。
无菌工作台能够提供无菌环境，有效地阻止外界微生物的污染。
植物组织培养的设备与使用方法
植物组织培养的设备与使用方法植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。
要达到无菌操作和无菌培养，就需要认为创造无菌的环境，使用无菌的器具，同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。
无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备，实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。
但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。
图1 组培室分区布局1.实验室基本组成a)无菌操作室在植物组织培养中，无菌操作室（clean chamber）是进行植物材料的分离及培养体转移的一个重要场所。
由于植物组织培养需长时间的无菌操作，所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。
微生物的培养生长时间短，而植物组织培养短的一个月，长的达几年。
所以，防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。
无菌操作室基本要求是：干净无菌、密闭、光线好。
一般安装滑动门，使空气不致流动，以防外界菌及尘埃的侵入；墙壁光滑平整，地面平坦无逢，便于清洁工作；室内安装紫外灯，以便灭菌，还要有照明装置及灯座，以备临时增加设备之用；室内有超净工作台、移动式载物台（医用平板推车）、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。
面积根据工作性质可大可小，小的无菌操作室一般一间5~7㎡即可。
接种室内主要安放超净工作台，分单人使用和双人同时连续作业使用两种。
超净台中准备接种用的器具，如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等，以及酒精灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶等。
如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种，还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜，以便观察、解剖和分离细小的外植体。
小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等，也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。
无菌室外最好设置预备室作为缓冲间，以防工作人员进出时带进杂菌。
控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。
预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔，便于观察和参观。
2第一章__组织培养实验室及操作技术
第一章组织培养实验室及操作技术第一节实验室设置及基本技术组织培养实验室必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基配制、洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。
一．实验室组成1、准备室准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。
要求宽敞明亮，通风条件好。
2、缓冲室缓冲室的功能主要是工作人员进行工作服装、口罩拖鞋等的更换，也是其他实验室电力控制器的安装场所，需安装紫外灯进行灭菌。
3、无菌操作室接种室的功能是进行无菌操作。
要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。
房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。
接种室除了出入口和通气口外，应行密闭。
4、培养室培养室的功能是对离体材料进行控制培养。
其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。
主要设备应有培养架子、灯光、通风设施、边台等。
另还应具有空调机、除湿机、温度湿度计、换气扇等。
5、驯化室通常在温室的基础上营建，要求清洁无菌，配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪等。
