生物素化抗体使用说明
生物素标记抗体的原理应用
生物素标记抗体的原理应用引言生物素标记抗体是一种常用于生物学实验和生物化学研究的工具。
它可以通过结合生物素和抗体来标记目标蛋白，从而实现对目标蛋白的检测和定位。
本文将介绍生物素标记抗体的原理和常见的应用。
生物素标记抗体的原理生物素标记抗体是通过将生物素分子与抗体共价结合来实现标记的。
生物素是一种天然存在于生物体中的小分子，其与生物素受体（如亲和素或亲和力很强的亲和素结合蛋白）之间具有高度的亲和力。
生物素标记抗体的原理基于生物素与生物素受体之间的高亲和力，通过标记抗体即可实现对目标蛋白的检测和定位。
生物素标记抗体的应用生物素标记抗体在生物学实验和生物化学研究中有着广泛的应用。
下面列举了一些常见的应用：1.免疫组化生物素标记抗体可以用于免疫组化实验中的抗原检测和定位。
通过将生物素标记的抗体与目标抗原结合，再将其与亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物结合，可以实现对抗原的检测和可视化。
2.流式细胞术生物素标记抗体可以在流式细胞术中用于细胞表面标记。
通过将生物素标记的抗体与目标细胞结合，再与荧光素-生物素-蛋白（如荧光素结合蛋白）复合物结合，可以实现对目标细胞的检测和定位。
3.免疫沉淀生物素标记抗体在免疫沉淀实验中广泛应用。
通过将生物素标记的抗体与目标蛋白结合，再与琼脂糖颗粒（如琼脂糖颗粒A/G）结合，可以实现对目标蛋白的沉淀和富集。
4.西方印迹生物素标记抗体在西方印迹实验中也起着重要的作用。
通过将生物素标记的抗体与目标蛋白结合，再与亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物结合，可以实现对目标蛋白的检测和定量。
结论生物素标记抗体是一种常用的生物学实验和生物化学研究工具，其原理基于生物素与生物素受体之间的高亲和力。
通过将生物素标记抗体与目标蛋白结合，可以实现对目标蛋白的检测和定位。
生物素标记抗体在免疫组化、流式细胞术、免疫沉淀和西方印迹等实验中有着广泛的应用。
在将来的研究中，生物素标记抗体将继续发挥重要的作用，并为研究人员提供更多的实验选择和研究手段。
CA15-3II中文说明书
664中文 – 2001- 07 –03045838 １００ 人份2176718001 01 02用途：用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的ＣＡ１５－３ＩＩ。
辅助乳腺癌病人的治疗监测。
与其它临床和诊断措施相结合，ＣＡ１５－３ＩＩ系列动态测定有助于ＩＩ期和ＩＩＩ期乳腺癌病人治疗后再复发的早期发现；监测乳腺癌转移病人对治疗的反应性。
电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Ｅｌｅｃｓｙｓ１０１０、２０１０和Ｅ１７０免疫测定分析仪。
概述：ＣＡ１５－３测定值由夹心法中所用的二种单克隆抗体（ＭＡｂ）１１５Ｄ８和ＤＦ３决定。
１１５Ｄ８特异性针对人乳脂球膜，而ＤＦ３特异性针对人转移性乳腺癌的膜提取成份。
能与１１５Ｄ８和ＤＦ３反应的决定簇存在于一种称为ＭＡＭ－６的糖蛋白分子上，该种抗原属于唾液酸化的糖蛋白亚类，又称多态性上皮粘蛋白（ＰＥＭ）。
正常情况下，ＰＥＭ只存在于腺体细胞腔的分泌物中，不出现在血循环中。
当细胞恶变时，基底细胞膜渗透性增强，ＰＥＭ可在血清中由ＣＡ１５－３方法检测出来。
原理：采用双抗体夹心法原理，整个过程１８分钟完成。
· 第１步：２０ｍｌ预先用Ｅｌｅｃｓｙｓ通用稀释液作１：１０稀释的标本、生物素化的抗ＣＡ１５－３单克隆抗体和钌（Ｒｕ）标记的抗ＣＡ１５－３单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。
· 第２步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
· 第３步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过２点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
试剂：Ｍ：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），１瓶，６．５ｍｌ。
粒子浓度０．７２ｍｇ／ｍｌ，生物素结合能力： ４７０ｎｇ生物素／ｍｇ粒子。
生物素标记试剂盒使用说明书
生物素标记试剂盒使用说明书货号: EBLK0002产品介绍：Elabscience生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂，用于含有氨基（NH2-）抗体的标记。
生物素已经活化，可直接使用，每个试剂盒足以完成3次标记，每次可标记0.2-2mg。
试剂盒中包括6个用于抗体标记脱盐的Filtration tube，不用透析，操作简便，熟练操作90min可完成整个标记过程。
产品特点：试剂全面:本试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂。
