甘草酸脂质体的处方及制备工艺
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2 结果
2. 1 包封率和处方优化 通过均匀设计法优化实 验 ,结合类脂质膜的均匀性 、水合时间 、脂质体的稳定 性 、脂质体的形态 、包封率等确定制备甘草酸脂质体 的处方 , 6为最佳处方工艺 ,即 :磷脂 100 mg,胆固醇 70 mg,甘草酸 10 mg,水合介质甘露醇 14 mL ,氯仿 23 mL ,氯仿蒸发温度 36℃. 按处方 6 制备得到的脂质 体结合类脂质膜的均匀性好 、易水合 、脂质体稳定 、脂 质体的形态好 、包封率高 (表 2). 2. 2 电镜结果 在透射电镜下可观察到处方 6和处 方 2所制得的甘草酸脂质体的粒径均匀 ,在 40～60 nm 之间 ,成圆形或类圆形 ,整体分布比较均匀 (图 1).
84777154 Email: chengjf0689@ sina. com
免疫功能 、诱生干扰素等作用 [ 1 ] ,可明显促进肝细胞 再生 [ 2 ] ,目 前 临 床 上 使 用 的 甘 草 酸 注 射 液 副 作 用 大 [ 3 ]. 我们将其制备成脂质体 ,以促进吸收 ,提高疗 效 ,降低副作用.
表 2 脂质体的包封率和处方优化结果
(n = 3)
处方 号 1
包封率 ( % , RSD 类质膜的
x ±s)
( % ) 均匀性
63. 03 ±1. 48 2. 4 较均匀
水合 t (m in) > 50
脂质体 稳定性 较差
脂质体 形态
\
2
68. 05 ±2. 49 3. 7 均匀
10
好 较好
3
75. 67 ±1. 60 2. 1 均匀
656
第四军医大学学报 (J Fourth M il M ed Univ) 2006; 27 (7) http: / / journal. fmmu. edu. cn
度 、脂质体的稳定性 、脂质体的形态 、包封率高低为评 价指标综合评定得出最佳处方. 1. 2. 2 甘草酸脂质体的制备工艺 精密称取处方量 的磷脂和胆固醇于茄型烧瓶中 ,然后加入氯仿使其充 分溶解后再加入甘草酸 ,将烧瓶放在超声清洗器上超 声使药品完全溶解后 ,再经旋转蒸发仪旋转蒸发除去 氯仿 (旋转蒸发薄膜分散法 ) ,可看见在烧瓶上形成 一层半透明的薄膜 ,将烧瓶放在真空干燥箱中干燥 后 ,加入甘露醇溶液进行水合 ,再水浴超声得乳白色 半透明液体 ,依次经过 0. 8μm 和 0. 45μm 微孔滤膜 过滤 ,分装于适合的安瓿中 , 4℃条件下密闭避光保 存. 精密量取甘草酸脂质体 2. 0 mL ,注入透析卡. 将 透析卡浸入甘露醇液中透析 3次 ,第 1次 2 h,换溶液 后再进行第 2次透析 ,时间为 2 h左右 ,第 3 次将其 保存在 4℃温度下透析 12 h以除去游离药物 , 然后 从卡中取出药物 , 4℃下保存. 取 3批样品 ,每批样品 5个样本 ,采用反相高效液相色谱法测定甘草酸脂质 体的包封率. 取脂质体适量 ,加甲醇溶液溶解 、稀释 , 取稀释液 20μL 进样. 色谱条件 :流动相 :甲醇 ∶磷酸 盐缓冲液 ( 50 mmol/L ) ( 68 ∶32 ) ; 流速 : 1 mL /m in; 紫 外检测波长为 254 nm;进样量为 20 μL;柱温 :室温. 以测定甘草酸脂质体的包封率. 1. 2. 3 脂质体的电镜观察 将所制得的脂质体 ,加 水稀释到合适的浓度 ,取 1滴于点滴反应瓷板的凹槽 内 ,并将喷碳铜网放于试液上 (膜面向下 ) , 1 ～2 m in 后取出铜网 ,用滤纸小片从铜网边缘吸干多余液体 ; 按上述同样方法 ,将该铜网放在染液滴 ( 20 g /L 磷钨 酸溶液 , pH 7. 0)上约 30 s,用滤纸小片从铜网边缘吸 干多余染液 ,干燥. 在透射电镜下观察脂质体的形态 及分布并测量其粒径.
