苏丹红最新检测方法
食品中苏丹红的检测方法
2 薄层色谱法(TLC)
• 采用薄层色谱法分离样品中的苏丹红，主 要是利用样品溶液中苏丹红理化性质如吸 附力、分子极性等的差异，由于各组分受 固定相阻力与流动相推力的影响不同，因 而各组分在两相间的分配不同，从而使各 组分以不同流速流动，从而达到分离的目 的。
3 色谱－ 质谱联用法
•
质谱法比高效液相色谱法更灵敏，近年
• 将薄层色谱分离和分光光度法结合测 定了苏丹红Ⅰ含量［21］。该方法便 捷、可靠、经济实惠。
5 拉曼光谱法
• 根据苏丹红中 N=N 官能团产生的 拉曼信号，利用拉曼光谱技术检测了 苏丹红含量［22］。该方法无须对样 品进行特殊处理，可直接测量固体粉 末，隔瓶测定液体，快速方便。
பைடு நூலகம்
6 共振瑞利散射法
• 根据人血清白蛋白与苏丹红结合后 共振瑞得散( RLS) 的变化，建立了一 种新型的苏丹红检测方法———共振 瑞利散射法［23］。该方法成本低、 灵敏度高、可靠、简便、快速，可直 接测定水样中的苏丹红。
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食品中苏丹红的检测方法
检测食品中苏丹红的特点及其研究进展
苏丹红的简介
• 苏丹红是人工合成的亲脂性偶氮化合物，属工业染料，不溶于水，易溶于有 机溶剂，可作为化学合成着色剂应用于蜡、油彩、地板蜡等化工产品生产中; 但苏丹红却被作为食品添加剂而广泛应用。在食品中添加苏丹红的主要目的 是增色，苏丹红对光线的敏感性不强，食品中添加苏丹红后能长期保持鲜红。
红心鸭蛋
1，高效液相色谱法(HPLC)
• 高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上， 引入气相色谱理论和技术而发展起来的现代色谱 柱分离分析方法。。该方法以液体为流动相，具 有速度快、效率高、灵敏度高等特点。目前高效 液相色谱法检测苏丹红主要有欧洲委员会推荐方 法、国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管 理委员会发布方法( 国标法) 和凝胶柱净化－ 高 效液相色谱法。
食品中苏丹红的快速检测方法课件
苏丹红检测的意义
提高公众健康水平
提升食品安全监管水平
通过苏丹红检测，能够减少含有苏丹 红的食品对公众健康的危害，提高整 体健康水平。
苏丹红检测技术的不断发展和完善， 有助于提高食品安全监管机构的监管 能力和水平。
规范食品行业秩序
加强苏丹红检测能够促使食品企业自 律，遵守食品安全法规，规范行业秩 序。
趋势分析
对多次实验结果进行趋势分析， 了解苏丹红含量的变化趋势。
因素分析
分析影响实验结果的各种因素， 为改进实验方法提供依据。
结果解读与报告撰写
结果解读
对实验结果进行深入解读，理解苏丹红在食品中 的存在状态和潜在风险。
报告撰写
根据实验结果和分析结论撰写实验报告，包括数 据记录、结果分析和建议措施等。
根据实验需要，准备适量的苏丹 红标准品、提取剂、缓冲液等试 剂，确保其质量和纯度。
实验操作步骤
提取
将处理好的样品加入适 量的提取剂中，进行充 分搅拌、纯 化，去除杂质，提高检
测准确性。
显色反应
加入适量的缓冲液和苏 丹红标准品，进行显色
反应。
检测
使用分光光度计在 550nm波长处测定吸光 度值，根据标准曲线计
算苏丹红含量。
05
实验结果分析
数据处理与结果判定
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括 平均值、标准差等。
结果判定
根据实验数据判定食品中是否含有 苏丹红，以及苏丹红的含量是否超 标。
可信度评估
对实验结果的可信度进行评估，确 保结果的准确性和可靠性。
结果分析方法
对比分析
将实验结果与标准值进行对比， 分析差异原因。
气相色谱-质谱联用法
总结词
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红
超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红陈 英（周至县食品药品检验检测中心，陕西西安 710400）摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。
通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。
在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。
苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0μg/kg。
本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
关键词：超高效液相-串联质谱法；苏丹红；非法添加苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。
市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。
目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。
本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。
本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。
1 材料与方法1.1 仪器与试药液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；配有电喷雾离子源（ESI）；LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。
苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的薄层层析
苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的薄层层析一、苏丹红(Sudan Red)苏丹红是一种常用的红色染料，被广泛应用于食品、化妆品、药品、指甲油等业界，能够赋予产品艳丽的色泽。
然而苏丹红也被认为是致癌物质之一。
为了避免食品安全问题，许多国家和地区禁止苏丹红的使用。
在分析检测方法方面，薄层层析技术是一种比较简单、快捷、经济的方法。
下面是针对苏丹红的薄层层析过程：试料：苏丹红试剂：正洁净丙酮、橄榄油(甘油)、硅胶G工具：薄层层析板、层析罐、玻璃棒、显色剂方法：1.将硅胶G加入根据需要加入橄榄油(甘油)加至湿润状态。
2.将硅胶G加至薄层层析板上。
3.将湿润硅胶G平均的铺置于薄层层析板上，待干燥。
4.取适量的苏丹红加入正洁净丙酮中，使其完全溶解（尽量不要加多）。
0.2克左右即可。
5.将Sudan Red加入到上一步得到的层析板中。
6.晾干后，将层析板塞于等温层析罐中，上面加入适量的正洁净丙酮，将罐盖好。
7.将等温层析罐放入直线扫描层析仪中，使其等温30-60分钟。
8.测定苏丹红的吸收峰，记录其波长和相对强度。
9.采用显色剂可更加准确的测定吸收峰的波长和相对强度，进而进行定量分析。
苏丹黄是一种荧光亮黄色的有机颜料，被广泛用于染料、涂料、食品、饮料等多个领域，亦为一种致癌物质。
因此，人们对其分析检测越来越重视。
下面是苏丹黄的薄层层析方法：试剂：苯酚，四氯化碳1.取得薄层层析板，并在上面用硅胶G均匀的抹上一层。
2.将苯酚和四氯化碳混合，其配比为1：1，得到的混合溶液为显色剂。
3.将苏丹黄与混合溶液按需要的含量混合，制成样品溶液。
4.将样品溶液放在层析板边缘上，慢慢靠近层析板中心。
5.用含四氯化碳小槽将薄层层析板放入液面中，控制好溶液高度。
6.让样品溶液慢慢上升，进行层析分离。
7.分离结束后，将层析板晾干。
8.将晾干的层析板放入紫外灯下进行检测，通过温和化学反应，苏丹黄将被氧化，产生出淡黄色的荧光。
9.将层析板放入显色剂中，用显色剂复过程进行检测，最后根据相对迁移率计算定量分析。
红辣椒粉中苏丹红Ⅰ的检测
A
4
u j A u A 4 r A A
r
eff
A
u c W
u A
A
4
W
4
u As
A s
As
4
V W Cs M AS
A=2349、As=2955、Cs=1.52ug/mL、 V=5mL、M=5.0000g代入上式得
W=1.208mg/kg
A
误差分析：
V W Cs M AS A
0.001 u j (M ) 0.00058( g ) 3
2 2 (M) (M) u u j u f (M) 0.00058( g )
有效自由度
eff
4 u C 4 4 4 u A s s uV 4 u M u A As Cs V A M A A M s Cs V
u c W 4 W
公式简化为
其中
A
j
u A 4
样品峰面积 序 号 1
样品
2
3
4
5
6
7381 2290 2229 2345 2465 2437 2316 2349 积
标准工作液峰面积
序 号
1
2
3
4
5
6
7
8
平 均
峰面 2931 2989 3005 2985 2907 2954 2981 2888 2955 积
样品中的苏丹红Ⅰ的含量：
已知：
苏丹红Ⅰ纯度95%±1%；液相色谱面积不确
薄层色谱法测定苏丹红
薄层色谱法测定苏丹红1.试剂和仪器苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液，乙醚，正己烷，0.5%羧甲基纤维素钠水溶液，硅胶G，7.5cm*2.5cm玻璃板、毛细管、250mL广口试剂瓶、尺子和铅笔等。
2.苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液的配制（提前配制）分别称取苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ各0.5mg，用乙醚溶解后用正己烷定容至50mL，相当于100μg/mL的苏丹红。
3.展开剂的配制正己烷+乙醚+氯仿（体积比为7:1:0.5）4.薄层板的制备（至少提前一天准备）取7.5cm*2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干。
