霍乱弧菌实验室检测完整版
霍乱弧菌实验室检测ppt课件
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• 6.增菌培养6-8小时后，需要取胨水生长物再次观察动力 ，进行6-8小时动力报告。并转种到庆大霉素平板并放入 35℃孵箱中培养。在进行6-8小时动力报告时，需要先取 消之前的审核，在原报告单上进行审核（1505970005） 。
11.12.2020
0139霍乱弧菌，并认定为真正的霍乱弧菌。
三、不典型01群霍乱弧菌：可被多价01群血清所凝集，但该群 菌不产生肠毒素，因此无致病性
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霍乱病原学特点
• 形态与染色
– 弧状或逗点状 – 革兰染色阴性 – 有一根单鞭毛，细菌运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流星状
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霍乱实验室检测
2020/12/11
检验科
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霍乱病原菌发现
• 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 • 1 9 0 5 年埃及埃儿托检疫站首次分离到ElTor弧菌，与霍乱
弧菌甚为相似，但经过多年的观察并不致病或仅引起轻度 腹泻，直到1937-1958年发生4次爆发后才逐渐认识到 ElTor弧菌致病性 • 1992年10月印度马德拉斯发现了新菌型O139霍乱弧菌
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疑似菌落初步鉴定：
7.庆大平板培养18-24h后挑取可疑菌落进行动力观察， 如动力阴性，可进行最终阴性报告，如下图。
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11.12.20ห้องสมุดไป่ตู้0
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• 注意：
• 1.动力试验阴性，无需进行血清制动试验。 • 2.任何一次动力阳性，都需进行血清制动试验并
传染病检测SOP工作手册-霍乱弧菌[2]
![传染病检测SOP工作手册-霍乱弧菌[2]](https://img.taocdn.com/s3/m/eecf24f0f90f76c661371a18.png)
霍乱弧菌实验室检测SOP手册1.标本的采集和送检1.1.标本的采集：采集标本的好坏，对检验工作的质量影响很大。
为尽快获得细检查结果，应在发病早期、在服用抗菌药物之前尽快采集标本和及时送到检验室。
标本以病人大便为主。
采便方法用灭菌的棉拭采集排出的新鲜大便，亦可用直肠棉拭或用采便管由肛门插入3㎝～5㎝采集。
一般要求水样便采集1ml～3ml，固形便采取蚕豆大小粪量。
有时病人的呕吐物、沾染大便的衣物和尸体的肠内容物亦可作为检材。
带菌者的大便可用棉拭或直肠棉拭采取。
1.2.标本的送检：采取的标本应立即接种培养基，典型病人的水样便含有大量病菌（106/ml～109/ml），可直接做分离培养并同时增菌培养。
不需做直接分离的均可接种碱性蛋白胨水增菌。
并立即送检验室。
1.3.标本运送途中较远，也可将标本放入文腊氏保存液或卡里—布莱尔运送培养基。
标本与保存液的比例为8ml～10ml保存液加1ml～3ml水样便或蚕豆大的固形便。
也可用厚吸墨纸条吸饱水样便放入小塑料袋内封好送检。
送检标本时，必须认真填写送检单，标本必须妥善包装，专人送检，并防止污染，注意安全，送检箱用后要严密消毒。
