第九章 细菌感染的分子生物学检验

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医学检验实验指南

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医学检验实验指南第1章基础知识与实验原理 (4)1.1 实验室安全与生物伦理 (4)1.1.1 实验室安全操作规程 (4)1.1.2 生物伦理基本要求 (4)1.2 医学检验的基本原理 (4)1.2.1 样本采集与处理 (4)1.2.2 检测方法 (4)1.2.3 检验结果分析与解释 (5)1.2.4 质量控制与改进 (5)第2章样本采集与处理 (5)2.1 血液样本采集 (5)2.1.1 采集前的准备 (5)2.1.2 采血方法 (5)2.1.3 采血后处理 (5)2.2 尿液样本采集 (5)2.2.1 采集前的准备 (5)2.2.2 采集方法 (5)2.2.3 采尿后处理 (6)2.3 其他生物样本采集 (6)2.3.1 精液样本采集 (6)2.3.2 痰液样本采集 (6)2.3.3 组织样本采集 (6)2.3.4 体液样本采集 (6)第3章血液学检验 (6)3.1 血常规检验 (6)3.1.1 红细胞计数(RBC) (6)3.1.2 血红蛋白浓度(Hb) (6)3.1.3 白细胞计数(WBC) (7)3.1.4 白细胞分类计数 (7)3.1.5 血小板计数(PLT) (7)3.2 血型鉴定 (7)3.2.1 ABO血型鉴定 (7)3.2.2 Rh血型鉴定 (7)3.3 血液凝固功能检测 (7)3.3.1 凝血酶原时间(PT) (7)3.3.2 活化部分凝血活酶时间(APTT) (7)3.3.3 凝血酶时间(TT) (8)3.3.4 纤维蛋白原(FIB) (8)第4章生化检验 (8)4.1 肝功能检测 (8)4.1.1 肝酶检测 (8)4.1.3 胆红素检测 (8)4.2 肾功能检测 (8)4.2.1 肾小球功能检测 (8)4.2.2 肾小管功能检测 (9)4.2.3 其他肾功能指标 (9)4.3 血糖检测 (9)4.3.1 空腹血糖(FPG) (9)4.3.2 餐后2小时血糖(2hPG) (9)4.3.3 糖化血红蛋白(HbA1c) (9)4.4 血脂检测 (9)4.4.1 总胆固醇(TC) (9)4.4.2 甘油三酯(TG) (9)4.4.3 高密度脂蛋白胆固醇(HDLC) (9)4.4.4 低密度脂蛋白胆固醇(LDLC) (9)4.4.5 脂蛋白(a)[Lp(a)] (9)第5章免疫学检验 (9)5.1 传染病免疫学检测 (10)5.1.1 病毒感染免疫学检测 (10)5.1.2 细菌感染免疫学检测 (10)5.2 自身免疫性疾病检测 (10)5.2.1 类风湿关节炎(RA)检测 (10)5.2.2 系统性红斑狼疮(SLE)检测 (10)5.3 肿瘤标志物检测 (10)5.3.1 肝细胞癌(HCC)标志物检测 (10)5.3.2 乳腺癌标志物检测 (11)5.3.3 前列腺癌标志物检测 (11)第6章微生物检验 (11)6.1 细菌鉴定 (11)6.1.1 基本原理 (11)6.1.2 鉴定方法 (11)6.2 真菌鉴定 (11)6.2.1 基本原理 (11)6.2.2 鉴定方法 (11)6.3 病毒检测 (12)6.3.1 基本原理 (12)6.3.2 检测方法 (12)第7章血液寄生虫检验 (12)7.1 疟疾检验 (12)7.1.1 基本原理 (12)7.1.2 检验方法 (12)7.2 黑热病检验 (12)7.2.1 基本原理 (12)7.2.2 检验方法 (13)7.3.1 弓形虫检验 (13)7.3.2 巴贝虫检验 (13)7.3.3 锥虫检验 (13)7.3.4 肺孢子虫检验 (13)7.3.5 其他寄生虫检验 (13)第8章尿液检验 (13)8.1 尿常规检测 (13)8.1.1 检测原理 (13)8.1.2 检测方法 (14)8.1.3 临床意义 (14)8.2 尿微量蛋白检测 (14)8.2.1 检测原理 (14)8.2.2 检测方法 (14)8.2.3 临床意义 (14)8.3 尿液细胞学检测 (14)8.3.1 检测原理 (14)8.3.2 检测方法 (15)8.3.3 临床意义 (15)第9章分子生物学检验 (15)9.1 基因扩增技术 (15)9.1.1 概述 (15)9.1.2 常用基因扩增方法 (15)9.1.3 基因扩增技术的应用 (15)9.2 基因测序技术 (15)9.2.1 概述 (15)9.2.2 常用基因测序方法 (16)9.2.3 基因测序技术的应用 (16)9.3 基因芯片技术 (16)9.3.1 概述 (16)9.3.2 常用基因芯片类型 (16)9.3.3 基因芯片技术的应用 (16)第10章质量控制与实验结果分析 (17)10.1 实验室质量控制 (17)10.1.1 质量控制体系建立 (17)10.1.2 质量控制指标 (17)10.1.3 质量控制方法 (17)10.1.4 质量控制记录与反馈 (17)10.2 实验结果分析 (17)10.2.1 结果判读 (17)10.2.2 异常结果分析 (17)10.2.3 结果不确定性的处理 (17)10.3 实验方法学评价与改进建议 (17)10.3.1 方法学评价 (18)10.3.3 持续改进 (18)第1章基础知识与实验原理1.1 实验室安全与生物伦理在医学检验实验室中,保证实验室安全与遵守生物伦理原则。

分子生物学复习题(含答案)

分子生物学复习题(含答案)