在50mL烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5%羧甲基纤维素钠水溶液8mL，调成均匀的糊状，用滴管吸取此糊状物，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在玻璃板或水平的桌面上做上下轻微的颤动，并不时转动方向，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h，取出，稍冷后置于干燥器中备用。
5.点样取1块用上述方法制好的薄层板。
分别在距一端1cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。
取管口平整的毛细管插入样品溶液中，在一块板的起始线上点苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液和混合液4个样点。
样点间距0.5-0.8cm。
如果样点的颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点干燥后进行。
样点直径不应超过2mm。
6.展开用正己烷+乙醚+氯仿（体积比为7:1:0.5）作为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的250mL广口瓶中进行展开。
点样一端应浸入展开剂0.5cm。
盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后观察分离的，比较样点的R f值的大小。
7.数据处理计算公式：比移值：R f = R1/ R2R1：原点至样品斑点中心之间的距离，cmR2：原点至展开剂前沿的距离，cm相对比移值：R is=R f（i）/R f（s）R f（i）是试样至原点的距离，cmR f（s）是标样至原点的距离，cm数据结果记录表8.思考题（1）在一定的操作条件下为什么可利用R f值来鉴定化合物？（2）在混合物薄层谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？（3）展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有何影响？。
苏丹红检测方法
苏丹红检测方法检测方法 (中文)欧洲委员会健康与消费者保护综合委员会第四分委员会―生产与流通过环节的食品安全第三部―物理化学危害物监督新方法声明:03/99主题:苏丹红检测方法的更正以前的3/92新方法声明在此更正(原方法4.12.1存在错误:正确的数字是100ml而不是50ml)代办处已收到来自法国的方法声明内容如下:辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析O.Veretout,L.Demesse,L.Szymanski1 应用范围本方法涉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红1号、苏丹红2号、苏丹红3号、苏丹红4号、苏丹橙B、苏丹红7B和胭脂树橙的检测。
2 定义苏丹红是应用于诸如油彩、蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成着色剂，一般不溶于水易溶于有机溶剂，胭脂树橙是一种食品着色剂但不允许在辣椒粉和调味品中使用。
3 方法要点上述着色剂经乙腈提取后，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。
以波长可变的紫外―可见检测器定性与定量。
4 试剂与标准品除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，实验用水均为蒸馏水、去离子水或相同质量的分析用水。
4.1 乙腈色谱纯4.2 水色谱级4.3 冰醋酸4.4 氯仿4.5 苏丹红1号(Aldrich Chemical Company)4.6 苏丹红2号(Acros organics 化工合成有机物)4.7苏丹红3号(Acros organics 化工合成有机物)4.8苏丹红4号(Acros organics 化工合成有机物)4.9苏丹橙B(Acros organics 化工合成有机物)4.10 苏丹红7B(Acros organics 化工合成有机物)4.11 胭脂树橙(特殊合成产品)4.12 标准溶液4.12.1 标准贮备液称取50.0mg着色剂(按产品标明的纯度折算成纯着色剂)并按以下方式移入100ml容量瓶定容。
着色剂溶解和转移溶剂定容溶剂苏丹红1号乙腈乙腈苏丹红2号乙腈乙腈苏丹红3号氯仿乙腈苏丹红4号氯仿乙腈苏丹橙B 乙腈乙腈苏丹红7B 乙腈乙腈胭脂树橙氯仿氯仿 4.12.1 标准工作液取上述标准贮备液各5ml移入50ml容量瓶中以乙腈定容，再分别从以上容量瓶中吸取0.5ml、1ml、2.5ml、4ml和5ml溶液移入50ml容量瓶中以乙腈定容，此时溶液中各种着色剂的浓度分别为0.5,1,2.5,4和5μg/ml。
苏丹红快速检测试剂盒使用说明
