利用小鼠D-半乳糖衰老模型
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• 取1mL加入预先恒温于25℃水浴中的5mL DTNB分析
溶液，混匀，静置5 min后，于波长412nm处测定 吸光．计算每毫克蛋白质中GSH的含量．
4.脑组织中羟自由基(OH-)的测定
• 通过比色法检测抗氧化物质总抗氧化以及清除活性氧 能力．
• Fenton反应产生的OH-量与H202的量成正比，当用 Gress试剂显色时，形成红色物质，其呈色与OH-的多 少成正比关系．利用这一原理，进行清除活性氧能力 的测定．
慢性槲皮素增强小鼠空间学习记忆
摘要
•
以往研究发现，引起脑老化的神经系
统增龄性退行性变化与学习记忆能力衰退
存在一致性．老龄动物的学习记忆能力下
降，探究用小鼠D-半乳糖衰老模型，通过
Morris水迷宫动物行为实验和小鼠皮层与
海马组织还原型谷胱甘肽和羟自由基含量
测定等生化指标实验，对槲皮素延缓脑衰
• 置于玻璃匀浆器中，加入脑组织重量9 倍的冷生理盐水，在冰水浴中匀浆， 充分研磨，使组织块匀浆化．
3.脑组织中还原型谷胱甘肽(GSH)的测定
• 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量： • 取脑组织匀浆1mL，加入0.25mol／L pH8.0的
Tris-HCl 缓冲液3mL，再加入1mL 3％甲醛，混匀， 室温下分别准确静置60min
讨论
• 1.槲皮素的抗氧化机制 • 槲皮素是有效的自由基捕获剂和抗氧剂。 • 有实验表明黄酮类化合物对超氧阴离子、羟自由
• 羟自由基测试盒为活性氧试剂盒，使样本产生羟自由 基，其测试结果显示组织抗氧化能力的大小．
• 计算公式:总抗氧化能力=(测定管A-对照管A)×反应 液(mL)×样品测试前稀释倍数÷0.01÷30÷取样量 (mL)．
数据统计处理
• 所有实验数据均经一元方差分析过程进行 单变量方差分析．
实验结果
1.槲皮素对D-半乳糖处理小鼠Morris水迷宫 实验的影响
小鼠水迷宫第六轮实验时游泳平均速度的变化
• 数值示每组鼠从4个入水点到达平台的平均值 • 与Dgal组比较：* 表示P<0.05 **表示P<0．01 • 与Young组相比较：﹟表示P<0.05,﹟﹟表示 P<0.01,﹟﹟﹟表示P<0.001
• 在第五轮和第六轮训练中
• 青年组小鼠
70％可找到平台
• 小鼠水迷宫为直径120cm， 高50cm的圆形水池，周围 放有视觉提示物体．
• 水迷宫分为东南、西南、 东北、西北4个象限，其中 一个象限之中置一平台， 平台高15cm，表面直径为 6cm，水面高出平台1cm
• 水中加入黑色食用色素， 使动物在水面不能看见水 下平台．
• 实验时将小鼠随机从一个象限面向池壁放入水迷 宫，通过迷宫上方的摄像头和图像采集系统记录 小鼠找到平台休息的运动轨迹．
• 每天进行4次游泳训练，每次令动物从不同的象限 入水．对第1天在60s内未找到平台的小鼠，人为 引导其找到平台，以后几天记录的最长时间为60s， 持续实验6天.