快速:整个过程仅需90min。
方便:通过Filtration tube即可脱盐，无需透析或者凝胶过滤。
使用灵活:既可用于微量标记又可大量标记，每次可标记0.2-2mg。
理想的标记效果:已经优化确定了最适的标记比例，降低标记不足或由于过度标记而失活的可能性。
产品组成：标记过程需要仪器：1. 10ul，50ul，200ul，1000ul可调高精度移液器2. 恒温箱（37℃）3. 离心机（离心力可达到12,000×g）储存条件：本试剂盒未开封前在2-8℃可稳定保存一年生物素标记反应原理：NH2-Reactive Biotin专一地与伯胺反应（N-末端及赖氨酸残基侧链）形成稳定的酰胺键生物素标记NH2-Reactive Biotin使用量的计算：每个反应中生物素试剂的使用量取决于待标记蛋白质的量和浓度。
通过优化，我们确定了标记2mg/ml的抗体（IgG ，150KD），使用生物素和抗体的分子比为20:1能达到较理想的标记效果。
1、标记2mg/ml的抗体，使用生物素和抗体的分子比为20:1时，应加入生物素量的计算方法：ml蛋白×2mg蛋白ml蛋白×1mmolIgG150,000mgIgG×20mmol生物素mmol蛋白= mmol生物素2、对于10mmol的生物素溶液，应加入反应中该生物素体积的计算方法：mmol生物素×1,000,000μLL ×L10mmol= ul生物素计算示例：对于0.5ml 2mg/ml的IgG（分子量为150,000）溶液，需加入10mM的生物素溶液13.3ul。
生物素化抗AIB1单克隆抗体的初步应用
中 图分 类 号 ： ３ ２—３ Ｒ９ ３ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ２— ６ ９ ２ １ Ｏ ０ ０ —０ １７ ２ ３ （０ ０）ｌ一 ０ １ ２
Ａｐ ｉａ ｉ ｎ ｏ ｉ ｔｎ ｌ ｔｄ ａ ｉ—ＡＩ １ ｍ ｏ ｃｏ ａ ｔｂｏ ｙ ｐｌ ｔｏ ｆｂ ｏ ｉ ｙ ａ ｅ ｎｔ － Ｂ ｃ ｎｏ ｌ ｎ ｌａ ｉ ｄ ｎ
ｆｒｈ ｍａ ａ ｃ ｒ ｏ ｕ ｎ ｃ ｎ ｅ ． Ｋｅ ｒ ｓ Ｂ ｏｉ ｙａｉｎ ＡＩ １；ｄ ｔｃ ；ｔ ｍｏ ｒｃ ｌ ｙ ｗｏ ｄ ： ｉ ｔ ｌｔ Ｂ ｎ ｏ ｅｅｔ ｕ ｕ ｅｌ
ＡＢ Ｉ Ｉ基因 （ｍｐ ｆｄｉ ｒａｔ ａｃｒ ， Ｉ １ 属于细 胞 ａ ｌ ｅ ｎｂ ｓ ｃ ｅ １ Ａ Ｂ ） ｉ ｉ ｅ ｎ 核激素受体共激活剂 Ｐ ６ １０家族 的成员 ， 是一 种核激 素受体 的转 录共激活因子 ， 最早是在寻找乳腺癌 中频繁扩增 的基 因 时发现 的。ＡＢ Ｉ１基 因定 位 于人 细胞 的 ２ ｑ２ 含 １２ ０ １ ， ４ ０个氨
第 ８卷第 １期
２１ ０ ０年 ３月
延安 大学 学报 （ 学 科 学 版 ） 医 Ｊｕｎｌｏ ａａ ｎｖｒｔ Ｍ ｄＳｉ ｏｒａ ｆ ｎ ｎＵ ｉ ｓ ｙ（ ｅ ｃ） Ｙ ｅｉ
Ｖ０． ． １８ Ｎｏ １ Ｍａ． ｒ ２０１ ０
生物 素 化 抗 Ａ Ｂ Ｉ １单 克 隆 抗体 的 初 步应 用
庞秋 霞 ， 张海莲 ， 王爱红 ， 晓丽， 魏 许静 洪△
（ 延安大学医学院 ， 陕西 延安 ７ ６０ ） １０ ０
摘 要： 目的 探讨生物素化抗 Ａ Ｂ 单抗在肿瘤细胞 Ａ Ｂ 检测中的应用。方法 用生物素 Ｎ一 Ｉ１ １Ｉ 羟基丁二酰亚胺酯（ Ｎ Ｓ 对纯化 ＢＨ） 可成 功应用该抗
人IL-1β ELISA kit说明书
标本收集: 1. 收集血液的试管应为无热原和内毒素试管。 2. 血浆抗凝剂推荐EDTA。 3. 避免溶血，高血脂标本。 4. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
1
5. 标本收集后若不及时检测，请按一次用量分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。 6. 可根据实际情况，将标本做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。
60分钟。 5. 洗板4次。 6. 除空白孔外，加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育30分
钟。 7. 洗板4次。 8. 加入显色剂100ul/孔，避光37℃孵箱孵育10--15分钟。 9. 加入终止液100ul/孔,混匀后即刻测量OD450值(5分钟内)。
结果判断: 1. 每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。 2. 手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标
灵敏度，特异性和重复性: 1. 灵敏度：最小可测人IL-1β达2pg/ml. 2. 特异性：不与IL－2,3,4,5,6,8,10,12,IFN,TNF及sTNF-RII等反应。 3. 重复性：板内，板间变异系数均<10%.