分子生物学复习题(含答案)一、单选题(共100题,每题1分,共100分)1、有关 SNP 位点的描述,不正确的是A、生物芯片技术可提高 SNP 位点的检测准确性B、单个 SNP 位点信息量大,具广泛的应用前景C、在整个基因组中大概有 300 万个 SNP 位点D、被称为第三代 DNA 遗传标志E、SNP 位点是单个核苷酸的变异正确答案:A2、硝酸纤维素膜最大的优点是( )A、高结合力B、非共价键结合C、本底低D、脆性大E、共价键结合正确答案:C3、关于核酸探针的种类下列不正确的是A、cDNA 探针B、寡核苷酸探针C、基因组 DNA 探针D、RNA 探针E、双链 DNA 探针正确答案:E4、目前白血病的发病机制的研究主要集中的领域不包括A、融合基因与白血病B、白血病复发的后天因素C、白血病发病的先天因素D、遗传学疾病及白血病发病的后天因素E、基因多态性与白血病正确答案:B5、下列属于抑癌基因的是( )A、c-erb-2B、mycC、sisD、p53E、ras正确答案:D6、下列有关 cDNA 探针的描述不正确的为A、利用 mRNA 通过 RT-PCR 在体外反转录可制备大量的 cDNA 探针B、cDNA 探针不包含内含子C、cDNA 探针不包含大量的高度重复序列D、由于 cDNA 探针自身所携带的 poly(dT),有可能产生非特异性杂交的问题E、cDNA 探针合成方便,成为探针的重要来源正确答案:E7、一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链,这一过程称A、探针B、杂交C、变性D、复杂性E、复性正确答案:B8、SYBR Green Ⅰ技术常要求扩增片段不大于A、50bpB、100bpC、200bpD、300bpE、400bp正确答案:D9、DNA 指纹分子的遗传性基础是A、连锁不平衡B、MHC 的多样性C、DNA 的多态性D、反向重复序列E、MHC 的限制性正确答案:C10、以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时,若能与突变探针及正常探针接合,则该样本为A、正常人B、不能确定C、纯合体患者D、杂合体患者E、携带者正确答案:E11、目前细菌表型分型的方法不包括A、血清学分型B、分子分型C、噬菌体分型D、生化分型E、抗生素敏感性分型正确答案:B12、不适宜于直接作为第一代测序技术测序的 DNA 模板( )A、双链 DNA 片段和 PCR 产物B、单链 DNA 片段C、克隆于质粒载体的 DNA 片段D、克隆于真核载体的 DNA 片段E、提取的染色质 DNA正确答案:E13、定点诱发突变可以通过以下哪个过程获得:A、PCRB、LCRC、RT-PCRD、SSCPE、ASO正确答案:A14、基因诊断对下列哪些疾病最具有确切的临床诊断意义A、肿瘤B、染色体疾病C、畸形D、单基因遗传病E、多基因遗传病正确答案:D15、下列关于细菌感染性疾病的分子生物学检验说法错误的是A、可以检测不能或不易培养、生长缓慢的病原菌B、可以实现对感染细菌的广谱快速检测C、可以对细菌进行基因分型D、可以检测病原菌耐药基因E、其检验技术都是 PCR 及其衍生技术正确答案:E16、操纵子结构不存在于:A、原核生物基因组中B、细菌基因组中C、大肠杆菌基因组中D、真核生物基因组中E、病毒基因组中正确答案:D17、分离纯化核酸的原则是( )A、保证一定浓度B、保持一级结构完整并保证纯度C、保持二级结构完整并保证纯度D、保持空间结构完整E、保证纯度与浓度正确答案:B18、关于切口平移法下述不正确的是A、可标记线性 DNAB、可标记松散螺旋 DNAC、可标记超螺旋 DNAD、可标记存在缺口的双链 DNAE、可标记随机引物正确答案:E19、未知突变的检测,下列最准确的方法是A、PCRB、RFLPC、核酸杂交D、序列测定E、ASO正确答案:D20、用于病毒基因突变检测的技术是A、荧光定量 PCR 技术B、PCR-RFLP 技术C、PCR 微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA 表达芯片技术正确答案:B21、有关微卫星的描述正确的是A、散在重复序列的一种B、10~100bp 组成的重复单位C、主要存在于着丝粒区域,通常不被转录D、形式为(CA)n/(TG)n、(AG)n、(CAG)n 等E、又称为可变数目串联重复序列(VNTR)正确答案:D22、关于抑癌基因的说法正确的是A、呈隐性作用方式B、可以使细胞丧失生长控制和正性调控功能C、是一类可编码对肿瘤形成起促进作用的蛋白质的基因D、抑癌基因又称为肿瘤分化抑制基因E、正常情况下促进细胞增殖、抑制细胞分化正确答案:A23、决定 PCR 反应特异性的是A、模板B、dNTPC、引物D、缓冲液E、Taq DNA 聚合酶正确答案:C24、关于 DNA 芯片原位合成法的描述错误的是:A、也称在片合成B、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针C、包括光导原位合成法D、包括原位喷印合成法E、包括直接点样法正确答案:E25、可作为分子遗传标记的是A、HLAB、单拷贝序列C、高表达蛋白D、RFLPE、染色体正确答案:D26、为了避免反复冻融对核酸样品产生的破坏作用,最好( )A、将核酸溶解保存B、将核酸小量分装保存C、将核酸冻干保存D、将核酸沉淀保存E、将核酸大量保存正确答案:B27、GeneXpert 全自动结核检测平台不具有的优势是( )A、检测高度自动化B、单标本单试剂检测,避免浪费C、检测快速准确D、同时检测 TB 与利福平耐药E、检测费用低廉正确答案:E28、Sanger 双脱氧链终止法使用的链终止物是A、α-32P-dNTPB、dNTPC、ddNTPD、α-35S-dNTPE、NTP正确答案:C29、导致世界范围内性传播疾病的最为普遍的因素是A、肺炎衣原体B、豚鼠衣原体C、沙眼衣原体D、鹦鹉热衣原体E、鼠衣原体正确答案:C30、实时荧光 PCR 中,GC 含量在 20%~80%(45%~55%最佳),单链引物的最适长度为A、35~50bpB、15~20bpC、5~70bpD、5~20bpE、70~90bp正确答案:B31、Southern 杂交通常是指( )A、DNA 与 RNA 杂交B、DNA 与 DNA 杂交C、RNA 与 RNA 杂交D、蛋白质与蛋白质杂交E、DNA 与蛋白质杂交正确答案:B32、具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链,这一过程称A、杂交B、变性C、复杂性D、复性E、探针正确答案:D33、第二代测序技术不能应用于A、从头测序、重测序B、转录组及表达谱分析C、小分子 RNA 研究D、个体基因组测序和 SNP 研究E、直接测甲基化的 DNA 序列正确答案:E34、目前已知感染人类最小的 DNA 病毒( )A、HIVB、HPVC、HBVD、HAVE、HCV正确答案:C35、下列方法中不属于 RNA 诊断的是A、Northern blotB、RNA 斑点杂交C、基因芯片D、mRNA 差异显示 PCR 技术E、逆转录 PCR正确答案:C36、RNA/RNA 杂交体的 Tm 值一般应增加A、1-5℃B、5~10℃C、10~15℃D、15~20℃E、20~25℃正确答案:E37、下列属于核苷酸三联体重复序列发生高度重复所致的是A、珠蛋白生成障碍性贫血B、脆性 X 综合症C、迪谢内肌营养不良D、血友病E、镰状细胞贫血正确答案:B38、逆转录 PCR 扩增最终产物的特异性由A、随机引物决定B、oligo-d(T)决定C、PCR 扩增的特异引物决定D、扩增效率决定E、逆转录酶决定正确答案:C39、检测融合基因、确定染色体易位的首选方法是A、FISHB、RT-PCRC、实时定量 PCRD、PCRE、DNA 芯片正确答案:D40、单基因遗传病分子诊断的主要应用是A、产前诊断B、携带者筛查C、症状前诊断D、携带者诊断E、耐药基因检测正确答案:A41、乳腺癌分子生物学检测的意义不包括A、预测早期乳腺癌复发、转移的风险B、筛选易感人群C、帮助减轻化疗的不良反应D、反映肿瘤的生物学行为E、筛选适合内分泌、化疗及靶向治疗的患者正确答案:C42、线粒体基因组与核基因组之间,下面描述不正确的是A、线粒体基因组与核基因组分别在不同的位置进行自主复制和转录,之间互不影响B、mtDNA 突变可引起编码蛋白功能障碍,影响细胞呼吸、氧化功能,进而影响核 DNA 的表达C、mtDNA 自主性复制,但复制所需的酶、调控因子等由核基因编码D、二者虽在地理位置上独立,但二者之间关系十分密切E、线粒体基因组与核基因组之间存在“交叉对话”,相互影响,相互协调正确答案:A43、STR 法医鉴定的基础是A、孟德尔遗传定律B、蛋白质空间结构C、基因扩增技术D、碱基配对原则E、基因多态性正确答案:A44、以下哪种酶可用于 PCR 反应( )A、KlenowB、HindⅢC、Taq DNA 聚合酶D、RNaseE、Dnase正确答案:C45、下列不能用于核酸转移作固相支持物的是A、NC 膜B、尼龙膜C、化学活性膜D、滤纸E、PVC 膜正确答案:E46、Southern 印迹杂交的描述正确的是A、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因,而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案:A47、在下列何种情况下可考虑进行基因连锁检测方法进行基因诊断A、表达异常B、基因结构变化未知C、点突变D、基因片段缺失E、基因片段插入正确答案:B48、关于 mtDNA 非编码序列,描述正确的是A、不参与 mtDNA 的复制、转录等,属于“无用”信息B、是高度重复序列C、占整个 mtDNA 的 15%,比例较大D、mtDNA 中有两段非编码区E、位于 mtDNA 的轻链正确答案:D49、变性梯度凝胶电泳的描述中错误的是A、使 DNA 双链分子局部变性B、采用梯度变性凝胶C、变性难易由核苷酸组成决定D、突变检测率高E、可确定突变位置正确答案:E50、以下对镰刀状红细胞贫血症叙述正确的是( )A、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成苯丙氨酸残基B、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成甘氨酸残基C、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成丝氨酸残基D、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成缬氨酸残基E、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成异亮氨酸残基正确答案:D51、关于测序策略的叙述正确的是A、应该具有最大重叠、最小数量的测序反应B、最小的目的 DNA 片段(如<1kb),可以使用引物步移法C、最小的目的 DNA 片段(如<1kb),可以使用随机克隆法D、大片段未知序列 DNA 测序,可以直接测序E、大规模基因组计划,可以使用多个测序策略正确答案:E52、组织 DNA 提取中,EDTA 的作用是A、抑制 DNaseB、沉淀 DNAC、减少液体表面张力D、抑制 RNaseE、去除蛋白质正确答案:A53、寡核苷酸探针的 Tm 简单计算公式为A、Tm=4(G+C)+2(A+T)B、Tm=2(G+C)+4(A+T)C、Tm=6(G+C)+4(A+T)D、Tm=2(G+C)+6(A+T)E、Tm=6(G+C)+2(A+T)正确答案:A54、对于 BRCA 基因突变的检测,以下最常用的方法是A、变性高效液相色谱法B、单链构象多态性分析C、变性梯度凝胶电泳D、异源双链分析E、直接 DNA 序列分析正确答案:E55、下列关于人类遗传病的叙述不正确的是A、人类遗传病是指由于遗传物质改变而引起的疾病B、遗传性疾病既可以直接诊断,也可以间接诊断C、人类遗传病包括单基因遗传病、多基因遗传病和染色体异常遗传病D、21-三体综合症患者体细胞中染色体数目为 47 条E、单基因病是指受一个基因控制的疾病正确答案:E56、第一个被发现可以预测晚期转移性结直肠癌患者是否能从靶向治疗药物西妥昔单抗中获益的生物标志物是A、K-rasB、EGFR 基因C、TTF-1D、CEAE、bcl-2 基因正确答案:A57、下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争 PCRB、巢式 PCRC、多重 PCRD、普通 PCRE、PCR-RFLP正确答案:C58、关于 PCR-RFLP 错误的是A、采用特定的限制性内切酶对 PCR 产物进行处理B、对酶切后的片段长度进行分析C、判断有无点突变D、突变位点不必在限制酶识别序列中E、需先进行 PCR 扩增正确答案:D59、下列哪些技术不适用于鉴定菌种亲缘性:A、随机扩增 DNA 多态性分析B、连接酶链反应C、PCR-RFLPD、多位点测序分型E、DNA 测序技术正确答案:B60、点/狭缝杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因,而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、用于基因定位分析D、阳性菌落的筛选E、蛋白水平的检测正确答案:A61、DNA 提取中不能有效去除蛋白质的是A、酚/氯仿抽提B、SDSC、高盐洗涤D、蛋白酶 KE、RNase正确答案:E62、宫颈癌与 HPV 病毒感染密切相关,宫颈癌细胞产生的机制是A、HPV DNA 大量复制B、原癌基因被激活C、病毒增殖导致细胞破裂D、HPV 导致细胞凋亡E、病毒蛋白在细胞内堆积正确答案:B63、纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8,可使比值升高的是:A、蛋白质B、酚C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案:C64、关于 TaqMan 探针技术的描述,不正确的是A、R 基团与 Q 基团相距较远,淬灭不彻底,本底较高B、易受到 Taq DNA 聚合酶5’→3’核酸外切酶活性的影响C、操作亦比较简单D、不需要进行寡核苷酸熔解曲线分析,减少了实验时间E、解决了荧光染料技术非特异性的缺点正确答案:C65、基因芯片技术的本质是( ):A、核酸分子杂交B、蛋白质分子杂交技术C、连接酶链反应D、DNA 重组技术E、酶切技术正确答案:A66、编码 HIV 衣壳蛋白的是A、env 基因B、gag 基因C、vif 基因D、tat 基因E、pol 基因正确答案:B67、HIV 核酸类型是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案:D68、检测靶序列是 DNA 的技术是:A、Southern 杂交B、Western 杂交C、Northern 杂交D、Eastern 杂交E、杂交淋巴瘤正确答案:A69、HCV 的核酸是A、+ssRNAB、dsRNAC、dsDNAD、ssDNAE、-ssRNA正确答案:A70、关于 Sanger 双脱氧链终止法叙述错误的是A、每个 DNA 模板需进行一个独立的测序反应B、需引入双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)作为链终止物C、链终止物缺少3’-OH,使链终止D、测序反应结果是产生 4 组不同长度的核苷酸链E、高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离仅差一个核苷酸的单链 DNA 正确答案:A71、PCR 中的脱氧核苷三磷酸不包括A、dATPB、dTTPC、dCTPD、dGTPE、dUTP正确答案:E72、以 mRNA 为模板合成 cDNA 的酶是A、DNA 酶B、Taq DNA 聚合酶C、限制性内切酶D、RNA 酶E、逆转录酶正确答案:E73、结核杆菌的分子生物学检验临床意义中不包括A、早期诊断B、耐药检测C、鉴别诊断D、疗效评价E、快速诊断正确答案:A74、目前被 DNA 自动化测序技术广泛采用的酶是A、大肠杆菌 DNA 聚合酶ⅠB、Klenow 片段C、测序酶D、耐热 DNA 聚合酶E、限制性内切核酸酶正确答案:D75、结构基因突变不包括A、基因表达异常B、基因点突变C、基因扩增D、基因缺失E、基因重排正确答案:A76、点突变引起的血友病 A 的分子诊断方法不包括A、PCR-SSCPB、PCR-RFLPC、PCR-VNTRD、PCR-STRE、长距离 PCR正确答案:E77、大肠杆菌类核结构的组成是A、双链 DNAB、RNAC、蛋白质+DNAD、支架蛋白E、RNA+支架蛋白+双链 DNA正确答案:E78、作为芯片固相载体的材料描述正确的是A、主要有玻片、硅片等实性材料B、不使用硝酸纤维素膜、尼龙膜及聚丙烯膜等膜性材料C、这些载体材料不需要处理,其表面存在活性基团(如羟基或者氨基)D、可以直接固定已经合成的寡核苷酸探针E、不需要对介质表面进行化学预处理--活化正确答案:A79、不属于脆性 X 综合征分子诊断人群的是A、已明确母亲为携带者的婴儿B、没有 FraX 家族史C、发育迟缓或自闭症的患者D、未诊断的 MR 家族史E、有 FraX 体格或性格阳性征象者正确答案:B80、关于人工合成的寡核苷酸探针,下列描述不正确的是A、特异性高B、可依赖氨基酸序列推测其序列C、分子量小D、可用于相似基因顺序差异性分析E、可用末端转移酶进行5’端标记正确答案:E81、下列哪一种病毒的遗传物质为 RNA( )A、乙肝病毒B、乳头瘤状病毒C、疱疹病毒D、人类免疫缺陷病毒E、腺病毒正确答案:D82、下列几种 DNA 分子的碱基组成比例,哪一种的 Tm 值最高( )A、A+T=15%B、G+C=25%C、G+C=40%D、A+T=80%E、G+C=60%正确答案:A83、关于逆转录 PCR 的描述,不正确的是A、首先应将 RNA 转化为 cDNA 才能进行 PCRB、除了使用 DNA 聚合酶外,还应使用逆转录酶C、模板为 RNAD、oligo-d(T)理论上可以将所有的 mRNA 进行逆转录反应E、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应正确答案:E84、一个完整的生物芯片配套软件不包括A、统计分析软件B、生物芯片的图像处理软件C、画图软件D、生物芯片扫描仪的硬件控制软件E、数据提取软件正确答案:C85、线粒体疾病的遗传特征是A、女患者的子女约 1/2 发病B、母系遗传C、发病率有明显的性别差异D、交叉遗传E、近亲婚配的子女发病率增高正确答案:B86、在人类基因组中,编码序列占的比例为A、23%B、1.5%C、3%D、21%E、5%正确答案:B87、乙型肝炎病毒的核酸类型是( )A、双股 DNAB、负股 DNAC、正股 DNAD、单股 DNAE、DNA-RNA 二聚体正确答案:A88、对于相同大小的核酸片段,最快的转移方法是A、电转移B、真空转移C、毛细管电泳D、向下虹吸转移E、虹吸转移正确答案:B89、延伸的温度通常为A、95℃B、55℃C、37℃D、72℃E、25℃正确答案:D90、在 pH 为下述何种范围时,Tm 值变化不明显A、pH 为 5~9B、pH 为 3~5C、pH 为 5~6D、pH 为 8~11E、pH 为 4~5正确答案:A91、标记的参与杂交反应的核酸分子称为A、复性B、复杂性C、杂交D、变性E、探针正确答案:E92、对于镰刀状红细胞贫血的基因诊断不可以采用( ):A、PCR-RFLPB、DNA 测序C、核酸分子杂交D、设计等位基因特异性引物进行 PCRE、Western blot正确答案:E93、与耳聋有关的最主要的 mtDNA 突变是A、点突变B、插入或缺失C、大片段重组D、拷贝数变异E、异质性突变正确答案:A94、荧光原位杂交的描述正确的是A、快速确定是否存在目的基因B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案:C95、第三代测序技术的最主要特征:A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案:A96、关于 DNA 变性的描述不正确的是A、二级结构破坏B、一级结构破坏C、黏度降低D、生物活性丧失E、浮力密度增加正确答案:B97、下列不能被列入可移动基因范畴的是A、插入序列B、质粒C、染色体 DNAD、转座子E、可转座噬菌体正确答案:C98、生物芯片根据芯片上固定的探针种类不同可分为几种,不包括:A、DNA 芯片B、蛋白质芯片C、细胞芯片D、组织芯片E、测序芯片正确答案:E99、DNA 芯片的固相载体不可以用A、半导体硅片B、玻璃片C、滤纸D、硝酸纤维素膜E、尼龙膜正确答案:C100、DNA 自动化测序技术一般用不到的技术是A、Sanger 的双脱氧链终止法B、Maxam 和 Gilbert 的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR 技术E、电泳技术正确答案:B。

临床分子生物学检验技术知到章节答案智慧树2023年济宁医学院

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临床分子生物学检验技术知到章节测试答案智慧树2023年最新济宁医学院第一章测试1.下列哪项检测需应用分子生物学检验技术()参考答案:乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测2.1976年,简悅威应用DNA分子杂交技术成功进行了()疾病的产前诊断。

