第16章呼肠孤病毒科(Reoviridae)汇总

第十六章呼肠孤病毒科（Reoviridae）
一、概述
二、正呼肠孤病毒属
（一）哺乳动物呼肠孤病毒
（二）禽呼肠孤病毒
三、环状病毒属
（一）蓝舌病病毒
（二）非洲马瘟病毒
（三）鹿流行性出血病病毒
（四）茨城病病毒
（五）马器质性脑病病毒
四、轮状病毒属
五、COLTI病毒属
科罗拉多蜱传热病毒
六、水生呼肠孤病毒属
草鱼出血病病毒
主要参考文献
一、概述
同义名：双股核糖核酸病毒科
本科的命名是取自3个英文单词的词头组合而成，全称是呼吸道（respiratory）、肠道（enteric）和孤儿（orphan）病毒。

于50年代早期，当乳鼠和灵长类的细胞培养开始广泛应用于病毒学实验室时，从人的呼吸道和胃肠道分离出这类病毒，但与任何疾病都不相关，分类鉴定为小RNA病毒。

几年以后，发现该病毒的基因组为双股RNA，并分节段。

1959年建议命名为呼肠孤病毒，强调了其与疾病的不相关性。

但是随后发现，这些病毒也有一定的病原性，一些成员还
是某些特定疾病的病原体，因此建议改称呼肠病毒。

本书照顾习惯，仍称呼肠孤病毒，也与英文“Reo”相应。

在证明呼肠孤病毒的基因组是由若干片段组成的双股RNA后，接着又发现三叶草的伤瘤病毒（Clover wound tumour virus, WTV）也含双股RNA，而且病毒粒子的形态结构极像呼肠孤病毒，从而引起病毒学工作者对双股RNA病毒的极大兴趣。

此后，相继在脊椎动物、无脊椎动物、细菌、高等植物和真菌等宿主体内发现了60种以上的双股RNA病毒（虽其形态结构和生物学特性不尽一致）。

呼肠孤病毒基因组是双链ＲＮＡ这一重要发现，第一次说明了双链ＲＮＡ可作为稳定的生命形式存在于自然界。

1968年，Verwoerd等建议成立一个新的分类学类群，称为“双股核糖核酸病毒”（亦即双股RNA病毒）。

1971年，Borden等在原来的呼肠孤病毒群中的某些病毒的负染标本上，发现病毒壳粒呈短粗中空的环状，建议成立环状病毒属。

1974年，Flewett等根据犊牛腹泻病毒和婴儿腹泻病毒的形态类似车轮的特点，又提出了“轮状病毒”这一新的病毒名称。

1975年，国际病毒命名委员会正式采用这一名称，并于1978年将其列为一个病毒属，而将原来的呼肠孤病毒属提升为科，从而在呼肠孤病毒科下包括呼肠孤病毒属、环状病毒属和轮状病毒属等三个病毒属。

1991年，国际病毒分类委员会（ICTＶ）第5次病毒分类报告中新增科州蜱传热（ＣＯＬＴＩ）病毒属及水生呼肠孤病毒属，将呼肠孤病毒科分为呼肠孤病毒亚群（正呼肠孤病毒属、环状病毒属、轮状病毒属、COLTI病毒属、水生动物呼肠孤病毒属)
Cypovirus）、植物呼肠孤病毒亚群1（植物病毒属Phytovirus）、植物呼肠孤病毒亚群2（斐济病毒属 Fijivirus3（建议）。

１９９４年ＩＣＴＶ第６次病毒分类报告中，取消了第５次分类报告中的群，统一定位为属，即呼肠孤病毒科下设正呼肠孤病毒属、环状病毒属、轮状病毒属Fijivirus、植物呼肠孤病毒属Ｐhytoreovirus Oryzavirus
状病毒属、轮状病毒属、COLTI病毒属（科州蜱传热病毒属）及水生呼肠孤病毒属有一些重要的动物病原，本书将分节介绍。