2.检验方法2.1.培养方法2.1.1.增菌培养：所有标本都应经过增菌，尤其是恢复期病人、带菌者或用过抗生素的病人标本，需增菌后再分离。
碱胨水接种后放37℃6～8小时，夏日可将运送时间计算在内。
保存液内的标本取1ml种入碱胨水中。
培养后慢慢地从碱胨水生长的菌膜下，取一接种环表层培养物接种于4号或庆大霉素琼脂平板。
标本含菌少时，可实行二次增菌。
取第一次碱胨水增菌后的表层液0.1～0.2ml，接种于另一碱胨水中，37℃6～8小时再做分离。
2.1.2.分离培养：急性典型病人标本在增菌的同时直接做分离培养，这样既可缩短检出的时间，还可避免标本中如有不凝集弧菌经增菌后大量繁殖，影响霍乱弧菌的分离。
其它标本均应增菌后再做分离培养。
当前的习惯多为碱性蛋白胨水增菌，再用强选择性培养基分离，37℃12～16小时长出的菌落，可供做玻片凝集用。
霍乱弧菌的实验室
霍乱的流行病学
霍乱的病原菌：霍乱弧菌 是我国《传染病防治法》：甲类传染病（又称2号病）， 是国际检疫的烈性传染病 霍乱：七次世界大流行： 1817-1923年 六次大流行 （均从印度恒河三角洲发源地）~古典生物型； 1961年 第七次大流行 ElTor生物型（我国以ElTor生物 型为主） 1992年 在印度， 孟加拉， 泰国发生的霍乱，分离到菌 株不与O1群霍乱血清凝集，定为O139群，被认为下一次 大流行的主角。浙江省94年发现，
疑似病人或急诊病人如何处理
如是高度怀疑的疑似病人或急诊病人可在接种碱性胨水培 养基的同时直接再接种于4号琼脂培养基一个。 标本直接涂片，镜检观察有没有呈鱼群穿梭样或流星状运 动活跃的细菌，如有加一滴霍乱诊断血清后再观察细菌运 动情况（3分钟运动被抑制为制动试验+） 标本直接涂片作革兰氏染色，镜检观察弧状或逗点状，革 兰染色阴性的细菌。 如形态典型，运动活泼，制动试验+，可作出疑似初步报 告，报涂片见到xx形态，xx染色性细菌等。--常见于紧急 情况
℃
- 抗原性
-生化反应：发酵葡萄糖，甘露醇，蔗糖，产酸不产气
霍乱红试验（+） o/129敏感试验（+） 赖氨酸，鸟氨酸脱羧酶（+） 精氨酸双水解酶（-） 氧化酶（+）粘丝试验（+）
-致病性：侵袭力 （鞭毛来自菌毛）霍乱肠毒素 -抵抗力：水中存活20天，怕酸耐碱，庆大霉素耐药 -消毒： 漂白粉
霍乱弧菌常规检验
霍乱弧菌的病原学特点
-形态与染色： 弧状或逗点状 -革兰染色阴性 有一根单鞭毛，细菌运动非常活跃，呈鱼 群穿梭样或流星状 -培养特性：营养要求不高，生长较快，兼性厌氧。 最适生长温度为37 ℃ ， 怕酸嗜碱，最适pH7.2-7.4, PH7.4-9.6快速生长 O抗原：耐热，耐受100℃2h,特异性高，分群 和分型的基础。 H抗原：不耐热，特异性低
霍乱弧菌检验程序
霍乱弧菌检验程序一、检查对象一天内腹泻三次或三次以上的病人。
二、标本采集及处理1、采集时间：在未服用抗生素前采样。
2、采集方式：用棉拭子或采便管从肛门插入直肠3—5厘米取样，必须看到有粪便黏附才可：对于自然排出的水样便、呕吐物及保存液保存的标本可直接接种分离或吸取0.5ML、成形大便取黄豆左右大小。
3、标本送检：标本采集后应立即送检。
若不能立即送检，可保存于碱性蛋白胨水中尽快送检验。
24小时以上才能送检的标本，应使用文一腊二氏保存液保存。
4、标本处理：将标本直接分离接种于4号琼脂及放入8—10ML碱性蛋白胨水中增菌。
“两管三板”：送检标本马上接种一个4号琼脂平板、同时碱性蛋白胨水培养管增菌；—8小时后接种增菌管内标本于第二块4号琼脂平板，同时转种第二管碱性蛋白胨水；6—8小时后继续接种第二管碱性蛋白胨水的标本于第三块4号琼脂平板上。
三、检验程序：1、弧菌形态：弧菌生长快、菌落大、培养4—5小时，原划线处有菌苔生长，8—10小时可长出小菌落，16小时菌落直径可达2毫米。