参考答案:α-地中海贫血3.临床分子生物学检验最常用的分子标志物是()参考答案:核酸4.下列核酸分子标志物中游离在体液细胞外的是()。

参考答案:循环核酸5.下列关于循环核酸说法错误的是()参考答案:利于肿瘤等疾病的早期检测,正常人体内不存在第二章测试1.下列关于分子生物标志物说法错误的是()参考答案:分子生物标志物仅指能够反应机体病理状态的生物大分子2.下列叙述哪项是错误的()参考答案:原核生物结构基因是断裂基因3.卫星DNA序列属于()参考答案:串联重复序列4.以下哪项不是真核生物核基因组的特点()参考答案:重复序列少见5.大肠杆菌类核结构的组成是()参考答案:蛋白质+DNA1.下列关于DNA分离纯化说法错误的是()参考答案:DNA提取过程要加入RNA酶抑制剂抑制RNA酶活性2.下列关于RNA分离纯化说法错误的是()参考答案:RNA提取过程要加入DNA酶抑制剂抑制DNA酶活性3.常利用哪些性质进行分离纯化蛋白质()参考答案:分子大小不同、溶解度不同、表面电荷不同、与配体的特异亲和力都是4.蛋白质分离纯化方法叙述错误的是()参考答案:琼脂糖凝胶常用于蛋白质的分离5.纯DNA溶液的A260/ A280值为()参考答案:1.81.以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时,若能与突变探针及正常探针结合,则该样本为()。

参考答案:携带者2.下列探针标记方法中,()法在标记之前探针的长度已经确定.。

参考答案:化学法全程标记3.Southern杂交通常是指()。

参考答案:DNA和DNA杂交4.基因芯片技术的本质是()。

参考答案:核酸分子杂交技术5.检测的靶序列是RNA的技术是()。

分子生物学复习题(附答案)

分子生物学复习题(附答案)

分子生物学复习题(附答案)一、单选题(共100题,每题1分,共100分)1.PCR 反应中延伸的时间取决于A、引物长度B、待扩增片段的长度C、模板的纯度D、Taq DNA 聚合酶的量E、模板的含量正确答案:B2.利用DNA 芯片检测基因突变,杂交条件应:A、短时间内、低盐、高温条件下的高严紧性杂交B、长时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交C、短时间内、高盐、高温条件下的低严紧性杂交D、短时间内、低盐、低温条件下的高严紧性杂交E、短时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交正确答案:A3.Northern 印迹杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因,而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、检测靶分子是 RNAD、用于基因定位分析E、用于阳性菌落的筛选正确答案:C4.利用DNA 芯片检测基因的表达情况,杂交条件应选( )A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案:A5.GeneXpert 全自动结核杆菌检测技术现可进行哪种药物的耐药检测A、链霉素B、乙胺丁醇D、吡嗪酰胺E、利福平正确答案:E6.第三代测序技术的最主要特征:A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案:A7.线粒体基因组编码几种rRNAA、22 种B、20 种C、18 种D、3 种E、2 种正确答案:E8.转录依赖扩增系统与其他 PCR 技术的区别是A、模板是 RNAB、模板是 DNAC、引物是 RNAD、模板和产物都是 RNAE、需要热循环正确答案:D9.基因多态性连锁分析中,第一、二、三代遗传标记分别是A、RFLP、SSCP、STRB、RFLP、SNP、STRC、RFLP、STR、SNPD、VNTR、SSCP、SNPE、VNTR、STR、RFLP正确答案:C10.关于分子信标技术的描述,不正确的是A、操作简便C、分子信标设计简单D、背景信号低E、灵敏度高正确答案:C11.作为芯片固相载体的材料描述正确的是A、主要有玻片、硅片等实性材料B、不使用硝酸纤维素膜、尼龙膜及聚丙烯膜等膜性材料C、这些载体材料不需要处理,其表面存在活性基团 (如羟基或者氨基)D、可以直接固定已经合成的寡核苷酸探针E、不需要对介质表面进行化学预处理--活化正确答案:A12.任意引物 PCR 的特点描述错误的是A、需预知靶基因的核苷酸序列B、通过随机引物与模板序列随机互补C、扩增后可直接得到靶基因的多态性指纹图谱D、可用于基因组 DNA 图谱构建E、可用于临床致病菌的流行病学检测、分型正确答案:A13.转录依赖扩增系统的描述错误的是A、以 RNA 为模板B、首先由靶 RNA 合成 DNA 拷贝C、再由DNA 转录生成大量 RNA 拷贝D、产物为 DNAE、为等温扩增正确答案:D14.焦磷酸测序技术不使用的酶是A、DNA 聚合酶 (DNA polymerase)B、DNA 连接酶 (DNA ligase)C、ATP 硫酸化酶 (ATP sulfurylase)D、荧光素酶 (luciferase)E、三磷酸腺苷双磷酸酶 (Apyrase)正确答案:B15.关于 G-C 之间氢键的描述下列正确的是A、G-C 之间有 3 个氢键B、G-C 之间有 2 个氢键C、G-C 之间有 1 个氢键D、G-C 之间有 4 个氢键E、G-C 之间有 5 个氢键正确答案:A16.PCR 反应的基本过程不包括以下:A、预变性B、退火C、探针杂交D、变性E、延伸正确答案:C17.发出临床检验报告前应进行结果审核,审核内容不包括A、室间质量评价是否合格B、临床医生申请的检验项目是否已全部检验C、室内质控是否在控D、检验报告是否正确E、检验结果与临床诊断是否相符正确答案:A18.个体识别所使用的 HLA 分型技术不包括下列哪项 ( )A、PCR-RFLPB、PCR-SSPC、PCR-SSOPD、PCR-指纹图E、FISH正确答案:E19.编码 HIV 衣壳蛋白的是A、tat 基因B、vif 基因C、pol 基因D、gag 基因E、env 基因正确答案:D20.用于基因定位的技术是:A、荧光定量 PCR 技术B、PCR-RFLP 技术C、PCR 微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA 表达芯片技术正确答案:D21.核酸分子杂交的基础是A、碱基互补配对B、磷酸化C、配体受体结合D、甲基化E、抗原抗体结合正确答案:A22.基因芯片技术的本质是 ( ) :A、核酸分子杂交B、蛋白质分子杂交技术C、连接酶链反应D、DNA 重组技术E、酶切技术正确答案:A23.镰状细胞贫血患者,代替其血红蛋白β链 N 端第六个氨基酸残基谷氨酸的是A、丙氨酸B、酪氨酸C、丝氨酸D、缬氨酸E、苯丙氨酸正确答案:D24.目前,个体识别和亲子鉴定主要依靠A、STR 基因座技术B、PCR-SSOC、蛋白质凝胶电泳技术D、PCR-SSCPE、细胞混合培养技术正确答案:A25.指导合成蛋白质的结构基因大多数为:A、中度重复序列B、回文序列C、单拷贝序列D、高度重复序列E、散在核原件正确答案:C26.母亲血浆中的胎儿 DNAA、占母亲血浆总 DNA 的 50%以上B、可用于检测胎儿从母亲遗传而来的线粒体 DNA 突变C、确定RhD 阳性孕妇所怀胎儿的RhD 情况D、确定胎儿是否从母亲遗传了X 连锁的基因突变E、血友病 A 的产前诊断正确答案:C27.引起急性移植排斥反应最重要的抗原是A、ABO 血型抗原B、HLA 抗原C、超抗原D、异嗜性抗原E、Rh 血型抗原正确答案:B28.下列方法中不属于 RNA 诊断的是A、Northern blotB、RNA 斑点杂交C、基因芯片D、mRNA 差异显示 PCR 技术E、逆转录 PCR正确答案:C29.基因芯片技术的优点不包括A、芯片检测稳定性高B、操作简单C、微缩化D、高通量E、观察结果直观正确答案:A30.在核酸检测体系中加入内质控,其作用不是监控的是A、仪器故障如扩增仪孔间温度差异所致的假阴性B、核酸提取效率太低所致的假阴性C、标本中抑制物或干扰物所致的假阴性D、试剂失效或 Taq 酶活性降低所致的假阴性E、样本吸取错误所致的假阴性正确答案:E31.荧光定量 PCR 检测核酸量的时间段在A、非指数期B、PCR 反应的最初阶段C、PCR 反应最后的时间阶段D、指数期的起始阶段E、指数期的终末阶段正确答案:D32.在人类基因组中,编码序列占的比例为A、21%B、3%C、23%D、5%E、1.5%正确答案:E33.下列是 PCR 反应体系中必须存在的成分, ( )除外A、引物B、模板C、dNTPD、Mg2+E、DMSO正确答案:E34.PCR 反应体系的描述错误的是A、模板B、一条引物C、dNTPD、DNA 聚合酶E、缓冲液正确答案:B35.唯一一个在结肠上皮增殖过程中起看门作用的基因是A、MCC 基因B、DCC 基因C、APC 基因D、p53 基因E、HNPCC 基因正确答案:C36.血友病是一种A、先天性代谢缺陷病B、常染色体隐性遗传病C、X 连锁遗传病D、染色体病E、先天畸形正确答案:C37.PCR-ASO 描述错误的是A、需要寡核苷酸探针B、检测点突变的技术C、PCR 产物必须电泳分离D、需正常和异常两种探针E、需严格控制杂交条件正确答案:C38.下列不可以作为核酸探针使用的是A、microRNAB、单链 DNAC、寡核苷酸D、mRNAE、病毒 RNA正确答案:A39.下述序列中,在双链状态下属于完全回文结构的序列是A、AGTCCTGAB、AGTCAGTCC、AGTCGACTD、GACTCTGAE、ACTCGACT正确答案:C40.下列疾病不可进行基因诊断的是A、组织水肿B、SARS 疑似患者C、肿瘤D、艾滋病E、血友病正确答案:A41.下列方法中不能分辨野生型和突变型基因的是A、PCR-SSCPB、变性梯度凝胶电泳C、熔解曲线分析D、逆转录 PCR正确答案:D42.珠蛋白基因的碱基由G 突变为 C 时,造成的突变称为A、密码子缺失或插入B、单个碱基置换C、融合基因D、移码突变E、片段缺失正确答案:B43.决定 PCR 反应特异性的是A、模板B、dNTPC、引物D、缓冲液E、Taq DNA 聚合酶正确答案:C44.第二代测序技术最主要技术特征是A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、针对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案:C45.关于mtDNA 的描述正确的是A、结构基因编码 mtDNA 复制所需的酶、调控蛋白、NADH 氧化还原酶、ATP 酶等B、重链有编码功能,轻链无编码功能C、含 22 个结构基因D、含 tRNA 基因,可转录 22 种 tRNA,以满足线粒体内蛋白质翻译的需要E、含 rRNA 基因,编码 2 种 rRNA,即 12SrRNA 和 18SrRNA正确答案:D46.SDS 是一种阴离子表面活性剂,其可断开蛋白质分子内和分子间的( )A、氢键B、离子键C、二硫键D、酯键E、疏水键正确答案:A47.下列哪一项 PCR 技术可以检测固定组织的DNA 或RNA:A、反转录 PCRB、单细胞 PCRC、原位 PCRD、巢式 PCRE、荧光 PCR正确答案:C48.采用了所谓酶联级联测序技术的测序方法是A、边合成边测序B、焦磷酸测序C、寡连测序D、化学降解法测序E、双脱氧终止法测序正确答案:B49.原核生物基因组特点不应包括:A、插入序列B、断裂基因C、转录产物为多顺反子D、操纵子结构E、重复序列正确答案:B50.下列哪些技术不适用于鉴定菌种亲缘性:A、随机扩增DNA 多态性分析B、连接酶链反应C、PCR-RFLPD、多位点测序分型E、DNA 测序技术正确答案:B51.下列哪种质粒带有抗性基因A、F 质粒B、Col 质粒C、接合型质粒D、ColEIE、R 质粒正确答案:E52.由于突变使编码密码子形成终止密码,此突变为:A、同义突变B、移码突变C、错义突变D、终止密码突变E、无义突变正确答案:E53.若要采用 Southern 或Northern 印迹方法分析某特定基因及其表达产物,需要A、收集培养细胞的上清液B、收集组织或细胞样品,然后从中提取蛋白质C、利用PCR 技术直接从标本中扩增出待分析的片段D、收集组织或细胞样品,然后从中提取总DNA 或 RNAE、制备固定在支持物上的组织或细胞正确答案:D54.下列说法正确的是A、液状石蜡切片中缩短蛋白酶 K 的消化时间可增加提取 DNA 片段的长度B、组织样本不需蛋白酶 K 消化即可进行核酸提取C、用于提取核酸的石蜡切片需要先用二甲苯脱蜡D、用于提取核酸的石蜡切片不需脱蜡即可进行核酸提取E、新鲜的组织样本需要先用二甲苯脱蜡才能进行核酸提取正确答案:C55.下列关于引物设计的原则中,错误的是A、两条引物的Tm 值相差尽量大B、G+C 的含量应在 45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、5’端可加修饰基团正确答案:A56.下列哪种病毒在复制过程中可产生 RNA-DNA 杂交体A、HIVB、HPVC、HBVD、HCVE、流感病毒正确答案:A57.未知突变的检测,下列最准确的方法是A、PCRB、RFLPC、核酸杂交D、序列测定E、ASO正确答案:D58.关于肺炎支原体的实验室检测,正确的是A、体外培养生长缓慢但阳性率很高B、免疫学方法检测的假阳性率较低C、体外培养在支原体感染的早期诊断上具有重要意义D、利用分子生物学方法可以进行流行病学调查和耐药基因分析E、PCR 技术可检测到极微量的 DNA,但特异性不高正确答案:D59.人类可遗传的变异中最简单、最常见的一种是 ( )A、RFLPB、VNTRC、STRD、SNPE、CNV正确答案:D60.Southern 印迹转移的步骤不包括 ( )A、用限制性内切酶消化 DNAB、DNA 与载体的连接C、用凝胶电泳分离 DNA 片段D、DNA 片段转移到硝酸纤维素膜上E、用一个标记的探针与膜上 DNA 杂交正确答案:B61.PCR 反应体系不包括A、耐热的 TaqDNA 聚合酶B、cDNA 探针C、4 种 dNTPD、合适的缓冲液体系E、模板 DNA正确答案:B62.细菌感染分子生物学检验的检验对象是A、测定血清中抗体抗原B、镜检病原体形态C、测定血清中病原体蛋白含量D、测定血清中蛋白酶活性E、测定样本中核酸含量正确答案:E63.一位男性血友病患者,他亲属中不可能是血友病的是A、外甥或外孙B、同胞兄弟C、姨表兄弟D、叔、伯、姑E、外祖父或舅父正确答案:D64.延伸的温度通常为A、55℃B、72℃C、37℃D、95℃E、25℃正确答案:B65.以下不是在移植配型中常用的分子生物学检测技术是A、核酸分子杂交技术B、PCR 技术C、基因芯片技术D、免疫组化技术E、基因测序技术正确答案:D66.Sanger 双脱氧链终止法使用的链终止物是A、dNTPB、NTPC、α-32P-dNTPD、ddNTPE、α-35S-dNTP正确答案:D67.一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值多少度A、30~40℃B、10~15℃C、15~25℃D、5~10℃E、40~50℃正确答案:C68.有关微卫星的描述正确的是A、散在重复序列的一种B、10~100bp 组成的重复单位C、主要存在于着丝粒区域,通常不被转录D、形式为 (CA) n/ (TG) n、 (AG) n、 (CAG) n 等E、又称为可变数目串联重复序列 (VNTR)正确答案:D69.判断 HBV 复制及传染性的直接指标是检测A、HBV DNA 多聚酶活力B、HBsAgC、HBV DNAD、HBeAgE、HBcAg正确答案:C70.检测 TB 的实验室技术中,被认为是目前最先进的一种检测TB 及其耐药性的方法是A、PCR 技术B、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、全自动结核杆菌检测技术E、DNA 测序技术正确答案:D71.在 pH 为下述何种范围时,Tm 值变化不明显A、pH 为 4~5B、pH 为 3~5C、pH 为 8~11D、pH 为 5~9E、pH 为 5~6正确答案:D72.单核苷酸多态性检测芯片探针的设计不正确的是 ( )A、一般采用等长移位设计法B、包括与靶序列完全匹配的野生型探针C、三种不同的单碱基变化的核苷酸探针D、靶序列与探针完全匹配的杂交点显示较弱的荧光信号E、可以对某一段核酸序列所有可能的 SNPs位点进行扫描正确答案:D73.结核分支杆菌的基因组特征是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案:B74.下列有关遗传病的叙述中正确的是A、遗传病是指由遗传物质改变而引起的疾病B、遗传病一定是先天性疾病C、遗传病都是由基因突变引起的D、遗传病只能诊断不能治疗E、先天性疾病都是遗传病正确答案:A75.下列关于病毒基因组描述不正确的是A、基因组可以由DNA 或 RNA 组成B、有重叠基因C、基因组大部分是用来编码蛋白质的D、有高度重复序列E、相关基因往往丛集形成一个功能单位正确答案:D76.HCV 基因分型的“金标准”是( )A、基因分型检测芯片B、测序分析法C、实时荧光 PCRD、基因型特异性引物扩增法E、RFLP正确答案:B77.规范化的临床基因扩增检验实验室工作区域不包括A、标本制备区B、隔离区C、扩增区D、产物分析区E、试剂储存和准备区正确答案:B78.点/狭缝杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因,而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、用于基因定位分析D、阳性菌落的筛选E、蛋白水平的检测正确答案:A79.DNA 芯片的固相载体不可以用A、半导体硅片B、玻璃片C、滤纸D、硝酸纤维素膜E、尼龙膜正确答案:C80.PCR 反应必需的成分是A、BSAB、DTTC、Tween20D、明胶E、Mg2+正确答案:E81.多重 PCR 的描述中正确的是:A、同一个模板,多种不同的引物B、相同的引物,多种不同的模板C、多个模板,多种引物D、引物的Tm 值、反应时间和温度、反应缓冲液等尽量不一致以区分不同产物E、同一反应内各扩增产物片段的大小应尽可能相同或接近正确答案:A82.下列物质不适于非放射性探针标记的是A、AKPB、ACPC、生物素D、地高辛E、荧光素正确答案:B83.双脱氧终止法测定核酸序列时,使用 ddNTP 的作用是:A、作为 DNA 合成的正常底物B、形成特异性终止链C、标记合成的DNA 链D、使电泳时 DNA 易于检测E、使新合成的 DNA 链不易形成二级结构正确答案:B84.关于 Sanger 双脱氧链终止法叙述错误的是A、每个 DNA 模板需进行一个独立的测序反应B、需引入双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP) 作为链终止物C、链终止物缺少3’-OH,使链终止D、测序反应结果是产生 4 组不同长度的核苷酸链E、高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离仅差一个核苷酸的单链 DNA 正确答案:A85.下列关于 real-time PCR 引物设计的原则中,不正确的是A、两条引物的Tm 值相差尽量大B、G+C 的含量应在 45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、引物过长可能提高退火温度正确答案:A86.巢式 PCR 错误的是A、是对靶 DNA 进行二次扩增B、第二次扩增所用的模板为第一次扩增的产物C、巢式 PCR 可提高反应的灵敏度和特异性D、常用于靶基因的质和 (或) 量较低时E、第二对引物在靶序列上的位置应设计在第一对引物的外侧正确答案:E87.产前诊断临床应用尚不广泛,原因不包括A、诊断的准确性受到多种制约B、需要生殖医学与遗传学技术的结合C、诊断技术不成熟D、单个细胞的遗传诊断困难E、已明确母亲为携带者的婴儿正确答案:C88.纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8,可使比值升高的是:A、蛋白质B、酚C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案:C89.K-ras 基因最常见的激活方式是A、染色体重排B、点突变C、插入突变D、缺失突变E、基因扩增正确答案:B90.下列不是片段性突变引起原因的是A、基因重排B、转录异常C、碱基缺失D、碱基扩增E、碱基插入正确答案:B91.下列不符合转座因子含义的是A、转座因子是 DNA 重组的一种形式B、可在质粒与染色体之间移动的DNA 片段C、转座子是转座因子的一个类型D、可移动的基因成分E、能在一个 DNA 分子内部或两个 DNA 分子之间移动的 DNA 片段正确答案:A92.对于寡核苷酸探针,杂交温度一般低于其 Tm 值A、20~30℃B、15~30℃C、5℃D、30~40℃E、10~15℃正确答案:C93.电脑显示和打印出的 DNA 碱基序列图谱中不出现的颜色:A、紫B、蓝C、绿D、黄E、红正确答案:A94.关于真菌,以下描述正确的是A、真菌种类繁多,其中大多数对人类有害B、浅部真菌感染对治疗有顽固性,对机体的影响相对较小C、近年真菌病的发病率有明显下降趋势D、病原性真菌根据其入侵组织部位深浅的不同分为浅部真菌和内部真菌E、真菌感染对人体的危害不大正确答案:B95.下列关于人类遗传病的叙述不正确的是A、人类遗传病包括单基因遗传病、多基因遗传病和染色体异常遗传病B、21-三体综合症患者体细胞中染色体数目为 47 条C、遗传性疾病既可以直接诊断,也可以间接诊断D、单基因病是指受一个基因控制的疾病E、人类遗传病是指由于遗传物质改变而引起的疾病正确答案:D96.构成完整的病毒颗粒的成分是A、结构蛋白B、核酸C、蛋白质与核酸D、蛋白质E、糖蛋白正确答案:C97.关于荧光原位杂交技术叙述不正确的是( )A、用荧光素标记探针B、用放射性核素标记探针C、无需经过核酸的提取D、可以用于遗传病的产前诊断E、可以用于基因定位正确答案:B98.RNA/RNA 杂交体的 Tm 值一般应增加A、1-5℃B、5~10℃C、10~15℃D、15~20℃E、20~25℃正确答案:E99.关于肿瘤分子诊断的说法正确的是A、肿瘤分子诊断的核心是基于细胞水平的分子诊断技术B、肿瘤分子诊断的研究成果仅用于临床肿瘤的诊断C、肿瘤分子诊断就是利用分子生物学原理和技术建立的肿瘤诊断方法D、肿瘤分子诊断的含义主要表现在虽然检测对象众多,但大多数标志物是特异性的肿瘤标志物E、肿瘤的分子诊断中根据目的、对象、类型的不同要采取相似的诊断策略与方法正确答案:C100.逆转录 PCR 扩增最终产物的特异性由A、随机引物决定B、oligo-d (T) 决定C、PCR 扩增的特异引物决定D、扩增效率决定E、逆转录酶决定正确答案:C。

