抗菌药物敏感性试验 PPT课件

孵育：35º C 16-18h，量取抑菌圈直径。

结果判读：

用刻度尺量取抑菌圈直径，根据CLSI
（Clinical and Laboratory Standards
Institute）标准判读结果；

报告：细菌对该抗生素是 敏感（susceptible，S）； 耐药（resistant，R）；
操作方法、结果判断及意义等；

了解稀释法的质量控制。
实验内容

常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测
方法介绍。

纸片扩散法。
肉汤稀释法。
一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药 检测方法介绍

纸片扩散法（Kirby-Bauer test） 稀释法（dilution test）


E试Байду номын сангаас法（E test）
30μg
10μg 15μg
—
≤12 ≤13
—
13～14 14～22
≥15
≥15 ≥23
—
≥8 ≥8
≤4
≤4 ≤0.5
克林霉素
磺胺药
2μg
1.25/23.75μg
≤14
≤10
15～20
11～15
≥21
≥16
≥4
≥8/152
≤0.5
≤2/38
三、肉汤稀释法

原理：

以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素

管：分别加入MH肉汤2ml。

方法：

菌液制备：生理盐水校正测试菌和质控菌至 0.5麦氏比浊标准，再用MH肉汤稀释到 107CFU/ml； 加菌液：用微量加样器取0.1ml稀释菌液由低 到高加于各排试管中，其最终的接种量为 5×105 CFU/ml。测试菌排、测试菌生长对照 管加测试菌液；质控菌排、质控菌生长对照 管加质控菌液。 孵育：35º C 24h观察结果。
做不同浓度的稀释，然后种入待检细菌，定
量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度 （MIC）或最低杀菌浓度（MBC）。

方法：

试管编号：取26只试管排成两排（测试菌排，
质控菌排）每排13支编号。另取3支试管，分别
标记上“肉汤对照”、“测试菌生长对照”和
“质控菌生长对照”等对照。

抗菌药物稀释：用MH肉汤倍比稀释抗菌药物至 13管，稀释后使每管含抗菌药物稀释液2ml。 肉汤对照、测试菌生长对照、质控菌生长对照
范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该
药对测试菌的最低抑制浓度（minimal inhibitory
concentration，MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
含药纸片
抑菌圈

方法：

菌液制备：挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于
抗菌药物敏感性试验
南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心

教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 实验课时：4学时 课程类型：专业实验课 课程要求：必修 每组人数：2人
实验目的和要求

掌握纸片扩散法（K－B法）的原理、操作
方法等、结果判断、意义及质量控制；

熟悉肉汤稀释法抗生素敏感性试验的原理、



结果：

测试菌（或质控菌）不出现肉眼可见生长的
最低药物浓度为该药对测试菌（质控菌）的
MIC。

注意事项：

培养基、接种细菌的菌量、抗菌药物纸片的质
量、孵育温度和观察时间、操作是否规范等均
能影响本试验的结果。

为保证结果的可靠性，需同时采用相应标准菌
株同时进行药敏试验作为质量控制的方式。
还是中介（intermediate，I）。
表1
金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果
抑菌圈直径(mm) 相应MIC值 (μg/ml)
纸片含药量 抗菌药物 青霉素 苯唑西林 10U 1μg
耐药
≤28 ≤10
中介
— 11～12
敏感
≥29 ≥13
耐药
β-内酰胺酶
敏感
≤0.12 ≤2
≥4
万古霉素
庆大霉素 红霉素
联合药物敏感试验
特殊耐药菌及耐药酶的表型检测

耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测 β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等
二、纸片扩散法（K-B法）

原理：

含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上， 纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周
围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度
生理盐水管中，校正浓度至0.5麦氏标准； 涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多 余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转 平板60º ，最后沿平板内缘涂抹1周；


贴含药纸片：平板在室温下干燥3-5min，用无菌镊子
将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距应大于 24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；