本科其它属如胞质多角体病毒属的成员多达150种以上，均是昆虫病毒，代表种为家蚕胞质多角体病毒，是家蚕的重要致病病毒。

植物呼肠孤病毒属及斐济病毒属是植物的病毒。

此外，还从真菌发现一些结构与呼肠孤病毒类似的病毒，但RNA只有1～3个节段，这些内容不再予以讨论。

该科大多数成员的病毒粒子呈廿面体对称，无囊膜，有双层衣壳，内衣壳结构稳定，含32个壳粒，呈廿面体对称，但外衣壳结构差异明显（见正呼肠孤病毒属、环状病毒属和轮状病毒属等）。

病毒核酸为线性双股RNA，有10～12个节段，单个节段的分子量02×10330
103kDa，总分子量为12×103～20×103kDa，大约为病毒粒子总重的14%%～22%。

每个RNA节段有一个阅读开放框架，编码一种蛋白质（不需要进一步加工，这区别于双ＲＮＡ病毒科）。

病毒粒子有6～10种蛋白质（分子量15×103～155×103Da），包括与核心相关的转录酶和mRNA帽化酶，其中一些蛋白质是糖基化的。

完整的病毒粒子的分子量约为120×106Da，在CsCl 2中浮密度为136～139g/cm3。

病毒在胞浆内复制，有时在感染细胞的胞浆内看到病毒粒子呈类结晶状排列。

病毒复制前，胞饮的病毒粒子首先受细胞溶酶体水解酶的作用致使病毒粒子部分脱壳，成为亚病毒颗粒（ subviral particle ）。

这一过程活化了病毒子携带的转录酶和帽化酶，从而转录出在3'末端没有多聚腺苷酸化而在5'端帽化的mRNA分子，这点是独特的。

在病毒粒子转录酶作用下，首先合成正股ＲＮＡ。

并不是所有呼肠孤病毒基因组在起始过程中都能转录，只是某些基因（节段）才能起始转录，而其它基因随着病毒早期蛋白的合成而被抑制。

每种蛋白的合成分别与每个mRNA分子相联系，并合成反义RNA链，从而产生双股子代RNA分子。

这些RNA分子又作为模板转录出更多的mRNA；然而此时的mRNA不被帽化，通过一种未知的机制，这些未帽化的呼肠孤病毒mRNA能优先合成大量的病毒结构蛋白。

最后，这些亚病毒颗粒与一些附加蛋白一起完成病毒粒子的成熟。

在环状病毒的合成过程中，胞浆内形成规则性的微管样结构。

轮状病毒的成熟涉及到单层衣壳进入粗面内质网上囊泡的这一不寻常的出芽过程。

因此而形成的
伪膜随后移至它处，外衣壳加到囊泡上，由于病毒的主要外衣壳蛋白是糖基化的，它的合成只有当它通过内质网膜时才能完成。

由于该科病毒核酸是多节段的，很容易出现基因重组现象，重组频率一般为３%～５%。

二、正呼肠孤病毒属（Orthoreovirus）
代表株为呼肠孤病毒3型，成员包括从人、猴、犬、牛分离的呼肠孤病毒１、２、３型以及家禽分离株和纳尔逊海湾病毒（Nelson Bay virus, NBV）。

呼肠孤病毒可由许多脊椎动物体内分离到，包括马、牛、猪、绵羊、豚鼠、犬、猫、貂、禽类、蝙蝠以及人、黑猩猩和猴，除了感染啮齿动物和禽外，一般不引起明显的疾病，特别是对成年动物。

呼肠孤病毒在动物和人类的某些呼吸道及消化道疾病的发生上，呈现一定的辅助或促进作用。

病毒粒子直径约76nm，有92个壳粒，核心直径约52nm，由两层致密的蛋白质衣壳所包裹。

在电镜下，核心上具有12个呈5度对称的棘状突起（约5nm），分别从廿面体对称的12个顶上延伸出来，基因节段的转录酶就从该部位释放出来。

病毒有三组不同大小的RNA，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分成10个分散的节段，编码10种蛋白质，在翻译过程中再一一裂解。

