肿瘤细胞培养和杂交瘤技术优秀课件
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肿瘤细胞培养(教学课件)
原代培养方法有组织块法、消化培养法、器官培养法等。最基本和最常用 的是组织块法和消化培养法。
肿瘤个人精准医疗
二、肿瘤细胞的培养
1、原代培养
组织块培养法是一种简便易行且成功率较高的常用原代培养方法。即将 组织剪切成小块后，接种于培养瓶。培养瓶可根据不同细胞生长的需要 作适当处理。例如预先涂以胶原薄层，以利于上皮样细胞等的生长，涂 以多聚赖氨酸培养需旺细胞等，适用于组织量少的原代培养。
肿瘤个人精准医疗
二、肿瘤细胞的培养
2、传代培养
肿瘤细胞的传代是人们利用培养肿瘤细胞作为进一步研究的靶材料。细胞 性状的好坏直接影响研究的结果。常见肿瘤细胞的传代多指细胞系的传代， 大致分为两种：一种是贴壁型细胞传代；另一种是悬浮型细胞传代。
注意事项：1、细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前（80%）， 不要急于传代。
3、运输
在购买和交换培养细胞时，需根据保存方式和运输时间，采用适当的运输方法。 1、充液法运输：选生长良好的细胞，待接近或刚刚连接成片后，去掉培养 液，加入新鲜培养液至培养瓶颈部(保留少量空气)，拧紧 瓶盖，然后用封口膜将瓶口密封。到达目的地后，弃去多 余培养液，置37℃培养，次日传代。 2、冰瓶运输：在较短时间内运输细胞，可将未冷冻的细胞悬液放入装有碎 冰的冰瓶内，以保持细胞活力。 3、液氮罐运输：细胞冻存后，将有细胞的冻存管放人液氮罐内进行运输。 在液氮罐搬运过程中，要防止液氮外漏。
步骤：1、制备1.2%和0.7%浓度的琼脂糖溶液，灭菌备用。 2、制备20%FBS+2x1640+2xPS营养液。 3、铺下胶：1:1混合1.2%与营养液，混匀，凝固，备用。 4、铺上胶：1:1混合0.7%与营养液，加入细胞悬液， 混匀铺到下胶上，凝固后培养箱培养，10-14d。
肿瘤个人精准医疗
二、肿瘤细胞的培养
1、原代培养
组织块培养法是一种简便易行且成功率较高的常用原代培养方法。即将 组织剪切成小块后，接种于培养瓶。培养瓶可根据不同细胞生长的需要 作适当处理。例如预先涂以胶原薄层，以利于上皮样细胞等的生长，涂 以多聚赖氨酸培养需旺细胞等，适用于组织量少的原代培养。
肿瘤个人精准医疗
二、肿瘤细胞的培养
2、传代培养
肿瘤细胞的传代是人们利用培养肿瘤细胞作为进一步研究的靶材料。细胞 性状的好坏直接影响研究的结果。常见肿瘤细胞的传代多指细胞系的传代， 大致分为两种：一种是贴壁型细胞传代；另一种是悬浮型细胞传代。
注意事项：1、细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前（80%）， 不要急于传代。
3、运输
在购买和交换培养细胞时，需根据保存方式和运输时间，采用适当的运输方法。 1、充液法运输：选生长良好的细胞，待接近或刚刚连接成片后，去掉培养 液，加入新鲜培养液至培养瓶颈部(保留少量空气)，拧紧 瓶盖，然后用封口膜将瓶口密封。到达目的地后，弃去多 余培养液，置37℃培养，次日传代。 2、冰瓶运输：在较短时间内运输细胞，可将未冷冻的细胞悬液放入装有碎 冰的冰瓶内，以保持细胞活力。 3、液氮罐运输：细胞冻存后，将有细胞的冻存管放人液氮罐内进行运输。 在液氮罐搬运过程中，要防止液氮外漏。
步骤：1、制备1.2%和0.7%浓度的琼脂糖溶液，灭菌备用。 2、制备20%FBS+2x1640+2xPS营养液。 3、铺下胶：1:1混合1.2%与营养液，混匀，凝固，备用。 4、铺上胶：1:1混合0.7%与营养液，加入细胞悬液， 混匀铺到下胶上，凝固后培养箱培养，10-14d。
杂交瘤技术和单克隆抗体技术PPT课件模板
制备单克隆抗体
从筛选得到的杂交瘤 细胞中提取单克隆抗 体，进行纯化和定量 。
应用单克隆抗体
将单克隆抗体应用于 临床诊断、治疗和基 础研究等领域。
单克隆抗体技术的实验操作流程
免疫原制备
制备免疫原，如抗原蛋白或多糖等，并进行 纯化和定量。
免疫动物
将免疫原注射入动物体内，刺激机体产生特异 性抗体。
制备杂交瘤细胞
杂交瘤技术和单克隆
抗体技术ppt课件模
板
汇报人：可编辑
2024-01-11
目录
• 杂交瘤技术简介 • 单克隆抗体技术简介 • 杂交瘤技术与单克隆抗体技术的比
较 • 杂交瘤技术与单克隆抗体技术的实
验操作流程 • 杂交瘤技术与单克隆抗体技术的应
用案例
01
杂交瘤技术简介
杂交瘤技术的定义
