微生物鉴定中的生理生化试验讲课稿
实验七.微生物鉴定中的生理生化反应
甲基红试验观察 培养液中，各加入2～3滴甲基红指示剂。
V.P.验观察：
加入5～10滴40%KOH溶 37℃，15－30min)。呈红色者为阳性。
实验报告
1 用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法.
2
实验结果。设计表格，将观察结果填入表内。
3
实验分析。参考相关文献，对实验结果进行分析。实验 操作中存在什么问题，应如何改进？
观察、记录 （透明圈有无及大小）
3.2.2 糖发酵试验
糖发酵培养基制备（已完成） 标记（培养基、菌种） 接种
（葡萄糖发酵培养基试管3支，
乳糖发酵培养基试管3支
E. coli ， P. vulgaris ，CK）
培养（ 37℃，24－48h） 观察、记录（ 颜色、气泡）
3.2.3 吲哚试验
每试验制作试管培养基各2支 吲哚试验 （蛋白胨水培养基） 甲基红试验、V.P.试验 （葡萄糖蛋白胨水培养基）
接种
（ E. coli ， P. vulgaris）
培养
（ 37℃，48h ） 结果观察
吲哚试验观察： 加入3～4滴乙醚 振荡 静置1min 加入2滴吲哚试剂
产生红色环状物为阳性。
注意：沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为 若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示。
3.1.3 试剂：卢戈氏碘液，甲基红指示剂，40%KOH溶液，5%α萘酚，乙醚， 吲哚试剂。 3.1.4 其它物品： 无菌培养皿，接种环，试管，菌玻璃涂棒，培养箱。
3.2 方法
3.2.1 淀粉水解试验 制作淀粉培养基平板（已制备）
平板分区，标记（4部分）
接种4种微生物（平板划线法）
培养（37℃，24h）
微生物鉴定中常用的生理生化实验教学文案
2.明胶液化试验： 明胶是由胶原蛋白水解产生的蛋白质，在25℃以下可维持凝胶状 态，以固体形式存在，而在25℃以上明胶会液化。 有些微生物可产生一种称作明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而 使明胶液化，甚至在4℃仍能保持液化状态。
3.尿素试验：
尿素是由大多数哺乳动物消化蛋白质分泌在尿液中的 废物，尿素酶能分解尿素释放出氨，这是一个分辨细菌很 有用的诊断试验。
淀粉水解试验
(二)、明胶水解实验
1. 取3支明胶培养基试管，用记号笔标明各管欲接种的菌名。 2. 用接种针分别穿刺接种枯草芽孢杆菌，大肠杆菌和金黄色葡萄 球菌。 3.将接种后的试管置于20度中培养3~5天。 4.观察明胶液化情况。
穿刺接种
1)手持试管。 2)旋松棉塞。 3)右手拿接种针在火焰上将针 端灼烧灭菌接着把在穿刺中可能伸入 试管的其他部位，也灼烧灭菌； 4)用右手的小指和手掌边拔出 棉塞。接种针先在培养基部分冷却， 再用接种针的针尖沾取少量菌种。 5)将接种过的试管直立于试管 架上，放在37℃或28℃恒温箱中培 养。24h后观察结果 注意：若具有运动能力的细菌， 它能沿着接种线向外运动而弥散， 故 形成的穿刺线较粗而散、反之则 细而密。
4.硫化氢试验： 硫化氢试验是检测硫化氢的产生，也是用于肠道细菌检查常 用生化试验。 有些细菌能分解含硫的有机物如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨 酸等产生硫化氢，硫化氢一遇培养基中铅盐或铁盐等，就形成黑 色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。
5.甲基红试验： 甲基红试验是用来检测葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、 乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养 基中的甲基红指示剂由橙黄色（pH6.3）转变为红色（pH4.2）， 即甲基红反应。 尽管所有的肠道微生物都能发酵葡糖产生有机酸，但这个试 验在区分大肠杆菌和产气肠杆菌上仍然是有价值的。 这两个细菌在培养的早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养 后期仍能维持酸性pH4，而产气肠杆菌则转化有机酸为非酸性末端
微生物鉴定中常用的生理生化反应
微生物鉴定中的生理生化反应摘要各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，反映出它们具有不同的酶系和不同的生理特征，本实验通过细菌对大分子物质如淀粉、油脂的水解，糖发酵试验，甲基红实验等几个实验，分别来达到不同目的：证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解实验的原理和方法；了解糖发酵的原理和重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法；了解甲基红实验的原理、意义和方法。
关键词淀粉水解实验油脂水解实验糖发酵试验甲基红实验前言微生物对大分子物质如淀粉和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质水解后，才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，脂肪水解酶水解脂肪为甘油和脂肪酸等，这些过程均可以通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。
如淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘液测定时，不会产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可以改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳糖、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等），有些细菌只产酸不产气。
例如，大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；普通变形菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。
发酵培养基含有蛋白胨、指示剂（溴甲酚紫）、倒置的德汉式小管和不同的糖类。
当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）转变为黄色（pH5.2）。
气体产生可由倒置的德汉式小管中有无气泡来证明。
甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橙黄色（pH6.3）变为红色（pH4.2），即甲基红反应。