菌落略带灰色、半透明、扁平、稍隆起、光滑湿润，培养时间延长或室温放置后，菌落略带黄色，中心厚而周围透明，培养基含亚碲酸钾使得菌落成灰色，中心形成黑色金属碲沉淀。
在平皿上挑取典型菌落做玻片凝集试验。
2、玻片凝集试验：首先要注意抗原抗体比例和保证抗原（菌株）的纯洁性，使用O1群和O139群两种诊断血清。
如未获单个菌落，可挑取可疑菌苔边缘透明部分做玻片凝集。
注意，凝集的菌落应以生理盐水作对照，检查有无自然凝集；然后用此玻片显微镜下看动力（动力活泼如流星样）；再将此玻片革兰氏染色看弧菌形态。
3、弧菌分型：稻叶型和小川型诊断血清做玻片凝集试验进一步分型。
四、报疫程序：一旦发现阳性可疑标本立即用铁罐保存，通知送检科室，确认病人资料；上报医院总值班2460或2560，派车送海珠区防疫站确证。
五、标本处理：发现Ⅱ号菌阳性可疑标本，即送标本往防疫站确认。
霍乱弧菌实验室检测
▪ 深入分型判定(省CDC进行)
注：快速检测并不能替换常规检测进行，只是 作为辅助检测一个伎俩
霍乱弧菌实验室检测
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霍乱弧菌胶体金免疫层析检测
霍乱弧菌实验室检测
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荧光PCR检测霍乱弧菌
病例标本检测 环境和食品调查初筛方法
霍乱弧菌实验室检测
O1群、 O139群双色荧光检测试剂盒 深圳生科源生物技术有限企业
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O1群和O139群霍乱弧菌检验程序
▪ 培养特征：
营养要求不高，兼性厌氧，37℃生长，怕酸嗜碱， pH:7.4-9.6快速生 长
▪ 检验依据：
WS 289- 《霍乱诊疗标准》
霍乱防治手册（1999年第五版）
霍乱弧菌实验室检测
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霍乱试验室检测
样品采集和运输 不一样品病原分离流程及技术关键点
➢粪便 ➢水体 ➢水产品，食品等
平板分离及可疑菌落挑取
+
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O139 —
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霍乱弧菌实验室检测
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▪ 国内商品化霍乱检测血清
▪ 国外血清：日本生研，泰国S&A血清等
霍乱弧菌实验室检测
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深入试验
氧化酶试验 1％盐酸对氨基二甲基苯胺或盐酸 二甲基对苯二胺水溶液
霍乱弧菌实验室检测
粘丝试验 0.5％去氧胆酸钠水 溶液
传染病学指导：霍乱的实验室检查
霍乱常⽤的实验室检查有：
（1）直接镜检：
①直接涂⽚染⾊：将标本涂⽚，固定后⽤1∶10稀释⽯炭酸复红染⾊和⾰兰⽒染⾊，镜检有⽆典型弧菌。
典型霍乱弧菌互相连接平⾏排列，有如“鱼群”。
②悬滴标本：将标本制成悬滴，镜检细菌动⼒，⽤暗视野显微镜。
霍乱弧菌运动活泼，呈⼩鱼穿梭状。
（2）分离培养：将吐泻物直接或先经碱性胨⽔增菌后，接种于庆⼤霉素琼脂等培养基，容易检出霍乱弧菌。
应⽤荧光抗体检测粪便中霍乱弧菌，可于1～2⼩时内获得结果。
（3）⾎清学检查：可作⾎清凝集试验。
在发病第1～3⽇及第10～15⽇各取1份⾎清，若第2份⾎清的抗体效价⽐第1份增⾼4倍或4倍以上，有诊断参考价值。
（4）制动试验——快速诊断：在急性病⼈的⽔样便中含有⼤量弧菌，如悬滴检查阳性，再滴加不含防腐剂的霍乱多价⾎清（使⽤浓度为1∶64），⼏分钟内细菌运动停⽌，凝集成块即为阳性。