杂交瘤技术是一种将免疫系统的B淋巴细胞与骨髓瘤细 胞融合，形成杂交瘤细胞的技术。
单克隆抗体的应用领域
01 肿瘤诊断与治疗
用于肿瘤的早期诊断、靶 向治疗、免疫治疗等。
03
免疫性疾病。
02 感染性疾病
用于诊断和治疗病毒性肝 炎、艾滋病等感染性疾病 。
04 心血管疾病
用于诊断和治疗冠心病、
心肌梗死等心血管疾病。
杂交瘤技术与单克隆抗体技
杂交瘤技术与单克隆抗体技
04
术的实验操作流程
杂交瘤技术的实验操作流程
准备免疫动物
选择适宜的免疫动物 ，如小鼠或大鼠，并 进行免疫接种，刺激 机体产生特异性抗体 。
制备杂交瘤细胞
将免疫动物的脾细胞 与肿瘤细胞融合，形 成杂交瘤细胞。
克隆化筛选
通过选择性培养基筛 选出能够产生所需抗 体的杂交瘤细胞，并 进行克隆化培养。
第十一章动物细胞融合和杂交瘤技术 演示文稿ppt课件
• 单克隆抗体（McAb）的应用：
• 主要用于疾病的诊断、治疗和预防。 • 如各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌及血 吸虫等数百种疾病的诊断。 • 在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士，能 识别“自己”与“异己”，一旦发现致病因素便 与之结合将其杀死。若在单抗上带上抗癌药物制 成“生物导弹”，将药物定向带到癌细胞所在部 位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞。 • 与常规抗体相比，具有特异性强、灵敏度高的优 点。
2、聚乙二醇诱导融合
•
继高国楠(Kao) 用PEG成功诱导植物原生
质体融合后，1975年，Potecrvo用该法成功
融合动物细胞。该法以其特有的优势迅速取代
病毒诱导动物细胞融合。
3、电诱导融合
• 同植物原生质体融合
聚乙二醇（PEG）法细胞融合步骤
（1）将两种不同亲本细胞各5×l06混匀； （2）离心沉淀，吸去上清液； （3）加1ml 50％PEG溶液，用吸管吹打，使之与细胞接触1
一、动物细胞融合技术
•Cienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在无 脊椎动中发现了细胞合并现象。 •1958年日本学者冈田（Okada）发现仙台病毒具有触 发动物细胞融合的效应。 •1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG） 化学融合法。
•1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细 胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤 细胞。 •20世纪80年代出现了电融合技术。
细胞膜上，并使两细胞相互凝聚； ②在37℃中，病毒与细胞膜发生反应，细胞膜受到破环，此 时需要Ca2+和Mg2+，最适PH为8.0一8.2； ③细胞膜连接部穿通，周边连接部修复，此时需Ca2+和ATP；
xb六、细胞融合与杂交瘤技术PPT课件
的制备 • 杂交瘤细胞的筛选：有限稀
释法等 • 单克隆抗体的制备和冻存 • 单克隆抗体的纯化
60
1.亲本细胞的选择
个或多个相同或不同细胞通
过膜融合形成单个细胞的过
程。
4
5
2.发生：
自然界存在很多细胞融合现象，如：
受精、成肌细胞融合，但频率低； 细胞内吞与外排也属细胞膜融合现象； 细胞内膜系统物质运输过程等。
6
3.细胞融合研究进展
Muller于1838年观察到脊椎动物的肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核 的肿瘤细胞。 Virchow于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞 现象。 Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。 Lange于1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过 程。 Cienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在无脊椎动中发现了细 胞合并现象。 1958年日本学者冈田善雄发现仙台病毒具有触发动物细胞融合的效应。 1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学融合法。 1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产 生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。 20世纪80年代出现了电融合技术。