完整病毒的浮密度为1.37g/cm3。

病毒具有抗酸、抗脂溶剂等特性，不需节肢动物传播。

基于宿主种类、抗原特性、血凝素和引起细胞融合的能力，一般将正呼肠孤病毒属成员分两群，即哺乳动物呼肠孤病毒和禽呼肠孤病毒。

从飞狐中分离到的一株纳尔逊海湾病毒，它的特性介于两群之间。

（一）哺乳动物呼肠孤病毒
1. 形态
具有特征的廿面体对称的双层衣壳结构。

病毒粒子的核心由核酸基因组及其密切连接的内衣壳构成，其外还有一层外衣壳，无囊膜。

完整的病毒粒子直径76nm左右，核心的直径52nm左右，电子显微镜下很容易看到病毒粒子表面的壳粒，外衣壳共92个壳粒，分别由五邻体和六邻体组成，其中80个为六邻体，12个为5邻体，壳粒为长10nm、宽8nm的中空棱状结构。

内衣壳呈廿面体5度对称排列。

正呼肠孤病毒的外衣壳比较脆弱，易被热和胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）等蛋白水解酶破坏，正是由于这种特性，一般说来，蛋白水解酶能增强病毒在肠道中的感染性，这是由于脱去病毒外衣壳的缘故。

内衣壳却很稳定，不仅对热和胰凝乳蛋白酶处理具有较大的抵抗力，而且能耐高浓度的尿素、二甲亚砜（ＤＭＳＯ）和SDS的处理。

呼肠孤病毒可在体外培养的敏感细胞内形成胞浆内包涵体，包涵体内具有许多结晶状排列的病毒粒子。

将提纯的病毒粒子置于蒸馏水中，可使外衣壳结构疏松，病毒粒子的直径增大。

也常见到呼肠孤病毒的空衣壳，这是病毒粒子中缺乏核酸的缘故。

2. 理化学特性
早在1962年，Gomatos等就已证明呼肠孤病毒具有双股RNA，因为感染呼肠孤病毒的L细胞的胞浆内包涵体在DNA酶和RNA酶处理后依然保持感染性，Feulgen染色呈阴性反应，而且这种包涵体在用吖啶橙染色时呈苹果绿色。

5FUDR）和5BUDR）等DNA 合成抑制剂，不能抑制呼肠孤病毒的增殖。

但在病毒增殖的后期，吖啶橙染色可能呈橘红色[ZW(]应用pH4.95的001%吖啶橙液进行染色，双股DNA和双股RNA病毒呈苹果绿色，单股DNA和单股RNA病毒呈橘红色，详见本书第十四章。

[ZW)]，从而证明呼肠孤病毒除双股RNA外，同时还有单股RNA的存在。

后者是一些低分子量的寡核苷酸，一般认为是病毒不完全转录的产物，约占病毒核酸总量的15%%～20%。

这些单股RNA主要分布在病毒粒子核心的外面。

正呼肠孤病毒的整个基因组由10个片段的双股RNA组成，节段分子量为05×103～27×103kDa，RNA的总分子量14×103～15×103kDa。

在氯化铯中的浮密度为161g/cm 3。

S20W730。

RNA含量约占病毒粒子总重的14%，病毒共含3 000个寡核苷酸，其长
度在2%～20核苷间，核心含44%RNA。

G+C含量为44%。

双股RNA在78～85℃温度中发生变性，成为对RNA酶敏感的单股RNA，说明其中存在不耐热的结合键。

病毒粒子分子量130×106Da，本属病毒的基因组与呼肠孤病毒科其它属成员无同源性序列。

正呼肠孤病毒的蛋白质占病毒粒子总重的86%，分布于两层衣壳内，一共有9种蛋白质，分子量33×103～155×103Da，７种主要多肽，即λ1、λ2、μ1、μ2、δ1、δ2、和δ3。