6、温室内配置有温度控制装置、通风装置、光照调节装置、杀菌杀虫工具等。
7、细胞学实验室其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。
要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。
8、生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。
组织培养实验室布局的总体要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。
二．基本设备配制基本设备：冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、搅拌器。
灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
无菌操作设备：净化工作台、接种箱。
光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。
细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床等。
细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。
三．培养器皿及实验用具玻璃器皿新型材料器皿金属材质用具四．洗涤技术玻璃器皿洗涤：新购置的玻璃器皿，常有游离碱性物质，使用前，先用1%稀盐酸浸泡过夜（12h），然后用洗衣粉洗涤，清水冲洗，晾干备用。
1 植物组织培养实验室的构建
医用手提式灭菌锅
不锈钢立式灭菌锅
3、超净工作台
陈列于操作室（接种室）内
类型：垂直式和水平式
作用：无菌操作
（二）药品贮存和配制仪器设备
1、冰箱
作用：低温保存材料，存 放药品、培养基母液、激 素、酶制剂。
2、天平
陈列于制备室中
作用：称取大量元素、微 量元素、酶制剂
3、酸度计
注意！ 实际应用中要通过试验筛选。
基本培养基对西洋杜鹃增殖的影响
三、培养基的配制
（一）培养基母液的配制
1.基本培养基母液 类型：四液式（钙盐最后加入）、三液式、 五液式（钙盐和铁盐单独配制）。 成分：大量元素、微量元素、铁盐、 有机成 分。 贮藏：2~4冰箱内贮藏。 倍数：10X、100X。 标记：名称、配制倍数、日期等。
取容器（搪瓷缸），加入1/3~2/3左右的蒸馏水，加热至沸腾； 称取定量的琼脂和蔗糖加入上述煮沸的水中并不断搅拌， 直到完全溶解。 用移液管量取所需量的母液加入一只干净的烧杯中， 待琼脂完全溶解后加入 用NaOH或稀HCl调节pH值 高压灭菌，（121℃，15 min~20min） 冷却，取出，备用
植物组织培养材料移到田间前，通常 先移到温室进行练苗，待生根成活后， 再移到大田。
二、仪器和设备
（一）无菌操作设备 １、烘箱：
作用：干燥洗后的器皿
高温干热灭菌 测定培养物的干重时烘干培 养材料。
2、灭菌锅
类型：普通医用消毒锅 大的高压灭菌锅
作用：培养基、水和各种用具的消毒
（四）培养设备 1.空调
作用：控制培养温度
2.加湿器和去湿机
控制培养室内湿度状况
3.定时器
月季组培实验报告(3篇)
第1篇一、实验简介实验名称：月季组培实验实验目的：通过组培技术，了解月季组织培养的原理和方法，掌握无菌操作技术，提高植物繁殖效率，为月季的快速繁殖和遗传改良提供技术支持。
实验时间：2023年X月X日至X月X日实验地点：XX大学园艺实验室实验材料：月季植株（品种：XX）实验设备：超净工作台、无菌操作箱、高温高压灭菌器、移液枪、解剖刀、培养皿、试管、滤纸、镊子、剪刀、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅等。
二、实验方法1. 外植体选取与消毒：- 选择生长健壮的月季植株，取其茎尖作为外植体。
- 使用无菌水清洗外植体，然后用75%酒精浸泡30秒，再用无菌水冲洗3次。
- 将外植体置于0.1%的氯化汞溶液中消毒5分钟，再用无菌水冲洗5次。
2. 诱导生根：- 将消毒后的外植体切成1-2厘米的小段，接种到含有不同激素比例的MS培养基中。
- 将接种后的培养皿放入培养箱中，培养温度为25℃，光照时间为12小时/天。
3. 生根培养：- 当外植体开始生根时，将培养基更换为含有较低激素浓度的MS培养基。
- 继续培养至生根率达到80%以上。
4. 炼苗与移栽：- 将生根的植株从培养皿中取出，置于温室中炼苗。
- 炼苗成功后，将植株移栽到花盆中，进行正常的养护管理。
三、实验结果与分析1. 外植体消毒效果：- 通过显微镜观察，发现消毒后的外植体表面无细菌污染，说明消毒效果良好。