若具备下列条件之⼀者，可确诊为霍乱：
①凡有腹泻、呕吐等症状，⼤便培养霍乱弧菌阳性者；
②霍乱流⾏期间，在疫区有典型霍乱症状，⼤便培养阴性，⽽⽆其他原因可查者；
③有吐泻症状，霍乱弧菌培养阴性，作⾎清凝集试验第2份⾎清抗体效价呈4倍以上增⾼者。
在⾮疫区，凡有典型泻吐症状，在病原学检查未确定时，或在霍乱流⾏期间，曾接触过霍乱患者，有腹泻症状⽽⽆其他原因可查者，均应⾼度怀疑为霍乱，在给予积极处理的同时，应作⼤便培养，隔⽇1次，连续3次阴性者，才可以否定诊断，并作出疫情更正报告。
霍乱弧菌的检验程序
霍乱弧菌的检验程序临床细菌实验室接到高度疑似患者标本，应尽快地进行检验。
具体处理方法如下。
1.临床标本（患者排泄物、呕吐物、肛拭、肛管内容物及残留、剩余食物等）直接涂片，观察动力，再做制动试验以及革兰染色，镜检发现革兰阴性、细小、直的、微弯、逗号状的杆菌。
疑似者即予电话报告2.标本直接接种：①血琼脂平板；②弧菌鉴别性平板（4号琼脂平板、碱性琼脂平板）；③接种碱性胨水3.保留原始标本（不可置于冰箱冷藏）4.35℃孵育上述所有平板及胨水5.6~8h后：①取碱性胨水培养物涂片（直接观察动力、做制动试验）染色镜检；②移种鉴别性琼脂平板和血琼脂平板；③霍乱红试验；④观察血琼脂平板，见有微小菌落生长。
立即涂片染色，霍乱多价血清凝集，氧化酶试验。
如符合霍乱弧菌的推断性鉴定，可作出早期初步报告。
6.继续孵育过夜后，做玻片凝集试验。
自分离平板上挑取可疑菌落与霍乱多价诊断血清做玻片凝集试验，所用血清的效价应在1：80～1：160，如过浓，则稀释后再做凝集。
将稀释血清滴加在洁净的载玻片上，挑取可疑菌落混悬于血清内，即刻（一般不超过10s）出现肉眼可见的明显凝集者为阳性。
菌落应以生理盐水作对照，不发生凝集。
为了提高阳性检出率，应多挑可疑菌落进行玻片凝集。
将O1群霍乱多价血清凝集阳性菌落再做氧化酶、涂片染色镜检，初步推断性鉴定，将此高度疑似菌株，报告当地疾病控制中心做最后鉴定。
霍乱弧菌的检测1.涂片检查：取新鲜送检标本涂片2张，干燥后，用乙醇或甲醇固定，分别用革兰染色剂1：10稀释的石碳酸复红染色，用油镜检查，观察有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌。
悬滴检查：取患者粪便，制成悬滴标本或圧滴标本，检查细菌的动力，霍乱弧菌古典型和EL-Tor型常呈穿梭状及活泼的活动，在悬滴涂片中加O1群霍乱弧菌诊断血清后，在显微镜下观察，若原运动活泼的现象停止，为制动试验阳性。
2.培养：取疑似患者粪便直接接种于碱性蛋白胨水中，进行增菌，同时划线接种于碱性琼脂平板或TCBS平板及血液琼脂平板，孵育于35℃。
霍乱弧菌检测方法 文档
霍乱弧菌的检测霍乱弧菌相关知识：稻叶型（A、C）古典型小川型（A、B、C少量）O1群霍乱弧菌：彦岛型（A、B、C）稻叶型（A、C）艾尔托型小川型（A、B、C少量）彦岛型（A、B、C）实验室准备：1.培养基：碱性蛋白胨水、TCBS、4号或庆大霉素琼脂、营养平板、半固体菌种保存管。
2.试剂：拉丝实验用试剂（0.5%去氧胆酸钠水溶液）、氧化酶试剂（1%盐酸对氨基二甲基苯胺或盐酸对氨基四甲基苯胺水溶液。
3.诊断血清：O1群霍乱诊断血清、稻叶型霍乱血清、小川型霍乱血清、O139群霍乱血清。
4.快诊试剂：O1群霍乱胶体金标记快诊卡、O139群霍乱胶体金标记快诊卡。
霍乱弧菌检验流程图：标本37度6-8小时TCBS、4号或庆大霉素琼脂小时胶体金快诊卡/制动等试验血清学凝集试验氧化酶实验拉丝实验O/129敏感试验初步报告、菌种保存一、采样（一）水样便采取1-2毫升，成形便采取指甲大小的粪量。
病人呕吐物、沾染粪便的衣物、尸体的肠腔和口腔内容物亦可做为检材；（二）外坏境样本可采取病人的污染衣物、剩饭菜、可疑食品、抹布、污水、坑塘水、井水、公厕粪便、苍蝇等；（三）按1：10比例置入碱性蛋白胨水增菌液中，迅速送往实验室。