外衣壳由μ2、δ1和δ3等三种蛋白质组成。

Astell等（1972）由感染细胞中提取“亚病毒单位”，也就是除掉外衣壳的病毒粒子，随后加入δ3蛋白，结果成功地在试管内组装成完整的呼肠孤病毒粒子，从而证明δ3蛋白是外衣壳的主要成分。

但在仔细研究胰凝乳蛋白酶降解外衣壳的过程中，发现与衣壳稳定性和病毒粒子感染性有关的主要成分是μ2而不是δ3。

胰凝乳蛋白酶可将δ3完全除去，但病毒粒子仍保持高度感染性。

但在将μ2降解时，病毒粒子的感染性明显下降。

最后除去的是δ1，结果遗留52nm直径的内衣壳，即核心。

λ1、λ2、μ1和δ2等几种蛋白质存在于内衣壳内。

正呼肠孤病毒不含糖类和脂质，对乙醚有抵抗力。

正呼肠孤病毒含有转录酶、复制酶、核苷酸磷酸水解酶、帽化酶。

正呼肠孤病毒对去氧胆酸盐、醚和氯仿具有很大抵抗力，能耐56℃2小时或60℃30分钟的加热，在4℃，其传染性至少可维持2个月。

在有1～2mol/L MgCl2存在的情况下，50～55℃加热5～15分钟，可以明显提高正呼肠孤病毒的感染力。

一般认为，这是除去外衣壳或改变外衣壳结构或性质的结果。

在冰冻的病毒液中加入上述浓度的Mg和Cl离子，却使病毒明显灭活，原因不明。

用胰凝乳蛋白酶处理病毒标本，有提高其感染力的作用。

这种酶可使外衣壳发生部分裂解，并不将其完全除去。

正呼肠孤病毒可被某些染料的光动力作用所破坏，包括常用于蚀斑试验的中性红。

紫外线也有破坏病毒的作用，但是已经在紫外线灭活的病毒标本内多次发现多数感染复活现象。

正呼肠孤病毒在pH22～80的广泛酸碱范围内保持稳定。

在室温条件下，能耐1%H2O
2、3%福尔马林、5%来苏儿和1%石炭酸1小时。

但70%乙醇在较长时间作用后使其灭活，过碘酸盐也可迅速杀死呼肠孤病毒。

3. 抗原性
正呼肠孤病毒具有共同的群特异性抗原λ2和δ3，另外还有型特异型抗原δ1。

哺乳动物的呼肠孤病毒共有一个补体结合性抗原，应用血清中和试验和血凝抑制试验，则可将其区分为3个不同的血清型。

2型呼肠孤病毒更进一步区分为4个亚型。

这些血清型与禽呼肠孤病毒没有血清学关系。

奇怪的是，哺乳动物的呼肠孤病毒竟与三叶草的伤瘤病毒具有一个共同的抗原成分，而且这种植物病毒与哺乳动物的呼肠孤病毒具有同样的形态结构以及双股RNA构型。

呼肠孤病毒的3个哺乳动物血清型都能凝集人的O型红细胞，这种红细胞凝集现象发生于4～37℃温度中。

56℃加热使呼肠孤病毒迅速丧失血凝特性。

3型呼肠孤病毒还能凝集牛的红细胞。

分离自猪的病毒株常可凝集猪的红细胞，但不能凝集豚鼠和鸡的红细胞。

应用蔗糖密度梯度技术可由病毒粒子中提取两种血凝素，其中一种与病毒的感染性有关。

乙醚不能破坏呼肠孤病毒的血凝性和感染性；氯仿能破坏其血性，但不破坏其感染性。

呼肠孤病毒的血凝现象可被特异抗血清所抑制，故可进行血凝抑制试验检测抗体或用已知抗体鉴定病毒。

4. 培养
呼肠孤病毒可在许多种类的培养细胞中增殖，包括原代猴肾细胞、KB细胞、HeLa细胞、人羊膜细胞以及L细胞等，并于7～14天内产生细胞病变，主要是在感染细胞内形成嗜伊红性胞浆内包涵体。