苏丹红快速检测试剂盒使用说明一、本方法适用于非食用色素苏丹红（1、2、3、4号）的现场快速检测。
二、样品处理：1、取约1克样品于试管中，加入2～5ml乙酸乙酯，振摇提取1分钟，静置5分钟，2、取一张层析纸，在端底向上1cm处、平行相隔1cm、用铅笔画出将要点样的五个+字线或点五个小点。
3、用四支毛细管分别沾取苏丹红1、2、3、4号对照液少许（毛细管尖端不多于0.5厘米容积距离）点在层析纸1、2、3、4号+字线上，另取1支毛细管沾取静置后已经染色的乙酸乙酯样品溶液（体积不限），将其点在层析纸5号+字线上。
（溶液的颜色较浅时，可在每次点样斑点挥干后重复点样），斑点直径控制在5毫米内。
三、测定：取一个约200ml的烧杯，加入约5ml展开剂，将层析纸（样品端朝下）插入展开剂中靠在杯壁上，待展开剂延层析纸向上平行展开至约 7厘米处时取出层析纸，观察结果。
四、判断：在本实验条件下，如果样品在展开轨迹中出现斑点，其斑点展开（向上跑）的距离与某一对照液展开后的斑点距离相等、形状相同、颜色虽浅却相近时，即可判断样品中加入了这一色素。
五、说明：1、本方法能够判定样品中是否加入了目视可见的苏丹红（1、2、3、4号），同时对判断样品中是否加入了其它非食用色素也有一定的参考价值，论据在于国家标准允许使用的辣椒红天然色素以及允许使用的合成色素在本方法展开过程中不会形成斑点，对出现异常斑点的样品，可用高效液相色谱仪进一步确正。
注意：国家允许使用的红曲天然色素在展开后的前沿顶端会形成斑点，需要时可用对照液作对比实验。
2、苏丹红对照液的点样量不要太多，否则会产生拖尾现象。
在用毛细管沾取对照液后，可在棉花球或一张废弃的层析纸上沾弃多余的溶液，使毛细管尖端留有不超过0.5厘米距离的溶液，将其一次性点到层析纸+字线上。
3、展开剂的使用应适量，液面高度应控制在斑点以下，展开过程中层析纸不能倾倒，每展一张层析纸最好更换一次展开剂。
4、环境温度会影响斑点的展开距离。
紫外可见分光光度法检测蛋黄中微量苏丹红IV
Technology 科技 分析与检测
紫外可见分光光度法检测蛋黄中微量苏丹红 IV
□ 李锦城 深圳市测达农产品检测有限公司
摘 要：本实验建立了紫外可见分光光度法检测蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的新方法，蛋黄样品经过预处理后利用紫外 - 可 见光检测器测定吸光度，并用外标法分析定量。当苏丹红 IV 在 1~12 μg/mL 时，其特征峰的吸光值与苏丹红Ⅳ含量呈良 好线性性关系。运用于蛋黄实际样品检测，其加标回收率为 97%~105%，检出限低至 0.05 μg/mL，测定结果与其他方法 比对无显著差异。该方法具有简单、快速、准确度高等特点，能运用于蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的快速测定。
3 结论
本文以紫外可见分光光度法实现 了蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的快速测定。 此法设备简单、成本低、耗时短、精 密度和准确度高，可应用于蛋黄中微 量苏丹红Ⅳ的快速测定。
参考文献 [1]Stiborova M,Martinek V,
Rydlora H,et al.Sudan Ⅰ is a potentialcarcinogen for humans: Evidence for its metabolic activation and detoxication by human
图 1 吸收光谱曲线
注：1. 加标蛋黄提取液；2. 纯蛋黄提取液；3. 苏丹红Ⅳ标准液
表 1 苏丹红 IV 的加标回收率测定
DM-P-097 生鸡蛋中苏丹红的测定
生鸡蛋中苏丹红的测定序列号：DM-P-0971、适用范围适用于生鸡蛋中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、苏丹红G和苏丹红7B的检测，方法检出限是10 μg /kg。
2、提取(1) 取2 g样品、2 g NaCl、20 mL乙酸乙酯混合，振荡5 min，超声提取5 min，8000 rpm下离心2 min，收集上清液；(2) 将下层残留物用20 mL乙酸乙酯按照步骤(1)重复提取一次，合并两次上清液定容到40 mL；(3) 取10 mL上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至近干，再加入5 mL正己烷混匀，待净化。
3、净化ProElut SDH 6 mL（Cat.#65909）a活化： 5 mL正己烷活化；b上样：加入待净化液，弃去流出液；c淋洗：依次加入5mL正己烷，5 mL1%乙酸乙酯正己烷，弃去流出液；d洗脱：加入10 mL1%甲酸乙酸乙酯，收集流出液；e重新溶解：将洗脱液在40 ℃下减压蒸馏近干，用40%甲基叔丁基醚甲醇溶液定容至1 mL，供HPLC分析。
