霍乱弧菌实验室检测完整版
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PCR检测阳性或粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱弧菌快速辅助检测试验阳性 ；
中、重型病例 。 临床诊断病例：符合下列任一类病例均为临床诊断病例。 临床表现为轻、中、重型或中毒型病例，并在腹泻病患者日常生活用品或家居环境中
检出O1群或/和O139群霍乱弧菌；
在一起确认的霍乱暴发疫情中，暴露人群中临床表现为轻、中、重型或中毒型病例。 实验室确诊病例： 临床病人并粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到O1群或/和O139群霍乱弧菌 ； 在疫源检索中，粪便培养检出O1群或O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。
Variant B
Outbreak
C
关系? 关联? 溯源：
- 流行病学证据? - 实验室证据?
获得一个细菌染色体DNA的指纹图谱:
细菌染色体DNA 限制性内切酶 凝胶和专用电泳仪
电泳图谱
BioNumerics --- 数据管理和分析
实验室网络化监测的作用：暴发的发现和溯源
S
SS
流行特征：
➢ 发病急 ➢ 传播快 ➢ 波及范围广 ➢ 能引起大流行
霍乱诊断标准
带菌者：
无霍乱临床表现，但粪便或肛拭子细菌培养检出O1群或/和O139群霍乱弧菌者。
疑似病例：下列任一类病例均为疑似病例。 与霍乱病人或带菌者有密切接触史或共同暴露史，临床表现为轻型病例 ； 临床表现为轻型病例 或中毒型病例，并粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱毒素基因
• 实验室检查： • （一）血液检查：血液浓缩表现。 • （二）尿常规检查：可见少量蛋白、白细胞、红细胞、管
型等。 • （三）粪常规检查：为水样便，无炎症细胞成分。 • （四）粪便细菌学检查： • 1 粪便悬滴检查及制动试验：在暗视野显微镜下发现有小
亮点划过视野，为动力阳性，表明标本中有弧菌（不一定 为霍乱弧菌），如再滴加诊断血清，在上述镜中，看不到 小亮点划过，为制动试验阳性，提示有霍乱弧菌。
胶体金层析 卡检测
核酸提取 荧光PCR检测
血清分型、生化鉴定
问题：实验时间；灵敏度；初筛；等待时间
标本的采集和运输
采集：
病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、操作台、砧板、下水道口……
要求：位置、数量
运输：
C-B运输培养基（pH8.4） 碱性蛋白胨水：不是最佳的，尤其6小时内还不能进行培养时，不要用 运输培养基用前预冷1-2小时，采样后不能立即运至实验室时，需冷藏
挑可疑菌落、多价血清凝集
胶体金层析 卡检测
特定地区？
感染因素多样化
初级感染因素、衍生的感染因素
确诊 病例 采样检测
就诊
患者
- 临床及时发现病例 - 细致的流行病学调查 - 实验室检测与分析 - 信息整合 - 控制行动
标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、
前处理：运输、调pH
增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过 夜
涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素
S
SS S
S
1998年8月，欧芹导致的宋内志贺菌腹泻暴发：美国、加拿大、墨西哥
暴发调查
散发菌株 此暴发的分离株 散发菌株
海水、 河口水 霍乱弧 菌增殖、 超本底 水平
海、水产 品养殖区
批发、 市售
交叉 污染
餐馆加工 家庭加工
交叉 污染
食用者
无感染 带菌者 患者-不就诊 患者-就诊-未检出 患者-就诊-检出
2 粪便直接涂片镜检：可见排列成鱼群状的革兰染色阴性
的弧菌。
划平板
挑菌落与玻片凝集
庆大霉素平板和4号琼脂：多呈半透明状，菌落中央常呈灰色或灰黑色， 并随培养时间的延长而加深（由于这类培养基均含有亚碲酸盐成份）。 TCBS（硫代硫酸盐枸櫞酸盐胆盐琼脂）：菌落生长呈黄色发亮、表面光 滑、润湿、稍凸起、边缘整齐。 与诊断血清的玻片凝集：
多价血清 O1：小川、稻叶 O139 每份标本至少挑选5个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。
常用的选择培养基为硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平 板（TCBS），霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落，因发酵
蔗糖产酸而使菌落呈黄色。