二、增菌、培养（一）所有粪便标本都应经过增菌，尤其是恢复期病人、带菌者或用过抗菌药物的病人标本含菌量少，单靠直接分离不易检出。
需经碱胨水37度增菌6-8小时后分离(夏日可将运送时间计算在内)；（二）标本含菌量少时，为提高检出率可实行2次增菌，取第一次碱胨水增菌后的培养物表层液0.1-0.2毫升，接种于8-10毫升的碱胨水中，37度培养6-8小时后再做分离。
（三）霍乱弧菌好氧，易形成菌膜，故在取出增菌管时动作要轻，接种环于菌膜下取一满环，划线接种于TCBS或4号琼脂平板37℃10~14h孵育培养。
三、快速诊断（一）、直接镜检：为争取最快速度作出诊断，采取病人“米泔水样”大便或呕吐物，悬滴法镜检（最好用暗视野），可见具有流星状动力的细菌。
霍乱弧菌实验室检测
检验科
2018/11/23
* 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌
* 1905年埃及埃儿托检疫站首次分离到ElTor弧菌，与霍乱弧菌甚
为相似，但经过多年的观察并不致病或仅引起轻度腹泻，直到 1937-1958年发生4次爆发后才逐渐认识到ElTor弧菌致病性
* 1992年10月印度马德拉斯发现了新菌型O139霍乱弧菌
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注意：门诊在上午11：00之前收到的大便弧培标本，需要将转种 好的胨水和患者化验单一起转运至微生物室，后续步骤由微生 物室来完成：门诊在上午11：00以后收到的标本，需将转种好 的胨水和患者化验单一起放置门诊35°C的培养箱中培养，门诊 拖班人员需跟当晚住院部夜班人员交班，夜班人员需在转种胨 水6-8h后看动力和转种庆大平板，记录并审核结果，第二天由师 傅将平板和化验单转运至微生物室，后续步骤由微生物室来完 成。
2018/11/23
* 血清制动试验包括4瓶血清。第1瓶为O1群多价，第2、3瓶为小
川、稻叶型单价。第4瓶为O139群抗血清。当观察到动力阳性， 首先进行O1群多价的制动试验。如为阴性，接着做O139群的制 动试验。两者均阴性，可初步排除霍乱弧菌病感染。如O1多价 制动试验阳性，则进一步进行第2、3瓶的制动试验，即进行小 川、稻叶型单价血清的制动试验
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* 接收到大便动力弧菌培养标本，请先建单。方法如下
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* 5.取粪便标本录入结果（阴性或阳性），并审核打印报告。同时粪 便标本转种到碱性胨水中并放入35℃孵箱中培养,在化验单上记 录转种时间。
霍乱弧菌实验室检验技术20060409
B.采样：
病人标本 ：用采便管或病人自主留样 便：水样便1-3毫升（尽可能的多一些） 成形便取指甲大小
C.悬滴试验:
动力试验：取1滴急性期病人水样便分别滴在 玻片上，直接镜检（暗视野或相差显微镜） 可见具有流星状或穿梭样动力的细菌，为动 力阳性； 制动试验:便标本与血清比例1：1混匀，2滴 便标本悬液（成形便可生理盐水稀释制成悬 液）各加入2滴O1群或O139群霍乱免疫血清后， 如运动停止，凝集成块，视为制动阳性。
（二）培养特性
生长要求：
1、营养要求简单 在普通培养基上生长良好，属兼性厌氧菌。 2、怕酸嗜碱 可繁殖的酸碱度（pH）为6.0～9.2，适宜 的pH为7.2～7.4。初次分离，常用 pH8.5的碱 性蛋白胨水。培养增菌6-8h，可抑制其他杂菌 的生长。
3、耐一定浓度的盐 4、需氧性强、又具兼性厌氧 5、怕冷喜湿嗜中温 生长温度为16～42℃，培养温度以37℃ 最为适宜。 6. 在培养基上的生长特性 液体培养基: 碱性蛋白胨水 固体培养基：庆大平板 半固体培养基