4、色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(2), 250 mm×4.6 mm, 5 μm（Cat# 99603）流速：1.0 mL/min 进样量：20 μL 柱温：40 ℃检测器：苏丹红G 430 nm 苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、7B 518 nm流动相：0.2% 磷酸水溶液:乙腈=15:855、添加回收结果生鸡蛋中苏丹红的HPLC检测添加回收结果430 nmTime (min)V o l t sTime (min)V o l t s生鸡蛋中苏丹红检测(加标样品)的液相色谱图430 nmTime (min)V o l t s518 nmTime (min)生鸡蛋中苏丹红检测(空白样品)的液相色谱图 430 nm10203040Time (min)0.0000.0100.020V o l t s518 nm10203040Time (min)0.0000.0100.020V o l t s。
苏丹红等油溶性非食用色素的快速纸层析测定法
苏丹红等油溶性非食用色素的快速纸层析测定法方法编号：CDC-20411 适用范围：本方法适用于苏丹红（1、2、3、4号）等油溶性非食用色素的现场快速检测。
2 方法原理：依据苏丹红等油溶性非食用色素的化学极性不同，通过绽开剂在试纸上的绽开距离不同来确定确定组分的存在。
3 检测试材（试剂盒组成）：快速层析纸，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ号系列苏丹红对比液，绽开剂，毛细管。
4 样品处理：取约1g样品于容器中，加入2～4 mL乙酸乙酯，充分混匀，提取1min，静置3min以上。
5 点样：取一张层析纸，在端底向上约1cm处、平行相隔约1cm、用铅笔画出将要点样的+字线或五个小点。
取1支毛细管沾取样品溶液的上层液，将其分别点在五个+字线上（样品溶液颜色较浅时，可在每次点样斑点挥干后重复点样），斑点直径掌握在5毫米以内。
另取四支毛细管分别沾取苏丹红1、2、3、4号对比液少许分别点在样品的原点上。
6 绽开：取一个250mL以上的烧杯，加入约5mL绽开剂，将层析纸（样品端朝下）插入绽开剂中靠在杯壁上，待绽开剂延层析纸向上平行绽开至层析纸顶端约1厘米处时取出层析纸，观看结果。
7 结果推断7.1在本试验条件下，假如样品在绽开轨迹中消失斑点，其斑点绽开（向上跑）的距离与某一对比液绽开后的斑点距离相等、颜色相同或颜色虽浅却相近时，即可推断样品中含有这一色素。
7.2我国允许使用的色素除自然色素外没有油溶性色素，自然色素的化学极性往往很小，样品中即使含有自然色素，绽开后的色斑会在前沿之处消失淡色斑点或淡色条带。
7.3假如对比物已经绽开，而样品色斑在原处未动或绽开的距离很小，表明这一色素为水溶性色素，可用水溶性色素检测试剂来推断其是食用的还是非食用的。
8 留意事项：8.1本方法检出限为点样量10 L,0.08g 目视可见；最低检出浓度8g/mL。
精确定量需要采纳高效液相色谱仪。
8.2 检测的样品数量较多时，不必每张层析纸上都点对比液，可一次点几个样品，当绽开过程中消失斑点后，再做加入对比液试验。
食品中苏丹红的快速检测方法
【检测步骤】 1.样品处理：取约2g样品（辣椒取1g）于研钵中, 加入一瓶提取剂研 磨约3至5分钟，用滤纸过滤后挤干残渣, 收集滤液5mL于100mL量筒 中，用蒸馏水定容至15mL。 2.过层析柱：将50mL注射器与层析柱（层析柱使用前依次用5ml洗 脱液、5ml水激活）连接，将步骤1中收集到的样液倒入注射筒里， 用注射塞加压，加快流速，建议15mL样本通过柱子的时间为3～ 5min。待样液完全流干后加2mL洗涤剂、2ml水洗涤层析柱。 3.观察结果：观察层析柱中吸附剂颜色变化，若吸附剂逐渐形成红色 环带，可初步判断样本中含有苏丹红；向层析柱中加1mL洗脱液； 将其洗脱下来的液体用5mL离心管收集,看液体颜色来判断。 萃取：取步骤3中的5mL离心管，加入1mL萃取剂，加入0.2ml水， 振荡，离心管上层若有明显的红色则可判断样品中含有苏丹红。 4.检测：用1ml注射器取步骤4中离心管中的上层液(注意不要吸到下 层的液体), 加到白色点滴板的一个孔上，样液渐渐ห้องสมุดไป่ตู้干，若在孔上形 成红色斑环则说明样品中含有待检物质。加0.2ml提取剂溶解，滴加 2~3滴定性试剂,试剂红色加深为苏丹红1、2，试剂变蓝色为苏丹红3、 4。（注意及时观察）
实验原理：
分子印迹聚合物是一类新的分子识别物质, 它将待 测物质作为模板分子, 首先, 使功能单体与模板分 子间相互作用形成单体- 模板分子复合物; 然后, 功 能单体与交联剂交联聚合形成聚合物, 将模板分子 固定; 最后再通过一定的物理或化学方法把模板分 子提取出来。从而在聚合物中留下一个与模板分子 特异性结合的功能基的三维空穴, 对模板分子具有 专一性识别作用。这种分子印迹聚合物具有构效预 定性、特异识别性和广泛实用性。其识别能力可以 和生物分子抗原- 抗体、酶- 底物、受体-激素间的 特异性识别相媲美, 同时还具备对恶劣环境(高温、 高压、强酸、强碱)的耐受性。
高效液相色谱法测定食品中苏丹红的研究
068苏丹红是一种化学染料，具有致癌性，不允许在食品中添加。