实验十 微生物鉴定中常用的生理生化试验
实验十微生物鉴定中常用的生理生化试验摘要本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。
最后观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。
关键词微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验前言类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。
因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。
生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。
一、实验目的1、大分子水解试验证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
2、糖发酵试验了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
3、IMViC试验了解IMViC的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
代谢过程主要是酶促反应过程。
具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶（endoenzymes）.许多细菌产生胞外酶(exoenzymes)，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。
各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1、大分子水解试验：微生物对大分子如淀粉、蛋白质和油脂不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后才能被微生物吸收利用。
微生物的生理生化试验
二、蛋白质代谢试验
1、吲哚（indole）试验（又称靛基验 目的：通过不同细菌对氨基酸之羧基的分解能力来 鉴别细菌。 原理：细菌产生的脱羧酶可脱掉氨基酸之羧基，生 成胺和CO2 ，使培养基PH升高，指示剂显色。 常用氨基酸有三种： a、赖氨酸：经过赖氨酸脱羧酶作用生成尸胺和CO2 。 b、鸟氨酸：经过鸟氨酸脱羧酶作用生成腐胺和CO2 。 c、精氨酸：经过精氨酸脱羧酶作用生成精胺和CO2 。
二、蛋白质代谢试验
7、尿素酶试验
三、碳源和氮源利用试验
1、柠檬酸盐利用试验 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：细菌能利用柠檬酸盐作为唯一的碳源，能在 除柠檬酸盐外不含其他碳源的培养基上生长，分解 柠檬酸盐生成碳酸钠，使培养基变碱性。 结果：培养基由淡绿色变为深蓝色为阳性，不变色 为阴性。
一、糖类代谢试验
1、单糖分解反应： 葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖
一、糖类代谢试验
2、氧化-发酵试验（OF试验） 细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有氧参加的称为氧 化型，有氧无氧都可以分解葡萄糖的称为发酵型，不 分解葡萄糖的称为产碱型。 方法：穿刺两只斜面琼脂，一只滴加无菌液体石蜡， 高度不少于1cm，35℃培养48小时。 结果：两只均为黄色为发酵型，均不变为产碱型或不 分解塘型，不加石蜡的变黄而加石蜡未变黄为氧化型。
微生物的生理 生化试验
微生物的生理生化试验
不同的细菌分解利用糖类、脂肪类和蛋白质类 物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也 不同，通过检测微生物的不同代谢产物和代谢 过程中不同的酶系统，达到鉴定细菌的目的。
包括糖类代谢试验、蛋白质代谢试验、碳源和 氮源利用试验、呼吸酶类试验以及其他酶类试 验。
三、碳源和氮源利用试验
实验六_细菌的生理生化试验PPT课件教案与资料
2018/11/27
2018/11/27
（三） 甲基红试验（M.R.试验）
1、 目的
检测细菌能否分解葡萄糖产生有机酸 的能力。了解鉴别肠杆菌科各菌属的甲 基红试验原理，并掌握其操作方法。
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2、 原理
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖， 在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一 步分解中，由于糖代谢的途径不同，可 产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量 酸性产物，可使培养基PH值下降至 pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
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3 材料
(1 )、菌种 大肠埃希氏菌、产气肠杆菌、沙门氏菌的 斜面菌种
(2) 、培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基
(3)、试剂
V-P指试剂
2018/11/27
４ 流程 培养液试管→标记→接种→培养→观察 →记录
2018/11/27
5 步骤 （1 ）、 标记试管 取4支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试 管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、 沙门氏菌和空白对照。
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(二)、乙酰甲基甲醇试验(V．P试验)
1.目的 检测细菌能否利用葡萄糖产生非酸性 或中性末端产物的能力。了解鉴别不同 肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原 理，并掌握其操作方法。
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2 原理
葡萄糖 二乙酰
丙酮酸 乙酰甲基甲醇 与胍基生成红色化合物