感染性疾病的分子生物学检验

感染性疾病的分子生物学检验
感染性疾病的分子生物学检验
Molecular diagnosis for infectious diseases
感染的慨念
感染是病原体和人体之间的相互作用过程 病原体:衣原体、螺旋体、病毒、细菌、真菌、原虫、寄生虫 病原微生物:致病菌(条件致病菌)


微 生

















HBV DNA检测(PCR) PCR 引物是PCR扩增的关键,决定扩 增的特异性和敏感度。PCR引物常根据 其S、C、P和X基因中的高度保守序列 来设计。
部分常用的引物序列
扩增位置 P、X基因特
异片段
C基因特异 片段
C基因特异 片段
引物序列 5’-ATACTGCGGAACTCCTAGC-3’ 5’-CCGCGTAAAGAGAGGTGCG-3’ 5’-ATACCACAGAGTCTAGACTCGTGGTGGACT-3’ 5’-AAGCCCTACGAACCACTGAACAAATGGCAC-3’ 5’-GCTTTGGGGCATGGACATTGACCCCTATAA-3’ 5’-ATGGGATCCCTGGATGCTGGGTCTTCCAAA-3’
扩增片段大小(bp) 278
477
258
HBV DNA FQ-PCR(real time PCR)
进行HBV DNA检测的同时使其进行相对的量化 更直接了解乙肝患者体内HBV的复制及传染性,能 准确地反映出HBV DNA的复制水平、病程变化和治 疗恢复情况等。
其特异性高,灵敏度可达0.01fg,检测范围为 2.5×102~2.5×109copies/ml。

分子生物学鉴定细菌的方法具体操作步骤与注意事项

分子生物学鉴定细菌的方法具体操作步骤与注意事项

16S rDNA鉴定细菌的方法细菌16S rDNA鉴定主要分为7个部分:1.提取细菌基因组DNA,2.设计/选择引物进行PCR扩增,电泳检测纯度与大小。

3.琼脂糖凝胶电泳分离4.胶回收目的片段5.目的片段测序。

6.BLAST比对获取相似片段。

7.构建系统进化树试剂:1、培养基:通常选择组分简单且细菌生长良好的培养基(培养基组分过于复杂会影响DNA 的提取效果,也可以在裂解细菌前用TE缓冲液对菌体进行洗涤。

)。

2、1M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)(1L):121.1g Tris,加浓盐酸约(70ml, 60ml, 42ml),高温高盐灭菌后,室温保存。

冷却到室温后调pH,每升高1℃,pH大约下降0.03个单位。

3、0.5M EDTA(pH8.0)(1L):186.1g Na2EDTA•2H2O,用NaOH调pH至8.0(约20g),高温高压灭菌,室温保存。

4、10×TE Buffer(pH7.4,7.6,8.0)(1L):组分:100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA。