su la tion
【摘 要 】目的 : 优化甘草酸脂质体的处方及制备工艺. 方 法 : 用旋转蒸发薄膜 2超声法制备甘草酸脂质体 ,用均匀设计 优选该脂质体的处方及制备工艺 ,采用扫描电镜观测其外观 、 大小及分布 ,用 HPLC测定其包封率 ,初步考察该制剂的稳定 性. 结果 : 用旋转蒸发薄膜 2超声法制备的甘草酸脂质体球形 圆整 ,大小较均匀 ,粒径 40～60 nm ,包封率 63. 0% ～89. 0%. 结论 :薄膜分散法优化工艺后制备得到的脂质体包封率较高 , 稳定性较好. 【关键词 】甘草酸 ;脂质体 ;均匀设计法 ;包封率 【中图号 】R944. 1 【文献标识码 】A
8
较差
\
4
80. 51 ±4. 11 5. 1 不均匀
> 50 较差
\
5
83. 48 ±1. 58 1. 9 较均匀
15
差
\
6
89. 02 ±2. 03 2. 3 均匀
11
好
好
A: 处方 6; B: 处方 2. 图 1 甘草酸脂质体的超微结构 TEM ×100 000
3 讨论
甘草酸是水溶性极低的药物 ,只有氯仿对甘草酸 的溶解较完全 ,且形成的薄膜也比较好 ,所以我们采 用氯仿作有机溶媒. 制备脂质体的方法很多 ,主要 有 :薄膜分散法 、逆相蒸发法 、高压乳匀法 、乳化分散 法 、超声波分散法等. 逆相蒸发法和超声波分散法适 合于包裹水溶性药物 ,但甘草酸的水溶性极低 ,所以 不宜选择. 高压乳匀法 、乳化分散法等需要加热到一 定的温度 ,对甘草酸脂质体的稳定性有影响. 旋转蒸 发薄膜分散法适合于脂溶性及水溶性低的药物且简 便易行 ,适合于实验室制备. 载药的脂质体和游离的 药物必须分离后才能测定包封率. 常用的分离方法
【参考文献 】
[ 1 ] 柳长华. 李时珍医学全书 [M ]. 北京 :中国中医药出版社 , 1999:
418. [ 2 ] L iu J,Mc Intush H, L in H. Chinese medicinal herbs for chronic hepa2
titis B: A systematic review [ J ]. L iver, 2001, 21 ( 4) : 280 - 286. [ 3 ] 徐会选. 甘草酸类药物的不良反应 [ J ]. 药物不良反应杂志 ,
表 1 均匀设计试验方案
处方 号
磷脂 胆固醇 60 g /L 甘草酸 (mg) (mg) 甘露醇 (mL ) (mg)
1
100
100
12
6
氯仿 (mL )
21
2
100
80
18
12
17
3
100
60
10
8
15
4
100
110
16
14
13
5
100
90
8
16
19
6
100
70
14
10
23
t( ℃)
35 32 34 37 33 36
第四军医大学学报 (J Fourth M il M ed Univ) 2006; 27 (7) http: / / journal. fmmu. edu. cn
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有凝胶层析法 、离心法 、透析法. 而凝胶层析法操作 繁琐 ,高速离心时脂质体有可能凝聚而被破坏 ,因此 在本次实验中采用透析法.
0 引言
甘草酸具有抗炎 、抗氧化 、抗过敏 、抗肿瘤 、增强
收稿日期 : 2005206203; 接受日期 : 2005211215 基金项目 :陕西省中医管理局 2003年招标课题 (0389) 作者简介 : 程 建 峰. 副 主 任Fra Baidu bibliotek药 师. Tel: ( 029 ) 84777164 Fax: ( 029 )
第四军医大学学报 (J Fourth M il M ed Univ) 2006; 27 (7) http: / / journal. fmmu. edu. cn
655
·研究原著 ·
甘草酸脂质体的处方及制备工艺
文章编号 : 100022790 (2006) 0720655203
程建峰 ,扈本荃 ,刘 梅 ,贺建荣 ,扬 胜 ,王弼时 (第四军医大学唐都医院药学部 ,陕西 西安 710038)
1 材料和方法