血清学鉴定： 对可疑菌落与O1群霍乱多价诊断血清作玻片凝集试验，如很快出现 肉眼可见的明显凝集即为阳性。 阳性者必须用生理盐水按同样方法作对照试验，以排除菌体自凝而导 致的假阳性反应。 O1群多价血清凝集阳性者用小川和稻叶单价血清进行进一步分型。 O1群多价血清不凝集的可疑菌落，应用O139群诊断血清作玻片凝 集。 每份标本至少挑选5个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。 小川型菌株有时在稻叶型单价血清中可出现弱凝集，这并非彦岛型， 而是小川型含有少量C抗原成分
O1群和O139群抗原构造与血清分型
型别 小川
群特异性抗原
A
O139
+
型特异性抗原
B
C
+百度文库
+少量
稻叶
+
—
+
彦岛
+
+
+
O139 —
+
—
—
进一步实验
氧化酶试验
1％盐酸对氨基二甲基苯胺或盐酸二甲基对 苯二胺水溶液
粘丝试验
0.5％去氧胆酸钠水溶液
• 霍乱快诊试剂 • O1群霍乱胶体金标记快诊卡 • O139群霍乱胶体金标记快诊卡
霍乱弧菌的实验室检测与分析
霍乱
病原体：霍乱弧菌
O1群 El Tor型
O139群
古典型
霍 乱 乱于胃肠则为霍乱
病原体
➢ 霍乱弧菌O1群（古典型、El Tor型）、O139群
发病特征：
➢ 剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡 ➢ 不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20－50％（重症病人达70－100％）
胶体金免疫层析检测
C
C
C
T
T
T
结果： 阴性
阳性
阳性？
荧光PCR检测霍乱弧菌
病例标本检测 环境和食品调查的初筛方法
不同暴发
- 不同地点 - 不同时间 - 不同的病人 - 不同的分离株
Outbreak
A
Outbreak
B
ICDC, China CDC
Ancestor strain
Variant A
霍乱的实验室检测
➢ 细菌分离培养 ➢ 辅助检测方法
➢ 制动试验 ➢ 免疫荧光球法 ➢ PCR检测 ➢ 胶体金检测卡
。。。。。。
标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、
前处理：运输、调pH
增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过 夜
？ ？
涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素
挑可疑菌落、多价血清凝集
中、重型病例 。 临床诊断病例：符合下列任一类病例均为临床诊断病例。 临床表现为轻、中、重型或中毒型病例，并在腹泻病患者日常生活用品或家居环境中
检出O1群或/和O139群霍乱弧菌；
在一起确认的霍乱暴发疫情中，暴露人群中临床表现为轻、中、重型或中毒型病例。 实验室确诊病例： 临床病人并粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到O1群或/和O139群霍乱弧菌 ； 在疫源检索中，粪便培养检出O1群或O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。
Variant B
Outbreak
C
关系? 关联? 溯源：
- 流行病学证据? - 实验室证据?
获得一个细菌染色体DNA的指纹图谱:
细菌染色体DNA 限制性内切酶 凝胶和专用电泳仪
电泳图谱
BioNumerics --- 数据管理和分析
实验室网络化监测的作用：暴发的发现和溯源
S
SS
流行特征：
➢ 发病急 ➢ 传播快 ➢ 波及范围广 ➢ 能引起大流行
霍乱诊断标准
带菌者：
无霍乱临床表现，但粪便或肛拭子细菌培养检出O1群或/和O139群霍乱弧菌者。
疑似病例：下列任一类病例均为疑似病例。 与霍乱病人或带菌者有密切接触史或共同暴露史，临床表现为轻型病例 ； 临床表现为轻型病例 或中毒型病例，并粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱毒素基因
• 实验室检查： • （一）血液检查：血液浓缩表现。 • （二）尿常规检查：可见少量蛋白、白细胞、红细胞、管
型等。 • （三）粪常规检查：为水样便，无炎症细胞成分。 • （四）粪便细菌学检查： • 1 粪便悬滴检查及制动试验：在暗视野显微镜下发现有小
亮点划过视野，为动力阳性，表明标本中有弧菌（不一定 为霍乱弧菌），如再滴加诊断血清，在上述镜中，看不到 小亮点划过，为制动试验阳性，提示有霍乱弧菌。
胶体金层析 卡检测
核酸提取 荧光PCR检测
血清分型、生化鉴定
问题：实验时间；灵敏度；初筛；等待时间
标本的采集和运输
采集：
病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、操作台、砧板、下水道口……