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分 解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙 酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧 氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成 红色化合物，称V－P（+）反应。
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四、 流程
糖类发酵试验 → V-P试验→M.R试验 →吲哚试验 → 硫化氢试验→三糖铁 （TSI）琼脂试验
微生物的生理生化反应讲课文档
第一页，共33页。
淀粉的水解试验
一、目的要求 二、实验原理 三、器材 四、操作步骤 五、结果
第二页，共33页。
一、目的要求
证明不同微生物有着不同的酶系统。 掌握微生物大分子水解试验的原理和方法。
第三页，共33页。
二、基本原理
微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必 须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能 被微生物吸收利用。
第十八页，共33页。
吲哚试验、甲基红试验与V.P.反应
吲哚试验（indol test） 甲基红试验（methyl red test） V.P.反应（Voges-Prokauer test）
第十九页，共33页。
一、目的要求
了解试验原理及其在肠道菌鉴定中的意义和 方法。
第二十页，共33页。
二、基本原理
2．思考题 （1）解释在细菌培养中吲哚检测到的化学原理，
为什么在这个实验中用吲哚的存在作为色氨酸 酶活性的指示剂，而不用丙酮酸？ （2）为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性，而产气 杆菌为阴性？这个试验与伏－普试验最初底物 与最终产物有何异同处？为什么会出现不同？
第三十三页，共33页。
种环，接种针，试管架。
第五页，共33页。
四、操作步骤
（1）将固定淀粉培养基融化后冷却至50℃左右，无菌操 作制成平板。
（2）用记号笔在平板底部划成二部分。
（3）将枯草芽孢杆菌,大肠杆菌（金黄色葡萄球菌）分别在 不同的部分划线接种，在平板的反面分别写上菌名。
（4）将平板倒置在37℃温箱中培养24h。
吲哚试验
有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中 的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二 甲基氨基苯甲醛结合，就会形成红色的玫 瑰吲哚。
微生物鉴定中常用生理生化试验
微⽣物鉴定中常⽤⽣理⽣化试验微⽣物常规⽣理⽣化试验摘要利⽤⼤肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus）进⾏淀粉和油脂实验，证明不同微⽣物对各种有机⼤分⼦的⽔解能⼒的不同，从⽽说明不同微⽣物有着不同的酶系统，掌握进⾏微⽣物⼤分⼦⽔解实验的原理和⽅法；使⽤⼤肠杆菌（Escherichia coli）和普通变形杆菌（Proteus vulgaris）进⾏葡萄糖和乳糖发酵试验，了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作⽤，掌握通过糖发酵鉴别不同微⽣物的⽅法；利⽤⼤肠杆菌（Escherichia coli）、产⽓肠杆菌（Enterobacter aerogenes）进⾏吲哚试验和甲基红试验，了解两个实验的反应原理以及在肠道细菌鉴定中的意义和⽅法。
关键词⽣理⽣化⼤分⼦试验糖发酵试验吲哚试验甲基红试验前⾔微⽣物代谢与其他⽣物代谢有着许多相似之处，也有不同之处。
微⽣物代谢重要特征之⼀，就是代谢类型的多样性，因此使得微⽣物在⾃然界的物质循环中起着重要的作⽤，同时也为⼈类开发利⽤微⽣物资源提供更多的机会与途径。
⼈们在微⽣物的分类鉴定⼯作中，常利⽤其⽣理⽣化反应作⽤作为重要依据。
微⽣物对⼤分⼦淀粉、蛋⽩质和脂肪不能直接利⽤，必须靠产⽣的胞外酶将⼤分⼦物质分解才能被微⽣物吸收利⽤。
胞外酶主要为⽔解酶，通过加⽔裂解⼤的物质为较⼩的化合物，使其能被运输⾄细胞内，这些过程均可以通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。
糖发酵试验是常⽤的鉴别微⽣物的⽣化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。
绝⼤多数细菌都能利⽤糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能⼒上有很⼤的差异。
不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因⽽发酵糖(醇)的能⼒各不相同，其产⽣的代谢产物亦不相同，如有的产酸产⽓，有的产酸不产⽓。
细菌的生化试验—血浆凝固酶试验(微生物检验课件)
主要用于金葡菌的鉴定。
血Hale Waihona Puke 凝固酶试验结果血浆凝固酶试验结果
血浆凝固酶试验
原理：
有些细菌能产生血浆凝固酶，可以使人和动物血浆中的纤维蛋白原转化成纤维 蛋白，从而使血浆凝固。
血浆凝固酶试验方法
方法： ➢ 玻片法：取洁净玻片一张，加生理盐水两小滴于玻片两端，用接种环挑取待检菌落
和对照菌均匀涂于盐水中，制成浓菌液，加兔或人血浆一滴于菌液中，观察结果。 ➢ 试管法：于3支试管中分别加入1:4稀释的血浆0.5ml，1支管加入待检菌肉汤培养物
微生物鉴定中的生理生化试验
微生物鉴定中的生理生化试验一．实验目的1.证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
4.了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二．实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.大分子水解试验微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸，蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等，这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。
如淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘液测定时，不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH 降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。
2. 糖发酵试验糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要，绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、加完、二氧化碳等），有些细菌只产酸不产气。