一. 霍乱及其病原体的研究简史 ﹙一﹚霍乱概念：
霍乱（Cholera）是由O1血清群和 O139血清群霍乱弧菌﹙Vibrio cholerae ﹚ 引起的急性肠道传染病﹙本病以腹泻大量 水样便并拌有脱水症状为特征﹚，其发病 急，传播快，波及范围广，可引起大流行。 是国际检疫传染病之一，也是《中华人民 共和国传染病防治法》规定的甲类传染病 之一。
工作要求:
按开诊要求准备好各种检验器材、 培养基和血清，并保证诊断血清的 质量 （备用和保藏）。 工作人员应增强工作责任心，掌握 正确操作方法。 提高检验技术水平和鉴别能力。 （检验超时、不熟练）
霍乱弧菌实验室检验技术
抗原构造
O139群霍乱弧菌不被已知的O1-O138群霍乱弧 菌诊断血清所汇集。表明本菌的抗原性与O1群 和其它非O1群霍乱弧菌有明显区别。 革兰氏阴性菌的抗原性都是由细胞壁的脂多 糖（LPS）所决定。通过对O139群霍乱弧菌的 LPS进行化学分析和血清学分析后发现O139群 霍乱弧菌缺少O1群霍乱弧菌LPS中的特异性成 分。 通过两者进行提取其LPS然后进行被动溶血试 验与被动溶血抑制试验检测，结果显示两者抗 原性有显著不同。O139群霍乱弧菌有荚膜而 O1群霍乱弧菌无荚膜。
2012-5-4
两者不同点：
群所致病中有44 O139群所致病中有 44.3% 可发生腹部痉 139 群所致病中有 44. 也有引起严重粘液性腹泻的， 挛 ， 也有引起严重粘液性腹泻的 ， 进入 外周血液可引起发热， 外周血液可引起发热 ， 出现菌血症或败 血症。 印度出现20 例病人中有17 例发热、 20例病人中有 17例发热 血症 。 印度出现 20 例病人中有 17 例发热 、 白细胞增多。 白细胞增多 。 而 O1 群引起的病人未曾见 过。 鉴别两者， 必须通过血清学诊断 来区分。 血清学诊断来区分 鉴别两者 ， 必须通过 血清学诊断 来区分 。 22群与 139群血清有交叉汇集反应 群与O 群血清有交叉汇集反应， O22群与O139群血清有交叉汇集反应，必 须用O22群弧菌吸收 群弧菌吸收， 须用O22群弧菌吸收，去除交叉汇集现象。
病，发病急、传播速度快、波及范 围广、危害严重的甲类传染病。 ♦ 是国内交通检疫传染病之一。 ♦ 也是当今三种国际检疫传染病中最 严重的一种。
2012-5-4
霍乱病原菌发现
♦ 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 ♦ 1905年埃及埃儿托检疫站首次分离到
霍乱弧菌的分离与鉴定、霍乱诊断的相关实验技术、鉴别诊断.pptx
菌株的复核鉴定应以纯培养物为基础，至少应包括以下项目：革兰染色、黏丝试验、氧化酶试验、血清分型、 动力试验、CT毒素基因检测（按附录B）,也可选择生化鉴定条或全自动微生物生化鉴定系统。凝集反应不典型或者 怀疑为彦岛型的菌株应增做试管凝集试验。菌株血清群的鉴定也可用聚合酹链式反应（PCR）方法扩增01群和0139 血清群脂多糖特异性基因力来确定（按附录B）。
C.2.1肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）性肠炎
潜伏期4h〜24h,有发热、恶心呕吐及腹部绞痛，腹泻呈黄水或清水样便，无脓血便,严重腹泻者亦可产生重度脱 水，婴幼患儿常因此而危及生命。
C.2.2肠致病性大肠埃希菌（EPEC）性肠炎
主要症状为腹泻，大便为黄色和黄绿色蛋花样稀水便，量较多，常有特殊腥臭味，重症者可有脱水等全身症状 。
A.2标本的送检
采得的标本应立即接种于培养基，不能立即接种的，应放入pH8.4〜9.2的碱性蛋白陈水或文腊二氏保存液或插 入Cary-Blail•半固体保存培养基中，放置于冷藏箱内保存、送检。粪便或呕吐物等标本与运送培养基或增菌液的比例 约为1:10,肛拭子应插入5m1.运送培养基或增菌液中。
