第21章基因诊断与基因讲义治疗修改

病毒载体 非病毒载体
体细胞 生殖细胞
间接体内疗法 直接体内疗法
外源基因表达的筛检 利用在体中的标记基因
回输体内
目录
目录
三、基因治疗的应用与展望
应用
遗传性疾病、心血管疾病、肿瘤、 感染性疾病、神经系统疾病
展望
进一步寻找切实有效的基因 精密调控外源基因在人体内的表达 体细胞移植和重建的生物学研究 减少外源基因对机体的不利影响
第21章基因诊断与 基因治疗修改
基因变异致病类型
内源基因的变异 基因结构突变 基因表达异常
外源基因的入侵
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第一节 基因诊断
Genetic Diagnosis
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一、基因诊断的概念和特点
定义 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术
和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否 正常，从而对疾病作出诊断的方法。
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几种常见的基因失活技术 ① 反义核酸技术 ② 核酶技术 ③ 三链技术 ④ 干扰RNA（RNAi）技术
基因治疗的其他方法：如“自杀基因” 的应用，基因疫苗等
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干扰RNA技术的特点
干扰因子前身为dsRNA而不是ssRNA，因而不 易降解；
序列特异性抑制mRNA和蛋白质的表达； 只有效作用于外显子，而对内含子无影响； 具有高效性、长期性（可影响下两代）； 可通过细胞屏障而发挥作用。
oligonucleotide, ASO)
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（二）聚合酶链பைடு நூலகம்应 (PCR) （三）基因测序 （四）基因芯片
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镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
MstⅡ酶切位点(GCTNAGG)
5´
3´
1.15kb
正常基因
×
5´
3´
1.35kb
突变基因
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镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
﹣
1.35kb 1.15kb
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基因疫苗的特点和原理
基因疫苗主要指DNA疫苗； 毒副作用低，易操作，易储存，价格低； 主要原理：将编码外源性抗原的基因插入到含
真核表达系统的质粒上，将质粒直接导入人或 动物体内，让其在宿主细胞中持续表达抗原蛋 白，诱导机体产生免疫应答。
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二、基因治疗的基本程序
治疗性基因的选择
基因载体的选择 靶细胞的选择 基因转移
0.2kb
正常人
突变携带着 患者
+
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RFLP分析法
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PCR/单链构象多态性分析 (single strand conformation polymorphism, SSCP)
PCR产物变性后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，正 常基因和变异基因的迁移位置不同，借此可分析确 定致病基因的存在。
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﹣
+
正常人
纯合突变 杂合突变
Leber 病患者 PCR/SSCP分析
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三、基因诊断的应用
遗传疾病 肿瘤 感染性疾病，传染性流行病 判断个体疾病易感性 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定
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第二节 基因治疗
Gene Therapy
目录
一、基因治疗的概念
定义
早期是指用正常的基因整合入细胞基因组， 以校正和置换致病基因的一种治疗方法。
目前广义上来讲是指将某种遗传物质转 移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以 达到治疗疾病目的的方法。
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基因治疗的基本方法
基因矫正 (gene correction) 基因置换 (gene replacement) 基因增补 (gene augmentation) 基因失活 (gene inactivation)
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谢谢观看
特点 针对性强 特异性强 灵敏度高 适应性强
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二、基因诊断常用技术方法
（一）核酸分子杂交技术
限制性内切酶谱分析法 DNA限制性长度多态性(restriction fragment
length polymorphism, RFLP)分析 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific