复方利血平片所含成分的测定方法综述

复方利血平片所含成分的测定方法综述黄雪丽; 刘敏; 曹蕾; 孔秀芹; 马扬光【期刊名称】《《广州化工》》【年(卷),期】2019(047)018【总页数】3页(P31-33)【关键词】复方利血平片; 高效液相色谱法; 含量测定【作者】黄雪丽; 刘敏; 曹蕾; 孔秀芹; 马扬光【作者单位】泰州医药高新技术产业园区管理委员会公共平台服务中心江苏泰州225300【正文语种】中文【中图分类】R917复方利血平片为常用抗高血压药，曾用名复方降压片，是一种复方制剂，适用于中早期高血压；含有丰富的生物活性成分，应用广泛。

其处方为每片含利血平0.032 mg，氢氯噻嗪3.1 mg，维生素B6 1.0 mg，维生素B1 1.0 mg，混旋泛酸钙1.0 mg，三硅酸镁30 mg，氯化钾30 mg，硫酸双肼屈嗪4.2 mg，盐酸异丙嗪2.1 mg及辅料适量。

随着近几年科学研究的深入，国家药品标准对于复方利血平片的质量标准也日趋完善，现行标准《中国药典》2015年版第二部[1]，对于利血平、氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、盐酸异丙嗪、维生素B1和维生素B6的鉴别检查与含量测定虽已有规定。

但复方利血平片作为一个复杂的多组分制剂，处方中的各成分化学性质差别很大，含量差别也很大，它们的药理药效作用是多种成分综合起作用的结果，若摄入过少，达不到治疗目的；摄入过量，则会引起各类不良反应，因此各类成分含量必须要控制在一定范围内。

因此，对于复方利血平片的研究需系统全面。

下面就复方制剂中化学成分的存在形式、化学性质、药理作用、处理方法、含量测定(包括单个含量测定及多种组分同时测定)等几个方面进行了归纳总结，以期为全面探究同时测定多种活性成分提供切实依据。

1 单一组分的研究1.1 利血平利血平(Reserpine，RSP)是一种存在于夹竹桃科萝芙木属植物中具有降压作用的吲哚型生物碱，在催吐萝芙木中含量最高可达1%。

易溶于氯仿、二氯甲烷、冰醋酸，能溶于苯、乙酸乙酯，稍溶于丙酮、甲醇、乙醇、乙醚、乙酸和柠檬酸的稀水溶液。

遇光不稳定，易分解变色，应遮光保存。

利血平能降低血压和减慢心率，作用缓慢、温和而持久，对中枢神经系统有持久的安定作用，是一种很好的镇静药。

早在1987年，张胜强等[2]就采用高效液相色谱法测定复方利血平片中利血平的含量。

由于利血平含量少，以甲醇-水为流动相很难分离出微量的利血平，故加入冰醋酸以改善分离和调整出锋次序。

王昕等[3]通过试验，确定以乙腈-水(41:59)为流动相，并用高氯酸调节pH值至2.15±0.05时，利血平峰与其他成分色谱峰分离效果最好。

梁选革等[4]对各种流动相进行考察后发现，以乙睛-水(60:40)为流动相可较好地把利血平与相邻成分杂质峰分离，理论塔板数可达3900以上。

他们还比较多种色谱柱，最后选取phenomenex C18为实验用色谱柱。

张莉等[5]在比较紫外检测器与荧光检测器后，选择了响应值较高的荧光检测器；在进行流动相实验优化时，发现以乙腈-1%氯化铵溶液(46:54)为流动相、50%乙腈为溶剂时，综合结果较好。

实验表明，测定利血平时，在常规流动相中加入弱酸(如冰醋酸、高氯酸和氯化铵等)改善分离效果良好。

1.2 氢氯噻嗪氢氯噻嗪(hydrochlorothiazide)为白色结晶性粉末；无臭，味微苦；溶于丙酮、苯、乙醚、氯仿、四氯化碳和乙醇，难溶于水。

是复方利血平片中的一个主要成分，具有利尿、降压的作用；与利血平、硫酸双肼屈嗪合用时，可以增强两者的降压作用。

方东伟[6]采用高效液相色谱法测定复方利血平片中氢氯噻嗪的含量，色谱柱为C18柱，流动相为乙睛-水(12:88)，检测波长为272 nm。

张火旺在同样条件下测定复方利血平片中氢氯噻嗪的含量[7]。

吴红英等[8]改进了实验条件，因氢氯噻嗪在乙醇溶液中能较好的溶解，对不同浓度的乙醇进行考察，发现50%的乙醇溶液溶解性好；结果发现以乙腈-甲醇-水(10:10:80)为流动相，达到效果最好。

张华等[9]选择了不同比例甲醇-水、甲醇-乙腈-水、甲醇-0.1%庚烷磺酸钠溶液、甲醇-乙腈-0.1%庚烷磺酸钠溶液、甲醇-0.1%己烷磺酸钠做预试验，发现甲醇-0.1%己烷磺酸钠溶液(磷酸调节pH=3.0±0.1)综合结果较好。

吴迪等[10]只要求样品制成溶液，且选用制备简单、含酸的流动相。

作者调整甲醇和水的比例并调节pH值后，既避免了氢氯噻嗪峰的拖尾现象，又使得样品中各杂质峰能与氢氯噻嗪峰有效分离。

最终选定甲醇-水的流动相组成(70:30，用磷酸调pH为3.1)用于本次分析。

实验表明，对于氢氯噻嗪的含量测定同样采取C18柱，常规流动相，但是加入少量乙醇做为流动相或者少量离子对试剂调节pH后，分离效果更佳。

1.3 硫酸双肼屈嗪硫酸双肼屈嗪(Dihydralazine Sulfate)为白色或微黄色结晶性粉末，无水物为黄色粉末；无臭，味微苦，在沸水中略溶，在水或乙醇中微溶。

硫酸双肼屈嗪是一种降压药，其通过扩张小动脉，增加心排血量，使周围血管阻力下降，从而达到降血压的目的。

吴红英等[11]采用反相离子对色谱法，使用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱，乙腈-甲醇-1.2%庚烷磺酸钠溶液(磷酸调节pH=2.5±0.1)(20:10:70)为流动相，检测波长为310 nm。

李婕等[12]发现溶液pH值对复方利血平片中硫酸双肼屈嗪的稳定性有较大影响，硫酸双肼屈嗪随溶液pH值的升高而降解加速。

吴勇[13]在考察了多种流动相，发现甲醇-0.1%己烷磺酸钠溶液(磷酸调节pH=3.0±0.1)为流动相，效果最佳。

实验表明，硫酸双肼屈嗪随溶液pH值的变化影响较大，对于硫酸双肼屈嗪的含量测定要加入少量离子对试剂调节pH后，分离效果更佳。

1.4 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪(Promethazine)在水中极易溶解，在乙醇或三氯甲烷中易溶，在丙酮或乙醚中几乎不溶。

是一种常见的止咳药物，是一类抗组胺药，能竞争性阻断组胺H1受体，对抗组胺所导致的毛细血管扩张，并降低其通透性，能加强麻醉药、催眠药及镇痛的作用，并能降低体温和镇吐。

吴红英等[14]选择Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱，流动相为乙腈-1.2%庚烷磺酸钠溶液(45:55)(磷酸调节pH=2.4±0.1)，检测波长为249 nm，效果最佳。

而辛俊衡[15]参照文献分别比较甲醇、乙腈系统，结果发现有些拖尾，加三乙胺扫尾，最后采用乙腈-0.3%十二烷基硫酸钠溶液-磷酸(60:40:0.02，用三乙胺调pH至3.3)为流动相。

实验表明，对于盐酸异丙嗪的测定，流动相系统需要加入少量三乙胺扫尾，分离效果更佳。

1.5 维生素B1、维生素B6、泛酸钙维生素B1又称硫胺素或抗神经炎维生素或抗脚气病维生素，为白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭，味苦，有引湿性。

溶于水，微溶于乙醇、氯仿；盐酸盐为白色结晶性粉末，易潮解，有苦味，易溶于水，稍溶于乙醇，不溶于乙醚。

维生素B6为白色或类白色的结晶或结晶性粉末，无臭，味酸苦，遇光渐变质。

在水中易溶，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。

维生素B1的常见含量测定方法有硫色素荧光法、硅钨酸重量法、非水溶液滴定法和紫外分光光度法。

维生素B6常用的检测方法有的方法有离子对色谱法、反相高效液相色谱法、高效液相色谱法。

泛酸钙易溶于水和甘油，不溶于酒精、氯仿和乙醚。

是B族维生素的一种，是代谢环节中蛋白质、碳水化合物、脂肪及上皮功能维持正常所必需的辅酶A的组成部分，其含量低，以盐的形式存在于药品中，紫外吸收属末端吸收。

对泛酸钙的测定，文献报道主要有比色法、滴定法及HPLC法。

2 多组分的研究虽然复方利血平片的最新标准规定了硫酸双肼屈嗪，维生素B1和维生素B6的鉴别检查与含量同时测定；利血平，氢氯噻嗪和盐酸异丙嗪的鉴别检查与含量同时测定[16]；但是一些科研人员除此两种情况之外，还进行了其他多种组分的含量同时测定[17]，此种多组分的研究为我们寻求一种快速、高效、便捷且能同时检测多种成分的测定方法奠定了基础。

赵雪梅等[18]对复方利血平片中氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、维生素B1、维生素B6、利血平的含量。

吴艳琳等[19]采用高效液相色谱法对硫酸双肼屈嗪、氢氯噻嗪、维生素B1、维生素B6含量同时进行测定。

贺文军等[20]同样测定了这四种成分。

许波等[21]采用高效液相色谱法同时测定维生素B1、维生素B6、泛酸钙及氢氯噻嗪的含量。

张铮[22]采用高效液相色谱法同时测定氢氯噻嗪和硫酸双肼屈嗪两种成分含量。

祝莉莎等[23]同时测定双肼屈嗪、氢氯噻嗪、维生素B1、维生素B6和泛酸钙5种成分。

裴月梅[24]同时测定了氢氯噻嗪、盐酸异丙嗪、利血平3种成分。

范桂强等[25]同时测定了维生素B6、氢氯噻嗪、盐酸异丙嗪、利血平4种成分。

陈建琴[26]同时测定了维生素B6、氢氯噻嗪2种成分。

金鹏飞等[27]从提取条件、色谱条件和检测波长等方面考察了硫酸双肼屈嗪、氢氯噻嗪和氨苯蝶啶3种成分的测定。

实验表明，由于各组分溶解性、稳定性等化学性质的不同和含量的差异，选择的流动相系统、洗脱条件和溶解的溶剂要多方面考量，波长和柱子等也要多方面优化，最终达到多组分的同时测定。

3 结语复方利血平片的主要化学成分为降压和利尿类两类物质。

已报道的复方制剂中成分分析方法有容量法、比色法、毛细管电泳法及紫外分光光度法等，但主要是高效液相色谱法。

虽然随着药学研究的深入，HPLC法已能同时检测5种成分，但仅仅如此确实不够的，日新月异的现代社会要求科研人员继续探索，寻求一种快速、高效、便捷且能同时检测多种成分的测定方法。

所以采用 HPLC-DAD/ESI-TOF-MS技术对复方利血平片中的多种成分进行快速分析显得尤为重要，根据高分辨质谱获得的母离子信息，结合对照品，对复方制剂中多种活性物质进行鉴定，以期为全面探究同时测定多种活性成分提供了切实的依据; 为其他复方组合的定性定量关系研究及临床应用提供基础; 并为该药的进一步开发和利用提供重要参考依据和有力手段。

参考文献【相关文献】[1] 中华人民共和国药典:2015年版.第二部[M].2015:803-804.[2] 张胜强,杜镐,安登魁.复方降压片中微量利血平的高效液相色谱测定[J].中国药科大学学报,1987,18(1):12-15.[3] 王昕,孙悦,米亚娴.HPLC法测定复方降压平片中利血平的含量[J].天津药学,2003,15(6):15-16.[4] 梁选革,石慧秋.HPLC法测定复方利血平片中利血平的含量[J].中国药房,2007,18(25):1978-1980.[5] 张莉,田洪斌.HPLC法测定复方利血平片中利血平的含量[J].中国药事,2008,22(11):997-999.[6] 方东伟.高效液相色谱法测定复方利血平片中氢氯噻嗪含量[J].药物鉴定,2005,14(9):51.[7] 张火旺.高效液相色谱法测定复方利血平片中氢氯噻嗪的含量[J].药物鉴定,2006,15(11):39.[8] 吴红英,范玉峰.HPLC测定复方利血平片中氢氯噻嗪的含量[J].药品鉴定,2009,6(27):47-48.[9] 张华,吴勇.HPLC法测定复方利血平中氢氯噻嗪的含量[J].亚太传统医药,2012,8(8):24-25.[10] 裴月梅.HPLC法测定清脑降压片中非法添加的氢氯噻嗪、盐酸哌唑嗪、盐酸异丙嗪、利血平、硝苯地平[J].中草药,2014,23(45):3414-3417.[11] 吴红英,范玉峰.反相离子对色谱法测定复方利血平片中硫酸双肼屈嗪的含量[J].药品鉴定,2009,16(16):62-63.[12] 李婕,黄海伟,张红,等.复方利血平片中硫酸双肼屈嗪含量测定方法的探讨[J].中国药品标准,2014,15(5):363-365.[13] 吴勇.HPLC法测定复方利血平片中硫酸双肼屈嗪的含量[J].安徽医药,2011,15(6):695-696.[14] 吴红英,邱栋樑.高效液相法测定复方利血平片中盐酸异丙嗪的含量[J].药品鉴定,2009,6(28):50-51.[15] 辛俊衡.复方利血平片中盐酸异丙嗦的含量测定及含量均匀度考察[J].药物鉴定,2010,19(2):29-30.[16] 张新芹,周礼玲.火焰原子吸收分光光度法测定复方利血平片中氯化钾含量[J].黑龙江医药,2013,4(26):544-545.[17] 路柯,常军民,莎莉塔娜提.火焰原子吸收分光光度法测定复方利血平片中氯化钾、三硅酸镁的含量[J].新疆中医药,2013,5(31):68-70.[18] 赵雪梅,张淑琴.反相高效液相色谱法测定复方利血平片中6个组分的含量[J].药物分析杂志,2003,23(5):335-337.[19] 吴艳琳,林志华,汪洋,等.高效液相色谱法测定复方利血平片中4种成分的含量[J].中国药师,2007,10(6):559-561.[20] 贺文军,刘哲鹏,包漩.HPLC法测定复方利血平片中氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、维生素B1和维生素B6的含量[J].应用化工,2012,41(9):1632-1635.[21] 许波,苌玲,高玲.HPLC法测定复方利血平片中维生素B1、B6、泛酸钙和氢氯噻嗪的含量[J].药物分析杂志,2008,28(11):1906-1908.[22] 张铮.HPLC法同时测定复方利血平片中氢氯噻嗪和硫酸双肼屈嗪的含量[J].安徽医药,2011,15(10):1211-1212.[23] 祝莉莎,刘君康,吴鹏宇,等.HPLC法同时测定复方利血平片中硫酸双肼屈嗪等5种成分[J].现代科学仪器,2013(4):193-196.[24] 范桂强,宋更申.HPLC法同时测定复方三嗪芦丁片中5种成分的含量[J].中国药房,2016,27(33):4722-4725.[25] 吴迪,郭伟英.HPLC法同时测定缬沙坦氢氯噻嗪胶囊中缬沙坦和氢氯噻嗪的含量[J].中国药房,2012,23(9):846-848.[26] 陈建琴.复方利血平氢氯噻嗪片中三组分的HPLC法测定[J].中国医药工业杂志,2016,47(1):76-78.[27] 金鹏飞,邝咏梅.HPLC同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中3种活性成分的含量[J].中国药学杂志,2011,46(2):152-155.。