1. 1 材料 旋转蒸发器 (上海申顺生物科技有限公 司 ) ,W 201恒温水浴锅 (上海申顺生物科技有限公 司 ) , SHZ型真空干燥箱 (北京科伟永鑫试验仪器设 备厂 ) ,超声波清洗器 (北京医疗设备二厂 )微量分析 天平 ( TG332A 型 、上海天平仪器厂 ) ,电动沉淀器 (上 海医疗仪器厂 ) ,透析卡 ( Slide2A 2LyzerR 10K) , JEM 2 2000Ex型透射电子显微镜 (日本电子 ) ,铜网 、大豆磷 脂 ( PL 纯度 > 95% ,天津市化学试剂公司 ) ,胆固醇 (Chol分析纯 ,天津市登峰化学试剂厂 ) ,甘草酸 (纯 度 > 95. 6% , 陕西 慧科 植 物 开 发 有 限 公 司 ) , 氯 仿 (CHC l3 分析纯 ,西安化玻站化学厂 ) ,甘露醇 (MNT 双鹤药业 ). 1. 2 方法 1. 2. 1 均匀设计法优化处方 甘草酸脂质体制备过 程中影响烧瓶壁上及小玻璃珠上的类脂质膜的均匀 性 、水合的难易程度 、脂质体的稳定性 、脂质体形态及 包封率的 5种因素 :胆固醇与磷脂的质量比 、甘草酸 与磷脂的质量比 、甘露醇溶液的用量 、氯仿的用量 、蒸 发温度 ,每个因素选 6 个水平 ,根据均匀设计法的设 计原则和使用原则 ,按照均匀设计表 U7 ( 76 )进行试 验 ,得到 6个制备甘草酸脂质体的处方 (表 1) ,按照 实验方案进行 ,以类脂薄膜的均匀性 、水合的难易程
Form ula tion and prepara tion of glycyr2 rh iz ic ac id liposom e
CHEN G J ian2Feng, HU B en2Q uan, L IU M ei, HE J ian2R ong, YAN G S heng, WAN G B i2S h i Department of Pharmacy, Tangdu Hosp ital, Fourth M ilitary M edical University, Xiπan 710038, China
【Abstract】A IM : To op tim ize the p rescrip tion and p reparation of encap sulated liposome. M ETHOD S: The liposomes were p re2 pared by conventional rotary2evaporated film 2ultrasonication method. The p rescrip tion and p reparation of liposome were op ti2 m ized by uniform design. Its shape and size distribution were detected under transm ission electron m icroscope. A method to determ ine the encap sulated rate of the liposome by high perfor2 mance liquid (HPLC) was established. RESUL TS: Glycyrrhizic acid liposome was regular under its m icrophotograph and the diameter was 40 - 60 nm. The entrapment efficiency of the gly2 cyrrhizic acid liposome was 63. 0% - 89. 0%. CO NCL US IO N: The entrapment efficiency of glycyrrhizic acid liposome and the stability of glycyrrhizic acid liposome p repared by conventional rotary2evaporated film 2ultrasonication method is good. 【Keywords】glycyrrhizic acid; liposome; uniform design; encap2
2. 1 包封率和处方优化 通过均匀设计法优化实 验 ,结合类脂质膜的均匀性 、水合时间 、脂质体的稳定 性 、脂质体的形态 、包封率等确定制备甘草酸脂质体 的处方 , 6为最佳处方工艺 ,即 :磷脂 100 mg,胆固醇 70 mg,甘草酸 10 mg,水合介质甘露醇 14 mL ,氯仿 23 mL ,氯仿蒸发温度 36℃. 按处方 6 制备得到的脂质 体结合类脂质膜的均匀性好 、易水合 、脂质体稳定 、脂 质体的形态好 、包封率高 (表 2). 2. 2 电镜结果 在透射电镜下可观察到处方 6和处 方 2所制得的甘草酸脂质体的粒径均匀 ,在 40～60 nm 之间 ,成圆形或类圆形 ,整体分布比较均匀 (图 1).
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免疫功能 、诱生干扰素等作用 [ 1 ] ,可明显促进肝细胞 再生 [ 2 ] ,目 前 临 床 上 使 用 的 甘 草 酸 注 射 液 副 作 用 大 [ 3 ]. 我们将其制备成脂质体 ,以促进吸收 ,提高疗 效 ,降低副作用.