生物素标记抗体步骤
生物素标记抗体步骤
生物素标记抗体是一种常用的实验技术，能够在细胞、组织和蛋白质水平上检测目标分子的表达和定位。
以下是生物素标记抗体的步骤：
1. 预处理样本：将样本适当处理（如细胞培养、组织切片等），使其适合于抗体检测。
2. 抗原修复：对于一些抗原易于损伤或失活的样本（如石蜡包埋组织），需要进行抗原修复。
通常采用高压加热或酶消化等方法。
3. 抗体处理：加入适当浓度的生物素标记抗体，将其与目标分子结合。
4. 洗涤：用PBS等缓冲液对样本进行洗涤，去除非特异性结合的抗体。
5. 酶标记物处理：加入标记有辣根过氧化物酶（HRP）等酶标记物的检测抗体，使其与生物素标记抗体结合。
6. 洗涤：同样进行洗涤。
7. 显色：加入酶底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基苯丁二酸二乙酯）或DAB（3,3'-二氨基联苯）等，使样本呈现可见的颜色反应。
8. 停止反应：加入酸性溶液，停止反应。
9. 显微镜观察：在显微镜下观察样本，记录结果。
生物素标记抗体技术可以应用于免疫组化、免疫印迹等多种实验中，是一种方便、快速、准确的检测方法。
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ABC公司 YTHDF1人源YTH结构域蛋白家族1 ELISA试剂盒说明书
Human YTH domain-containing family protein1ELISA Kit (YTHDF1)Catalog NO.:RK04130version:2.0*使用产品前，请务必阅读产品包装内说明书产品简介本试剂盒产品使用夹心法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它生物体液中YTHDF1的含量。
产品检测原理本实验采用双抗夹心ELISA法。
将抗YTHDF1抗体预先包被在酶标板上，向微孔中分别加入标准品和样品，样本中YTHDF1与固相载体上的抗体结合。
孵育后，未结合的样品在洗涤过程中会被洗去，加入抗YTHDF1的检测抗体，形成双抗体夹心。
洗去未结合的检测抗体，然后向微孔中加入酶结合物。
孵育和洗涤后，加入底物TMB。
样品中YTHDF1的含量与TMB反应的颜色深浅呈正相关，加入酸终止反应并测量吸光值。
根据梯度稀释的YTHDF1标准品的吸光值绘制标准曲线并求出样品的浓度。
试剂盒组分及保存条件未拆封的试剂盒可在2-8°C保存1年，已拆封的产品须在1个月内使用完。
组分规格货号拆封后保存条件抗体预包被酶标板Antibody Coated Plate 8×12RM17545将未使用的板条放回装有干燥剂的铝箔袋中，并重新密封，可在2-8°C存储1个月。
冻干标准品Standard Lyophilized 2支RM17546复溶后不建议再次使用。
浓缩生物素化抗体（100×）Concentrated Biotin Conjugate Antibody(100×)1×120ul RM17547可在2-8°C存储1个月。
浓缩链霉亲和素-HRP（100x）Streptavidin-HRP Concentrated(100×)1×120ul RM17548可在2-8°C存储1个月。
标准品/样本稀释液（R1）Standard/Sample Diluent (R1)1×20mLRM00023可在2-8°C 存储1个月。
生物素化标记作用
生物素化标记在免疫组化中起到了至关重要的作用。免疫组化是一种常用的分子生物学实验技术，用于检测细胞或组织中特定蛋白质的存在和定位。生物素化标记可以将生物素与抗体结合，形成生物素化抗体复合物。通过与细胞或组织中目标蛋白质的结合，生物素化抗体复合物可以用于检测目标蛋白质的表达和定位，从而帮助研究者了解蛋白质在细胞或组织中的分布和功能。
生物素化标记还广泛应用于蛋白质亲和纯化技术中。蛋白质亲和纯化是通过特定的亲和剂选择性地富集目标蛋白质的技术。生物素化标记可以将生物素引入到亲和剂（如亲和树脂、亲和抗体等）中，形成生物素化亲和剂。通过与目标蛋白质的结合，生物素化亲和剂可以用于选择性地富集目标蛋白质，从而帮助研究者纯化和分析蛋白质。
生物素化标记还可以应用于荧光显微镜分析中。荧光显微镜是一种常用的细胞和组织成像技术，可以用于研究生物体内部结构和功能。生物素化标记可以将生物素与荧光染料结合，形成生物素化荧光探针。通过与目标结构或分子的特异性结合，生物素化荧光探针可以用于实现对目标结构或分子的高分辨率成像，从而帮助研究者观察和分析生物过程。