1M Tris-HCl (pH7.4,7.6,8.0)取100ml,0.5M EDTA(pH8.0)取20ml。

高温高压灭菌,室温保存。

1×TE Buffer用10×TE Buffer稀释10倍即可。

5、10%SDS(W/V):称10g,68℃加热溶解,用浓盐酸调pH至7.2。

室温保存。

用之前在65℃溶解。

配置时要戴口罩。

6、5M NaCl:称292.2gNaCl,高温高压灭菌,4℃保存。

7、CTAB/NaCl(10%CTAB,0.7M NaCl):溶解4.1g NaCl,加10g CTAB(十六烷基三甲基溴化铵),加热搅拌。

用之前在65℃溶解。

8、氯仿/异戊醇:按氯仿:异戊醇=24:1(V/V)的比例加入异戊醇。

9、酚/氯仿/异戊醇(25:24:1):按苯酚与氯仿/异戊醇=1:1的比例混合Tris-HCl平衡苯酚与氯仿/异戊醇。

细菌感染的分子生物学检验

细菌感染的分子生物学检验

第二节 结核分枝杆菌的分子生物学检验
结核分枝杆菌(TB),简称结核杆菌,是引起结核 病的病原体。随着抗结核药物的不断发展和卫生 生活状况的改善,结核的发病率和死亡率曾一度 大幅下降。近年,由于艾滋病和结核分枝杆菌耐 药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困 及人口广泛流动等因素,全球范围内结核病的疫 情死灰复燃。 据WHO统计,全世界约1/3的人感染了结核分枝 杆菌,在某些发展中国家成年人中群中结核分枝 杆菌携带率高达80%,其中的5%~10%携带者可 发展为活动性结核病。
TB是一种革兰氏阳性菌,G+C含量高,其细胞壁 除肽聚糖层外,还含有另外一层由特殊脂质、糖 脂和多糖组成的附加层。TB呈细长略弯曲,常聚 集成团,用抗酸性染色被染成红色。
对养要培求特殊条件,一 般要经4-6周才出现肉眼可 见的菌落。TB通过呼吸道、 消化道和破损的皮肤粘膜 侵入机体,它被吞噬后能 在吞噬细胞内繁殖,导致 巨噬细胞裂解,还可在细 胞外繁殖。
6、扩增结核分枝杆菌直接试验( AMTDT)
AMTDT以结核分枝杆菌的16SrRNA为扩增模板,采 用转录介导的扩增技术对靶核酸进行扩增,采用化 学发光物吖啶酯标记的cDNA探针与扩增的靶基因杂 交,探针与扩增产物杂交后利用杂交保护试验除去 未杂交的标记探针,最后利用化学发光仪检测化学 发光信号。
结核分枝杆菌天然地对很多抗生素有抵抗力,使得 治疗极其困难。该菌的药物抵抗力主要由于其具有 高度疏水的细胞壁充当渗透屏障。同时,在基因组 中还发现有许多药物抗性决定因子的编码序列,包 括水解酶或者药物修饰酶,例如乙酰转移酶和很多 药物外排泵系统。
抵抗力特点:“三耐四敏” ※耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿(1:13000) ※对湿热、70%乙醇、紫外线、常用抗结核药物(但长

感染性疾病的分子生物学检验

感染性疾病的分子生物学检验

THANKS.
免疫治疗
利用患者自身的免疫系统,通过免疫调节和免疫细胞治疗等方法,提 高患者的免疫力,控制感染性疾病的发展。
加强国际合作与交流
跨国合作研究
加强国际间的合作与交流,共同开展 感染性疾病的分子生物学研究,共享 研究成果和技术资源。
学术交流平台
建立国际性的学术交流平台,促进各 国学者之间的学术交流和技术合作, 推动感染性疾病的分子生物学检验领 域的快速发展。
耐药性分析
对于已经产生耐药性的病原体,分子生物学检验可以帮助分析其耐药机制,为 临床治疗提供参考。
展望与未来发展方
05

新技术的研发与应用
1 2 3
基因组学技术
利用新一代测序技术,对感染性疾病的基因组进 行全面解析,为疾病的诊断、治疗和预防提供更 精确的信息。
蛋白质组学技术
研究感染性疾病发生发展过程中蛋白质的表达和 功能变化,为药物研发和个性化治疗提供有力支 持。
VS
详细描述
蛋白质组学技术包括蛋白质分离、质谱分 析和功能研究等方面。通过对感染性疾病 患者体内蛋白质的表达谱进行分析,有助 于揭示感染性疾病的发病机制、疾病进程 和耐药性机制。蛋白质组学技术为感染性 疾病的诊断和治征
细菌性感染的分子生物学特征
详细描述
PCR技术利用特定的引物和耐高温的DNA聚合酶,通过循环加热和冷却的过程, 将特定的DNA片段进行指数级扩增,从而实现对微量DNA的检测。PCR技术在 感染性疾病诊断中具有高灵敏度和特异性,可检测出极低浓度的病原体DNA。
基因测序
总结词
基因测序是通过测定DNA序列,对感染性疾病进行诊断和溯源的技术。
详细描述
基因测序能够测定病原体全基因组的序列,提供关于病原体种属、基因型、耐药性等重要信息。通过比较不同病 原体基因组的序列差异,有助于追踪疾病的传播途径和溯源。基因测序在感染性疾病的防控、诊断和治疗中具有 重要意义。

(完整word)分子生物学检验完整版

(完整word)分子生物学检验完整版

1病原生物基因组在医学上有何应用?详见书P3a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查2什么是原癌基因,原癌基因有什么特性,原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些?原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称.特性:进化上高度保守,负责调控正常细胞生命活动,可以转化为癌基因。

功能分类:生长因子,生长因子受体,信号转导蛋白,核调节蛋白,细胞周期调节蛋白,抑制凋亡蛋白激活机制:插入激活,基因重排,基因点突变,基因扩增,基因转录改变3试述Down综合征(21三体综合征)的主要临床特征及核型。

临床特征:生长发育障碍,智力低.呆滞面容,又称伸舌样痴呆。

40%患者有先天性心脏畸形。

肌张力低,50%患者有贯通手,男患者无生育能力,女患者少数有生育能力,遗传风险高。

核型:92。

5%患者游离型:核型为47,XX(XY),+212.5%患者为嵌合型:46,XX(XY)/47,XX(XY),+215%患者为易位型:46,XX(XY),-14,+t(14q21q)4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点,对比分析分子生物学方法的优势1直接涂片染镜检:敏感度和特异性差,不能用于确诊。

2分离培养法:诊断NG感染的金标准,但是其对标本和培养及营养要求高,培养周期长,出报告慢,难以满足临床要求。

3免疫学法:分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制,推广受限.分子生物学的优点:敏感,特异,可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌,适应于快速检测5、在单基因遗传病的分子生物学检验中,点突变检测常用方法有哪些?1异源双链分析法(HA)2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA 芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸(DNA RNA)的检测、基因分型和耐药基因分析等。

9细菌感染的分子生物学检验

9细菌感染的分子生物学检验
NG的主要耐药机制
gyrA、parC基因
gyrA基因突变→DNA旋转酶结构改变→阻止氟喹诺酮类 药物进入霸位(低、中水平耐药)
gyrA、parC基因突变:高水平耐药
penA、ponA基因突变 → 编码的青霉素结合蛋白结 构改变 → 酶与青霉素的亲和力下降
31
NG的分子生物学检验内容
耐氟喹诺酮类药
gyrA基因突变 → DNA旋转酶上氟喹诺酮类药物 结合位点构象改变
23
分子生物学技术检测TB耐药性
DNA测序 PCR-SSCP(单链构象多态性):PCR + 核酸电泳 PCR-RFLP:PCR + 酶切 PCR-RDB(反向点杂交) 基因芯片
24
TB分子生物学检验的临床意义
探针的种类有:全染色体DNA、染色体克隆片段DNA、质粒 DNA、rRNA基因、寡核苷酸等
核酸扩增技术:是分子生物学中最具有重大意义的技术之 一。方法有聚合酶链反应(PCR)、连接酶链反应等。以 PCR最为广泛应用。
PCR技术在细菌的快速检测、细菌的毒素基因检测、细菌的 耐药性检测及感染细菌的流行病学调查中得到日益广泛的应用
青霉素、四Hale Waihona Puke 素、环丙沙星、头孢克肟27
淋病奈瑟菌
传统检测方法
直接图片镜检:灵敏度、特异性差 分离培养法:诊断金标准。对标本、培养基要求高,
周期长 免疫学方法:非特异性反应严重,稳定性差
28
NG的基因组结构特征
淋球菌FA1090, 最早被测序 染色体DNA长2.15Mbp,编码区占78% 2069个基因
19
TB的分子生物学检验内容
TB核酸检测
PCR real-time PCR PCR-RFLP:PCR + 酶切 线性探针杂交:PCR + 杂交 + 显色 链替代扩增技术 扩增TB直接试验 基因芯片 GeneXpert全自动结核检测平台

细菌感染分子生物学检验课件

细菌感染分子生物学检验课件

个性化治疗:根据 个体基因和健康状 况进行个性化治疗,
提高治疗效果
谢谢
02
细菌感染分子生物学检验可以区分不同类型的细菌感染,为治疗提供依据。
03
细菌感染分子生物学检验可以监测细菌耐药性,为抗生素治疗提供指导。
04
细菌感染分子生物学检验可以辅助诊断免疫缺陷病,为免疫治疗提供依据。
病原体研究
细菌分类:通过分子生物学方法对细 01 菌进行分类和鉴定
耐药性研究:研究细菌对抗生素的耐 0 2 药性机制,为临床治疗提供指导
04
代谢组学:研 究代谢物的种 类、含量和变
化规律
02
转录组学:研 究基因表达和
调控机制
05
系统生物学: 研究生物系统 的结构和功能
关系
03
蛋白质组学: 研究蛋白质的 结构、功能和
相互作用
06
合成生物学: 设计和构建新 的生物系统或
生物部件
3
细菌感染分子生 物学检验的应用
临床诊断
01
细菌感染分子生物学检验可以用于快速诊断细菌感染,提高诊断准确性。
于检测细菌的基因序列
和表达情况
基因测序技术:如二代 3 测序、三代测序等,用 于检测细菌的基因组序 列
生物信息学方法:如序
4
列比对、基因注释等,
用于分析细菌的基因功
能和进化关系
比较与优势
传统检测方法:培养法、免疫学检测法等,耗时 长,灵敏度低
分子生物学检验方法:PCR、基因芯片等,快速、 灵敏度高,可检测多种细菌
RNA片段
03
qPCR技术:实时 荧光定量PCR,
用于定量检测 DNA或RNA片段
04
NASBA技术:核 酸序列扩增技术, 用于扩增RNA片

分子生物学题库(附参考答案)

分子生物学题库(附参考答案)