表 2 脂质体的包封率和处方优化结果
(n = 3)
处方 号 1
包封率 ( % , RSD 类质膜的
x ±s)
( % ) 均匀性
63. 03 ±1. 48 2. 4 较均匀
水合 t (m in) > 50
脂质体 稳定性 较差
脂质体 形态
\
2
68. 05 ±2. 49 3. 7 均匀
10
好 较好
3
75. 67 ±1. 60 2. 1 均匀
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度 、脂质体的稳定性 、脂质体的形态 、包封率高低为评 价指标综合评定得出最佳处方. 1. 2. 2 甘草酸脂质体的制备工艺 精密称取处方量 的磷脂和胆固醇于茄型烧瓶中 ,然后加入氯仿使其充 分溶解后再加入甘草酸 ,将烧瓶放在超声清洗器上超 声使药品完全溶解后 ,再经旋转蒸发仪旋转蒸发除去 氯仿 (旋转蒸发薄膜分散法 ) ,可看见在烧瓶上形成 一层半透明的薄膜 ,将烧瓶放在真空干燥箱中干燥 后 ,加入甘露醇溶液进行水合 ,再水浴超声得乳白色 半透明液体 ,依次经过 0. 8μm 和 0. 45μm 微孔滤膜 过滤 ,分装于适合的安瓿中 , 4℃条件下密闭避光保 存. 精密量取甘草酸脂质体 2. 0 mL ,注入透析卡. 将 透析卡浸入甘露醇液中透析 3次 ,第 1次 2 h,换溶液 后再进行第 2次透析 ,时间为 2 h左右 ,第 3 次将其 保存在 4℃温度下透析 12 h以除去游离药物 , 然后 从卡中取出药物 , 4℃下保存. 取 3批样品 ,每批样品 5个样本 ,采用反相高效液相色谱法测定甘草酸脂质 体的包封率. 取脂质体适量 ,加甲醇溶液溶解 、稀释 , 取稀释液 20μL 进样. 色谱条件 :流动相 :甲醇 ∶磷酸 盐缓冲液 ( 50 mmol/L ) ( 68 ∶32 ) ; 流速 : 1 mL /m in; 紫 外检测波长为 254 nm;进样量为 20 μL;柱温 :室温. 以测定甘草酸脂质体的包封率. 1. 2. 3 脂质体的电镜观察 将所制得的脂质体 ,加 水稀释到合适的浓度 ,取 1滴于点滴反应瓷板的凹槽 内 ,并将喷碳铜网放于试液上 (膜面向下 ) , 1 ～2 m in 后取出铜网 ,用滤纸小片从铜网边缘吸干多余液体 ; 按上述同样方法 ,将该铜网放在染液滴 ( 20 g /L 磷钨 酸溶液 , pH 7. 0)上约 30 s,用滤纸小片从铜网边缘吸 干多余染液 ,干燥. 在透射电镜下观察脂质体的形态 及分布并测量其粒径.
su la tion
【摘 要 】目的 : 优化甘草酸脂质体的处方及制备工艺. 方 法 : 用旋转蒸发薄膜 2超声法制备甘草酸脂质体 ,用均匀设计 优选该脂质体的处方及制备工艺 ,采用扫描电镜观测其外观 、 大小及分布 ,用 HPLC测定其包封率 ,初步考察该制剂的稳定 性. 结果 : 用旋转蒸发薄膜 2超声法制备的甘草酸脂质体球形 圆整 ,大小较均匀 ,粒径 40～60 nm ,包封率 63. 0% ～89. 0%. 结论 :薄膜分散法优化工艺后制备得到的脂质体包封率较高 , 稳定性较好. 【关键词 】甘草酸 ;脂质体 ;均匀设计法 ;包封率 【中图号 】R944. 1 【文献标识码 】A
8
较差
\
4
80. 51 ±4. 11 5. 1 不均匀
> 50 较差
\
5
83. 48 ±1. 58 1. 9 较均匀
15
差
\
6
89. 02 ±2. 03 2. 3 均匀
11
好
好
A: 处方 6; B: 处方 2. 图 1 甘草酸脂质体的超微结构 TEM ×100 000
3 讨论
甘草酸是水溶性极低的药物 ,只有氯仿对甘草酸 的溶解较完全 ,且形成的薄膜也比较好 ,所以我们采 用氯仿作有机溶媒. 制备脂质体的方法很多 ,主要 有 :薄膜分散法 、逆相蒸发法 、高压乳匀法 、乳化分散 法 、超声波分散法等. 逆相蒸发法和超声波分散法适 合于包裹水溶性药物 ,但甘草酸的水溶性极低 ,所以 不宜选择. 高压乳匀法 、乳化分散法等需要加热到一 定的温度 ,对甘草酸脂质体的稳定性有影响. 旋转蒸 发薄膜分散法适合于脂溶性及水溶性低的药物且简 便易行 ,适合于实验室制备. 载药的脂质体和游离的 药物必须分离后才能测定包封率. 常用的分离方法
【参考文献 】
[ 1 ] 柳长华. 李时珍医学全书 [M ]. 北京 :中国中医药出版社 , 1999:
418. [ 2 ] L iu J,Mc Intush H, L in H. Chinese medicinal herbs for chronic hepa2
titis B: A systematic review [ J ]. L iver, 2001, 21 ( 4) : 280 - 286. [ 3 ] 徐会选. 甘草酸类药物的不良反应 [ J ]. 药物不良反应杂志 ,
表 1 均匀设计试验方案
处方 号
磷脂 胆固醇 60 g /L 甘草酸 (mg) (mg) 甘露醇 (mL ) (mg)
1
100
100
12
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氯仿 (mL )
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100
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18
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110
16
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100
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16
19
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100
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14
10
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t( ℃)
35 32 34 37 33 36
第四军医大学学报 (J Fourth M il M ed Univ) 2006; 27 (7) http: / / journal. fmmu. edu. cn
657
有凝胶层析法 、离心法 、透析法. 而凝胶层析法操作 繁琐 ,高速离心时脂质体有可能凝聚而被破坏 ,因此 在本次实验中采用透析法.
