植物组织培养教案

[重点难点]

组织培养的概念、组织培养的类型、特点和应用

第一节组织培养的概念

一、组织培养的概念是指通过无菌操作分离植物体的一部分(即外植体explant)，接种到培养基上，在人工控制的条件进行培养，使其生成完整的植株。

二、组织培养的特点：取材少生长周期短繁殖率高。人工控制条件管理方便

三、培养的研究类型组织培养按培养对象可分为植株培养、器官培养、组织培养、细胞培养和原生质体培养等：

第三节组织培养应用及展望

一、快速繁殖种苗组织培养的快速繁殖，就是应用组织培养和细胞培养技术，快速繁衍珍稀濒危植物。

二、无病毒苗的培养

三、在育种上的应用，。

四、工厂化育苗

参考文献

1、颜昌敬编著植物组织培养手册1990.1 上海科技出版社，

2、朱建华主编植物组织培养实用技术2002.1 中国升量出版社

3、梅家训、丁习武主编组培快繁技术及其应用2003.4 中国农业出版社

4、李浚明编译．植物组织培养教程[第2版]．北京：2004.1中国农业大学出版社，

[单元章节]

第一章实验室及培养条件

[教学目的]

基本掌基握组织培养实验室的设计；熟练掌握实验仪器设备使用和培养基用湿热灭菌方法以及无菌操作技术。

[重点难点]

的条件。

[教学方法]

启发式；讲授；多媒体课件；演示。

[教学时数]

2课时。

[教学内容]

第一节实验室及基本操作

一、实验室

（一）准备室(repairing room)

在准备室内要完成培养基制备、清洗与整理工作。为完成培养基的制备工作，准备室还应配备以下仪器设备：

大型工作台、药品柜、普通冰箱、电子分析天平和托盘天平、电蒸馏水器、磁力搅拌器、电炉或电饭锅、酸度计、高压灭菌锅等。

（二）接种室(transfering room)

1、对接种室要求

2、接种室的主要设备及用具

（三）培养室(culturing room)

培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养材料放在培养架上培养。培养条件:培养室一般保持在20-27℃左右，相对湿度以保持在70％-80％为好，一般需要每天光照10-16h。环境的相对湿度一般要求70％-80％的相对湿度。

（四）炼苗室

二、设备和器材

（一）玻璃器皿

（二）器械用具

第二节基本操作

一、洗涤（自学）

二、灭菌(sterilization)

灭菌是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体。

培养基用湿热灭菌方法

三、无菌操作

1、在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及紫外灯；

2、接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿托鞋；

3、上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面；·

4、先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍；

5、接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；

6、接种完毕后要清理干净工作台，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。

本章小结

实验室组成：准备室、无菌操作室、培养室、炼苗室；培养基用湿热灭菌；

无菌操作无菌操作的技术程序。

[自学指导与训练方案]

讨论：建一个组织培养实验室起码需要用哪些设备和仪器。

思考题：

1、对接种室有哪些要求？如何对接种室消毒？

2、培养室的作用是什么？对培养条件有什么要求？

3、简述无菌操作步骤。

4、简述培养基用湿热灭菌方法

5、用95％酒精配成75％酒精1000ml,问用95％酒精和水各多少ml？

参考文献

1. 刘庆昌吴国良植物细胞组织培养2005.3 中国农业大学出版社

2、李浚明编译．植物组织培养教程[第2版]．北京：中国农业大学出版社，2004 [单元章节]

第二章培养基及其配制

[教学目的]

掌握培养基的种类和特点；基本掌握培养基的组成成分和适宜的剂量；熟练掌握培养基的制备方法和步骤；初步掌握培养基的筛选方法。

[重点难点]

培养基的种类和特点、培养基成分、作用和常用剂量；母液配制过程，利用母液配

制工作培养基；培养基的选择。

[教学方法]

启发式；讲授；多媒体课件。

[教学时数]

4课时

[教学内容]

第一节培养基的种类和成分

一、培养基的种类

目前国际上流行的培养基有几十种，如：MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基、KM-8P培养基等

二、培养基的成分

培养基的成分主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。

1．水大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水；

2、无机元素大量元素，有N，P，K，Ca，Mg，S等。微量元素 Fe，B，Mn，Cu，Mo，Co等。

3．有机化合物

(1)碳水化合物最常用的碳源是蔗糖。

(2)维生素(vitamin)主要有VB

1、VD

6

、Vpp、V

C

、有时还使用生物素、叶酸、VB

2

等。

(3)肌醇又叫环己六醇。

(4)氨基酸是有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培养基中最常用甘氨酸。

4．植物激素(hormone)

在培养基的各成分中植物激素是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性作用。

(1)生长素类(auxin) 在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。

IAA(吲哚乙酸)、 NAA(萘乙酸)、IBA(吲哚丁酸)、2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)。 NAA 和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。生长素配制时可先用少量95％酒精助溶。2，4-D可用0．1mol／L的NaOH或KOH助溶。

(2)GA( 赤霉素)，赤霉素用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。赤霉素不耐热，高压灭菌后将有70％-100％失效。