生物素化标记在原位杂交实验中也发挥着重要的作用。原位杂交是一种用于检测特定核酸序列在细胞或组织中的存在和定位的技术。生物素化标记可以将生物素引入到探针（通常是亮氨酸探针）中，形成生物素化探针。通过与目标核酸序列的互补配对，生物素化探针可以用于检测目标核酸序列的存在和定位，从而帮助研究者了解基因表达和调控的机制。
碧云天生物技术 Human Angiogenin ELISA Kit PA023说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************碧云天网站微信公众号网址：Human Angiogenin ELISA Kit产品编号产品名称包装PA023 Human Angiogenin ELISA Kit 96次产品简介：碧云天的Human Angiogenin ELISA Kit (Human Angiogenin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人血管生成素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Angiogenin的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。
多次重复检测结果表明，最小检出量为4.75pg/ml，与EGF、GM-CSF、MIP-1α、MIP-1β、TGF-α、TGF-β1，小鼠 EGF、GM-CSF、MIP-1α等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
人血管生成素(Angiogenin, ANG)是一种分子量为14kDa的单链非糖基化蛋白，属于核糖核酸酶中RISBASE家族。
该家族成员不仅具有核糖核酸酶活性，还具有一些特殊的生物学功能。
ANG氨基酸长度为123，包括3个链内二硫键。
人ANG与小鼠ANG具有75%的氨基酸同源性，且具有一定的种间交叉反应。
能够表达ANG的细胞主要有血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、结肠柱状上皮细胞、淋巴细胞和部分肿瘤细胞。
ANG主要参与血管的形成过程。
基底膜的降解是血管新生过程中内皮细胞发生迁移的先决条件。
ANG首先与肌动蛋白结合，随后肌动蛋白-ANG复合物发生裂解，激活组织血纤维蛋白溶酶原。
这一过程产生的血纤维蛋白溶酶会降解基底膜中的层粘连蛋白和纤连蛋白。
生物素化免疫印迹法的原理
生物素化免疫印迹法的原理生物素化免疫印迹法（Biotinylated Immunoblotting）是一种常用的蛋白质检测技术，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。
该方法利用生物素（Biotin）标记的抗体与特定蛋白质结合，再通过酶标记的亲生素（Streptavidin）结合生物素，通过酶催化反应使目标蛋白质产生可视化的信号。
本文将详细介绍生物素化免疫印迹法的原理及其应用。
生物素化免疫印迹法的原理基于特异性抗原与抗体的结合反应。
首先，待检样品经过蛋白质分离技术（如SDS-PAGE）将蛋白质分离并定位在聚丙烯酰胺凝胶上。
然后，将聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质转移到固体膜上，例如聚偏氟乙烯（PVDF）或硝酸纤维素膜。
这个过程称为电转印（Electrotransfer）。
接下来，将转印膜中的非特异性结合位点（例如未被蛋白质占据的空白位点）阻断，以防止后续步骤中的非特异性结合。
通常使用的阻断剂有非脂型乳清蛋白（非脂型BSA）或牛血清白蛋白（BSA）。
这样可以减少背景信号，提高检测的特异性。
然后，在转印膜上加入经生物素标记的一抗抗体，这种抗体能与待检测蛋白特异性结合。
生物素是一种小分子化合物，其分子量较小，与蛋白质结合不会影响其性质。
生物素标记的抗体与待检测蛋白特异性结合后，形成抗原-抗体复合物。
为了可视化待检测蛋白，将转印膜与酶标记的亲生素（通常是辣根过氧化物酶-HRP）结合。
亲生素是一种能与生物素非常紧密结合的蛋白质。
亲生素与生物素结合后，形成稳定的复合物。
然后，在转印膜上加入适当的底物，如4-氨基联苯二酚（4-chloro-1-naphthol），使HRP催化底物产生可视化的颜色反应。
产生的颜色与待检测蛋白的含量成正比。
生物素化免疫印迹法具有许多优点。
首先，该方法对待检测蛋白的特异性非常高，可以检测到非常低浓度的蛋白。