但有些不法商贩为了让食品颜色更鲜艳，仍会使用苏丹红，因此加强对食品中苏丹红的检测十分必要。
本实验在参考国内外检测方案的基础上，对检测方案进行了改善，实现了简单、迅速、准确的目的。
一、材料及方案1.仪器。
高效液相色谱仪安捷伦1100（二极管阵列检测器）和一些常用仪器。
2.试剂和标准物。
甲醇（色谱纯度）；乙腈（色谱纯度）；有机酸溶剂（CH 3COOH∶HCL∶H 2O=10∶2∶1）；20%NAOH溶液；乙醚+石油醚（1＋1）（分析纯度）。
量取苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红G和苏丹红7B各10.0mg作为标准贮备液（100 μg/mL ），用乙醚将其溶解后，用正己烷配制成100mL 的贮备液，用于标准系列的制备。
3.方法。
（1）样品处理。
在50mL软木管中用20mL有机酸溶液提取约10g样品2-3次，收集并合并低酸溶液，在水浴中蒸发大约2/3的酸。
接下来用20%氢氧化钠溶液调节到微碱性，放入10mL乙醚+石油醚（1+1）在分液漏斗中萃取2-3次，然后将上层醚层收齐，在水浴中蒸发浓缩，甲醇定容至2.0mL，过0.45微米的滤膜，上机。
（2）色谱条件。
色谱柱Phenomenex cl8，250x4.60mm，5μm，流动速度是1.0mL/min。
色谱柱的温度是30℃，流动相内的溶剂是酸性的水溶液（165mL的CH 3COOH溶于1000mL的水）和溶剂B（乙腈）。
它的梯度洗脱见表1。
表1：不同流动相配比在不同时间应用总结果时间（min）溶剂A（%）溶剂B（%）梯度曲线02575线性10.02575线性11.00100线性20.00100线性25.02575线性苏丹橙G是432纳米，苏丹红I是478纳米，苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV、苏丹红7B是520纳米；进样量是20微升，标准溶液浓度是5.0μg/mL。
峰值出现的时间分别是高效液相色谱法测定食品中苏丹红的研究苏丹红G（5.704分钟）、苏丹红I（7.227分钟）、苏丹红Ⅲ（15.470分钟）、苏丹红7B（21.510分钟）、苏丹红IV （22.241分钟）。
高效液相色谱法检测食品中的苏丹红
m 安全与检测2 壬 =SAFETY AND TESTING高效j 夜相色谱法检测食品中的苏丹红郑佳玉:尤继明范明红宝应』摘 要：试验目的是用高效液相色谱法检测食品中的苏丹红。
试验釆用凝胶柱净化-高效液相色谱法同步测定食品内苏丹红I 、II 、III 与IV,用乙醇提取试验样品，Bio-Beads SX3凝胶柱净化处理提取液，经洗脱处理后，Symmetry ShieldRP18柱进行分离，二极管阵列检测器检测苏丹红。
结果表明，苏丹红I 、II 、III 与IV 质量浓度为0.1~10mg/L 时呈现出较好的线性相关性,加标回收率均值为80.6 -96.2%,相对标准偏差是2.4 ~ 5.8%。
关键词：食品；苏丹红检测；凝胶柱_高效液相色谱I. 检测试验仪器和试剂Agilent 1100高效液相色谱仪自带二极管阵列检测器（HPLC-DAD ） o甲醇（色的）、乙酸乙酯、环己烷、无水硫酸钠（分析纯）,苏丹红 1（ 97.51%）、H （90.0%）、皿（97.0%）、IV （91.0% ）标 准品。
层析柱 1.6 cm X 50 cm,填充 Bio-Beads S-X3 凝胶。
配制标准液：准确量取苏丹红I 、II 、III 与IV 标准品，均 为10 mg 。
仅用甲醇溶解苏丹红I, ImL 乙酸乙酯溶解苏丹红II 、 III 与IV 后，再用甲醇将其定容到10 mL,均被配制成l.OOg/ L 标准储备液。
分别量取2.5ml 储备液并将其放置在50mL 容量瓶内，甲醇做定容处理，以上获得的溶液实质上便是4种苏丹 红制备的50mg/L 混合储备液。
而后再使用甲醇配备质量浓度为 0.10、0.5、1.0、5.0、10mg/L 的标准液叫辣酱、香肠样品均采购于农贸市场。
1.2提取与净化样品精确称量4g 均质化的试验样品，兑入8g 无水硫酸钠，充 分震荡摇匀，待观察到样品成疏松样后，加入30 mL 无水乙醇，置于75P 水浴内加热8min,取样后用超声波清洗，静置lOmin,取用上层清液并放置于烧杯内，用35mL 乙醇提取残渣，与提取液混合。
薄层层析-高效液相色谱法测定食品中苏丹红
ｉ ． ｅ ａｄｇｔｈ ｄｔ ｔ ｎｌ ｉｏ ０ ０４ ｔ ／ ， ．２ ｇ ｇ ｒ ｅｔｅ ｄ ｅ ｅ ｉ ｉ ｆ ｗ ｓ ｉ ｙ
Ｋｅ ｒ ｓ：ｔ ｉ ａ ｅ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈ ｙ ｗｏ ｄ ｈ ｎ ｌｙ ｒｃ ｒ ｍａｏ ｒｐ ｙ；ｈ ｇ ｒｏ ｍａ ｃ ｉ ｕｄ ｃ ｒｍ ｔｇａ ｈ ｉｈ ｐ ｆｒ ｎ ｅ ｌｑ ｉ ｈ ｏ ｏ ｒ ｐ ｙ；ｓ ｌ ｅ ａ ｅｆ—ｍａ ｅｓｌ ａｇ ｌｐ ａｅ；ｓ ｄ ｅ ｄ ｉｉ ｅ ｌｔ ｃ ｕ ａ ｒｄ ｎ