2. 诱导生根效果：- 在不同激素比例的培养基中，生根效果最好的培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L IBA。
- 在此培养基中，生根率达到90%，平均根长为3.5厘米。
3. 炼苗与移栽效果：- 炼苗过程中，植株生长良好，无病虫害发生。
- 移栽后的植株成活率达到了95%。
四、实验讨论1. 外植体选取：- 本实验选择茎尖作为外植体，主要是因为茎尖细胞分裂旺盛，易于诱导生根。
2. 消毒方法：- 消毒是组培实验的关键步骤，本实验采用氯化汞溶液消毒，效果良好。
3. 激素配比：- 激素配比对生根效果有显著影响，本实验通过优化激素配比，提高了生根率。
实验一 组培室组成、主要设备使用方法
实验一实验室组成、主要设备使用方法、常用药剂配制及洗涤、灭菌一、目的了解植物组织培养实验室的基本组成，掌握主要设备的使用方法及常用药剂的配制。
二、实验室的组成：参观本院的组织培养室三、主要设备的使用方法（课堂现场操作）纯水仪、高压灭菌锅、分析天平、微波炉、酸度计、超净工作台、摇床、生物显微镜、体视显微镜等。
四、几种常用药剂的配制（一）用95%酒精配制不同浓度酒精学习配制70%和75%酒精（二）消毒剂1、20%次氯酸钠溶液称取20g次氯酸钠用适量的去离子水（或蒸馏水）溶解，然后用去离子水（或蒸馏水）定容至100ml。
2、0.1%升汞（HgCl2）溶液称取0.1g HgCl2用适量的去离子水（或蒸馏水）溶解，然后用去离子水（或蒸馏水）定容至100ml。
（三）洗涤剂1、硫酸—重铬酸钾洗液称取10g重铬酸钾加入蒸馏水90ml，加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸175ml，放入棕色试剂瓶备用（注意：切记不可将盛过酒精、甲醛等还原剂的药品试剂瓶直接放入溶液中，因为重铬酸钾是一种强氧化剂，一旦被还原氧化，洗液变绿，就会失去洗涤作用）。
这些玻璃器皿必须用自来水冲洗干净并晾干后再浸入洗液。
（四）1摩尔浓度NaOH和1摩尔浓度HCl配制摩尔浓度是指用1升（1000ml）溶液中所含溶质的分子量数来表示的溶液浓度。
用M 表示。
1、NaOH摩尔浓度（M）NaOH摩尔质量=分子克数=40g1MNaOH是指1000ml溶液里含有40克摩尔质量的NaOH，现要配制100ml，即需NaOH4克。
称取NaOH4克，用少量的去离子水（或蒸馏水）溶解，然后定容至100ml。
2、HCl摩尔浓度具体配制酸的摩尔浓度时，应考虑原浓酸的比重摩尔浓度。
V=要配制的摩尔浓度×需配制体积×原酸分子量/原酸百分浓度×原酸的比重×1000 配制1.0MHCl100ml，即量取38%，比重为1.19的HCl8.06ml加去离子水（或蒸馏水），定容至100ml。
组织培养的基本设备和无菌操作(PDF69页)
第二章植物组织培养的基本设备和无菌操作本章主要内容 组织培养实验室的组成 组织培养的基本设备 组织培养所需的环境条件 组织培养的无菌操作第一节 组织培养实验室的组成基本 实验室组织培养 实验室辅助 实验室基本实验室 洗涤室 配制室 灭菌室 无菌操作室 培养室 驯化移栽室辅助实验室用于细胞学、组织学观察。
组织培养室基本设置洗涤室 化学实验室 培养基配制 灭菌室观察室缓冲室温室培养室 组培室分区布局接种室第二节 组织培养的基本设备玻璃器皿培养容器培养容器盛装容器计量容器器械用具接种工具仪器与设备培养箱培养箱空调、加热器高压灭菌锅高压灭菌锅冰箱、冰柜摇床振荡培养箱电子天平酸度计显微镜显微镜水浴锅纯水系统超净工作台超净工作台试剂柜培养基配制器具培养基配制器具培养架温室大棚第三节 组织培养所需的环境条件组织培养所需的环境条件1、温度 2、光照 3、湿度 4、气体 5、培养基渗透压 6、培养基的pH值1、温度温度是植物组织培养成功的关键因素，温度最 重要的作用是决定呼吸速率和控制植物组织代谢 过程的化学反应。
为保持一定的温度，培养室一 般要求较好的密闭条件，由空气调节器调节室温。
最适温度 温度处理最适温度 一般植物生长的适宜温度在25±2℃之间。
例外：倒挂金钟22~24 ℃生长最好，温度升高生长放慢甚至完全停止。
温度不仅对增殖，对器官的形成也有影响。
可能与温度 调控内源细胞分裂素代谢系统有关。
例如：烟草芽的形成以18 ℃为最好，在12 ℃以下，33 ℃以上形成率很低。
温度处理的影响在植物组织培养前，先对培养材料进行不同 温度处理，往往起到诱导和促进生长的作用。
例如： 胡萝卜切片进行4 ℃，16~32min的低温处理，比不 处理的生长大大加快。
天竺葵10℃低温处理茎芽分化优于20℃和30℃ 菊芋块茎组织的低温和高温处理均可促进生根。
2、光照光照是组织培养中的重要条件。