• 第7天，去掉平台，将小鼠随机从一个象限面向池 壁放入迷宫，记录小鼠90s内穿越原平台位置的次 数．
2.小鼠脑组织匀浆的制备
• 取小鼠，迅速断头，在冰块上分离出 新皮层和海马，用4℃生理盐水冲洗干 净
• 3.化学结构
• 槲皮素的化学名为 3,5,7,3’,4’-五羟基黄 酮，多酚类化合物，化学 式C15H10O7，分子量 302.24
• 槲皮素具有很强的抗氧化 和清除自由基的能力
• 槲皮素及其衍生物具有亲 水性和亲脂性，其主要的 抗氧化活性基团是酚羟基
人体内槲皮素抑制细胞膜脂质的过氧化过程，增强机 体抗活性氧防御系统的能力，保护细胞不受过氧化作 用破坏
老作用进行了研究．
槲皮素
• 1.分布 槲皮素是一种在植物界分布很广的具有多
种生物活性的黄酮类化合物． 广泛存在于蔬菜和水果之中，如洋葱、马
铃薯、卷心菜、生菜、苹果、芒果和黑加仑 等
多种中草药中也含有槲皮素． 2.功能
扩张冠状血管，降低血脂，抗血小板聚集， 抗炎、抗过敏，抗糖尿病并发症，防止冠心 病、心率失常，抗氧化、清除自由基，以及 抗癌、抗肿瘤等药理作用．
2.槲皮素对D-半乳糖处理小鼠皮层和海马组织中GSH的影响
• 数值示平均值±标准误 • 与Dgal组比较:**示P<0.01 ***示P<0．001 • 与Young组相比较:###示P<0.001
3.槲皮素对D-半乳糖处理小鼠皮层和海马组织中 羟自由基的影响
• 数值示平均值±标准误 • 与Dgal组比较:**示P<0.01 ***示P<0．001 • 与Young组相比较:###示P<0.001
1
组 Dgal 别
2 Dq50
3 Dq75
4 Dq100
5 对照组
试
D-半乳糖50 mg/kg
剂
生理
试 生理盐水 槲皮素 槲皮素 槲皮素 盐水
剂
50mg/kg 75mg/kg 100mg/kg
• 实验时将其中4组小鼠每天颈后皮下注射
• 用药8周后，将5组小鼠分别进行行为测试和生化指标 测试．
1.Morris水迷宫实验
入水后到达平台的潜伏期随时间的变化
游泳速度随时间的变化
到达平台路程长度随时间的变化
小鼠水迷宫第六轮试验时小鼠潜伏期的变化
数值示每组鼠从4个入水点到达平台的平均值 与Dgal组比较：*表示P<0.05 **表示P<0．01 与Young组相比较：﹟表示P<0.05,﹟﹟表示 P<0.01,﹟﹟﹟表示P<0.001
实验材料
• 槲皮素、D-半乳糖，甘露醇、蔗糖和EDTA， 还原型谷胱甘肽试剂、羟自由基试剂
• 雄性小鼠50只随机分笼饲养，每笼10只小 鼠，室温控制在(22±1)℃，在12h明暗环 境条件下饲养，自由喂食、饮水．
实验方法
1. Morris水迷宫实验 2. 小鼠脑组织匀浆的制备 3. 脑组织中还原型谷胱甘肽(GSH)的测定 4. 脑组织中羟自由基(OH-)的测定
• 灌喂槲皮素100 mg／kg 41.32％
• 灌喂槲皮素75
45.45％
• 灌喂槲皮素50
18.18％
• D-半乳糖衰老组
8.33％
除平台后小鼠在原平台所在象限游泳时间占 总游泳时间的百分比
• 数值示平均值±标准误 • 与Dgal组比较:**示P<0.01 ***示P<0．001 • 与Young组相比较:###示P<0.001
溶液，混匀，静置5 min后，于波长412nm处测定 吸光．计算每毫克蛋白质中GSH的含量．
4.脑组织中羟自由基(OH-)的测定
• 通过比色法检测抗氧化物质总抗氧化以及清除活性氧 能力．
• Fenton反应产生的OH-量与H202的量成正比，当用 Gress试剂显色时，形成红色物质，其呈色与OH-的多 少成正比关系．利用这一原理，进行清除活性氧能力 的测定．
慢性槲皮素增强小鼠空间学习记忆
摘要
•
以往研究发现，引起脑老化的神经系
统增龄性退行性变化与学习记忆能力衰退
存在一致性．老龄动物的学习记忆能力下
降，探究用小鼠D-半乳糖衰老模型，通过
Morris水迷宫动物行为实验和小鼠皮层与
海马组织还原型谷胱甘肽和羟自由基含量
测定等生化指标实验，对槲皮素延缓脑衰
• 置于玻璃匀浆器中，加入脑组织重量9 倍的冷生理盐水，在冰水浴中匀浆， 充分研磨，使组织块匀浆化．
3.脑组织中还原型谷胱甘肽(GSH)的测定
• 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量： • 取脑组织匀浆1mL，加入0.25mol／L pH8.0的
Tris-HCl 缓冲液3mL，再加入1mL 3％甲醛，混匀， 室温下分别准确静置60min
讨论
• 1.槲皮素的抗氧化机制 • 槲皮素是有效的自由基捕获剂和抗氧剂。 • 有实验表明黄酮类化合物对超氧阴离子、羟自由
• 羟自由基测试盒为活性氧试剂盒，使样本产生羟自由 基，其测试结果显示组织抗氧化能力的大小．
• 计算公式:总抗氧化能力=(测定管A-对照管A)×反应 液(mL)×样品测试前稀释倍数÷0.01÷30÷取样量 (mL)．
数据统计处理
• 所有实验数据均经一元方差分析过程进行 单变量方差分析．
实验结果
1.槲皮素对D-半乳糖处理小鼠Morris水迷宫 实验的影响
小鼠水迷宫第六轮实验时游泳平均速度的变化
• 数值示每组鼠从4个入水点到达平台的平均值 • 与Dgal组比较：* 表示P<0.05 **表示P<0．01 • 与Young组相比较：﹟表示P<0.05,﹟﹟表示 P<0.01,﹟﹟﹟表示P<0.001
• 在第五轮和第六轮训练中
• 青年组小鼠
70％可找到平台
• 小鼠水迷宫为直径120cm， 高50cm的圆形水池，周围 放有视觉提示物体．
• 水迷宫分为东南、西南、 东北、西北4个象限，其中 一个象限之中置一平台， 平台高15cm，表面直径为 6cm，水面高出平台1cm
• 水中加入黑色食用色素， 使动物在水面不能看见水 下平台．
• 实验时将小鼠随机从一个象限面向池壁放入水迷 宫，通过迷宫上方的摄像头和图像采集系统记录 小鼠找到平台休息的运动轨迹．
• 每天进行4次游泳训练，每次令动物从不同的象限 入水．对第1天在60s内未找到平台的小鼠，人为 引导其找到平台，以后几天记录的最长时间为60s， 持续实验6天.