分子生物学题库(附参考答案)一、单选题(共100题,每题1分,共100分)1.关于切口平移法下述不正确的是A、可标记线性 DNAB、可标记松散螺旋 DNAC、可标记超螺旋 DNAD、可标记存在缺口的双链 DNAE、可标记随机引物正确答案:E2.在 pH 为下述何种范围时,Tm 值变化不明显A、pH 为 5~9B、pH 为 3~5C、pH 为 5~6D、pH 为 8~11E、pH 为 4~5正确答案:A3.关于SYBR Green Ⅰ 的描述,不正确的是A、荧光染料的成本低B、适用于任何反应体系C、操作亦比较简单D、特异性强E、不需要对引物或探针进行预先特殊的荧光标记正确答案:D4.PCR 反应过程中,退火温度通常比引物的Tm 值A、低5℃B、低15℃C、高5℃D、高15℃E、相等正确答案:A5.以下关于原癌基因说法不正确的是A、普遍存在于人类或其他动物细胞基因组中的一类基因B、在生物进化过程中不稳定C、在控制细胞生长和分化中起重要作用D、容易在多种因素作用下激活成活性形式的癌基因E、活性形式的癌基因才引起细胞癌变正确答案:B6.关于真菌,以下描述正确的是A、真菌种类繁多,其中大多数对人类有害B、浅部真菌感染对治疗有顽固性,对机体的影响相对较小C、近年真菌病的发病率有明显下降趋势D、病原性真菌根据其入侵组织部位深浅的不同分为浅部真菌和内部真菌E、真菌感染对人体的危害不大正确答案:B7.标记的参与杂交反应的核酸分子称为A、变性B、探针C、杂交D、复性E、复杂性正确答案:B8.不符合分子诊断特点的是A、灵敏度高B、特异性强C、样品获取便利D、检测对象为自体基因E、易于早期诊断正确答案:D9.在下列何种情况下可考虑进行基因连锁检测方法进行基因诊断A、基因结构变化未知B、点突变C、基因片段缺失D、表达异常E、基因片段插入正确答案:A10.关于抑癌基因的说法正确的是A、呈隐性作用方式B、抑癌基因又称为肿瘤分化抑制基因C、可以使细胞丧失生长控制和正性调控功能D、是一类可编码对肿瘤形成起促进作用的蛋白质的基因E、正常情况下促进细胞增殖、抑制细胞分化正确答案:A11.变性梯度凝胶电泳的描述中错误的是A、使 DNA 双链分子局部变性B、采用梯度变性凝胶C、变性难易由核苷酸组成决定D、突变检测率高E、可确定突变位置正确答案:E12.DNA 自动化测序技术中,不正确的荧光标记方法A、用荧光染料标记引物5’端B、用荧光染料标记引物3’-OHC、用荧光染料标记终止物D、使用一种或四种不同荧光染料标记E、使荧光染料标记的核苷酸渗入到新合成的 DNA 链中正确答案:B13.PCR 中的脱氧核苷三磷酸不包括A、dATPB、dTTPC、dCTPD、dGTPE、dUTP正确答案:E14.一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链,这一过程称A、变性B、复杂性C、探针D、复性E、杂交正确答案:E15.珠蛋白生成障碍性贫血的主要原因是A、珠蛋白链合成速率降低B、珠蛋白基因突变导致氨基酸序列改变C、血红蛋白破坏加速D、出现异常血红蛋白 SE、铁代谢异常正确答案:A16.众多肿瘤中遗传因素最突出的一种肿瘤是A、肺癌B、肝癌C、乳腺癌D、结直肠癌E、前列腺癌正确答案:D17.为封闭非特异性杂交位点,可在预杂交液中加入A、ssDNAB、1 ×SSCC、10×SSCD、5×TBECE、50×TAE正确答案:A18.不属于脆性 X 综合征分子诊断人群的是A、有 FraX 体格或性格阳性征象者B、发育迟缓或自闭症的患者C、没有 FraX 家族史D、已明确母亲为携带者的婴儿E、未诊断的 MR 家族史正确答案:C19.病毒的遗传物质是A、DNAB、RNA 和蛋白质C、DNA 或 RNAD、RNA 和 DNAE、DNA 和蛋白质正确答案:C20.Alu家族属于A、可变数目串联重复序列B、短串联重复序列C、长散在核原件D、短散在核原件E、DNA 转座子正确答案:D21.检测融合基因、确定染色体易位的首选方法是A、FISHB、RT-PCRC、实时定量 PCRD、PCRE、DNA 芯片正确答案:D22.母亲血浆中的胎儿 DNAA、占母亲血浆总 DNA 的 50%以上B、可用于检测胎儿从母亲遗传而来的线粒体 DNA 突变C、确定RhD 阳性孕妇所怀胎儿的RhD 情况D、确定胎儿是否从母亲遗传了X 连锁的基因突变E、血友病 A 的产前诊断正确答案:C23.关于人工合成的寡核苷酸探针,下列描述不正确的是A、特异性高B、可依赖氨基酸序列推测其序列C、分子量小D、可用于相似基因顺序差异性分析E、可用末端转移酶进行5’端标记正确答案:E24.以下哪种方法是检测耐药基因突变的金标准 ( )A、PCR 技术B、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、PCR-SSCPE、DNA 测序技术正确答案:E25.5’-末端的 DNA 探针标记主要依靠的酶是A、T4 多聚核苷酸激酶B、末端转移酶C、AKPD、DNA pol ⅠE、DNA pol正确答案:A26.第三代测序技术测定人全基因组的目标:A、30 分钟的测序时间及 5 万美元的测序价格B、3 小时的测序时间及 5 千美元的测序价格C、30 分钟的测序时间及 5 千美元的测序价格D、3 分钟的测序时间及 5 千美元的测序价格E、3 小时的测序时间及 5 万美元的测序价格正确答案:D27.GeneXpert 全自动结核杆菌检测技术现可进行哪种药物的耐药检测A、乙胺丁醇B、利福平C、链霉素D、异烟肼E、吡嗪酰胺正确答案:B28.不是自动 DNA 测序仪主要系统之一的是A、测序反应系统B、电泳系统C、荧光检测系统D、探针荧光标记系统E、电脑分析系统正确答案:D29.下列哪一种病毒的遗传物质为 RNA ( )A、乙肝病毒B、乳头瘤状病毒C、疱疹病毒D、人类免疫缺陷病毒E、腺病毒正确答案:D30.关于 TaqMan 探针技术的描述,不正确的是A、R 基团与Q 基团相距较远,淬灭不彻底,本底较高B、易受到Taq DNA 聚合酶5’→3’核酸外切酶活性的影响C、操作亦比较简单D、不需要进行寡核苷酸熔解曲线分析,减少了实验时间E、解决了荧光染料技术非特异性的缺点正确答案:C31.下列属于抑癌基因的是 ( )A、sisB、rasC、c-erb-2D、mycE、p53正确答案:E32.荧光定量 PCR 反应中,Mg2+的浓度对 Taq 酶的活性是至关重要,以 DNA 或 cDNA 为模板的 PCR 反应中最好的 Mg2+浓度是A、0.2~0.5mMB、1~2mMC、2~5mMD、6~8mME、0.5~2mM正确答案:C33.有关 HPV 描述错误的是A、核酸类型为 DNAB、结构蛋白 L1 和 L2 是包膜上的主要和次要蛋白C、HPV 对皮肤和黏膜上皮细胞具有高度亲嗜性D、病毒核酸合成主要发生在棘层和颗粒层E、大多数宫颈癌组织中病毒以整合状态存在正确答案:B34.K-ras 基因最常见的激活方式是A、插入突变B、点突变C、缺失突变D、基因扩增E、染色体重排正确答案:B35.下列 DNA 序列中的胞嘧啶易发生甲基化修饰的是A、5’-CCCCCT-3’B、5’-GGGGCC-3’C、5’-CGCGCG-3’D、5’-GCACAC-3’E、5’-CTCTCCC-3’正确答案:C36.下列哪种病毒在复制过程中可产生 RNA-DNA 杂交体A、HIVB、HPVC、HBVD、HCVE、流感病毒正确答案:A37.绝大多数β-地中海贫血系由位于第 11 号染色体上的β-珠蛋白基因中的基因突变所致,下列方法中不能用于分子生物学检验的技术是A、PCR-ASOB、PCR-RDBC、基因芯片D、多重 PCRE、MOEA-PCR正确答案:D38.多基因家族的特点描述错误的是 ( )A、由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因B、通常由于突变而失活C、假基因与有功能的基因是同源的D、所有成员均产生有功能的基因产物E、可以位于同一条染色体上正确答案:D39.关于 DNA 芯片原位合成法的描述错误的是:A、也称在片合成B、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针C、包括光导原位合成法D、包括原位喷印合成法E、包括直接点样法正确答案:E40.下列方法中不能分辨野生型和突变型基因的是A、PCR-SSCPB、变性梯度凝胶电泳C、熔解曲线分析D、逆转录 PCR正确答案:D41.下列哪些技术不适用于鉴定菌种亲缘性:A、随机扩增DNA 多态性分析B、连接酶链反应C、PCR-RFLPD、多位点测序分型E、DNA 测序技术正确答案:B42.下列不是目前用于 O157:H7 型大肠埃希菌分子生物学检验方法的是A、常规 PCRB、多重 PCRC、荧光定量 PCRD、基因芯片技术E、DNA 测序正确答案:E43.未知突变的检测,下列最准确的方法是A、PCRB、RFLPC、核酸杂交D、序列测定E、ASO正确答案:D44.任意引物 PCR 的特点描述错误的是A、需预知靶基因的核苷酸序列B、通过随机引物与模板序列随机互补C、扩增后可直接得到靶基因的多态性指纹图谱D、可用于基因组 DNA 图谱构建E、可用于临床致病菌的流行病学检测、分型正确答案:A45.巢式 PCR 错误的是A、是对靶 DNA 进行二次扩增B、第二次扩增所用的模板为第一次扩增的产物C、巢式 PCR 可提高反应的灵敏度和特异性D、常用于靶基因的质和 (或) 量较低时E、第二对引物在靶序列上的位置应设计在第一对引物的外侧正确答案:E46.下列不是细菌感染性疾病分子生物学检验技术的是A、PCR-SSCPB、real-time PCRC、ELISAD、PFGEE、PAPD正确答案:C47.通过酶联级联反应检测每次核苷酸聚合所产生的ppi 的测序方法是A、化学降解法B、寡连测序C、焦磷酸测序D、边合成边测序E、双脱氧终止法正确答案:C48.以 SDA 技术检测结核杆菌时扩增靶点是A、SDAB、IS6110 和 18SrRNAC、IS6110 和 5SrRNAD、IS6110 和 16SrRNAE、IS6110 和 15SrRNA正确答案:D49.STR 法医鉴定的基础是A、基因多态性B、碱基配对原则C、蛋白质空间结构D、孟德尔遗传定律E、基因扩增技术正确答案:D50.关于 APC 基因说法不正确的是A、是一种抑癌基因B、定位于染色体 5q21 上C、通过编码 APC 蛋白发挥作用D、APC 蛋白在细胞周期进程、细胞生长调控及维持自身稳定中起着重要作用E、APC 蛋白在肿瘤发生发展的全过程中并不稳定正确答案:E51.Northern 印迹杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因,而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、检测靶分子是 RNAD、用于基因定位分析E、用于阳性菌落的筛选正确答案:C52.描述 PCR-RFLP 技术在耐药突变检测方面错误的是:A、分型时间短B、技术简便C、突变要存在限制性内切酶酶切位点D、目前被广泛应用于耐药监测E、只能检测特定的突变位点正确答案:D53.单基因遗传病分子诊断的主要应用是A、产前诊断B、携带者筛查C、携带者诊断D、症状前诊断E、耐药基因检测正确答案:A54.结核分支杆菌的基因组特征是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案:B55.下列关于细菌感染性疾病的分子生物学检验说法错误的是A、可以检测不能或不易培养、生长缓慢的病原菌B、可以实现对感染细菌的广谱快速检测C、可以对细菌进行基因分型D、可以检测病原菌耐药基因E、其检验技术都是 PCR 及其衍生技术正确答案:E56.最早应用于 HLA 基因分型的方法是A、RFLP 分型技术B、PCR-SSCP 技术C、测序技术D、PCR-SSO 技术E、PCR-SSP 技术正确答案:A57.编码 HIV 衣壳蛋白的是A、gag 基因B、vif 基因C、pol 基因D、tat 基因E、env 基因正确答案:A58.关于核酸探针的种类下列不正确的是A、cDNA 探针B、寡核苷酸探针C、基因组 DNA 探针D、RNA 探针E、双链 DNA 探针正确答案:E59.下列关于引物设计的原则中,错误的是A、两条引物的Tm 值相差尽量大B、G+C 的含量应在 45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、5’端可加修饰基团正确答案:A60.多重 PCR 的描述中正确的是:A、同一个模板,多种不同的引物B、相同的引物,多种不同的模板C、多个模板,多种引物D、引物的Tm 值、反应时间和温度、反应缓冲液等尽量不一致以区分不同产物E、同一反应内各扩增产物片段的大小应尽可能相同或接近正确答案:A61.PCR 反应体系的描述错误的是A、模板B、一条引物C、dNTPD、DNA 聚合酶E、缓冲液正确答案:B62.关于 FISH 在白血病的应用中说法正确的是A、主要用于白血病的初诊和复发的检测B、只适用于体液、组织切片标本C、FISH 只能检测处于分裂中期的细胞D、FISH 的灵敏度高于 PCRE、FISH 是检测融合基因、确定染色体易位的首选方法正确答案:A63.mtDNA 中基因数目为A、39 个B、27 个C、22 个D、37 个E、13 个正确答案:D64.硝酸纤维素膜最大的优点是( )A、本底低B、高结合力C、共价键结合D、非共价键结合E、脆性大正确答案:A65.要制订一个能够简洁准确的 DNA 测序方案,首先应考虑A、DNA 片段大小B、测序方法C、实验条件D、测序目的E、测序时间正确答案:E66.寡核苷酸探针的最大的优势是A、易分解B、易标记C、杂化分子稳定D、可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列E、易合成正确答案:D67.关于支原体的描述错误的是A、支原体是一类在无生命培养基中能独立生长繁殖的最小原核细胞微生物B、支原体有一个环状双链 DNAC、以二分裂方式进行繁殖D、其分裂与 DNA 复制同步E、解脲脲原体、人型支原体和生殖器支原体均可引起泌尿生殖道感染正确答案:D68.下列几种 DNA 分子的碱基组成比例,哪一种的Tm 值最高 ( )A、A+T=15%B、G+C=25%C、G+C=40%D、A+T=80%E、G+C=60%正确答案:A69.PCR 反应必需的成分是A、BSAB、DTTC、Tween20D、明胶E、Mg2+正确答案:E70.Southern 印迹杂交的描述正确的是A、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因,而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案:A71.关于非放射性探针标记,下列描述不正确的是A、对人体危害小B、可长时间使用C、酶促显色检测最常使用的酶是碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶D、灵敏度不如放射性探针E、目前应用的非放射性标志物都是抗原正确答案:E72.作为芯片固相载体的材料描述正确的是A、主要有玻片、硅片等实性材料B、不使用硝酸纤维素膜、尼龙膜及聚丙烯膜等膜性材料C、这些载体材料不需要处理,其表面存在活性基团 (如羟基或者氨基)D、可以直接固定已经合成的寡核苷酸探针E、不需要对介质表面进行化学预处理--活化正确答案:A73.检测靶序列是 DNA 的技术是:A、Southern 杂交B、Western 杂交C、Northern 杂交D、Eastern 杂交E、杂交淋巴瘤正确答案:A74.目前的 DNA 自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约A、50bpB、100bpC、500bpD、1000bpE、2000bp正确答案:D75.在人类基因组 DNA 序列中,DNA 甲基化主要发生在A、腺嘌呤的 N-6 位B、胞嘧啶的 N-4 位C、鸟嘌呤的 N-7 位D、胞嘧啶的 C-5 位E、鸟嘌呤的 C-5 位正确答案:D76.有关微卫星的描述正确的是A、散在重复序列的一种B、10~100bp 组成的重复单位C、主要存在于着丝粒区域,通常不被转录D、形式为 (CA) n/ (TG) n、 (AG) n、 (CAG) n 等E、又称为可变数目串联重复序列 (VNTR)正确答案:D77.关于逆转录 PCR 的描述,不正确的是A、首先应将 RNA 转化为 cDNA 才能进行 PCRB、除了使用DNA 聚合酶外,还应使用逆转录酶C、模板为 RNAD、oligo-d (T) 理论上可以将所有的 mRNA 进行逆转录反应E、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应正确答案:E78.以下不是原癌基因的特点的是A、广泛存在于生物界,是细胞生长必不可少的B、在进化过程中,基因序列呈高度保守性C、通过表达产物 DNA 来实现功能D、在某些因素的作用下会形成能够致瘤的癌基因E、对正常细胞不仅无害,而且是细胞发育、组织再生、创伤愈合等所必需正确答案:C79.PCR-ASO 描述错误的是A、需要寡核苷酸探针B、检测点突变的技术C、PCR 产物必须电泳分离D、需正常和异常两种探针E、需严格控制杂交条件正确答案:C80.下列不是片段性突变引起原因的是A、基因重排B、碱基插入C、碱基缺失D、碱基扩增E、转录异常正确答案:E81.在核酸检测体系中加入内质控,其作用不是监控的是A、试剂失效或 Taq 酶活性降低所致的假阴性B、标本中抑制物或干扰物所致的假阴性C、样本吸取错误所致的假阴性D、仪器故障如扩增仪孔间温度差异所致的假阴性E、核酸提取效率太低所致的假阴性正确答案:C82.第一代 DNA 测序技术的核心技术是A、Sanger 的双脱氧链终止法B、Maxam 和 Gilbert 的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR 技术E、DNA 自动分析技术正确答案:A83.目前测序读长最大的测序反应:A、边合成边测序B、化学裂解法C、双脱氧终止法D、连接测序E、焦磷酸测序正确答案:C84.以下对镰刀状红细胞贫血症叙述正确的是 ( )A、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成缬氨酸残基B、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成苯丙氨酸残基C、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成丝氨酸残基D、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成异亮氨酸残基E、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成甘氨酸残基正确答案:A85.转录依赖扩增系统与其他 PCR 技术的区别是A、模板是 RNAB、模板是 DNAC、引物是 RNAD、模板和产物都是 RNAE、需要热循环正确答案:D86.HBV DNA 中最大的一个开放阅读框是A、P 基因区B、S 基因区C、X 基因区D、前 S1 基因区E、C 基因区正确答案:A87.HCV 的核酸是A、+ssRNAB、dsRNAC、dsDNAE、-ssRNA正确答案:A88.第二代测序技术一般不用到A、双脱氧链终止法B、文库接头C、高通量的并行 PCRD、高通量的并行测序反应E、高性能计算机对测序数据进行拼接和分析正确答案:A89.硝酸纤维素和PVDF 膜结合蛋白主要靠( )A、疏水作用B、氢键作用C、离子键作用D、盐键作用E、酯键作用正确答案:A90.关于梅毒螺旋体的实验室检测,下列描述正确的是A、分子生物学方法是耐药基因分析和流行学研究的首选方法B、镜检法简便,特异性高,但不能用于皮肤黏膜损害的早期诊断C、诊断梅毒的传统方法是体外培养D、血清学检查普遍用于梅毒的筛查、疗效观察和流行病学检查,对早期梅毒诊断敏感E、分子生物学方法不能早期诊断梅毒感染正确答案:A91.纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8,可使比值降低的是 ( ) :B、牛血清白蛋白C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案:A92.能发出γ-射线的放射性核素是A、3HB、14CC、32PD、35SE、125I正确答案:E93.定点诱发突变可以通过以下哪个过程获得:A、PCRB、LCRC、RT-PCRD、SSCPE、ASO正确答案:A94.在人类基因组中,编码序列占的比例为A、3%B、21%C、5%D、23%E、1.5%正确答案:E95.当标本核酸量非常低难以扩增时,可采用的 PCR 技术是A、逆转录 PCRB、转录介导扩增C、原位 PCRD、巢式 PCRE、荧光 PCR正确答案:D96.聚合酶链式反应是一种A、体外特异转录 RNA 的过程B、体外翻译蛋白质的过程C、体外特异转录 DNA 的过程D、体外特异复制 DNA 的过程E、体内特异复制 DNA 的过程正确答案:C97.下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争 PCRB、巢式 PCRC、多重 PCRD、普通 PCRE、PCR-RFLP正确答案:C98.唯一一个在结肠上皮增殖过程中起看门作用的基因是A、MCC 基因B、DCC 基因C、APC 基因D、p53 基因E、HNPCC 基因正确答案:C99.线粒体基因组与核基因组之间,下面描述不正确的是A、线粒体基因组与核基因组分别在不同的位置进行自主复制和转录,之间互不影响B、mtDNA 突变可引起编码蛋白功能障碍,影响细胞呼吸、氧化功能,进而影响核 DNA 的表达C、mtDNA 自主性复制,但复制所需的酶、调控因子等由核基因编码D、二者虽在地理位置上独立,但二者之间关系十分密切E、线粒体基因组与核基因组之间存在“交叉对话” ,相互影响,相互协调正确答案:A100.下列属于抑癌基因的是 ( )A、rasB、mycC、c-erb-2D、sisE、Rb正确答案:E。