由于植物组培是在含 糖培养基上进行的，因此光照的主要作用是在形态建成 的诱导方面。
组织培养所需的实验条件和器具
组织培养所需的实验条件和器具图片怎样才能发上来？请帮助！一、植物组织培养全过程：二、植物组织培养常用的设备和器材1、培养室:包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是组织培养实验所必须具备的基本条件。
2、仪器设备：主要有超净工作台、冰箱、水浴锅、高压蒸汽灭菌锅、烘箱等。
超净工作台高压蒸汽灭菌锅水浴锅3.实验常用用具三、常用药品组织培养所需药品主要用于培养基的配制，也有部分用于消毒，主要有以下几类：1、光照光照是组织培养中的重要外界条件之一，它对外植体生长和分化有很大的影响。
光照对组织培养的影响主要表现在光周期、光照强度（光强）和光质这三个方面。
2、温度温度最重要的作用是决定呼吸的速度和控制植物组织代谢过程的化学反应。
在植物组织培养中，不同植物繁殖的最适温度不同，大约为23～28℃之间，但也有不少例外，差异比较大。
通常低于15℃时，培养的外植体组织生长缓慢或出现停滞，但高于35℃对生长也不利。
在实际工作中，在考虑某种培养物的温度要求时，也应考虑原植物的生态环境所处温度条件，如生长在高海拔和较低温度环境的植物，则培养的环境温度可适当低些。
3、湿度植物组织培养中的湿度影响主要有两个方面：一是培养容器内的湿度条件，二是培养室的湿度条件。
培养容器内的湿度主要受培养基的影响，相对湿度可达100%，而培养室的湿度变化随季节而有很大变动，它可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70%～80%的相对湿度。
4、培养基的PH值外植体的培养增殖都要求一定的PH值。
通常一般培养基的PH值都在5.6～6.0之间。
如果PH值不适则直接影响外植体对营养物质的吸收，进而影响外植体的脱分化、增殖和器官形成。
不过PH值对不同植物的影响会有差异，有的宜偏酸，有的宜偏碱，在实际工作中，依不同植物而调整。
5、氧和其他气体培养容器中的气体成分会影响到培养物的生长和分化。
氧是植物组织培养必需的，在接种时应避免把整个外植体全部埋入培养基中，以免造成缺氧。
实验实训三植物组织培养中常用设备和仪器的使用.doc
实验实训三植物组织培养中常用设备和仪器的使用一、目的要求通过实训，使学生掌握植物组织培养的主要设备和仪器的使用方法、操作规程及保养方法等。
二、仪器和设备电子分析天平、超净工作台、高压灭菌器、酸度计等。
三、方法步骤（一）电子分析天平（感量O.OOOlg）以FA/jA型多功能电子天平为例说明电子天平的使用方法，这里重点介绍几个常用功能键的操作方法。
1. 天平的放铬天平应路于稳定的工作台上，避免震动、阳光照射和气流干扰。
2. 操作方法（1）天平调平在使用前观察水平仪，如水平仪水泡偏移，需调整水平节脚，使水泡位于水平仪中心。
（2）开机接通电源。
天平通电后就开始工作（显示器未工作），通常需预热以后，方可开启敁示器进行操作使用。
（3）开启显示器键（ON）只要轻按一下ON键，显示器全亮“土8888888%”对显示器的功能进行检查，约2秒后显示天平的型号，例如：“-1004-”，然后是称量模式“O.OOOOg”。
（4）清零、去皮键（TAR）铬称量容器或称量纸于秤盘上，显示出容器或称量纸的质量，然后轻按TAR键，显示消隐，随即显示“O.OOOOg”，容器或称量纸质量值已去除，即去皮重。
(5) 称量用试剂勺轻轻将试剂铬于称量容器或称量纸中，称取所需要的量。
试剂不可掉在容器或称量纸外。
(6) 关闭显示键移去称量容器或称量纸，轻按OFF键，显示器熄灭，淸扫电子天平。
若要较长时间不再使用天平，应从电源插座上拔下插头。
(二)梅特勒-托利多320pH计1. 设铬校准点要获得最精确的pH值，必须周期性的校准电极。
320pH 计允许选择一组(三种)校准缓冲液。
校准时可采用所选之缓冲液组中的两种溶液。
有三组缓冲液供选择：组l(b=l)： pH 4.00、7.00、10.00;组 2 (b=2)： pH 4.01、7.00、9.21；组 3 (b=3)： pH 4.01、6.86、9.18。
按下列步骤选择校准缓冲液：按“on/off”关闭显示屏。
植物组织培养实验室的构建和操作技术
细胞学鉴定室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定 和研究。要求清洁、明亮、干燥，使多种光学仪器 不受潮湿和灰尘污染。应配置多种显微镜、摄影系 统等。
生化分析室 在以培养细胞产物为主要目旳旳试验室 中，应建立相应旳分析化验试验室，以便于对培养 物旳有效成份随时进行取样检验。 离心机、酶联免 疫检测仪、天平、PCR仪等。
（2）温室