这些包涵体特征地形成于胞核附近的胞浆内，并在感染过程增进时散布于整个胞浆内。

电子显微镜检查，可在包涵体内看到完全和不完全的病毒粒子。

这些病毒粒子经常呈结晶状排列，并常连结于胞浆内的梭形微管上。

感染细胞最后崩解，病毒被释于细胞外。

不同于禽呼肠孤病毒，哺乳动物呼肠孤病毒虽可在鸡胚内增殖，但不呈现规律性。

来源于人的呼肠孤病毒株通常不能在鸡胚卵黄囊内增殖。

正呼肠孤病毒在L细胞内的增殖过程已被充分研究。

于37℃，接种入的病毒可在30分钟内吸附65%。

病毒借细胞吞饮作用侵入细胞。

吞饮泡与溶酶体融合而形成吞噬体。

电子显微镜观察，常可在这种吞噬体内见到完整的病毒粒子。

病毒粒子的外衣壳由溶酶体的水解酶除去，剩下“亚病毒颗粒”，亦即核心。

核心中的转录酶和帽化酶原来呈“不活动”状态，此时因外衣壳的除去或改变而被激活，从而由某些双股RNA片段转录出单股的mRNA。

另一些双股RNA基因节段则随早期病毒蛋白合成而受到抑制，母代的双股RNA继续保留，在获得蛋白外壳后可以重新成为完整的病毒粒子。

新转录出来的单股mRNA既是新的双股RNA的合成模板，也是病毒蛋白质的合成模板。

这些未帽化mRNA能优先合成大量的病毒结构蛋白。

这些双股RNA是在复制酶的帮助下由新复制的单股RNA组合而成的。

病毒粒子的最后装配，就在胞核周围的胞浆内进行，并如上述，常常连结于梭形微管上。

正呼肠孤病毒的一个特点，就是在没有脱去内衣壳的病毒核心内，就能进行部分转录过程。

每个病毒核心含有许多酶活动点，初期的mRNA分子即由此释出。

5. 病原性
鼠类能发生3型呼肠孤病毒的自然感染，有时称肝脑脊髓炎，其临床表现为黄疸、运动失调、油性被毛、生长发育迟缓等。

给乳幼鼠作滴鼻感染，也可使其发生呼吸道疾病而死亡。

将1型呼肠孤病毒给小鼠作腹腔内接种，可于5～7天内致死，并可由死亡小鼠的各器官分离到呼肠孤病毒。

对新生仓鼠、雪貂、大鼠也会引起同样病变。

将3型病毒直接注入乳鼠脑内，可以使其发生坏死性脑炎和死亡。

剖检中枢系统，可见病毒主要在神经原细胞内增殖，胶质细胞和室管膜细胞内显然不发生病毒增殖。

此外，呼肠孤病毒对大鼠、小鼠还有致畸变作用。

1和2型呼肠孤病毒感染小鼠，病毒可通过怀孕鼠的子宫垂直传播，致胎儿或新生儿死亡。

其它哺乳动物和人的呼肠孤病毒感染大多呈无症状经过。

第1株牛呼肠孤病毒是由健康牛的粪便中分离获得的，至今已分离到50多个牛呼肠孤病毒株，包括1、2、3等三个血清型。

1型最为常见。

在某些国家的牛群中，阳性抗体率达57%。

一般认为，牛在一岁以内普遍发生呼肠孤病毒感染，但不出现症状，牛在发生呼吸道疾病后，呼肠孤病毒抗体的效价经常上升。

1型与2型混合感染对牛地方性支气管肺炎的流行起重要作用。

给牛作呼吸道感染试验，虽然没有症状，但肺和其它组织中含有高滴度病毒，鼻液中也出现病毒，随后则可测出血清中较高效价的抗体。