例如，大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌能分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。
发酵培养基含有蛋白胨、指示剂（溴甲酚紫）、倒置的德汉氏小管和不同的糖类。
当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）转变为黄色（pH5.2）。
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微生物鉴定中的生理生化试验微生物鉴定中的生理生化试验一．实验目的1.证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
4.了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二．实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.大分子水解试验微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物利用。
胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸，蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等，这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。
如淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘液测定时，不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。
2. 糖发酵试验糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要，绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、加完、二氧化碳等），有些细菌只产酸不产气。
例如，大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌能分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。
发酵培养基含有蛋白胨、指示剂（溴甲酚紫）、倒置的德汉氏小管和不同的糖类。
当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）转变为黄色（pH5.2）。
气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。
3．IMViC试验IMViC是吲哚（indol）、甲基红（methyl red test）、伏-普（Voges-Prokauer test）和柠檬酸盐（citrate test）四个实验的缩写，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水细菌学检查。
硫化氢试验也是检查肠道杆菌的生化试验。
大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中超过一定数量，则表示受粪便污染，产气肠杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分开。
吲哚试验是用于检测吲哚的产生，某些细菌可产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。
对二甲基氨基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰吲哚（红色）。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测的指标。
色氨酸水解反应：吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应：大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色（pH6.3）转变为红色（pH4.2），即甲基红反应。
尽管所有的肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸，但这个试验在区分大肠杆菌和产气肠杆菌上仍然是有价值的。
这两个细菌在培养的早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养后期仍能维持酸性pH4，而产气肠杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6，因此，大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
三．实验器材1. 菌种枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌。
2. 培养基和试剂（1）培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基试管（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄糖蛋白胨水培养基。
（2）溶液和试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、中性红试剂等。
3. 仪器及其它用品酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、试管、烧杯、量筒、德汉氏小管、无菌操作台等。
四．操作步骤1. 培养基的配制及灭菌按附录所示配方称量各组分，配制培养基（注意：在配置油脂培养基时不能使用变质油，油和琼脂及水先加热，调好PH后最后加入中性红；在配置糖发酵培养基时将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（PH7.6）以及糖溶液分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管，使之充满培养基）。
配制分装包扎完成后放入灭菌锅中113℃灭菌20min。
2.倒平板，接种及培养（1）淀粉水解试验①倒平板：无菌条件下将冷却至50℃下的淀粉培养基倒平板并冷却至室温。
②接种及培养：用记号笔在平板底部划成四部分，并标记各分区所接种的名称。