为试管苗提供满足生长旳合适环境条件。
二、仪器和设备
（一）无菌操作设备
１.烘箱：
作用：干燥洗后旳器皿
高温干热灭菌
测定培养物旳干重时烘干培
养材料。
2.灭菌锅
类型：一般医用消毒锅
大旳高压灭菌锅
作用：培养基、水和多种用具旳消毒
医用手提式灭菌锅
不锈钢立式灭菌锅
3.超净工作台
陈列于操作室（接种室）内 类型：垂直式和水平式 作用：无菌操作
物理或化学处理； 火烤后旳物体； 健康旳动植物不与内外部表面接触旳组织 内部可能是无菌旳（有时也有内生菌，但 不会影响培养，也不会污染）
2.灭菌旳措施
（1）物理措施：干热、湿热、过滤（0.25 微米）紫外灯、超声波等。 （2）化学措施：使用灭菌剂或抗菌素，如 酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾 、双氧水、福尔马林等
（二）药物贮存和配制仪器设备
1.冰箱 作用：低温保存材料，存
储药物、培养基母液、激 素、酶制剂。
2.天平
陈列于制备室中 作用：称取大量元素、微量
元素、酶制剂
3.酸度计
陈列于制备室中 作用：测定培养基及酶制剂旳pH值
PHS-802中文台式酸度计
通用型或经济型酸度计
（三）观察分析仪器设备
C、 塑料器皿旳清洗
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空气消 毒灭菌
培养材料 的接种
（6）外植体灭菌
流水冲洗10—20min 或更长时间
0.1%—0.2%氯化汞 液中浸泡10min左右
在10%的次氯酸钠、 饱和漂白粉浸泡 30min左右
70%—75% 酒精中浸泡 30s
蒸馏水冲洗 4—5次
备用
常用消毒剂消毒灭菌比较表
消毒剂
使用浓度 （%）
去除难易
消毒时间 （min）
除菌、过滤、离心、沉淀等
化学方法： 消毒剂、抗菌素灭菌
2、灭菌
（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在9.8×104—10.8×104Pa 温度在121℃ 灭菌20—30min
（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌
饱和蒸汽压力与其对应的温度
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
缓冲室
培养室
无菌室（一）
无菌室（二）
二、仪器与设备
1、基本设备 冰箱、电炉、酸度计、纯水器、
天平、培养基分装器、搅拌器等。
冰箱 电炉
酸度计
天纯 平水
器
培养基分装器
搅拌器
2、灭菌设备
蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、 过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
蒸汽压力灭菌锅
干热消毒柜
无菌瓶顶过滤装置
实验室 组成
基本实验室
准备室 缓冲室 无菌操作室 培养室
细胞生物学实验室 辅助实验室 温 室
生化分析实验室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁
实
4.0m 架
验
台
电 炉
门
准备室 4.5m
冰箱
药 品
无菌台
搁
拉 窗
培养架
及 无菌台 仪
培养架
器无菌室
柜
架 培养室
培
培
养
养
缓冲室
架
架
3.0m
3.5m
组织培养准备实验室
植物组织培养实验室及操作技术
第一节 实验室设置及基本技术 第二节 组织培养所需的环境条件及营养成分 第三节 培养基的配制与灭菌
第一节 实验室设置及基本技术
一、实验室组成 二、基本设备 三、培养器皿及实验用具 四、洗涤技术 五、灭菌技术 六、无菌操作
一、实验室组成
组织培养实验室布局的总体要求
便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察
效果
次氯酸钙 次氯酸钠
漂白粉 溴水 过氧化氢 升汞 酒精 抗生素 硝酸银
9~10 2
饱和溶液
1~2 10~12 0.1~1 70~75 4~5（mg/L
1
易 易 易 易 最易 较难 易 中 较难
5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 0.2~2 30~60 5~30
很好 很好 很好 很好 好 最好 好 较好 好
1、玻璃器皿
三角瓶 培养皿 培养瓶
2、金属材质用具
接种针 镊子 解剖刀
四、洗涤技术
1、玻璃器皿洗涤
新购置玻 璃器皿
1%稀HCl
浸渍12h
已用过的 玻璃器皿
洗衣粉 洗涤
清水 冲洗
晾干 备用
2、塑料用品洗涤
新的塑料器皿打开即用
已用过的 塑料器皿
2%NaOH浸泡 12h
蒸馏水 冲洗
清水 冲洗