7
几种细胞融合成功的例子
生物种类
细胞来源
烟草两个种间
苷蓝——青菜 大豆——马唐草 矮牵牛——龙面花
大麦——花生 大麦——大豆 小麦——矮牵牛 油菜——大豆 玉米——大豆 大豆——野豌豆 大麦——蚕豆 大豆——草香木犀 酵母菌——鸡 大豆——烟草 大豆——秋水仙 人——胡萝卜 番茄——马铃薯 人——小鼠
52
●杂交瘤技术（hydridoma technique，也称MAb制备技术）
释法等 • 单克隆抗体的制备和冻存 • 单克隆抗体的纯化
60
1.亲本细胞的选择
个或多个相同或不同细胞通
过膜融合形成单个细胞的过
程。
4
5
2.发生：
自然界存在很多细胞融合现象，如：
受精、成肌细胞融合，但频率低； 细胞内吞与外排也属细胞膜融合现象； 细胞内膜系统物质运输过程等。
6
3.细胞融合研究进展
Muller于1838年观察到脊椎动物的肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核 的肿瘤细胞。 Virchow于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞 现象。 Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。 Lange于1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过 程。 Cienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在无脊椎动中发现了细 胞合并现象。 1958年日本学者冈田善雄发现仙台病毒具有触发动物细胞融合的效应。 1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学融合法。 1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产 生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。 20世纪80年代出现了电融合技术。
7
几种细胞融合成功的例子
生物种类
细胞来源
烟草两个种间
苷蓝——青菜 大豆——马唐草 矮牵牛——龙面花
大麦——花生 大麦——大豆 小麦——矮牵牛 油菜——大豆 玉米——大豆 大豆——野豌豆 大麦——蚕豆 大豆——草香木犀 酵母菌——鸡 大豆——烟草 大豆——秋水仙 人——胡萝卜 番茄——马铃薯 人——小鼠
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●杂交瘤技术（hydridoma technique，也称MAb制备技术）
第四章 单克隆抗体杂交瘤技术课件
ห้องสมุดไป่ตู้
抗原决定簇 Antigenic determinant
图4-5 抗原决定簇 Fig. Antigenic determinant
•Antigenic determinant
是决定抗原性的特 殊化学基团。 •抗原分子越大，决 定簇的数目越多。 •如白喉类毒素有8 个抗原决定簇，流 感病毒有40多个抗 原决定簇。
体液免疫humoralimmunity细胞免疫cellularimmunity作用对象清除游离在寄主细胞外的抗原及其产生的有毒物质摧毁侵入到寄主细胞内的病毒胞内寄生菌或外来的组织团块癌变的细胞等作用方式通过效应b细胞浆细胞分泌抗体并与抗原发生特异性结合来清除抗原通过效应t细胞杀伤t细胞分泌穿孔素perforin使靶细胞溶解死亡2体液免疫与细胞免疫的区别与关系体液免疫与细胞免疫的区别鼻粘膜细胞上有很多微细绒毛因此大大增大了药物吸收的有效面积粘膜细胞下有着丰富的血管和淋巴管药物通过粘膜吸收后可以直接进入体循环减少了药物发挥功效的时间
由于一个抗原有多各决定簇，所以用抗原免疫 动物后获得的免疫血清均为多克隆抗体。
有时抗原上某些决定簇是很强的免疫反应触发 剂，使同一抗原上其他决定簇可能引发更强的 免疫反应，所以每次制备的多克隆抗体效价各 不相同;
前一次制备的多克隆抗体对某一决定簇的抗体 含量高，下次制备的真对该决定簇的抗体又可 能较低。
McAb具专一性、誉为 “生物导弹”。
McAb--顾名思义与“多克隆抗体”相对而 言.