分子生物名词解释

分子生物名词解释

名词解释1.个体化医学:是现代医学的核心目标,包含个体化诊断与个体化治疗两个部分,个体化诊断是个体化治疗的基础,个体化治疗是个体化诊断的目的。

2.分子生物标志物是生物标志物的一种类型,是指可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质(多肽)、代谢产物等生物分子。

3.基因组是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质,包括基因和非编码DNA。

更准确地讲,一个生物体的基因组是指一套染色体中的完整的DNA 序列。

4.单核苷酸多态性是人类可遗传的变异中最简单、最常见的一种,主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA 序列多态性,简写为SNPs。

5.mRNA 分子标志物可用于单基因遗传病和药物治疗以及药物治疗效果检测和食品安全领域检测。

mRNA 可以进入血液循环,血浆RNA 检测可用于肿瘤诊断和产前诊断。

检测技术包括Northern 印迹杂交、荧光定量PCR、基因芯片和RNA 测序等。

6.miRNA(microRNA)分子标志物不仅存在组织细胞中,还可以通过微小囊泡分泌到细胞外,进入血液中。

循环miRNA 已成为肿瘤等疾病的特异性分子标志物。

检测miRNA 最常用的技术包括荧光定量PCR。

7.lncRNA 分子标志物是指长度大于200bp 的非编码RNA,在生物标志物研究之中,lncRNA 正在成为焦点,尤其是作为肿瘤分子标志物。

8.分子生物标志物: 是生物标志物的一种类型,是指可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质(多肽)、代谢产物等生物分子。

9.DNA 甲基化:是指生物体在DNA 甲基转移酶的催化下,以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基转移到特定的碱基上的过程。

DNA 甲基化可以发生在腺嘌呤的N-6 位、胞嘧啶的N-4 位、鸟嘌呤的N-7 位或胞嘧啶的C-5 位等。

10.microRNA:是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20~25 个核苷酸,在细胞内主要发挥基因转录后水平调控作用。

临床分子生物学检验技术(潍坊医学院)知到章节答案智慧树2023年

临床分子生物学检验技术(潍坊医学院)知到章节答案智慧树2023年

临床分子生物学检验技术(潍坊医学院)知到章节测试答案智慧树2023年最新第一章测试1.分子生物学检验技术检测的标本包括人体各种组织、细胞、体液、分泌物等多种样本。

参考答案:对2.1958年,克里克提出了著名的分子生物学中心法则。

参考答案:对3.DNA“STR”分型技术已经在全世界法医鉴定中普及应用。

参考答案:对4.个体化医学的内涵包括:基于个体化基因精准检测的疾病风险评估、个体化医学诊断和个体化医学治疗。

参考答案:对5.分子生物学检验技术所涉及到的原理和方法多种多样,常见的有参考答案:分子杂交技术;生物芯片技术;基因测序技术;聚合酶链式反应6.分子生物学检验技术检测的靶标主要包括参考答案:蛋白质;DNA;RNA7.临床分子生物学检验技术广泛应用于参考答案:遗传性疾病的诊断和预防;亲子鉴定;肿瘤的临床诊断和治疗监测;感染性疾病的诊断和监测8.“临床分子生物学检验技术”是以分子生物学的原理和技术为基础,通过检测生物样本中DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的量变或质变,从而为疾病的预防、诊断、治疗、预后提供生物信息和诊疗依据的应用学科。

参考答案:对9.表观遗传学是指DNA序列在不发生改变的情况下,可以影响表型变化,并通过体细胞遗传的现象。

参考答案:对10.通过多种分子生物学技术建立起来的人类白细胞抗原基因分型技术,可以提高器官移植、受体之间的相容性匹配和移植物存活率。

参考答案:对第二章测试1.真核生物mRNA在成熟过程中切去的是参考答案:内含子2.构成核小体的组蛋白不包括参考答案:H53.与核DNA相比,mtDNA具有以下特点参考答案:母性遗传4.Alu家族属于参考答案:短散在核元件5.大肠杆菌类核结构的组成是参考答案:RNA+支架蛋白+双链DNA6.下述序列中,在双链状态下,属于完全回文结构的序列是参考答案:AGTCGACT7.下列哪种质粒带有抗性基因参考答案:R质粒8.病毒的遗传物质是参考答案:DNA或RNA9.下列哪一项不是蛋白质组的研究技术参考答案:RFLP10.下列关于双向凝胶电泳优点的说法,不正确的是参考答案:能够筛选出所有的蛋白第三章测试1.BLAST可以进行参考答案:序列比对分析2.仅仅进行核酸一核酸查询,一般使用的BLAST方式是参考答案:BLASTn3.在进行多序列对比的多序列联配比对时,常用的程序是参考答案:ClustalW4.HGP绘制的四项图谱包括参考答案:遗传图谱、物理图谱、序列图谱和基因图谱5.欧洲分子生物学网EMBnet的主要数据库检索工具是参考答案:SRS6.生物信息学的任务有哪些参考答案:数据库的建立、相关分析软件的开发和应用;蛋白质的序列、结构、功能、定位、分类;基因组及基因表达数据的分析和处理;新药研制;生物分子数据的获取、处理、贮存、传递、分析和解释7.PDB能够100%准确预测蛋白质空间立体结构参考答案:错8.蛋白质的基本性质分析包括参考答案:疏水性分析;分子量;氨基酸组成;跨膜区分析9.核酸序列的基本分析包括参考答案:分子量;限制性酶切分析;测序分析;碱基组成10.常见生物信息数据库的检索工具有参考答案:SRS;BDGET/LinkDB;Entrez第四章测试1.下列不属于分离纯化质粒 DNA 的方法参考答案:甲酰胺解聚法2.质粒DNA提取中,沉淀DNA的是参考答案:无水乙醇3.以下哪种方法不能抑制或灭活RNase活性参考答案:加入EDTA金属离子螯合剂4.波长260nm的紫外线下,A值等于1时的光密度大约相当于多少的双链DNA参考答案:50µg/ml5.下列关于紫外分光光度法用于核酸的纯度鉴定的说法正确的是参考答案:TE 缓冲液中,纯 DNA 的A260/A280比值为1.8,纯 RNA 的 A260/A280比值为 2.06.有关核酸的鉴定描述错误的是参考答案:纯 DNA 样品的 A260/A280为 2.07.以下属于DNA的保存的方法是参考答案:溶于 TE 缓冲液中在-70℃储存8.以下哪种方法不是DNA的适宜保存法参考答案:常温保存9.下列关于双向凝胶电泳技术的说法,正确的是参考答案:是蛋白质组学研究最重要的技术;包括等电聚焦电泳和SDS-PAGE;与质谱技术紧密结合使用10.用碱裂解法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为()。