其次，由于生物素与亲生素结合稳定，可以进行长时间的信号增强，从而提高检测的灵敏度。
此外，生物素化免疫印迹法还可以同时检测多个蛋白，通过使用不同生物素标记的抗体，可以在同一转印膜上检测多个目标蛋白。
人 白介素10 IL-10 Elisa试剂盒检测方法原理步骤说明书
人IL-10定量分析酶联免疫检测试剂盒IL-10简介：人IL-10 是由160个氨基酸组成4个α螺旋结构的的细胞因子，分子量为18.5 kDa。
在水溶液中以二聚体形式存在，分子量约为39 kDa。
人IL-10是个多效性的因子，能够对多种细胞起作用，主要表现为免疫抑制和免疫刺激两方面的作用，特别是在调节淋巴系和髓系的细胞功能方面扮演重要的作用。
IL-10 也具有单核细胞/巨噬细胞依赖、抗原刺激引起的的PBMNC 和 NK 细胞合成其它细胞因子的抑制作用。
巨噬细胞膜介导的共刺激引起的T细胞和NK细胞活化后的产物及功能也可被IL-10所抑制。
IL-10是单核细胞/巨噬细胞功能的强有力的调节物。
IL-10作为细胞介导的免疫反应的抑制物，能够抑制像前列腺素E2、TNF-α、IL-1、IL-10和 IL-8等许多引起炎症的细胞因子。
IL-10 能够促进可溶性TNF受体的释放和ICAM－1和B7在细胞表面的表达。
IL-10还参与B细胞、柱状细胞及胸腺细胞的增殖和分化的调控。
人的IL-10与鼠类的IL-10在DNA序列和氨基酸序列上高度同源，其DNA序列中一个开放的基因框与艾伯斯坦-巴尔病毒基因组上基因框BCRF1高度同源，这可能在病毒感染中扮演重要角色的原因。
在许多与寄生虫感染的报道中，IL－10表达也会增加，如曼森氏血吸虫感染、利什曼原虫感染、弓形虫感染、锥虫感染等。
分枝杆菌的感染如麻风分枝杆菌、结核杆菌、鸟分枝杆菌等的感染也会引起IL－10的表达升高。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-10 的浓度。
IL-10 捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-10 会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入生物素化的抗人IL-10 抗体后，抗人IL-10 抗体与IL-10 接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。
生物素标记抗体
生物素标记抗体生物素标记抗体生物素标记反应简单、温和且很少抑制抗体活性，生物素标记的抗体可存放多年而不失活。
能与生物素结合的二级试剂为亲和素和链霉亲和素，所需的各种标记物均可购置。
此外，亲和素和链霉亲和素的结合背景水平非常低．结合紧密且快速。
故可消除多步骤程序中的许多缺点。
生物素拯记—尥王要优点是标记一抗后，再选用亲和素或链霉亲和素标记的二级试剂进行测定。
抗体很容易与经过化学修饰的活化生物素结合。
生物素又可以与结合有酶、荧光染料或放射性碘的亲和素或链霉亲和素连接，后者已有商品试剂供应。
这样只需将纯化抗体与生物素结合，就可用各种不同的标记物来检测。
链霉亲和素及亲和素与生物素的亲和力非常高(Ka1015L／mo1)，并且二者间的相互作用实质上是不可逆的。
由于链霉亲和素的等电点（pI）更适宜故其更常用，背量也因此较低。
将生物素与抗体共价结合是一种非常简便和直接的标记方法。
通常，生物素对抗体并无负面影响且标记条件温和，用亲和素或链霉亲和素标记试剂进行检测的敏感性与使用标记抗IZ抗体相同。
Becker和Wichek(1972)、Heitzmann和Richards(1974)及Heggeness和Ash(1977)等提供了首次使用生物素与亲和素复合物的例证，而且Green(1963，1990)对两者的相互作用做了详细论述。
大多数生物素酰基化反应是利用生物素的N—羟基琥珀酰亚胺酯。
琥珀酰亚胺基可以与抗体上的自由氨基结合，通常是赖氨酰侧链。
现在许多生物素酰基化酯均可购得。
此类变构物改变了生物素的分子大小及其与偶合基团之间空间桥联臂的特性等。
某些情况下，空间桥联臂起决定性作用。
例如，较长的空间桥联臂可以使偶联物更容易接近生物素，其柔韧性也更好，尽管也更容易出现非特异结合。
某些空间桥联臂可以劈开，这样就可在一定的控制条件下将抗体释放出来。
表4．6列出许多可以利用的空间桥联臂及其特性。
所有这些酯类均可用下列方法处理。
抗体的标记——生物素（Biotin）