多克隆抗体（polyclonal antibody）:由同一 抗原诱导而产生的针对多个不同抗原决定 簇的抗体即称为多克隆抗体。
动物机体一生会接触到许多种抗原物质， 同时一个抗原分子表面也会有几个抗原决 定簇。每一个抗原决定簇都会使机体产生 一种特异性的抗体。
抗原决定簇 Antigenic determinant
图4-5 抗原决定簇 Fig. Antigenic determinant
•Antigenic determinant
是决定抗原性的特 殊化学基团。 •抗原分子越大，决 定簇的数目越多。 •如白喉类毒素有8 个抗原决定簇，流 感病毒有40多个抗 原决定簇。
体液免疫humoralimmunity细胞免疫cellularimmunity作用对象清除游离在寄主细胞外的抗原及其产生的有毒物质摧毁侵入到寄主细胞内的病毒胞内寄生菌或外来的组织团块癌变的细胞等作用方式通过效应b细胞浆细胞分泌抗体并与抗原发生特异性结合来清除抗原通过效应t细胞杀伤t细胞分泌穿孔素perforin使靶细胞溶解死亡2体液免疫与细胞免疫的区别与关系体液免疫与细胞免疫的区别鼻粘膜细胞上有很多微细绒毛因此大大增大了药物吸收的有效面积粘膜细胞下有着丰富的血管和淋巴管药物通过粘膜吸收后可以直接进入体循环减少了药物发挥功效的时间
由于一个抗原有多各决定簇，所以用抗原免疫 动物后获得的免疫血清均为多克隆抗体。
有时抗原上某些决定簇是很强的免疫反应触发 剂，使同一抗原上其他决定簇可能引发更强的 免疫反应，所以每次制备的多克隆抗体效价各 不相同;
前一次制备的多克隆抗体对某一决定簇的抗体 含量高，下次制备的真对该决定簇的抗体又可 能较低。
McAb具专一性、誉为 “生物导弹”。
McAb--顾名思义与“多克隆抗体”相对而 言.
多克隆抗体（polyclonal antibody）:由同一 抗原诱导而产生的针对多个不同抗原决定 簇的抗体即称为多克隆抗体。
动物机体一生会接触到许多种抗原物质， 同时一个抗原分子表面也会有几个抗原决 定簇。每一个抗原决定簇都会使机体产生 一种特异性的抗体。
筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选培训课件
膜上蛋白质分子和 脂质分子重新排布
细胞发生融合
6、优点：
突破了有性杂交的局限， 使远缘杂交成为可能
7、应用： 用于研究细胞遗传、细胞免
疫、肿瘤和生物新品种培养等的重 要手段。
最重要的用途：制备单克隆 抗体
问题讨论
１、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个 体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？
物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。
2、缺点： 产量少、纯度低、特异性差
.
.
3、解决问题的设想: 免疫反应过程中，每一个B淋巴
细胞只分泌一种特异性抗体。 克隆单一的B淋巴细胞，形成细
胞群，获得大量的单一抗体。
4、面临的新问题： 一个B淋巴细胞不可能在体外培养
条件下无限增殖的。
.
.