ｔ ｔ ｎｉ ｔ ． ２ ． ｇ ｍＬｒｎｅ ｔｅ ｅｋａｅ ｓ（ ｒ ｉ ｅ０ １～ ０ ０ ／ ｇ ，ｈ ａ ｒａ Ｙ）ａｄｃｎ ｅｔ ｔ ｎ（ ａｏ ｎ ｈ ａ ｐ ｎ ｏ ｃｎｒ ｉ Ｘ）ｐｅｅｔ ｏｄｌ ｅｒ ｅ ｔ ｎｈ ， ｕ ａｏ ｒｓｎ ｏ ｎ ａ ｌ ｉ ｓｉ Ｓ — ｇ ｉ ｒ ａｏ ｐ
２１ 年 ３ ０１ ９卷第 １ ９期
广州 化 工
薄层层析 一高效液相色谱 法测定食 品中苏丹红 术
李 春 香 ，黄 坚 ，马 慧雪 ，张 祥
（ 中南大学化 学化 工学院 ，湖南 长沙 ４ ０ ８ ） １０ ３
摘 要 ： 建立了薄层层析 一 高效液相色谱联合技术测定食品中违禁添加物苏丹红Ｉ 的新方法。采用硅胶板将 、 Ⅱ
ｗｔ ｉ ｌ ｅ ｈｏ ａｏｒｐ ｙ（ Ｌ ｉ ｔ ｎ ａ ｒ ｒｍ ｔ ａ ｈ Ｔ Ｃ）ａ ｄｈｇ ｅ ｏ ａ ｃ ｑ ｉ ｈｏ ｔ ｒｐ ｙ（ Ｐ Ｃ ｗ ｅｈｄ ｏ ｂｎｄ ｕ ｈ ｈ ｙ ｃ ｇ ｎ ｉ ｐｒ ｒ ｎｅｌ ｕｄｃ ｒｍａ ｇａ ｈ Ｈ Ｌ ）ｔｏｍ ｔｏｓｃｍ ｉｅ ．Ｓ － ｈ ｆｍ ｉ ｏ
法应 用于辣椒粉 、 辣椒油 、 番茄酱等 中的苏丹红ＩⅡ 、的检测 。其检 出限分别为 ００４ｔ／ 、．２ ｇ／ 。 ．２ ｇｇ００７ ￣ ｇ
苏丹红的检测
苏丹红的检测中华人民共和国国家标准食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法1 范围本标准适用于食品中苏丹红染料的检测。
本标准规定了食品中苏丹红?、苏丹红?、苏丹红?、苏丹红?的高效液相色谱测定方法。
方法最低检测限:苏丹红?、苏丹红?、苏丹红?、苏丹红?均为10ug/kg. 2 术语和定义2.1 苏丹红属偶氮系列化工合成染料。
3 方法要点样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱——紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。
4 试剂与标准品4.1 乙腈色谱纯4.2 丙酮色谱纯、分析纯4.3 甲酸分析纯4.4 乙醚分析纯4.5 正己烷分析纯4.6 无水硫酸钠分析纯4.7 层析柱管:1cm(内径)×5cm(高)的注射器管。
4.8 层析用氧化铝(中性100目~200目):105?干燥2h，与干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL水降活，混匀后密封，放置12h后使用。
注:不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异，须根据具体购置的氧化铝产品略做调整，活度的调整采用标准溶液过柱，将1ug/mL的苏丹红的混合标准溶液1mL加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60mL完全洗脱为准，4种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红?、苏丹红?、苏丹红?、苏丹红?，可根据每种苏丹红的回收率作出判断。
苏丹红?、苏丹红?的回收率较低表明氧化铝活性偏低，苏丹红?的回收率偏低时表明活性偏高。
4.9 氧化铝层析柱:在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用。
4.10 5%丙酮的正己烷液:吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。
4.11 标准物质:苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红;纯度?95%/4.12 标准储备液:分别称取苏丹红、苏丹红、苏丹红及苏丹红各10mg(按实际含量折算)，用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。
4 仪器与设备5.1 高效液相色谱仪(配有紫外可见光检测器)5.2 分析天平:感量0.1mg5.3 旋转蒸发仪5.4均质机5.5 离心机5.6 0.45um有机滤膜6 样品制备将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需磨细。
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苏丹红最新检测方法
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苏丹红检测套装：
固相萃取柱：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL，订货号：22-05003)
液相色谱柱：HiSep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0246150）
苏丹红是偶氮苯类人工色素,由于苏丹红具有潜在的致癌性, 中国和欧盟等多数国家都禁止其作为色素添加剂在食品中使用。
然而, 仍有不少食品生产企业为了改善食品色泽、降低成本将其作为食用色素。
我国质量监督部门检出了包括几家知名企业生产的众多含有苏丹红的食品, 引起了整个社会的关注。