抗体的标记——生物素（Biotin）一般每个抗体可以标记3～5个生物素，标记时，生物素与抗体的比率受抗体浓度影响，对于10 mg/ml 的抗体溶液来说，生物素应超过蛋白12倍（摩尔数），对于2 mg/ml 的抗体溶液应超过20倍，生物素也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。
蛋白样品不得含有叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物。
1. 抗体/蛋白的前处理：1.1 选择适当截留的超滤柱中加入400μl 标记反应溶液（0.1M PBS pH 7.2），加入1mg抗体，混匀。
1.2 4℃，6,000rpm，离心2min，弃滤液；于超滤柱中再加入200μl 标记反应溶液，混匀。
4℃，6,000rpm，离心2min，1.3 重复步骤1.2 6～7次。
1.4 混匀超滤柱中的残留的液体，室温静置1min；将超滤柱反转倒置于一新的超滤管中，4℃，6,000rpm，2min，收集液体。
1.5 取50μl PBS于超滤柱中混匀，静置1min。
倒置超滤柱，4℃，6,000rpm，2min，收集液体。
1.6 步骤1.4 与步骤1.5 的收集的滤液合并，用标记反应溶液调节抗体浓度到2mg/ml，4℃放置备用。
2. 生物素的标记：2.1 将生物素溶解在合适的溶剂中（请参照所选购生物素的说明书，不同的生物素其溶剂不同），浓度为20mg/ml,按照生物素与抗体分子摩尔比1:20的比例加入抗体溶液，室温反应1h。
2.2 葡聚糖凝胶分离纯化/透析袋或者超滤管去除游离生物素及其他试剂。
2.3 将抗体保存于合适的抗体保存液。
进行抗体标记的时候，需要对抗体性质、交联剂和标记物的性质非常了解，否则很难标记出高品质的抗体；标记量低，导致信号值低；标记量太高，不但容易造成背景，并且还容易由于标记物的聚集造成信号拮抗，反而降低或者淬灭信号值。
标记物的种类繁多，不同类型的标记物其性质完全不一样，标记物很难选择和把握，建议初学者使用专业化的试剂盒进行标记，或者直接委托专业化公司标记。
实用文档之elisa的检测原理及步骤
实用文档之"Elisa Kit使用方法"检测原理:本实验采用双抗体夹心ELISA法。
抗人IL-4单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的IL-4会与单抗结合，游离的成分被洗去。
加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。
生物素与亲和素特异性结合；抗人IL-4抗体与结合在单抗上的人IL-4结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色底物，若反应孔中有IL-4，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。
在450nm处测OD值，IL-4浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IL-4的浓度。
试剂盒组成：1．抗体预包被酶标板（8×12 或8×6）2．冻干标准品（2 / 1 支；0.5ng/支）3．标准品和标本稀释液（橙盖瓶）（1 瓶；20ml/12ml）4．浓缩生物素化抗体（紫盖瓶）（1 支）5．生物素化抗体稀释液（蓝盖瓶）（1 瓶；16ml/10ml）6．浓缩酶结合物（棕盖瓶）（1 支）7．酶结合物稀释液（紫盖瓶）（1 瓶；16ml/10ml）8．浓缩洗涤液20×（白盖瓶）（1 瓶；50ml/25ml）9．显色底物（TMB）（棕盖瓶）（1 瓶；12ml/6ml）10．反应终止液（红盖瓶）（1 瓶；12ml/6ml）11．封板胶纸（6/3 张）12．产品说明书（1 份）标本收集:1. 收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2. 血浆抗凝剂推荐使用EDTA。
避免使用溶血，高血脂标本。
3. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
4. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃，-70℃电冰箱内，避免反复冻融，3-6月内检测。
5. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。
注意事项:1. 试剂盒使用前请保存在2-8℃。
复溶后的标准品应分装后，将其放在-20～-70℃贮存。