0 引言
甘草酸具有抗炎 、抗氧化 、抗过敏 、抗肿瘤 、增强
收稿日期 : 2005206203; 接受日期 : 2005211215 基金项目 :陕西省中医管理局 2003年招标课题 (0389) 作者简介 : 程 建 峰. 副 主 任Fra Baidu bibliotek药 师. Tel: ( 029 ) 84777164 Fax: ( 029 )
第四军医大学学报 (J Fourth M il M ed Univ) 2006; 27 (7) http: / / journal. fmmu. edu. cn
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·研究原著 ·
甘草酸脂质体的处方及制备工艺
文章编号 : 100022790 (2006) 0720655203
程建峰 ,扈本荃 ,刘 梅 ,贺建荣 ,扬 胜 ,王弼时 (第四军医大学唐都医院药学部 ,陕西 西安 710038)
1 材料和方法
1. 1 材料 旋转蒸发器 (上海申顺生物科技有限公 司 ) ,W 201恒温水浴锅 (上海申顺生物科技有限公 司 ) , SHZ型真空干燥箱 (北京科伟永鑫试验仪器设 备厂 ) ,超声波清洗器 (北京医疗设备二厂 )微量分析 天平 ( TG332A 型 、上海天平仪器厂 ) ,电动沉淀器 (上 海医疗仪器厂 ) ,透析卡 ( Slide2A 2LyzerR 10K) , JEM 2 2000Ex型透射电子显微镜 (日本电子 ) ,铜网 、大豆磷 脂 ( PL 纯度 > 95% ,天津市化学试剂公司 ) ,胆固醇 (Chol分析纯 ,天津市登峰化学试剂厂 ) ,甘草酸 (纯 度 > 95. 6% , 陕西 慧科 植 物 开 发 有 限 公 司 ) , 氯 仿 (CHC l3 分析纯 ,西安化玻站化学厂 ) ,甘露醇 (MNT 双鹤药业 ). 1. 2 方法 1. 2. 1 均匀设计法优化处方 甘草酸脂质体制备过 程中影响烧瓶壁上及小玻璃珠上的类脂质膜的均匀 性 、水合的难易程度 、脂质体的稳定性 、脂质体形态及 包封率的 5种因素 :胆固醇与磷脂的质量比 、甘草酸 与磷脂的质量比 、甘露醇溶液的用量 、氯仿的用量 、蒸 发温度 ,每个因素选 6 个水平 ,根据均匀设计法的设 计原则和使用原则 ,按照均匀设计表 U7 ( 76 )进行试 验 ,得到 6个制备甘草酸脂质体的处方 (表 1) ,按照 实验方案进行 ,以类脂薄膜的均匀性 、水合的难易程
Form ula tion and prepara tion of glycyr2 rh iz ic ac id liposom e
CHEN G J ian2Feng, HU B en2Q uan, L IU M ei, HE J ian2R ong, YAN G S heng, WAN G B i2S h i Department of Pharmacy, Tangdu Hosp ital, Fourth M ilitary M edical University, Xiπan 710038, China
【Abstract】A IM : To op tim ize the p rescrip tion and p reparation of encap sulated liposome. M ETHOD S: The liposomes were p re2 pared by conventional rotary2evaporated film 2ultrasonication method. The p rescrip tion and p reparation of liposome were op ti2 m ized by uniform design. Its shape and size distribution were detected under transm ission electron m icroscope. A method to determ ine the encap sulated rate of the liposome by high perfor2 mance liquid (HPLC) was established. RESUL TS: Glycyrrhizic acid liposome was regular under its m icrophotograph and the diameter was 40 - 60 nm. The entrapment efficiency of the gly2 cyrrhizic acid liposome was 63. 0% - 89. 0%. CO NCL US IO N: The entrapment efficiency of glycyrrhizic acid liposome and the stability of glycyrrhizic acid liposome p repared by conventional rotary2evaporated film 2ultrasonication method is good. 【Keywords】glycyrrhizic acid; liposome; uniform design; encap2