因此，建立快速可靠的检测方法至关重要。
目前报道的苏丹红的检测方法主要是采用液相色谱法。
由于辣椒油、辣椒粉等食品成分复杂,液相色谱分离困难,易导致假阳性结果。
国家标准的方法是采用正已烷作为萃取溶剂，用氧化铝固相萃取柱净化样品。
但该方法样品处理过程复杂，而且氧化铝的活性不易控制，方法回收率难以得到保证。
因此我们开发了HiCapt Sudan苏丹红专用固相萃取柱，建立了同时检测食品中四种苏丹红的高效液相色谱分析方法，较好地解决了这一问题。
方法的优势：
∙专利创新的苏丹红专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰
∙回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷
∙方法简单、快速、节省溶剂
∙优化的色谱分离条件，有效去除杂质干扰
1. 样品处理：
1.1 样品提取：（参考国标GB/T 19681—2005）
1.1.1辣椒粉等粉状样品
称取0.5 g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入5mL正己烷，超声10min，5000 r/min离心5 min 后取上清液3 mL，待净化。
1.1.2辣椒油等油状样品
称取0.5 g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入3mL正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。
1.1.3腊肠样品
将腊肠切成小丁，称取3.0 g, 放入10 mL离心管中，加入5 mL正己烷，超声10分钟，然后步骤同辣椒粉样品。
1.1.4番茄酱、甜辣酱样品
称取番茄酱1g，加入1 mL水，再加5 mL正己烷/丙酮（3/1，v/v），涡旋3分钟，超声10分钟，接着10000 r/min离心5分钟，取上层有机相3 mL，加无水硫酸钠0.5 g，涡旋0.5分钟，静置取上清液作为上样液。
1.2固相萃取柱净化：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL)
（1）活化：在HiCapt Sudan柱中依次加入3mL丙酮，2 mL正己烷活化。
（2）萃取：将待净化液加入HiCapt Sudan柱中（在柱中正己烷液面为2mm时上样，此过程不要使柱干涸），再用200μL正己烷淋洗样品管，一并加入SPE柱中。
流出液弃去。
（3）清洗：待上样液完全流出后，用2mL的3%异丙醇-正己烷溶液淋洗，淋洗液弃去，将小柱抽干。
（4）解吸：3mL丙酮解吸，收集解吸液。
（5）吹干及定容：解吸液50℃氮气吹干，加入1mL丙酮溶解并定容，用0.45μm有机滤膜过滤后HPLC 分析。
2.色谱条件：
色谱柱：HiSep C18-T(150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm)；
流动相：流动相A：0.3%甲酸的水溶液：乙腈=85:15，
流动相B：0.3%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80:20；
流速：1mL/min
柱温：35℃
检测波长：520nm
进样量：10μL
注：40分钟后主要在冲洗柱子
3. 标准溶液液的配制
准确称取苏丹红I，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ标准品各5 mg(按其标称含量折算)，用乙酸乙酯定容至10 mL，分别配成500 mg/L的标准储备液。
取储备液各200 L于10 mL容量瓶中，用丙酮定容，得4种苏丹红的质量浓度均为10 mg/L的混合标准储备液。
将该溶液放置于4℃冰箱中避光保存。
4 结果
4.1 标准曲线与检出限
将10 mg/L的苏丹红储备液用提取液逐级稀释配制了0.05 - 5 mg/L苏丹红标准溶液。
按照选定的色谱条件测定，以峰面积对质量浓度进行线性回归。
由表1可见，四种苏丹红在其质量浓度为0.05 - 5 mg/L 的范围内具有较好的线性关系，相关系数的平方均大于0.999；方法的检出限分别为21 - 41 ng/g（辣椒粉）；日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于8.9 %和8.7 %
4.2 回收率和精密度
分别加入低、中、高3种质量浓度的苏丹红标准溶液于辣椒粉样品中，然后按照本实验方法进行测定，回收率为80.70.14%-107.88%（见表2）。
图5为添加苏丹红的辣椒粉样品的色谱图。
从该图可以看出，没有杂质干扰。
且该方法具有较好的日内及日间精密度（见表2）；日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于8.9 %和8.7 %。
按本方法测定了咸鸭蛋、腊肠、辣椒油的回收率和相对标准偏差，其回收率81.56%-110.41%（见表3）。
结果表明，本实验方法能够有效地去除食品中的基质干扰，具有简单、灵敏的特点，适用于食品中苏丹红的检测。