给不吃初乳的新生犊牛作人工感染，常可产生轻微的肺炎病变，但不象组织培养细胞那样形成胞浆内包涵体。

马呼肠孤病毒的3种血清型均有发现，调查表明其抗体阳性率分别为1型29%，2型19%，3型61%。

1型与3型可致马上呼吸道疾患，此外还可与马流感病毒一起引起咳嗽综合征。

绵羊也存在3个型的呼肠孤病毒，但抗体检测以3型为主。

用猪株呼肠孤病毒给6周龄幼猪作经鼻接种，幼猪体温升高，血清中的血凝抑制抗体可增高4倍以上。

犬呼肠孤病毒只分离到1型，2型与3型的抗体亦有阳性。

用1型实验感染幼犬时发生间质性肺炎，抗体效价上升。

猫呼肠孤病毒分离率最高的是3型，人工感染可致温和的呼吸道症状。

1型是从猫的肿瘤细胞中分离所得的。

人类的呼肠孤病毒感染十分普遍，3种血清型均有发现，血清学调查的阳性率很高，最重要的是1型，但大多呈无症状经过。

曾从普通感冒、脑炎、肝炎、脑膜炎、脑脊髓膜炎以及致死性肺炎患者体内分离到不同血清型的呼肠孤病毒。

6. 诊断和防制
应用敏感的组织培养细胞从发病早期的粪便、呼吸道分泌物、滑液或其它组织样品中分离病毒。

为消除细菌和其它病毒的干扰，应视情况先将病料作50～55℃加热或用乙醚、丙酮处理。

根据特征性细胞病变——核周围包涵体的出现，人工感染乳鼠致病，初步判定病料中是否有呼肠孤病毒存在。

应用已知抗体进行鉴定：先以补体结合反应检测群抗原，随后再用中和试验或血凝抑制试验检测型特异性抗原。

鉴于症状及病理剖解变化都不具特征性，诊断通常有赖于抗体的检测，现症病例的诊断，则需发病期及康复期的双份血清。

ELISA的敏感性远远高于琼脂扩散和间接血凝试验，以纯化病毒为抗原，并且用高岭土处理血清，以排除非特异性反应，其结果与中和试验一致。

对某些由呼肠孤病毒参与所致的疾病，可用灭活的呼肠孤病毒与其它抗原混合而成的联合疫
苗进行预防。

（二）禽呼肠孤病毒
1. 病毒特征
禽呼肠孤病毒具有典型的呼肠孤病毒形态，纯化的禽呼肠孤病毒只含有RNA和蛋白质，平均含量分别为187%和813%。

RNA中既有ss又有ds，其中ssRNA约占RNA总量的30%。

禽株RNA的含量高于哺乳动物株（14%），这种差别归因于禽株含有ssRNA。

根据SDS-PAGE电泳迁移率的不同，可将禽呼肠孤病毒的10个RNA节段分为三类，依次为L、M和S。

其中大节段L（L1、L2和L3）分子量为24×103～27×103kDa；中节段M（M1、M2和M3）分子量为13×103～17×103kDa；小节段S（S1、S2、S3和S4）分子量为0.68×103～1.2×103kDa，与哺乳动物株比较稍有差异，但禽株S1的分子量远远大于哺乳动物株。

不同分离株（包括不同血清型和同型不同毒株）的dsRNA核酸电泳迁移有明显多样性，但与致病力无相关性。

嗜关节性的S1133株及其无致病力的疫苗株P100dsRNA节段在SDS PAGE中的迁移型式完全相同，但蛋白质却有差别，推测蛋白质的改变与毒力强弱和生长特性有关。