elisa的检测原理及步骤
Elisa Kit使用方法（一）检测原理:本实验采用双抗体夹心ELISA法。
抗人IL-4单抗包被于酶标板上，标本和品中的IL-4会与单抗结合，游离的成分被洗去。
加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。
生物素与亲和素特异性结合；抗人IL-4抗体与结合在单抗上的人IL-4结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色底物，若反应孔中有IL-4，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。
在450nm处测OD值，IL-4浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制曲线求出标本中IL-4的浓度。
试剂盒组成：1．抗体预包被酶标板（8×12 或 8×6）2．冻干品（2 / 1 支；0.5ng/支）3．品和标本稀释液（橙盖瓶）（1 瓶；20ml/12ml）4．浓缩生物素化抗体（紫盖瓶）（1 支）5．生物素化抗体稀释液（蓝盖瓶）（1 瓶；16ml/10ml）6．浓缩酶结合物（棕盖瓶）（1 支）7．酶结合物稀释液（紫盖瓶）（1 瓶；16ml/10ml）8．浓缩洗涤液 20×（白盖瓶）（1 瓶；50ml/25ml）9．显色底物（TMB）（棕盖瓶）（1 瓶；12ml/6ml）10．反应终止液（红盖瓶）（1 瓶；12ml/6ml）11．封板胶纸（6/3 张）12．产品说明书（1 份）标本收集:1. 收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2. 血浆抗凝剂推荐使用EDTA。
避免使用溶血，高血脂标本。
3. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
4. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃，-70℃电冰箱内，避免反复冻融，3-6月内检测。
5. 如果您的样本中检测物浓度高于品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。
注意事项:1. 试剂盒使用前请保存在2-8℃。
复溶后的品应分装后，将其放在-20～-70℃贮存。
2. 浓缩生物素化抗体，浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。
erastin使用注意事项
erastin使用注意事项
erastin是一种广泛应用于科研实验的试剂，在肿瘤免疫治疗、基因表达研究等领域中发挥着重要作用。
在使用erastin时，需要
注意以下几点：
1. 存储和使用环境：erastin应储存在阴凉、干燥、避光的
环境中，避免受热、受潮和与金属接触。
在操作erastin时，应佩
戴手套和口罩等防护用品。
2. 剂量控制：erastin的使用剂量对
实验结果的影响较大，应严格按照实验要求配制合适的浓度，并确
保剂量准确。
3. 配对使用：erastin应与适当的生物素化试剂配
对使用，以确保最佳效果。
在使用过程中，应注意检查生物素化试
剂的保质期和有效性。
4. 实验操作规范：在进行erastin相关实
验时，应遵循实验室操作规范，确保实验操作的准确性和安全性。
如需添加erastin，应在加入其他试剂后进行，并及时清洗加样枪
和吸头等器材。
5. 废弃物处理：实验结束后，应将废弃的
erastin和生物素化试剂等按相关规定进行处理，避免对环境和人
员造成危害。
总之，在使用erastin时，应充分了解其存储、使用和操作要求，并严格按照规范进行操作。
同时，应注意保护自己和他人的健
康和安全，确保实验结果的准确性和可靠性。
常见抗体标记技术之三：抗体的生物素化标记
常见抗体标记技术之三：抗体的生物素化标记基本原理本法可使抗体或其它蛋白质的e-氨基通过手臂与酰化的生物素共价结合。
其后,生物素化的分子可应用酶标-亲和素或荧光染料-链霉亲和素复合物来检测。