A.3分离培养
诺如病毒感染在各年龄人群普遍易感，可引起暴发流行，是成人病毒性腹泻的首位病原体。临床症状主要以腹 泻和呕吐为主，水样便或稀便多见，可伴有腹痛、恶心、纳差、乏力、低至中度发热等。粪便标本诺如病毒检测阳 性。
C.6急性细菌性痢疾
由志贺菌引起，潜伏期Id〜2d,起病急，以发热、腹痛、腹泻、里急后重、脓血便为主要特征，有全身感染中毒 症状。重症患者可伴有头痛、全身肌肉酸痛甚至惊厥，可出现脱水和电解质紊乱相关症状。不典型的急性细菌性痢 疾以婴儿多见，多无全身中毒症状、不发热或低热，腹痛较轻，粪便呈水样或稀糊样，含少量黏液，左下腹可有压 痛，应注意鉴别。急性中毒性细菌性痢疾可出现高热，在儿童患者早期即可出现烦躁、谐妄、惊厥等，发病初期肠 道症状不明显。成人患者主要表现为黏液脓血便频繁，呈里急后重。从粪便或肛拭标本等检出志贺菌可确诊。
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中、重型病例 。 临床诊断病例：符合下列任一类病例均为临床诊断病例。 临床表现为轻、中、重型或中毒型病例，并在腹泻病患者日常生活用品或家居环境中
检出O1群或/和O139群霍乱弧菌；
在一起确认的霍乱暴发疫情中，暴露人群中临床表现为轻、中、重型或中毒型病例。 实验室确诊病例： 临床病人并粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到O1群或/和O139群霍乱弧菌 ； 在疫源检索中，粪便培养检出O1群或O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。
挑可疑菌落、多价血清凝集
胶体金层析 卡检测
胶体金层析 卡检测
核酸提取 荧光PCR检测
血清分型、生化鉴定
问题：实验时间；灵敏度；初筛；等待时间
标本的采集和运输
采集：
病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、操作台、砧板、下水道口……
要求：位置、数量
运输：
C-B运输培养基（pH8.4） 碱性蛋白胨水：不是最佳的，尤其6小时内还不能进行培养时，不要用 运输培养基用前预冷1-2小时，采样后不能立即运至实验室时，需冷藏
特定地区？
感染因素多样化
初级感染因素、衍生的感染因素
确诊 病例 采样检测
就诊
患者
- 临床及时发现病例 - 细致的流行病学调查 - 实验室检测与分析 - 信息整合 - 控制行动
标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、
前处理：运输、调pH
增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过 夜
涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素
S
SS S
S
1998年8月，欧芹导致的宋内志贺菌腹泻暴发：美国、加拿大、墨西哥
暴发调查
散发菌株 此暴发的分离株 散发菌株
海水、 河口水 霍乱弧 菌增殖、 超本底 水平
海、水产 品养殖区
批发、 市售交ຫໍສະໝຸດ 污染餐馆加工 家庭加工交叉 污染
食用者
无感染 带菌者 患者-不就诊 患者-就诊-未检出 患者-就诊-检出
胶体金免疫层析检测
C
C
C
T
T
T
结果： 阴性
阳性
阳性？
荧光PCR检测霍乱弧菌
病例标本检测 环境和食品调查的初筛方法
不同暴发
- 不同地点 - 不同时间 - 不同的病人 - 不同的分离株
Outbreak
A
Outbreak
B
ICDC, China CDC
Ancestor strain
Variant A
Variant B
Outbreak
C
关系? 关联? 溯源：
- 流行病学证据? - 实验室证据?