应用更灵敏的核酸杂交试验表明疫苗株P100的dsRNA至少有4个节段发生了变化。

不同于哺乳动物呼肠孤病毒，禽呼肠孤病毒不能凝集鸡、火鸡、鸭、鹅、人O型、牛、绵羊、兔、豚鼠、大鼠或小鼠的红细胞。

只有两个例外报道。

禽呼肠孤病毒对热有抵抗力，能耐受60℃ 8～10小时，56℃ 22～24小时，37℃ 15～16周，22℃ 48～51周，4℃3年以上，-20℃ 4年以上，-63℃10年以上。

半纯化病毒于60℃ 5小时条件下尚不能完全灭活，MgCl2能增强病毒对热的稳定性，但浓度太大反而促进其灭活。

对乙醚不敏感，对氯仿轻度敏感，对pH3有抵抗力，室温下过氧化氢作用1小时不能使其灭活；2%苯酚部分灭活病毒，2%甲醛在低温（4℃）无效。

对2%来苏尔、3%福尔马林、DNA代谢抑制物、放线菌素D、阿糖胞苷、5270%05%
2. 抗原性
禽呼肠孤病毒各毒株之间具有共同的群特异抗原，而与哺乳动物株和纳尔逊海湾病毒无交叉，这种共同的沉淀抗原可用琼扩或补结试验检测。

使用血清学方法可对呼肠孤病毒进行分类，或根据对鸡的相关致病性分群。

Kawamura等将日本禽呼肠孤病毒77个株应用蚀斑减数试验分为5个血清型，Wood等（1980）统计了来自美国、英国、德国和日本呼肠孤病毒的相关性，虽然在异源型毒株间有很大程度的交叉中和关系，但仍发现了11个血清型。

至目前为止凭借中和试验将禽呼肠孤病毒分为11个血清型。

由于交叉反应大量存在，因此有些群只能作为亚型而不作为独立血清型。

Hieronymus等（１９８３）将5个吸收不良综合征的分离物分为3个血清型，而Robertson和Wilcox （１９８4）将10个澳大利亚分离物分为三个有很大程度交叉反应的群。

显然，呼肠孤病毒经常以抗原亚型，而不是以独特的血清型存在。

3 培养
禽呼肠孤病毒很容易从禽源细胞培养物中分离。

常用的细胞培养是禽原代细胞，包括鸡胚成纤维细胞、肝、肺、肾、巨噬细胞和睾丸细胞。

最常用的是雏鸡肾细胞（2～6周龄），分离火鸡株时可用火鸡肾细胞。

Barta（1984）等一些学者认为，做蚀斑和分离病毒时，应选择鸡胚肝细胞。

用各种方法分离本病毒的比较结果表明，以鸡肝细胞最敏感，其次为鸡肾细胞，而成纤维细胞敏感性最差。

感染呼肠孤病毒的鸡源细胞培养物能够形成合胞体（一般在合胞体形成前细胞内产生空泡），细胞浆内有包涵体（初期嗜酸性，后变嗜碱性）。

某些毒株亦可适应于许多哺乳动物细胞系，如在绿猴肾（Vero）、乳仓鼠肾（BHK21）、猫肾（CRFK）、Georgia牛肾（GBK），兔肾（RK）和猪肾（PK）细胞内生长，但大多数毒株只有在Vero细胞中产生CPE。

经卵黄囊或绒毛尿囊膜接种，呼肠孤病毒容易在鸡胚内生长。

初次分离选用卵黄囊接种，一般在接种后3～5天鸡胚死亡，胚体因皮下出血而呈淡紫色。

绒毛尿囊膜接种，通常在7～8天后鸡胚死亡，绒毛膜上有隆起的、分散的痘疮样病灶，未死胚胎生长滞缓，肝淡绿色，脾肿大，心脏有病损。

4 病原性
1954年，Fahey和Crawley首次从有慢性呼吸道疾病的鸡呼吸道内分离到禽呼肠孤病毒，后来由Peter（１９６７）进一步证实。

当时用这种被称为 Fahey Crawley病毒，接种于易感鸡后，表现为温和性呼吸道疾病，病鸡的肝脏坏死并出现腱和滑膜的炎症。

禽呼肠孤病毒流行于鸡、火鸡、鸭、鹦鹉和其它禽类，可水平传递亦可经卵垂直传递。

已由多种疾病分离出该类病毒，包括病毒性关节炎、腱鞘炎、矮小综合征（Stunting syndrome）、呼吸道病、肠病（Enteric disease）、吸收障碍综合征（Malabsorption syndrome ）和骨质疏松征（Osteo porosis）等。