晾干备用
1.266
20
126.0
1.406
22
127.8
1.543
24
129.6
1.681
30
134.5
50
147.6
（3）塑料器皿灭菌： 多采用高压蒸汽消毒灭菌
（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌 浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用
（5）接种室灭菌
接种室
紫外灯 照射
超净工 作台
紫外灯 照射
70%—75% 的酒精擦洗
植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素 在植物体内起到一定的生理作用：
a、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质； b、构成一些特殊的生理活性物质，参与活跃的新陈代谢； c、元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳
5、用沾有70%—75%酒精的纱布擦拭盛培养 基的培养器皿，放进工作台。
6、把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95% 的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。
7、在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。
8、打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶 口各部分都烧到。
9、取下接种器械，在火焰上消毒。
10、把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。
清水 冲洗
2%—5%盐 酸浸泡 30min
3、金属用品洗涤
热洗衣粉水 洗净
冲洗
擦干
清洁液配方
配方成分
弱液 次强液 强液 常用配方
重铬酸钾（g） 50
100
60
100
浓硫酸（ml） 100
200
800
200
蒸馏水（ml） 1000 1000
200
800
五、灭菌技术
1、灭菌方法
物理方法： 物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984
0
100
2
103.6
4
106.9
6
109.8
8
112.6
10 115.2
12 117.6
14 119.9
15
121.0
1.055
16
122.0
1.125
18
124.1
11、接种结束后，清理和关闭超净工作台。
注意：操作期间应经常用70%—75%的酒精擦拭工 作台和双手；接种器械应反复在95%的酒精中浸泡 和在火焰上消毒。
第二节 植物组织培养所需的环境
条件及营养成分
一、所需环境条件
与自然条件一样，组织培养中的材料的生长要 受到温度、光照、湿度等各种物理条件，不同气体、 培养基的组成、pH值和渗透压等各种化学条件，以 及外植体部位、大小、细胞密度等各种生物条件等 环境条件的影响。如何根据需要来控制培养条件是 组织培养中的一个重要问题。
温度
植物材料一般最适温度在25±2℃之间
光照
最常用的光周期是光照16h，黑暗8h
湿度
环
境
条 件
气体
一般情况下，培养器内相对湿度应达100%， 培养室内环境的相对湿度在70%—80%
氧气是愈伤组织生长所必需的
培养基的渗透压
调节渗透压常常从糖入手
pH值
植物组织培养时培养基的pH值大多在5.0—6.5
二、营养成分
（参考图）
喷雾消毒器
（参考图）
3、无菌操作设备
超 净 工 作 台
无菌接种箱
4、细胞培养设备 摇床
培养架
光 照 培 养 箱
150C 250D HZC-250
箱
恒 温 振 荡 培 养源自5、细胞学鉴定设备 光学研究显微
镜、实体显微镜、倒 置显微镜
光 学 显 微 镜
倒置显微镜
三、培养器皿及实验用具
六、无菌操作
实验员消毒 实验室、无 菌台灭菌
实验台 卫生
实验器材 的灭菌
消毒
无菌接种
培养室 培养
1、消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接 种室。
2、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯， 照射40min左右，后关闭。
3、开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面 和四周的台壁。
4、用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。