问题讨论
1、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
bdc
(1)图中的甲为苏格兰绵羊， e
乙为多莉羊。那么，a和b
是通过_______减分数裂形成的， 其DNA含量是体细胞的
甲
_______ 一；半c肯定是__ 细
体胞，乙的遗传性状与提供
_________细__胞的核绵羊 一致.
f 乙
(是2)有产—性生—生—甲殖—和—乙和的—过克—程隆—分—别 a
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合
物理（离心、振 物理、化学方法
荡、电激）
（同左）
化学（聚乙二醇）灭活的病毒
获得杂种植株 主要用于制备
单克隆抗体
二、单克隆抗体
？ 1.抗体是由何种细胞产生的？ 2.2.抗体是如何产生的？
（一）获得抗体的传统方法
1、方法： 向动物体内反复注射某种抗原，使动
动物细胞工程第三节 肿瘤细胞的培养课件高中生物竞赛
22
4.软琼脂培养： 癌细胞在低密度下仍具有高度存活率，并在软琼 脂中形成集落。
5.细胞核型分析： 检测核型特点，染色体数量，有无标记染色体， 染色体带型等，癌细胞大多为异倍体，多倍体， 并有标记染色体。
23
6. 动物致瘤试验：裸鼠背部皮下接种1×109~ 2×109/L癌细胞能生长形成实体瘤，其组织学形 态与原发瘤相似。
呈异倍体或多倍体，常有非整倍染色体出现。
13
区别正常成纤维细胞与恶性肿瘤细胞的常用指标
14
15
续表3
16
二、培养肿瘤细胞的生物学特性的检测
体外培养的肿瘤细胞一旦建立细胞系就需要进行一系列的 细胞生物学特性鉴定。 目的在于：①证明培养的细胞是否来自原来的肿瘤细胞。
②说明肿瘤组织类型。 ③描述肿瘤细胞的生物学特性。
第三节 肿瘤细胞的培养
1
应用细胞培养进行肿瘤研究优点如下:
①可免受机体内环境因素的影响，避免了个体差异性，便于探 索各种物理、化学和生物因素对肿瘤细胞生命活动的影响。
②既便于从细胞水平上研究肿瘤细胞的结构与功能，又便于从 基因及分子水平上研究癌变的发生机理。
③可长期传代、保存，便于观察肿瘤细胞生物学特性和遗传行 为的改变。
内置杯 单层细胞
通透膜
上室 下室
10
11
5．异质性
肿瘤细胞都是由增殖能力、遗传性、 起源、周期状态等性状不同的细胞组成，属 于异质性，其中有的衰老、退化，有的处于 周期阻滞状态，只有那些处于活跃增殖的肿 瘤干细胞才是支持肿瘤生长的成分，肿瘤干 细胞易于生长增殖。
12
6．细胞遗传性 体外培养的肿瘤细胞失去了二倍体核型，
与肿瘤细胞具有不定向运动和粘附不依赖性有关。
4.软琼脂培养： 癌细胞在低密度下仍具有高度存活率，并在软琼 脂中形成集落。
5.细胞核型分析： 检测核型特点，染色体数量，有无标记染色体， 染色体带型等，癌细胞大多为异倍体，多倍体， 并有标记染色体。
23
6. 动物致瘤试验：裸鼠背部皮下接种1×109~ 2×109/L癌细胞能生长形成实体瘤，其组织学形 态与原发瘤相似。
呈异倍体或多倍体，常有非整倍染色体出现。
13
区别正常成纤维细胞与恶性肿瘤细胞的常用指标
14
15
续表3
16
二、培养肿瘤细胞的生物学特性的检测
体外培养的肿瘤细胞一旦建立细胞系就需要进行一系列的 细胞生物学特性鉴定。 目的在于：①证明培养的细胞是否来自原来的肿瘤细胞。
②说明肿瘤组织类型。 ③描述肿瘤细胞的生物学特性。
第三节 肿瘤细胞的培养
1