• 第7天，去掉平台，将小鼠随机从一个象限面向池 壁放入迷宫，记录小鼠90s内穿越原平台位置的次 数．
2.小鼠脑组织匀浆的制备
• 取小鼠，迅速断头，在冰块上分离出 新皮层和海马，用4℃生理盐水冲洗干 净
• 3.化学结构
• 槲皮素的化学名为 3,5,7,3’,4’-五羟基黄 酮，多酚类化合物，化学 式C15H10O7，分子量 302.24
• 槲皮素具有很强的抗氧化 和清除自由基的能力
• 槲皮素及其衍生物具有亲 水性和亲脂性，其主要的 抗氧化活性基团是酚羟基
人体内槲皮素抑制细胞膜脂质的过氧化过程，增强机 体抗活性氧防御系统的能力，保护细胞不受过氧化作 用破坏
老作用进行了研究．
槲皮素
• 1.分布 槲皮素是一种在植物界分布很广的具有多
种生物活性的黄酮类化合物． 广泛存在于蔬菜和水果之中，如洋葱、马
铃薯、卷心菜、生菜、苹果、芒果和黑加仑 等
多种中草药中也含有槲皮素． 2.功能
扩张冠状血管，降低血脂，抗血小板聚集， 抗炎、抗过敏，抗糖尿病并发症，防止冠心 病、心率失常，抗氧化、清除自由基，以及 抗癌、抗肿瘤等药理作用．
2.槲皮素对D-半乳糖处理小鼠皮层和海马组织中GSH的影响
• 数值示平均值±标准误 • 与Dgal组比较:**示P<0.01 ***示P<0．001 • 与Young组相比较:###示P<0.001
3.槲皮素对D-半乳糖处理小鼠皮层和海马组织中 羟自由基的影响
• 数值示平均值±标准误 • 与Dgal组比较:**示P<0.01 ***示P<0．001 • 与Young组相比较:###示P<0.001
1
组 Dgal 别
2 Dq50
3 Dq75
4 Dq100
5 对照组
试
D-半乳糖50 mg/kg
剂
生理
试 生理盐水 槲皮素 槲皮素 槲皮素 盐水
剂
50mg/kg 75mg/kg 100mg/kg
• 实验时将其中4组小鼠每天颈后皮下注射
• 用药8周后，将5组小鼠分别进行行为测试和生化指标 测试．
1.Morris水迷宫实验
入水后到达平台的潜伏期随时间的变化
游泳速度随时间的变化
到达平台路程长度随时间的变化
小鼠水迷宫第六轮试验时小鼠潜伏期的变化
数值示每组鼠从4个入水点到达平台的平均值 与Dgal组比较：*表示P<0.05 **表示P<0．01 与Young组相比较：﹟表示P<0.05,﹟﹟表示 P<0.01,﹟﹟﹟表示P<0.001
实验材料
• 槲皮素、D-半乳糖，甘露醇、蔗糖和EDTA， 还原型谷胱甘肽试剂、羟自由基试剂
• 雄性小鼠50只随机分笼饲养，每笼10只小 鼠，室温控制在(22±1)℃，在12h明暗环 境条件下饲养，自由喂食、饮水．
实验方法
1. Morris水迷宫实验 2. 小鼠脑组织匀浆的制备 3. 脑组织中还原型谷胱甘肽(GSH)的测定 4. 脑组织中羟自由基(OH-)的测定
• 灌喂槲皮素100 mg／kg 41.32％
• 灌喂槲皮素75
45.45％
• 灌喂槲皮素50
18.18％
• D-半乳糖衰老组
8.33％
除平台后小鼠在原平台所在象限游泳时间占 总游泳时间的百分比
• 数值示平均值±标准误 • 与Dgal组比较:**示P<0.01 ***示P<0．001 • 与Young组相比较:###示P<0.001