小分子的水溶性生物素对细菌蛋白链霉亲和素具有高度亲和力是本法的设计基础试剂及仪器NHSB:N-羟基琥珀酰亚胺生物素(有商品供应)0.1 mol/L碳酸氢钠缓冲液,pH8.0(见附录双蒸水(注意去除游离氨基),用以配制碳酸氢钠缓冲液或硼酸缓冲液DMS0(二甲亚砜,有毒试剂)叠氮钠(有毒试剂)10g/L牛血清白蛋白(W/W)PBS液分子筛柱电磁搅拌器透析袋(MWCO8000)铝铂微量移液器操作步骤1.将待生物素化的蛋白质用0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液(pH8.0)或0.5mol/L硼酸缓冲液(pH8.6)稀释到1mg般实验室应用的生物素化体积为1-2.5ml2.交互用0.1mo1/L碳酸氢钠缓冲液(pH8.0)或0.5mol/L硼酸缓冲液(pH8.6),对蛋白质充分透析3.用 1m1 DMS0溶解 NHSB Img4.向1m1蛋白质溶液(即含蛋白质1mg)加入120u1NHSB溶液(即含NHSB120g)5.在室温下持续搅拌,保温2-4小时6.加入9.6μL1mol/LNH41(每25μ g NHSB加1u1),在室温下搅拌10分钟7.在4℃,对PBS充分透析,以除去游离的生物素8.将样品上1ml的分子筛柱,以PBS缓慢洗脱,收集1ml/管,蛋白质在1-3m1之间洗下9.最后,样品加入叠氮钠(终浓度0.5g/L)及1.0g/LBSA。
将结合产物置4℃,避光保存,亦可加入50%重蒸甘油,置一20℃保存质量监测与酶-或荧光染料-结合的亲和素、链霉亲和素或中和亲和素( neutravidin),通过标准方法( Westerblotting或免疫荧光染色法)测定交联率实验要点及说明1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。
生物素化抗体原理
生物素化抗体原理嘿，你知道生物素化抗体不？这玩意儿可神奇啦！就像是一把超级精准的钥匙，能打开特定的锁。
生物素化抗体到底是啥原理呢？咱就来好好唠唠。
生物素，这名字听起来是不是有点陌生？其实啊，它就像是一个小标签，能牢牢地贴在抗体上。
抗体呢，就像是勇敢的小卫士，专门去识别和结合特定的目标。
当生物素和抗体结合在一起，就变成了生物素化抗体。
这就好比给小卫士穿上了一件特别的战衣，让它在战斗中更加厉害。
为啥要进行生物素化呢？这可有着大用处呢！生物素和亲和素之间的结合那可是超级紧密的，就像两块磁铁紧紧吸在一起。
有了生物素化抗体，我们就能利用这种强大的结合力，进行各种检测和实验。
比如说，在医学诊断中，生物素化抗体可以快速准确地检测出疾病相关的标志物。
这难道不厉害吗？生物素化的过程也挺有意思。
就像是一个精心设计的化学反应，科学家们通过巧妙的方法，把生物素连接到抗体上。
这个过程需要高超的技术和精细的操作，可不能有一点马虎。
一旦成功地进行了生物素化，抗体就获得了新的能力。
想象一下，如果没有生物素化抗体，我们的医学检测和研究将会变得多么困难。
就像在黑暗中摸索，找不到方向。
而有了生物素化抗体，就像是有了一盏明灯，照亮了前进的道路。
生物素化抗体在生物学研究中也发挥着重要的作用。
它可以帮助科学家们更好地了解生命的奥秘。
比如，研究细胞的结构和功能，探索疾病的发生机制等等。
这就像是一把神奇的钥匙，打开了一扇扇通往未知世界的大门。
在实际应用中，生物素化抗体的优势可多啦！它的特异性强，只针对特定的目标进行结合，不会乱打一通。
而且，它的灵敏度也很高，能够检测到微量的物质。
这就好比一个超级敏锐的探测器，能够发现那些隐藏在角落里的秘密。
生物素化抗体的发展前景也是一片光明呢！随着科技的不断进步，我们对它的认识和应用也会越来越深入。
说不定在未来的某一天，它会给我们带来更多的惊喜。
总之，生物素化抗体是一种非常神奇的工具。
它的原理虽然有点复杂，但一旦理解了，就会发现它的魅力无穷。
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生物素化抗体使用说明
Biotin Antibody Conjugates
规格：0.1ml
保存：-20℃保存至少一年，避免反复冻融。
4℃保存3-6个月。
产品说明：
生物素化抗体是经亲和层析纯化成高纯度IgG成分，将进口的活化生物素（羟基琥珀酰亚胺酯，BNHS）共价交联到抗体IgG分子上制成。
生物素化抗体标记的样品可应用酶标或荧光染料标记的亲和素或生物素-亲和素复合物来检测。
本产品0.1ml含有0.2mg抗体，0.02mgBNHS，0.3mgBSA。
工作效价：
ELISA法：1：500～1000
组织化学：1：50～100
免疫印迹：1：200～500。
具体效价以产品标签为准，最佳使用条件需根据所检测样本的抗原及一抗效价优化而定。
产品说明：
SP034兔IgG免疫球蛋白抗原
SPA131羊抗小鼠IgG(纯化)
SF134羊抗兔IgG-FITC
SE237兔抗猪IgG-HRP
A1820HRP标记的抗体稀释液。