应用细胞培养进行肿瘤研究优点如下:
①可免受机体内环境因素的影响，避免了个体差异性，便于探 索各种物理、化学和生物因素对肿瘤细胞生命活动的影响。
②既便于从细胞水平上研究肿瘤细胞的结构与功能，又便于从 基因及分子水平上研究癌变的发生机理。
③可长期传代、保存，便于观察肿瘤细胞生物学特性和遗传行 为的改变。
内置杯 单层细胞
通透膜
上室 下室
10
11
5．异质性
肿瘤细胞都是由增殖能力、遗传性、 起源、周期状态等性状不同的细胞组成，属 于异质性，其中有的衰老、退化，有的处于 周期阻滞状态，只有那些处于活跃增殖的肿 瘤干细胞才是支持肿瘤生长的成分，肿瘤干 细胞易于生长增殖。
12
6．细胞遗传性 体外培养的肿瘤细胞失去了二倍体核型，
与肿瘤细胞具有不定向运动和粘附不依赖性有关。
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癌细胞来源于体内正常上皮细胞。癌细胞在 体内或体外一样具有无控制生长和分化不全
的特点，因此比正常细胞容易培养建细胞系。 如20世纪50年代，国外建立了宫颈癌的Hela 细胞系。
癌细胞的增殖是按指数方式生长的，自一个癌 细胞增殖到能触及的程度要经过30代（109， 1cm3, 1g）。这样1cm3大小的肿块再经过10 代（ 1012 ，10 cm3，1Kg）。这样的大小和
阿糖胞嘧啶，选择性地抑制核苷二磷酸还原 酶，阻断核苷酸变为脱氧核苷酸，从而抑制 DNA合成，是DNA合成抑制剂，属于S期特 异性药物。
秋水仙素能与微管蛋白强烈结合，引起 微管解体，纺锤体破坏，结果染色体的 移动被阻断，细胞分裂停留在中期，它 是属于M期的特异性药物。
通过体外细胞培养观察抗癌药物对细胞 周期作用点将常用的抗癌药物的细胞周 期分类。
②暂不增殖细胞群（B），它是延长了G1细 胞或G0细胞，目前不参加细胞周期，与肿瘤 的扩大暂时无关，由于它保留着增殖的能力， 在一定条件下成为肿瘤复发根Байду номын сангаас。
③不再增殖群（C），它不再参与细胞周期， 而日趋衰老，死亡，对肿瘤增长无意义。肿 瘤的增长情况取决于3种细胞群的比例，肿瘤 增殖率（growth factor GF）可由下列关系来 决定：GF=A／A+B+C。A群细胞越多， B、 C群细胞越少，肿瘤恶性程度越高。
体内细胞处于不同状态，大概分成三种命运: ① 中 骨继不髓同干续时细增期胞殖（，细胃S胞、肠，G上不2皮断、M中离）的开完基G成1底期细细通胞胞过分等细裂，胞，周如期
②不增殖细胞，这类细胞在分裂完成后，暂处 于 分G裂1期期，，如正肝常细情胞况，下只不有合受成损DN或A切，除不时进肝入细细胞胞 再分裂增殖。哺乳动物的初级卵细胞也属于此 类。
由于临床试验中没有同时对所有乳腺癌患者进行 试验，而是选择了其中的一小部分（大约占25℅） 的那些HER-2含量异常高的晚期乳腺癌患者。
当前较有前景的靶向治疗
①现在发展的基因工程腺病毒（ONYX015）因删除了E1B 55KD蛋白而可以选 择性的溶解P53突变或缺失的肿瘤细胞， 此类肿瘤细胞占50℅，也就是腺病毒 ONYX-015可达到50℅的靶向治疗药物的 效果，目前已在头颈部肿瘤中进行Ⅱ期 临床试验。
当前较有前景的靶向治疗
数十年来医生们除用手术外只能用放疗 和化学疗法来治疗癌症，这些疗法毫无 分别地同时杀死健康细胞和癌细胞，直 到人类基因组图谱的解密，我们才迎来 了适用少数病人的靶向性治疗新时代， 医生们首先分析病人肿瘤中的DNA（基 因），再开出靶向性复合药物的药方， 专门攻击肿瘤细胞发生缺陷的基因，达 到治疗癌症的目的。