患禽生长受阻，发生心包炎、心肌炎、心包积水、肠炎、肝炎，腔上囊和胸腺萎缩，骨短粗或出现急慢性呼吸道病。

某些呼肠孤病毒株的致病作用，由于柔嫩艾美尔球虫或巨型艾美尔球虫的协同感染而加强。

鸡感染传染性法氏囊病病毒或在特殊的饲养环境下，能增高由WVV2937株感染所致腱鞘炎的严重性。

呼肠孤病毒也能加剧由其它病原引起的疾病，如鸡贫血因子、大肠埃希氏杆菌和新城疫病毒。

由于感染了呼肠孤病毒，使机体的免疫功能降低，导致对其它传染性病因的易感性增加。

此外，在临床上未感染的鸡也常发现病毒。

由禽呼肠孤病毒所致的最重要和常见的疾病是病毒性关节炎、腱鞘炎和吸收障碍综合征。

三、环状病毒属（Orbivirus）
本属在某些形态、理化和生物学特性上不同于正呼肠孤病毒。

正呼肠孤病毒经常含有两层衣壳，对热及酸性环境（pH30）具有强大抵抗力，不发生虫媒传播方式，而环状病毒虽有双层衣壳，外衣壳结构模糊，内衣壳由32个大的环状壳粒组成，故称环状病毒。

对热和pH3.0的抵抗力不高，多数成员可在节肢昆虫和脊椎动物体及其细胞内增殖。

病毒粒子呈二十面立体对称，直径为65～80nm，核衣壳的直径为54～60nm，但无棘状突起，衣壳由32个大型壳粒组成。

病毒粒子的分子量为80×106Da，S20W550，在pH6～8稳定，感染性在pH30丧失。

在蛋白质存在下，病毒非常稳定，如由室温存放的血液中25年后仍能重新分离出蓝舌病病毒。

病毒基因组由10个节段的双股RNA组成，节段分子量大小为0.5×103～2.8×103 kDa，总分子量约15×103kDa，占病毒粒子重量20%，G+C含量为42%～44%。

有七条结构多肽，分子量为35×103～150×103Da，占整个病毒粒子重量的80%。

主要核心蛋白是Vp3和Vp7，分子量分别为103Da和38×103Da，其中Vp7是存在于核心表面上壳粒的主要成分，核心也含有Vp1、Vp4和Vp6。

外衣壳层含Vp2（MW=111×103Da）和Vp5（MW=59×103Da）。

有三种非结构蛋白NS1、NS2和NS3，分子量分别为644×103、41×103和256×103Da，其中NS2是磷蛋白。

目前已知的成员根据其血清学的亲缘关系可分为12个群，其中蓝舌病病毒、非洲马瘟病毒、鹿流行性出血病病毒、茨城病病毒及科罗拉多蜱传热病毒5个群对家畜致病（表19-1）。

没有检测到属特异性抗原，但可通过荧光抗体、免疫扩散和补结反应证实群内有共同的抗原。

个别毒株呈现低水平交叉反应，通常被报道为血清群中的独特成员。

表19-1 环状病毒病的分群
群的名称血清型生物媒介
非洲马瘟病毒 1～9 库蠓
蓝舌病病毒 1～24 库蠓
鹿流行性出血症病毒 1～7 蚊
马脑器质性脑病病毒 1～5 库蠓
Eubenangee病毒 1～3 白蛉。