将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别在所标定对应的不同的区域点种（注：由于四种菌对淀粉的水解程度不同，为防止由于接种量过大导致四种菌对应区域水解部位发生重叠，宜采用点种的方式，如下图1）。
接种完成贴好标签后在37℃条件下培养两天。
图 1淀粉水解试验接种示意图图 2油脂水解试验接种示意图（2）油脂水解试验①倒平板：无菌条件下将冷却至50℃下的油脂培养基倒平板并冷却至室温（注：倒平板时，需不断搅拌，使油均匀分布于培养基中）；②接种及培养：用记号笔在平板底部划成四部分，并标记各分区所接种的名称。
将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别在所标定对应的不同的区域划十字线接种（如上图2所示）。
接种完成贴好标签后在37℃条件下培养两天。
（3）糖酵解试验①葡萄糖酵解的接种及培养：用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名（大肠杆菌，普通变形杆菌）。
取盛有葡萄糖发酵培养基的试管5支，按编号2支接种大肠杆菌， 2支接种普通变形杆菌，剩余的1支作为空白对照不接种。
接种完成后在37℃条件下培养两天。
②乳糖酵解的接种及培养：用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名（大肠杆菌，普通变形杆菌）。
取盛有乳糖发酵培养基的试管5支，按编号2支接种大肠杆菌，2支接种普通变形杆菌，剩余的1支作为空白对照不接种。
接种完成后在37℃条件下培养两天。
（4）IMViC试验①吲哚实验的接种及培养：用记号笔在各试管上标明所接种的菌名。
取盛有蛋白胨水培养基的试管4支，按编号2支接种大肠杆菌，另2支接种产气肠杆菌。
接种完成后在37℃条件下培养两天。
②甲基红实验的接种及培养：用记号笔在各试管上标明所接种的菌名。
取盛有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管4支，按编号2支接种大肠杆菌，另2支接种产气肠杆菌。
接种完成后在37℃条件下培养两天。
3.结果的检验（1）大分子水解试验的检验①淀粉水解试验的检验：观察各种细菌的生长情况，打开平板的盖子，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板，观察水解圈，出现水解圈的为阳性，记录试验结果。
②油脂水解试验的检验：取出平板，观察各种细菌产生的菌苔颜色，出现红色菌苔的为阳性，记录试验结果。
（2）糖发酵试验的检验：取出各试管，与空白对照组对照观察培养基的颜色以及倒立的小管中气泡的有无，若培养基变成黄色则说明细菌分解糖类并产酸；若倒立的小管中有气泡存在，则说明细菌分解糖类并产气。
产酸产气的为阳性。
（3）IMViC试验的检验①吲哚试验的检验：取出各试管，向培养基中加入3～4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂。
在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性。
②甲基红试验的检验：取出各试管，向培养基的培养物内加甲基红试剂2滴。
培养基变黄为阴性，红为阳性。
五．实验结果及分析1.实验结果（理论实验结果）A．大分子物质的水解试验（1）淀粉水解试验（我们的实验也得到了预期的结果）表1 淀粉水解试验结果(“+”表示阳性，“—”表示阴性)（2）油脂水解试验表2 油脂水解试验(“+”表示阳性，“—”表示阴性)B.糖发酵试验（1）葡萄糖发酵试验表3 葡萄糖发酵试验（“+”表示阳性，“—”表示阴性）（2）乳糖发酵试验表4 乳糖发酵试验（“+”表示阳性，“—”表示阴性）C.IMViC试验（1）吲哚试验表5 吲哚试验（“+”表示阳性，“—”表示阴性）（2）甲基红试验表6 甲基红试验（“+”表示阳性，“—”表示阴性）2.实验结果分析理想上的试验结果如上述表格所示，但是我们组的实验只有淀粉水解试验是成功的，其他的是失败的。
其中由淀粉水解试验可以得出枯草芽孢杆菌和大肠杆菌能产生淀粉酶的结论，枯草芽孢杆菌菌落周围的透明圈较大肠杆菌周围的透明圈大，可以大体判断前者较后者代谢利用淀粉的能力强。
通过油脂水解试验，理想上的结果是铜绿假单胞菌能产生脂肪酶分解脂肪从而出现红色斑点状菌苔，但可能是培养基的原因，我们的实验失败了。
通过糖酵解实验，理想结果应为大肠杆菌和普通变形菌都能够分解葡萄糖，但是普通变形菌不能够分解乳糖。
但实验结果却是普通变形菌不能分解乳糖，与事实相违背，实验失败。
究其原因可能是菌种在接种时出现失误而接种失败或是菌种本身存在有问题，还有可能是接种量太少，培养时间不够等原因。
在吲哚试验中，理想结果是大肠杆菌具有分解色氨酸产生吲哚的能力，而产气肠杆菌不能分解色氨酸为吲哚。
在甲基红实验中，理论上是大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH，产气肠杆菌转化有机酸为非酸性末端产物，我们的实验也失败了，试验失败有可能是因为培养基配错或菌种的原因。
六．注意事项1.淀粉水解试验中，观察各种细菌生长情况时，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，应轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板。
2.油脂水解试验中，制备固体油脂培养基时，应充分摇荡，使油脂均匀分布。
3.接种前要用记号笔做好标记，接种时要对号接种。
4.糖发酵试验中，接种后要轻缓摇动试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡。
否则会造成假象，得出错误的结果。
5.吲哚试验中，注意加入3~4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，再沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂。
否则就会观察不到在乙醚和培养物之间产生的红色环状物。
6.甲基红试验中，应该注意甲基红试剂不要加得太多，以免出现假阳性。
七．思考题1.你怎么样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？答：菌苔周围产生水解圈，可知淀粉在细胞外被水解，应该是细菌将淀粉酶分泌到胞外所致，因此为胞外酶。
2.不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？答：淀粉水解为葡萄糖才能被细胞利用，因此可以换用斐林试剂。
呈阳性者则说明产生了葡萄糖，淀粉被水解；阴性者说明淀粉未被水解。
3.假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？答：由于产生的CO2溶于水的量少且碳酸酸性若，因此颜色不变化，仍为紫色。