肿瘤细胞培养和杂交瘤技术
一、肿瘤细胞体外培养的重要性
恶性肿瘤细胞培养建立细胞系，包括癌细胞 系和转化细胞系。转化细胞系可以是恶性转 化细胞和一般转化细胞两种。
恶性转化细胞系和癌细胞系一样具有永久性 生长能力和恶性表型，对此二种来源的细胞 系鉴定也是相似的，为研究恶性肿瘤提供了 有用模型。而一般转化细胞系只具有无限生 长能力，不具有恶性细胞的表型，此种细胞 系可相似于正常细胞的模型而被应用。
常应用体外肿瘤细胞培养，模拟体内环境或确定 单因素多因素研究肿瘤细胞发生发展结局。观察
抗癌药物对细胞周期作用点的影响也常应用肿瘤
细胞体外培养。若能确定肿瘤细胞各周期时间， 选择各期针对性药物进行治疗，则可以提高疗效。
放线菌素D作用于G1期抑制DNA聚合酶合成， 作用于S后期与G2期抑制rRNA并影响cAMP 水平。放线菌素D不影响非分裂期细胞，因 而放线菌素D是一种细胞周期特异性药物。
癌细胞的迅速增殖扩散受机体内环境中多种因
素的影响如各种生长因子、抑素、激素、多胺、 基因调节包括细胞周期基因和癌基因、cAMP 和cGMP浓度（前者对细胞增殖负调节，而后 者为相反）。
正常细胞周期的G1期有一个特殊的调节点—R点， 在生长条件不适宜情况下，细胞不能通过调节点而 不增殖，细胞通过G1期进入M期前受一种不稳定蛋 白质调节通过R点启动DNA的合成，例如抑癌基因 P53最重要的生物学功能就是通过调控细胞周期监测 点来维持基因组的稳定性，当细胞DNA受损时，P53 诱导细胞周期终止或凋亡，而P53突变或缺失使P53 功能失活则导致基因组紊乱，产生细胞转化。
肿瘤对化疗和放疗抗性的一种机制是由 于P53突变或P53的缺失，人类癌50 % P53 突变
Non small cell lung
60 %
Colon
50 %
Breast
40 %
Head and neck
60 %
Ovarian
60 %
②制备单克隆抗体，主要是靶向表皮生长因子 EGF受体EGFR和HER-2。80年代研究人员发现，
重量时足以致病人于死亡。经治疗后如细胞数 从1012减少至1010，重约10g时可称显效或部 分缓解；若肿瘤细胞数减少到108或106，重约 100mg至10mg时，可认为临床治愈或完全缓
解，但仍有可能复发。要根治肿瘤细胞，必须
彻底消灭所有癌细胞。外科手术切除大量肿瘤 细胞，但转移癌细胞仍有复发的危险。
在人类的脑部、肺部和胰腺等部位的肿瘤中 EGFR的含量极高，Artrazeneca公司的研究人员 于1998年率先提出通过开发阻断EGFR的药物，
可以抑制肿瘤的生长，这种全新的疗法就是现在
的靶向性疗法，它没有毒副作用，不会杀死正常
细胞，按照这种思路，基因技术公司开发出一种 治疗晚期乳腺癌的药物Herceptin，并于1998年 获准上市。Herceptin是一种单克隆抗体药物，靶 向HER-2，这种药物能使只有5个月寿命的晚期 乳腺癌病人继续生存。为什么Herceptin成功获准，
③不增殖细胞，这类细胞由R点走向分化细胞， 并执行专门功能的细胞（称终末细胞）如神经 细胞、哺乳动物成熟的红细胞、皮肤上皮的角 质细胞、多性核粒细胞。
肿瘤和正常的组织同样在体内也具有三 种不同的细胞群：
①增殖细胞群（A）：是肿瘤中处于增殖周期的细 胞，与肿瘤生长直接有关，亦是化学疗法最易攻击 的部分。