获得一个细菌染色体DNA的指纹图谱:
细菌染色体DNA 限制性内切酶 凝胶和专用电泳仪
电泳图谱
BioNumerics --- 数据管理和分析
实验室网络化监测的作用：暴发的发现和溯源
S
SS
霍乱的实验室检测
➢ 细菌分离培养 ➢ 辅助检测方法
➢ 制动试验 ➢ 免疫荧光球法 ➢ PCR检测 ➢ 胶体金检测卡
。。。。。。
标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、
前处理：运输、调pH
增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过 夜
？ ？
涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素
挑可疑菌落、多价血清凝集
2 粪便直接涂片镜检：可见排列成鱼群状的革兰染色阴性
的弧菌。
划平板
挑菌落与玻片凝集
庆大霉素平板和4号琼脂：多呈半透明状，菌落中央常呈灰色或灰黑色， 并随培养时间的延长而加深（由于这类培养基均含有亚碲酸盐成份）。 TCBS（硫代硫酸盐枸櫞酸盐胆盐琼脂）：菌落生长呈黄色发亮、表面光 滑、润湿、稍凸起、边缘整齐。 与诊断血清的玻片凝集：
流行特征：
➢ 发病急 ➢ 传播快 ➢ 波及范围广 ➢ 能引起大流行
霍乱诊断标准
带菌者：
无霍乱临床表现，但粪便或肛拭子细菌培养检出O1群或/和O139群霍乱弧菌者。
疑似病例：下列任一类病例均为疑似病例。 与霍乱病人或带菌者有密切接触史或共同暴露史，临床表现为轻型病例 ； 临床表现为轻型病例 或中毒型病例，并粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱毒素基因
• 实验室检查： • （一）血液检查：血液浓缩表现。 • （二）尿常规检查：可见少量蛋白、白细胞、红细胞、管
型等。 • （三）粪常规检查：为水样便，无炎症细胞成分。 • （四）粪便细菌学检查： • 1 粪便悬滴检查及制动试验：在暗视野显微镜下发现有小
亮点划过视野，为动力阳性，表明标本中有弧菌（不一定 为霍乱弧菌），如再滴加诊断血清，在上述镜中，看不到 小亮点划过，为制动试验阳性，提示有霍乱弧菌。
霍乱弧菌的实验室检测与分析
霍乱
病原体：霍乱弧菌
O1群 El Tor型
O139群
古典型
霍 乱 乱于胃肠则为霍乱
病原体
➢ 霍乱弧菌O1群（古典型、El Tor型）、O139群
发病特征：
➢ 剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡 ➢ 不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20－50％（重症病人达70－100％）
O1群和O139群抗原构造与血清分型
型别 小川
群特异性抗原
A
O139
+
型特异性抗原
B
C
+
+少量
稻叶
+
—
+
彦岛
+
+
+
O139 —
+
—
—
进一步实验
氧化酶试验
1％盐酸对氨基二甲基苯胺或盐酸二甲基对 苯二胺水溶液
粘丝试验
0.5％去氧胆酸钠水溶液
• 霍乱快诊试剂 • O1群霍乱胶体金标记快诊卡 • O139群霍乱胶体金标记快诊卡
多价血清 O1：小川、稻叶 O139 每份标本至少挑选5个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。
常用的选择培养基为硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平 板（TCBS），霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落，因发酵
蔗糖产酸而使菌落呈黄色。
血清学鉴定： 对可疑菌落与O1群霍乱多价诊断血清作玻片凝集试验，如很快出现 肉眼可见的明显凝集即为阳性。 阳性者必须用生理盐水按同样方法作对照试验，以排除菌体自凝而导 致的假阳性反应。 O1群多价血清凝集阳性者用小川和稻叶单价血清进行进一步分型。 O1群多价血清不凝集的可疑菌落，应用O139群诊断血清作玻片凝 集。 每份标本至少挑选5个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。 小川型菌株有时在稻叶型单价血清中可出现弱凝集，这并非彦岛型， 而是小川型含有少量C抗原成分