第九章 细菌感染的分子生物学检验

第九章 细菌感染的分子生物学检验

TB具有合成所有必需氨基酸、维生素和酶辅助因 子的潜在能力。该菌具有代谢各种各样碳水化合 物、乙醇、酮和羧酸的能力。此外,还具有许多 涉及脂代谢、糖酵解、磷酸戊糖途径、三羧酸和 乙醛酸循环所必须的酶分子。 TB的培养特点:馋、懒、丑。 馋--营养要求较高,必须在含血清、卵黄、马铃薯、 甘油以及含某些无机盐类的特殊培养基(罗氏) 上才能生长良好。 懒--生长缓慢,14~18h分裂1次,在固体培养基 上2~5w才出现肉眼可见的菌落。 丑--典型菌落为粗糙型,表面干燥呈颗粒状,不透 明,乳白色或淡黄色,如菜花样。
(5)耐乙胺丁醇分子机制:耐乙胺丁醇主要与操纵子 cmbB基因有关, cmbB突变导致糖基转移酶结构,影响 乙胺丁醇和糖基转移酶的结合而产生耐药,其中第306 位密码子的错义突变最为常见。 (6)耐氟喹诺酮类药物分子机制:氟喹诺酮类药物主 要靶位是结核杆菌的DNA旋转酶,该酶由gyrA和gyrB两 种基因编码的两个A亚单位和两个β亚单位组成。 其中编码的gyrA基因发生突变则导致氟喹诺酮类药物结 合位点构象改变,从而产生耐药性。 突变大多数发生在gyrA基因保守区67~106位密码子区, 常见有94位GAC→GCC或CAC或TAC, 90位GCC→GTG的突变。
目前结核杆菌常规检测方法
痰涂片法阳性率低,且易受非结核杆菌的污染。 培养法目前认为是诊断的“金标准”但结核杆菌 生长缓慢,不利于临床上的及时诊断和治疗。 血清学试验由于分枝杆菌属各菌之间抗原有着广 泛的交叉,特异性不强。
一、结核分枝杆菌的基因组结构特征
TB H37Rv 全基因组为环状双链 DNA,长约4 411 529bp,共有 4000基因, G+C平均值65.6%, 其基因序列高度保守。 H37Rv 基因组中有50 个编码功能 RNA 的基因,其中 45 个 tRNA基 因,3 个 rRNA 基因和 2 个核稳定 (stable)RNA基因,这些 RNA 分子是由特异的核糖体RNA 操纵 子产生的。 在H37Rv 全基因组中有16个拷贝的IS6110插入序列和6个 拷贝的IS1018,大多数插入序列位于基因间或非编码区, 通常靠近tRNA基因聚集成串,插入序列在染色体中主要分 布在重复区。
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TB具有合成所有必需氨基酸、维生素和酶辅助因 子的潜在能力。该菌具有代谢各种各样碳水化合 物、乙醇、酮和羧酸的能力。此外,还具有许多 涉及脂代谢、糖酵解、磷酸戊糖途径、三羧酸和 乙醛酸循环所必须的酶分子。 TB的培养特点:馋、懒、丑。 馋--营养要求较高,必须在含血清、卵黄、马铃薯、 甘油以及含某些无机盐类的特殊培养基(罗氏) 上才能生长良好。 懒--生长缓慢,14~18h分裂1次,在固体培养基 上2~5w才出现肉眼可见的菌落。 丑--典型菌落为粗糙型,表面干燥呈颗粒状,不透 明,乳白色或淡黄色,如菜花样。
TB H37Rv 基因组中共有3924个开放阅读框,其 中91%有潜在的编码能力,ORF中最常见的起始 密码子61%为ATG,35%为GTG。
187个ORF参与脂类代谢、细胞壁合成, 360个参与细胞壁代谢, 66个参与脂类合成, 287个参与能量代谢, 95个参与氨基酸合成, 38个与细菌毒力相关, 69个参与DNA合成。
(2)耐异烟肼分子机制:结核杆菌耐异烟肼与过氧化氢 酶-过氧化物酶编码基因(katG)、烯酰基还原酶编码基因 (inhA)、烷基过氧化氢酶还原酶编码基因(ahpC)、β2S酮 酰基酰基运载蛋白合成酶编码基因(kasA)有关。 主要是katG基因的点突变、缺失、插入,完全缺失占异 烟肼耐药菌株的7%~24%,主要出现于高水平耐异烟肼 分离株中,随机突变占50%~70%,常见的点突变是315 位AGC→ACC和463位CGG→CTG。 inhA基因突变约占异烟肼临床耐药株的10%~35%。耐药 的发生可由于inhA结构基因突变造成异烟肼与DADH的亲 和力下降,或是inhA启动子-15的C→T的点突变可能创造 一个强有力的启动,使inhA蛋白过度表达从而提高对异 烟肼活性形式所需的浓度,引起对异烟肼耐药, inhA基 因的突变常出现低水平异烟肼耐药性。
所编码的蛋白约有40%的为功能性蛋白,44%的 与已知蛋白有相似性信息,16%的则为未知蛋白。 TB不同菌株之间存在多个差异基因。 基因组中有3个毒力因子:mce、过氧化氢酶-过 氧化物酶和sigA。除了这些单基因毒力因子,细 菌的胞壁也对致病性起着重要的作用。
二、结核分枝杆菌的分子生物学检验内容 (一)结核分枝杆菌核酸的检测
可采用PCR、real-time PCR、PCR-RFLP、线性探针杂 交、链替代扩增技术、扩增结核分枝杆菌直接试验、基 因芯片技术、全自动结核检测平台等方法检测标本中的 TB DNA。 1、 PCR PCR扩增所选靶序列主要有65kD抗原基因、 MPB蛋白基因、rRNA基因、TB IS6110插入序列、染色 体DNA的重复序列等。常规PCR的不足:产物的交叉污 染、假阳性、假阴性、实验室污染。 2、real-time PCR 与传统PCR相比,具有敏感度、特 异性高及方便快速等优点,特别是对难以培养与生长缓 慢的结核杆菌的检测更有优势。
TB是一种革兰氏阳性菌,G+C含量高,其细胞壁 除肽聚糖层外,还含有另外一层由特殊脂质、糖 脂和多糖组成的附加层。TB呈细长略弯曲,常聚 集成团,用抗酸性染色被染成红色。
对养要培求特殊条件,一 般要经4-6周才出现肉眼可 见的菌落。TB通过呼吸道、 消化道和破损的皮肤粘膜 侵入机体,它被吞噬后能 在吞噬细胞内繁殖,导致 巨噬细胞裂解,还可在细 胞外繁殖。
目前结核杆菌常规检测方法
痰涂片法阳性率低,且易受非结核杆菌的污染。 培养法目前认为是诊断的“金标准”但结核杆菌 生长缓慢,不利于临床上的及时诊断和治疗。 血清学试验由于分枝杆菌属各菌之间抗原有着广 泛的交叉,特异性不强。
一、结核分枝杆菌的基因组结构特征
TB H37Rv 全基因组为环状双链 DNA,长约4 411 529bp,共有 4000基因, G+C平均值65.6%, 其基因序列高度保守。 H37Rv 基因组中有50 个编码功能 RNA 的基因,其中 45 个 tRNA基 因,3 个 rRNA 基因和 2 个核稳定 (stable)RNA基因,这些 RNA 分子是由特异的核糖体RNA 操纵 子产生的。 在H37Rv 全基因组中有16个拷贝的IS6110插入序列和6个 拷贝的IS1018,大多数插入序列位于基因间或非编码区, 通常靠近tRNA基因聚集成串,插入序列在染色体中主要分 布在重复区。
一、细菌感染的一般性检出策略
细菌感染性的分子生物学检验的一般性检出就是以感 染病原体的特异核酸序列作为检测目标序列,利用分 子生物学技术对目标序列进行检测,从而直接判断有 无细菌感染和是何种病原体感染。 二、细菌感染的完整性检出策略 完整性检出策略,即不仅对病原体作出快速准确诊断, 还需要对其进行分型(包括亚型)和耐药性等方面的 检测,尽可能地为临床诊疗提供更为详尽的细菌病原 体的相关信息。
第一节 细菌感染的分子生物学检验策略
分子生物学检验是以核酸(DNA或RNA)或蛋 白质分子为检验目标,通过检查人体内源基因 或外源(病原体)基因的存在、缺陷或表达异 常,对人体状态或疾病作出特异性诊断的方法 和过程。
机体感染细菌后,应用分子生物学技术直带菌者或潜 在性感染,还可以对感染性病原体进行分型和 耐药性监测。
6、扩增结核分枝杆菌直接试验( AMTDT) AMTDT以结核分枝杆菌的16SrRNA为扩增模板,采 用转录介导的扩增技术对靶核酸进行扩增,采用化 学发光物吖啶酯标记的cDNA探针与扩增的靶基因杂 交,探针与扩增产物杂交后利用杂交保护试验除去 未杂交的标记探针,最后利用化学发光仪检测化学 发光信号。 AMTDT方法具有高度的敏感性特异性。对涂片阳性 TB诊断的敏感性达到92%~100%,对所有临床标本 检测的特异性均在95%以上,因此具有极大的临床 应用价值。
临床分子生物学检验
第九章
细菌感染的分子生物学检验
湖南省中医药大学生化与分子生物学教研室 Jake Li
细菌感染是致病菌或条件致病菌入侵机体,并在机体 中生长繁殖,产生毒素或其他代谢产物所引起的全身 性感染,临床上以寒战、高热、关节疼痛等为特征, 部分患者还可以出现烦躁、四肢厥冷、发绀、呼吸加 速、血压下降、感染性休克等临床症状。 传统上对于细菌感染的病原体检测主要采用免疫学、 微生物学和血液学等相关技术,但这些技术方法受灵 敏度和特异性的限制,不易达到早期诊断。 利用分子生物学技术检验感染性病原体自身遗传物质 (RNA或DNA),从而达到早期、快速、敏感、特异 地检测已经成为临床检验的主流技术之一。
5、链替代扩增技术 ( SDA) SDA是一种基于酶促反应的新的DNA体外等温扩增技术。 基本原理: 引物与靶DNA序列上对应的DNA单链杂交,在聚合酶作 用下产生带HincⅡ识别位点含5’和3’端的靶DNA序列, 该靶序列进入DSA循环;HincⅡ限制性核酸内切酶切割 识别位点,依赖DNA聚合酶在切割处延伸3’端,并替 代另一条DNA链;该替代链与引物杂交后又依次作为另 一扩增反应的靶源,这些步骤在反应体系中不断重复, 使靶DNA序列呈指数性增长;37℃ ~40℃进行23次循环 后,2h内靶序列可得到108扩增放大。 SDA法以IS6110和16SrRNA基因为扩增靶点。
7、基因芯片技术、
1999年 Troesch 等开发出首块结核病相关芯片,包括 两部分,一部分是在结核分枝杆菌有种间的多态性的 16SrRNA 基因片段,借以鉴别结核杆菌与非结核杆菌; 另一部分则用于分析耐利福平菌株rpoB基因突变的发 生情况,可用于结核分枝杆菌对利福平耐药性的快速 检测。 8、GeneXpert全自动结核检测平台 将样品前处理、核酸提取、PCR检测和结果分析等全 过程结合在一起,最大程度上提高检测自动化和灵敏 度。XpertMTB/RIF,通过六重荧光定量PCR对结核分 枝杆菌和利福平耐药性进行快速检测。
(3)耐氨基糖苷类药物分子机制:耐链霉菌的结核杆菌 主要由于编码核算糖体16S rRNA的rrs基因与编码核糖体 蛋白S12的rpsL基因发生突变,从而降低了氨基糖苷类药 物结合到核糖体上的能力,形成耐药。 rpsL基因中编码第43位氨基酸的碱基A→G的突变是常见 的突变位点出。Rrs基因突变点为512、513位的碱基插 入,这些碱基突变均可导致高水平的耐药。 (4)耐吡嗪酰胺分子机制:吡嗪酰胺需经结核分枝杆菌 体内的吡嗪酰胺酶催化才能转变成具有活性的吡嗪酸。 耐吡嗪酰胺主要由 pncA 基因突变所造成的吡嗪酰酶的 蛋白结构改变,失去了将吡嗪酰胺转换成活性形式的能 力,形成耐药。
第二节 结核分枝杆菌的分子生物学检验
结核分枝杆菌(TB),简称结核杆菌,是引起结核 病的病原体。随着抗结核药物的不断发展和卫生 生活状况的改善,结核的发病率和死亡率曾一度 大幅下降。近年,由于艾滋病和结核分枝杆菌耐 药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困 及人口广泛流动等因素,全球范围内结核病的疫 情死灰复燃。 据WHO统计,全世界约1/3的人感染了结核分枝 杆菌,在某些发展中国家成年人中群中结核分枝 杆菌携带率高达80%,其中的5%~10%携带者可 发展为活动性结核病。
(二)结核分枝杆菌的耐药性检测
结核分枝杆菌耐药的分子机制是由于结核杆菌的特定基 因某些碱基出现突变(插入、缺失、替换)而造成。 1、结核分枝杆菌的耐药机制 (1)耐利福平分子机制:是由于其作用靶标—结核杆菌 DNA依赖RNA聚合酶β亚单位的编码基因(rpoB)突变 所致。 当rpoB中507~533位密码子的核心区域—耐利福平决定 区(RRDR)发生突变时,使DNA依赖RNA聚合酶β亚单位 酶结构改变利福平不能与细菌的RNA聚合酶β亚单位结 合而表现为耐药。 其中以编码531位氨基酸的碱基TCG→TTG和编码526位 氨基酸的碱基CAC→TAC的突变最常见。
2、结核分枝杆菌耐药性检测的分子生物学技术 (1)DNA测序:该技术是检测基因突变的金标 准,不仅可用于突变的筛选,而且能确定突变碱 基的部位和分布。 (2)PCR-SSCP (3)PCR-RFLP (4)PCR-ROB (5)基因芯片技术
三、分子生物学检验的临床意义 传统的结核病的临床诊断主要是根据病史、细 菌培养、涂片抗酸染色找TB、免疫学方法检测 TB抗原或抗体、胸片等可对大多数患者做出正 确的临床诊断,但对部分病人可造成误诊或漏 诊。分子生物学方法为TB的临床诊断提供了一 种快速、准确的诊断方法,具有以下特点:
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