要求：位置、数量
运输：
C-B运输培养基（pH8.4） 碱性蛋白胨水：不是最佳的，尤其6小时内还不能进行培养时，不要用 运输培养基用前预冷1-2小时，采样后不能立即运至实验室时，需冷藏
挑可疑菌落、多价血清凝集
胶体金层析 卡检测
特定地区？
感染因素多样化
初级感染因素、衍生的感染因素
确诊 病例 采样检测
就诊
患者
- 临床及时发现病例 - 细致的流行病学调查 - 实验室检测与分析 - 信息整合 - 控制行动
标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、
前处理：运输、调pH
增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过 夜
涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素
S
SS S
S
1998年8月，欧芹导致的宋内志贺菌腹泻暴发：美国、加拿大、墨西哥
暴发调查
散发菌株 此暴发的分离株 散发菌株
海水、 河口水 霍乱弧 菌增殖、 超本底 水平
海、水产 品养殖区
批发、 市售
交叉 污染
餐馆加工 家庭加工
交叉 污染
食用者
无感染 带菌者 患者-不就诊 患者-就诊-未检出 患者-就诊-检出
2 粪便直接涂片镜检：可见排列成鱼群状的革兰染色阴性
的弧菌。
划平板
挑菌落与玻片凝集
庆大霉素平板和4号琼脂：多呈半透明状，菌落中央常呈灰色或灰黑色， 并随培养时间的延长而加深（由于这类培养基均含有亚碲酸盐成份）。 TCBS（硫代硫酸盐枸櫞酸盐胆盐琼脂）：菌落生长呈黄色发亮、表面光 滑、润湿、稍凸起、边缘整齐。 与诊断血清的玻片凝集：
多价血清 O1：小川、稻叶 O139 每份标本至少挑选5个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。
常用的选择培养基为硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平 板（TCBS），霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落，因发酵
蔗糖产酸而使菌落呈黄色。
血清学鉴定： 对可疑菌落与O1群霍乱多价诊断血清作玻片凝集试验，如很快出现 肉眼可见的明显凝集即为阳性。 阳性者必须用生理盐水按同样方法作对照试验，以排除菌体自凝而导 致的假阳性反应。 O1群多价血清凝集阳性者用小川和稻叶单价血清进行进一步分型。 O1群多价血清不凝集的可疑菌落，应用O139群诊断血清作玻片凝 集。 每份标本至少挑选5个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。 小川型菌株有时在稻叶型单价血清中可出现弱凝集，这并非彦岛型， 而是小川型含有少量C抗原成分
O1群和O139群抗原构造与血清分型
型别 小川
群特异性抗原
A
O139
+
型特异性抗原
B
C
+百度文库
+少量
稻叶
+
—
+
彦岛
+
+
+
O139 —
+
—
—
进一步实验
氧化酶试验
1％盐酸对氨基二甲基苯胺或盐酸二甲基对 苯二胺水溶液
粘丝试验
0.5％去氧胆酸钠水溶液
• 霍乱快诊试剂 • O1群霍乱胶体金标记快诊卡 • O139群霍乱胶体金标记快诊卡
霍乱弧菌的实验室检测与分析
霍乱
病原体：霍乱弧菌
O1群 El Tor型
O139群
古典型
霍 乱 乱于胃肠则为霍乱
病原体
➢ 霍乱弧菌O1群（古典型、El Tor型）、O139群
发病特征：
➢ 剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡 ➢ 不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20－50％（重症病人达70－100％）
胶体金免疫层析检测
C
C
C
T
T
T
结果： 阴性
阳性
阳性？
荧光PCR检测霍乱弧菌
病例标本检测 环境和食品调查的初筛方法
不同暴发
- 不同地点 - 不同时间 - 不同的病人 - 不同的分离株
Outbreak
A
Outbreak
B
ICDC, China CDC
Ancestor strain
Variant A
霍乱的实验室检测
➢ 细菌分离培养 ➢ 辅助检测方法
➢ 制动试验 ➢ 免疫荧光球法 ➢ PCR检测 ➢ 胶体金检测卡
。。。。。。
标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、
前处理：运输、调pH
增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过 夜
？ ？
涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素
挑可疑菌落、多价血清凝集